FUNDAMENTO Y PRINCIPIOS DEL METODO DE ELISA
Que es ELISA La tcnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en ladeteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase slida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotomtricamente
Dispositivos empleados en ELISAFase solidaLos lectores ELISA son espectrofotmetros
Fases de un ensayo ELISA
Tipos de ELISA Directo Indirecto Sandwich
Elisa. 1. Generacin: Primeros ensayos usaban lisados de VIH purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y especificidad. 2. Generacin: Los ensayos mejorados basados en protenas recombinantes y/o los peptidos sintticos, que tambin permitieron la produccin de VIH 1 y 2 combinado. 3. Generacin: tipo sndwich, usan un antgeno marcado como conjugado, muy sensibles. 4. Generacin: detectan antgenos y anticuerpos, reducen el perodo de ventana.
p55
gp160
Enzimas p51/p66/p32/p10
gp41 Ncleo capsideop17/p24/p6/p7
Glicoproteinas
Capsideo p24
gp120
Substrato
HIV-1y HIV-2Antigeno conjugado Anti-HIV-1 p24 conjugado
Anti-1/ Anti-2 en la muestra de Px. HIV-1 p24 en muestra de pacientes
Anticuerpos monoclonales anti-p24
HIV-2 antgeno unido a los micropososo HIV-1 antgeno unido a los micropososo