8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 1/25
PRODUCCIÓN DE SEMILLA DE YUCA (MANIHOT-SCULENTA) LIBRE DE
CUERO DE SAPO MEDIANTE LOS SISTEMAS IN-VITRO DE
LABORATORIO.
1. DESCRIPCIÓN DEL PROBLEMA
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El Cultivo de yuca (Manihot-esculenta) es uno de los de mayor extensión en
el departamento del Meta, especialmente en la zona del Ariari con alrededor
de 800 hectreas cultivadas y una producción de !0"#00 toneladas
aproximadamente"
$no de los pro%lemas ms limitantes del cultivo de yuca (Manihot-esculenta)
es la en&ermedad conocida como cuero de sapo, El a'ente causal de la
misma no ha sido identi&icado, se cree
ue es un &itoplasma, esta
en&ermedad causa muchas prdidas a los productores" *a en&ermedad se
conta'ia por una +mosca %lanca +o +palomilla, esta patolo'a se encuentra
reportada en los departamentos de .oyac, Córdo%a, /ucre, uindo, 1alle
del Cauca y Meta (2CA, 3ia'nóstico 1e'etal 400!), ocasionando prdidas
hasta en un !005 ya ue a&ecta directamente la acumulación de almidón en
las races sin 'enerar sntomas o se6ales de la en&ermedad mani&estndose
solamente en al'unas races ue 7nicamente se o%servan al momento de la
cosecha"
*os productores de yuca se ven altamente a&ectados por este pro%lema ya
ue 'enera un impacto &uerte so%re sus in'resos y por ende so%re su calidad
de vida" rente a la alerta &itosanitaria el 2CA dispuso de al'unas medidas
tcnicas dedicado a la supervisión de cultivos de yuca a &in de evitar una
eventual presencia de la en&ermedad, sin tener ue esperar la o%servación
en el momento de la cosecha"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 2/25
/e piensa en los sistemas de la%oratorio in-vitro ya ue los medios
tradicionales no han sido e&ectivos de%ido a ue la en&ermedad se disemina
principalmente, por el uso de estacas contaminadas, como mtodo
tradicional se de%e realizar desin&estación de las herramientas condeter'ente o clorox, esto aparte de 'enerar 'astos adicionales no siempre es
e&ectivo"
*as plantaciones de yuca ue estn muy a&ectadas de%en incinerarse
incluyendo la parte area" /e de%en eliminar los residuos de cosecha
particularmente los tallos ue puedan re%rotar" *a limpieza de los campos
a&ectados es muy importante"
Actualmente existe un proyecto encaminado a &ortalecer las cadenas
productoras de yuca en Colom%ia, Costa 9ica y :ara'uay mediante
implementación masiva de tecnolo'as innovadoras (;<=A>9;,
2nnovaciones tecnoló'icas, 40!?) ue optimizan la productividad y reducen el
impacto del cam%io climtico so%re el cultivo, esto por medio de semillas
certi&icadas ue contienen micronutrientes y extractos ve'etales como
&ertilizantes de &cil acceso para los a'ricultores"
1.2. OBJETIVOS
1.2.1. Objet!" #e$e%&'
:roducir semilla de yuca (Manihot-esculenta) li%re de cuero de sapo
mediante los sistemas in-vitro en la%oratorio para incrementar la
renta%ilidad de los cultivadores"
1.2.2. Objet!" Ee*+,*"• Micropropa'ar una variedad de yuca (Manihot-esculenta) a partir de
meristemos"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 3/25
• Estandarizar los medios de cultivo de yuca (Manihot-esculenta Crantz)
para la propa'ación in-vitro de meristemos"• 3eterminar la relación, consumo-costo-%ene&icio entre el sistema de
propa'ación tradicional y el in-vitro"
1.. JUSTIICACIÓN
El consumo de yuca (Manihot-esculenta) en Colom%ia se'7n
senagrotaraza.blogspot.com.co se descompone en dos 'rupos@ la mayor
