A B O R A T O R I O D E D I A G N O S T I C O V I R O L Ó G I C O D E L C I E N I
“Evolución de las pruebas para el diagnóstico de la infección por VIH”
Q. C Ramón Hernández JuanCentro de Investigación de Enfermedades Infecciosas
Laboratorio de Diagnóstico VirológicoINER.
Hospital GeneralMéxico, CDMX 3 de Junio de 2017.
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Historia
Inve
stig
ació
n
• 1985 HTLV III.• Mayo de 1986,
clasificado como Human InmunodeficiencyVirus HIV-1.
Des
arro
llo • 2 de marzo 1985 FDA, ensayo de diagnóstico para VIH.
• ABBOTT, como monitoreo a donadores.
• Algoritmo de diagnóstico.
Labo
rato
rio
• Ensayos de 1, 2,3 , 4, 5 …….. generación.
• Pruebas rápidas• Ensayos de
Ácidos nucleicos
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Historia natural
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Primera Generación: 1985
ELISA INDIRECTO HTLVIII - VIH-1
IgG VIH-1
HTLV III
Uso Falsos Positivos Prueba confirmatoria
TamizajeDonadores de Sangre
Individuos bajo riesgo
IFA (HTLVII
Periodo de ventana de 8-10 semanas
Embarazo Western Blot
Anti-IgG VIH-1
Señal D.O
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Algoritmo
Confirmación
Western blot IFA (HTLV III)
Resultado
Positivo Positivo
Prueba
ELISA IgG VIH-1 ELISA IgG VIH-1
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Segunda generación
ELISA INDIRECTO VIH-1, 2
IgG VIH-1 IgG VIH-2
Proteínas Virales VIH-1 y Grupo O
Anti-IgG VIH-2Anti-IgG VIH-1
Proteínas Virales VIH-2
Usos Falsos Positivos
Prueba Confirmator
Donadores de sangre
Embarazo Wester Blot
Diagnóstico Otras infecciones: autoinmunes
ReducciónVentana 4-6 semanas.
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Algoritmo
ELISA VIH-1/VIH-2
• Positivo en duplicado• Western blot
ELISA VIH-1/VIH-2
• Positivo/Negativo• Indeterminado
ELISA VIH-2
• Positivo en duplicado• Pruebas HIV-2, WB
Reportar como VIH +
Ensayo VIH-2
Seguimiento
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Tercera generación
ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM
Antígenos recombinantes
Proteínas Virales 1, grupo O
Proteínas Virales
Ac´s IgMAc´s IgG
Usos Falsos Positivos Pruebaconfirmatoria
DiagnósticoIndividuos bajo riesgo.Enfermedadesautoinmunes
Western Blot.
Periodo de ventana 3 semanas Embarazo
HIV PCR:< 18 meses.Alto costo.Poco accesibles.
señal
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Algoritmo
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Cuarta generación: finales de los 90´s
ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM + Antígeno p24
p24
Ac´s IgG
Ac´s IgM
señalseñal
2010 FDA Sensibilidad vs Especificidad.
Pruebas Confirma
BIORAD HIV-1COMBO Ac-Ag
Especificidad 100 %Sensibilidad 99.9-100 %
Ventana 11-14 díasWestern Blot.
ARCHITEC ABBOTT, COMBO (QUIMIOLUMINISCENCIA)
Especificidad 99.94 %Sensibilidad 99.5 %
Ventana de 11-14 días.
Ensayos de Ácidos nuNAT´s.
HIV-1 RNA qualitativeassay
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Algoritmo
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Quinta generación: 2015
ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM + Antígeno p24
p24
señalseñal
señal
IgG
IgM
Aprobación FDA 2015 Sensibilidad vs Especificidad.
Pruebas Confirmato
BIO-RAD Bioplex 2200 HIV Ag/Ab.
Detecta Antígeno y Anticuerpos de VIH-1 por separado.
100 % sensibilidad y 99.5 % especificidad.
Ventana: 11 días
Westren Blot
NAT´s
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Pruebas rápidas
Sala de urgencias, salas de unidad de cuidados intensivos, UTI.Diseño aplicado en tarjetas de fase solida.Sangre completa, suero y fluidos oralesAprobado FDA.
3 generación
4.5 generación
4 generación
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Algoritmos con pruebas rápidas
Stevinson et al. / Journal of Virology 52S (2011)
S33
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Continuación …….
Diagnóstico de HIV-1 y HIV-2.Recomendado en los algoritmos de CDC, para diagnóstico diferencial de infección por VIH-1 o VIH-2.
Sensibilidad del 100 %.Especificidad del 96 %
Journal of Clinical Virology 52S (2011) S41– S44
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Ensayos de ácidos nucleicos. NAT
En países desarrollados a principios de 2000´s.– 33 países para HIV-1.– 27 países para HBV.
– Altamente sensible y especifico para ácidos nucleicos virales.• RNA• DNA
• Reduce el periodo de ventana:– HBV 10.34 días.– HCV 1.34 días.– HIV 2.93 días.
