H E X A G O N PSA

Prueba inmunocromatogrfica de un solo paso (One Step) para la Deteccin Forense de Semen

Cada caja contiene:

- 20 Inmunocromatoplacas. - 20 Pipetas pasteur desechables. - Instrucciones de uso.

Principio de la Prueba

En el Protocolo Forense de Investigacin de Manchas que se presumen de origen Seminal, se hace necesaria la utilizacin de Pruebas de Orientacin o Presuncin (Fosfatasa cida) y Pruebas de Confirmacin (Observacin de Espermatozoides o Deteccin del Antgeno Prosttico Especfico). El Anfgeno Prosttico Especfico (PSA) tambin conocido como p30, es una glicoprotena producida por la glndula prosttica, la cul hoy en da, esta siendo utilizada por las Ciencias Forenses como un marcador de la presencia de lquido seminal an y cuando el individuo sea azoosprmico o presente vasectoma. El HEXAGON PSA es una prueba inmunocromatogrfica de un solo paso para la deteccin de p30 la cul contiene anticuerpos fijos y mviles Anti PSA humano y anticuerpos Anti IgG de ratn como prueba de control. Una muestra de los indicios que se presume es semen, es transferida a un medio de extraccin (agua estril o Buffer 1X HEPES). El extracto o sobrenadante es adicionado gota a gota a la inmunocromatoplaca, en donde en caso de contener la muestra p30, se presenta la formacin de un complejo inmunolgico anticuerpo-antgeno-anticuerpo (sndwich) revelado por la formacin de una lnea de color rosa-violeta en el rea de prueba (T), debido a la acumulacin en dicho sitio de los anticuerpos mviles Anti-PSA humana marcados con partculas de color. Una segunda lnea color rosa-violeta en el rea de control (C) nos indica un buen funcionamiento de los reactivos y un adecuado procedimiento del estudio.

Reactivos

- 20 Inmunocromatoplacas individualmente selladas en blister de aluminio con desecante que constan de un conjugado mvil de una sustancia color rosa y anticuerpos monoclonales (anti-PSAh, ratn); anticuerpos fijos policlonales anti-PSAh (ratn) y anticuerpos anti-IgG de ratn (cabra).

Almacenamiento y Estabilidad

El kit de prueba es estable hasta su fecha de caducidad cuando es almacenado entre 2 y 25 C. Este no debe de usarse despus de su fecha de caducidad. Se debe evitar su congelamiento y exponerlo a temperaturas mayores de 30 C.

Caractersticas de la Prueba

La prueba es especfica para PSA humano. La sensitividad de la prueba es de 4 ng PSA/mL aproximadamente equivalente a una dilucin del lquido seminal de 1:450,000. Las muestras completas de semen contienen aprx. 1,800,000 ng PSA/mL. Una muestra positiva tpicamente es detectada entre los 58 minutos, pero un resultado negativo no deber de ser confirmado antes de que pasen 10 minutos. No leer resultados despus de 20 minutos.

Recoleccin de la Muestra

- En caso de Manchas sobre telas, tomar trozos de 5X5 mm del centro de las mismas.

- En caso de Hisopos, se puede utilizar nicamente la mitad. - Depositar las muestras en tubos de ensayo para

microcentrfuga de 2 mL o en tubos de ensayo normales de 5 mL.

- Adicionar 1 mL de HEPES (0.24%, pH 7.2) o 1 mL de agua estril, tapar y extraer por 2 horas a temperatura ambiente.

La muestra as recolectada es estable a temperatura ambiente y debe de ser analizada inmediatamente o bien congelarse a -20 C para su posterior anlisis.

Procedimiento e Interpretacin

- Centrifugue la muestra a 13 K rpm por 1 minuto. - Saque la inmunocromatoplaca de su empaque y colquela sobre

una superficie plana y nivelada. - Tome 200 L o aplique 3 gotas del supernadante dentro de la

apertura redondeada de la placa. - Espere aproximadamente 5 minutos y lea los resultados. - La intensidad del color de la lnea de prueba depende de la

concentracin de PSA en la muestra.

Los resultados negativos debern de confirmarse hasta despus de transcurridos 10 minutos.

Negativo (Fig. 1) Aparece solamente una lnea rosa de Control (C) en la parte superior de la ventana rectangular, indicativo de que la prueba se realizo correctamente y que los reactivos funcionan.

Positivo (Fig. 2 y 3) Aparece una segunda lnea rosa de prueba en la parte baja de la ventana rectangular, indicativo de la presencia de hemoglobina humana en la muestra.

Invalido (Fig. 4) No aparece ninguna lnea, o bien no aparece la lnea de control y la de prueba s. Repetir la prueba utilizando una nueva placa siguiendo cuidadosamente estas instrucciones.

Referencias:

Hochmeister, M. N., Borer, U., Budowle, B., Dirnhofer, R., Gehrig, C., Rudin, O., and Thali, M. Evaluation of prostate-specific antigen (PSA) membrane test assays for the forensic identification of seminal fluid, Journal of Forensic Sciences (1999) 44:1057-1060. Johnson E. D. and Kotowski T. M. Detection of prostate-specific antigen by ELISA, Journal of Forensic Sciences (1993) 38:250-258. Poyntz, F. M. and Martin, P. D. Comparison of PSA and acid phosphatase levels in postcoital vaginal swabs from donor and casework studies, Forensic Science International (1984) 24:17-25. Sensabaugh G. Isolation and characterization of a semen-specific protein from human seminal plasma: A potential new marker for semen identification, Journal of Forensic Sciences (1978) 23:106-15.

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T T T T

C C C

Fig. 1 Fig. 2 Fig. 3 Fig. 4

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