IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE
CALONECTRIA Y CYLINDROCLADIELLA
PRESENTES EN VIVEROS DE EUCALIPTO DE
PAYSANDÚ
Pilar GasparriPilar Gasparri
Guillermo Pérez
Raquel Alonso
Carlos A. Pérez
VI Jornada Técnica Protección ForestalTacuarembó, 15 de noviembre 2013
Enfermedades causadas por “Cylindrocladium”
Muerte de pie madre
Muerte de estacasPodredumbre de tallo
Anillado del tallo
Manchas foliares
Muerte de plantines en el campo
Tizón foliar por Cylindrocladium en Sur de China
FABI
Calonectria TaxonomíaReino: FungiFilum: Ascomycota Familia: NectriaceaeGenero: Calonectria
Biología
Fase Sexual = Calonectria
Peritecio de color rojo-anaranjado, ostiolados y con paredes rugosas. En su interior contiene ascos con ascosporas hialinas, fusiformes. ascos con ascosporas hialinas, fusiformes.
Fase Asexual = Cylindrocladium
Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas
Lombard et al., 2010
Cylindrocladiella
TaxonomíaReino: FungiFilum: AscomycotaFamilia: NectriaceaeGenero: Cylindrocladiella
Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas
Lombard et al., 2012
Conidios pequeños
Fase asexual
Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas
Estípite sin septo
Especies asociadas a manchas foliares
Ca. reteaudii
Ca. ilicicola
Ca. gracile IndiaCa. reteaudii
Sur oeste de Asia Norte de Australia
Ca. avesiculatum
Ca. theae
Ca. cadelabrum
Ca. colhounii
Ca. heptaseptatum
Ca. ovatum
Ca .parasiticum
Ca. pauciramosum
Ca. pteridis
Ca. reteaundii
Ca. variabile
Sudamérica
Ca. gracile Brasil
Ca. pauciramosum Sudáfrica
Ca. candelabrum
Ca. colhounii
Ca. floridanum
Ca. macroconidiale
Ca. parasiticum
Ca. ovatum
Ca. retaudii
Especies asociadas a podredumbre de tallo
Ca. pauciramosum Sudáfrica
Ca. gracile Brasil
Ca. scoparium
Ca. gracile
Especies asociadas a podredumbre de raíz
Ca. retaudii
Ca. scoparium.
Ca. gracile
Ca. curvatum
Ca. floridanum
Cy. camelliae
India
R. Reyna
Escasa información a nivel nacional
OBJETIVO
Identificar especies de Calonectria y Cylindrocladiella presentes en viveros de eucalipto en Paysandú
• Prospección• Aislamiento• Generación de colección de cultivos puros• Identificación por técnicas moleculares
Estrategia de investigación
MATERIALES Y MÉTODOS
Prospección - 4 viveros del departamento de Paysandú.
Plantines con síntoma de Calonectria
Sustrato Arena de mini jardines Suelo
MuestrasMuestras
Suelo Bandejas
Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total
A 6 - 14 4 - 24
B 3 3 9 1 - 16
C 3 - 8 5 - 16
Tipo de muestras tomadas en cada vivero
C 3 - 8 5 - 16
D 3 2 6 2 2 15
Total: 71
Cámaras húmedas : Inducción esporulación desde infección
Procesamiento
Pesca : Inducción esporulación desde sustrato
Obtención de cepas puras
Esporulación Lupa Conidióforos extracto de malta 2%
Purificación Repique punta de hifa Cepa pura
Generación de una colección de cultivos puros
Colección de cepas analizada
Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total
A 6 0 3 4 0 13
B 0 1 10 0 0 11
C 0 0 0 1 0 1
D 2 0 0 0 4 6
Total 8 1 13 5 4 31
Colección total: 120 cepas
Cepa 48 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40
Cepa 31 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40
Agrupamiento por morfología
Cepa 13 : Vivero A/sustratoN°muestra: 1.4
N°muestra: 11.40
Cepa 30 : Vivero B/plantinN°muestra: 11.40
N°muestra: 11.40
Extracción de ADN desde cultivo puro
Amplificación de la región del ITS
Secuenciación
Identificación molecular
Comparación con cepas de referencia
Análisis filogenético
Cy. lageniformis
Ca colombiensis CBS112221 T
PG25
Cy peruviana CBS113022
Cy camelliae STE U234
Cy peruviana CBS114943
Cy camelliae CPC237
PG10
Cy lageniformis CBS340.92 T
Cy lageniformis CBS111061
PG14
PG20
PG45
PG54
PG60
PG3
PG42
PG44
PG16
PG15
PG24
PG64
PG48
PG63
PG56
PG51
PG61
PG50
Ca sulawesiensis CBS125277 T
Ca sulawesiensis CBS125248
Ca cerciana CBS123693 T
Ca cerciana CBS123695
Ca. sulawesiensis
Complejo camelliae
100
100100
100
100
Cy. natalensisAnálisis filogenético
Análisis realizado por Máxima Parsimonia basado en la región ITS del ADN ribosomal
Ca cerciana CBS123695
Ca reteaudii CBS112143
Ca reteaudii CBS112144 T
Ca pseudospathiphylli CBS109165
Ca insularis CBS114558 T
Ca insularis CBS114559
Ca densa CBS125261 T
Ca densa CBS125250
Ca spathiphylli CBS116168 T
Ca spathiphylli CBS114540
Ca spathulata CBS555.92
Ca spathulata CBS112689
PG17
PG19
Ca scoparia CPC1675
Ca scoparia CPC1679
Ca pentaseptata VM3
Ca pentaseptata VM11
PG58
Ca humicola CBS125251 T
Ca humicola CBS125269
PG52
Ca pauciramosa CMW5683 T
Ca pauciramosa CPC416
Ca hawksworthii CBS111870 T
PG18
PG55
PG53
PG27
PG2
PG13
PG11
Ca. scoparia
Ca. humicola
Ca. pauciramosa
100
100
100
Número de cepas por especie por vivero
Presencia de las especies en los diferentes sustratos
Ca. pauciramosa
África y Australia: patógeno dominante en viveros
Reportada en Uruguay por Lombard et al. 2010
Ca. humicola
Ecuador: suelo
En un vivero, aislado desde compost
África y Australia: patógeno dominante en viveros
Presente en 3 de 4 viveros, en todos los sustratos analizados
Ca. sulawesiensis
Indonesia: patogénica
Presente en todos los viveros y en todos los sustratos analizados, menos arena
Complejo Cylindrocladiella camelliae
Cy. peruviana
Sudáfrica y Brasil: patogénica
Cy. camelliae
Australia, Brasil, Nueva Zelanda y Sudáfrica: patogénica, presente en suelo
Cy. lagenifromis
Brasil y Sudáfrica: patogénica
Sólo aislada de compost de un vivero
Sólo aislada de compost de un vivero
Conclusiones
• Dos géneros presentes en los viveros
• Varios grupos taxonómicos representados
• Confirmación del inóculo en todos los sustratos
• Necesidad de análisis de otras regiones genómicas
4 viveros1 Departamento
IDENTIFICACIÓN
• Conocimiento sobre la biología de cada especie
• Necesidad de evaluar patogenicidad
• Conexión con las especies presentes en el campo
• Resistencia de materiales genéticos
Agradecimientos
� UPM
� Vivero Dodera
� Vivero Nasca
Trabajo realizado en el marco de tesina de grado
Facultad de Ciencias
Financiación:
Muchas gracias!!!