» Resolver FALSOS POSITIVOS (donadores)
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NAT continuación
Tecnología especializada y costosa.Infraestructura especializada y en condiciones controladas.Personal calificado.
• Evaluación de la incidencia y prevalencia en la población donadora.
• Mejores resultados cuando se suma a la pruebas de serología.
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Resumen
Año 1985 1987 1991 1997 2015
generación 1st 2nd 3rd 4th 5th
Ventana (semanas)
10-12 4-6 2-3 2 2
Prueba confirmatoria
Western blot, IFA
HIV-1 WB, HIV-2 ELISA y
WB
HIV-1 WB, HIV-2 ELISA y
WB
HIV 1-2 diferencias, HIV-1 RNA
qPCR
NAT´s
IgG, lisado virales HTLV II IgG HIV-1/HIV-2
IgG/IgM, HIV-2, Grupo O
IgG/IgM/Grupo O, Ag p24
IgG/IgM/Grupo O/Ag p24
E=95 %S=99 %
E = >99.5%S = >99.5 %
E= 99.5 %S= 100%
E=> 99 %S=> 99.5 %
E= 99.5%S= > 99.8 %
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Centro de Investigación en Enfermedades Infecciosas:
•Catalogo de pruebas Laboratorio de Diagnóstico Virológico:
1. SEROLOGIA: VIH, HBV, HCV, TOXO, CM2. PCR EN TIEMPO REAL: VIH, CMV, EBV,
JC/BK, B19, HHV8.3. GENOTIPO: VIH, HCV y HBV, VPH.4. PCR PUNTO FINAL: HERPES FAMILY
VIRUS5. CITOMETRIA DE FLUJO:
CD4/CD3/CD8/CD45.6. GENEXPERT: MTB/RIF, MRSA, INFLUEN
(A,HINI2009,B).
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NOM-010 Prevención y control de la infección por el VIH.
.1. Pruebas de tamizaje: presencia de anticuerpos contra el VIH en el suero o plasma, demostradalguno de los siguientes métodos:.1.1. Ensayo Inmunoenzimático (ELISA)..1.2. Aglutinación pasiva..2. Pruebas suplementarias: presencia de anticuerpos contra el VIH en el suero o plasma
demostrada por alguna de las pruebas siguientes:.2.1. Inmunoelectrotransferencia (Prueba de Western blot)..2.2. Inmunofluorescencia, o.2.3. Radioinmunoprecipitación (RIPA), o.3. Pruebas específicas: determinan la presencia del virus o algún componente del mismo, como son.3.1. Cultivo de virus..3.2. Determinación de antígeno viral..3.3. Reacción en cadena de la polimerasa, para determinar el ARN viral o ADN proviral.
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Cinco principios: OMS
Consentimiento informado.Confidencialidad.Facilitación de orientación (o asesoramiento).Garantía de que los resultados de la prueba son correctos.Vinculación con la asistencia, el tratamiento y otros servicios.
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LABORATORIO DE SEROLOGÍA
SEROLOGÍA EVOLIS BIO-RAD: LI21,LI28,LI29,LI35 SEROLOGÍA VIDAS BIOMERIEUX:
LI34,LI37,LI17,L28,LI49,LI50,LI34
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•DISEÑADO PARA SU USO EN TODO EL MUNDO.•VIH-1 GRUPO M(A,B,C,D,E,F,G,H)•GRUPO O.•GRUPO N.•VIH-2
Cuarta generación combo Ac-Ag
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Cuarta generación combo Ac-Ag
• Determinación combinada de aHIV-1 (groups M and O) y anti-2 + Antígeno p24 de VIH-1.
• Lectura o señal de Ag y Ab.• Alta sensibilida para Ag p24.• Fácil de usar.
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WESTERN BLOT
LI35,LI52,LI12
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CIENI, Laboratorio de Diagnóstico Virológico.
Prueba confirmatoria:Western blot
2 plataformas diferentes
ELISA4 generación
VIH- 1 combo Ac-Ag
VIDAS -EVOLIS -
NEGATIVO
NOTIFICACIÓN PACIENTE
VIDAS +EVOLIS +
POSITIVO 2 ENV + 2 GAG
+ 2 POL
POSITIVO
SEGUIMIENTO CV-CD4.
TRATAMIENTO ARV.
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Algoritmo de seguimiento
VIH- 1 combo Ac-Ag
VIDAS PositivoEVOLIS Positivo
INDETERMINADO 1 GAG + 1 POL
PCR VIH-1 CUALITATIVO
POSITIVO
SEGUIMIENTO CV-CD4.TRATAMIENTO ARV
NEGATIVO
NOTIFICACION RESULTADO.SEGUIMIENTO ESTRECHO.
VIDAS Positivo o NegativoEVOLIS Positivo o Negativo
NEGATIVO
PCR VIH-1 CUALITATIVO
POSITIVO
SEGUIMIENTO CV-CD4.
TRATAMIENTO ARV
NEGATIVO
NOTIFICACION PACIENTE
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Gracias…..
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