parte se destina al consumo humano directo, en &orma seca, y una
proporción peue6a se trans&orman en materias primas a'roindustriales"
Estudios realizados por el Centro 2nternacional de A'ricultura =ropical (Ciat) y
el Consorcio *atinoamericano para el desarrollo de la uca (Clayuca),
muestran ue el pas tiene un 'ran potencial de desarrollo de este cultivo
dndole valor a're'ado con un proceso a'roindustrial ue permita aumentar
la demanda para la alimentación humana y animal"
El %oletn de la corporación Clayuca se6ala%a ue para el a6o 40!# se
estima%a una producción de !00 mil toneladas de harina de yuca, ue
representara una disminución de cinco por ciento en las importaciones de
maz" *a proyección era lle'ar a producir #B0 mil toneladas en los si'uientes
cinco a6os" *as investi'aciones de Clayuca muestran tam%in ue el pas
de%e producir races de yuca a precios competitivos de !B a 4! dólares por
tonelada, de tal &orma ue, aunue se reduzcan los aranceles de
importación, los precios ue se manearn en Colom%ia permitan a los
productores o%tener 'anancias"
*a yuca (Manihot-esculenta) se'7n Agronet es el tercer producto en
producción nacional, se siem%ra en todo el pas pero se concentra en los
departamentos de Antiouia, Cauca, /antander, los de la Costa Atlntica y
Meta" /in em%ar'o se ha presentado una sensi%le disminución del rea
sem%rada en el pas de !?#"B0# hectreas en el 4008 a 8D"0BD hectreas
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 4/25
para el 40! lo ue mani&iesta una reducción del ##"#5 del rea sem%rada
de%ido a pro%lemas &itosanitarios especialmente la en&ermedad denominada
+cuero de sapo"
El uso de %uenas tcnicas a'ronómicas permite tener maneo y control
&itosanitario de pla'asF de tal manera ue estos mtodos no aporten al
deterioro am%iental y la posi%le contaminación del cultivo" 2nvesti'aciones
realizadas en Cu%a por la 2nstitución CE</A permitió desarrollar reactivos
para el dia'nóstico de a'entes de di&erentes en&ermedades virales y
%acterianas en cultivos en&ocada en la importancia económica no solo con
&ines comerciales, tam%in con la puesta en prctica en distintos sistemas de
producción mediante servicios y 'eneralizaciones (Margarita Ceballos et al.,
2009).
*o anterior usti&ica la utilización de metodolo'as de propa'ación in-vitro ue
permitan la limpieza de material ve'etal para la distri%ución a los productores
en el departamento y as aumentar la renta%ilidad de este cultivo y su
consecuente aumento del rea sem%rada"
1./. ORMULACION DEL PROBLEMA
G/e meora la renta%ilidad de los cultivadores, si se produce semilla de yuca
(Manihot-esculenta) li%re de cuero de sapo mediante los sistemas in-vitro de
la%oratorioH
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 5/25
2. MARCO DE REERENCIA
2.1. ESTADO DEL ARTE
En la $niversidad de .rasilia 3, .rasil, para el a6o 4008 &ue presentada la
si'uiente tesis por *" :edro .arreto Cid y *uis *"C"." Carvalho la cual nos
ha%la de la importancia del Icido A%scsico (A.A) en la Conservación 2n
1itro de la uca (Manihot-esculenta )"
*a tecnolo'a usual para conservación in vitro de colecciones de
'ermoplasma de yuca (Manihot-esculenta) es corrientemente la%oriosa y
emplea varias trans&erencias por a6o" Este procedimiento envuelve altos
costos en preparación de medios, consumo de tiempo, ries'os de
manipulación y necesidad de mucho espacio para la mantención de
colecciones en cmaras de cultivos" /e desarrolló un nuevo procedimiento
usando yemas axilares nodales cultivadas in vitro con di&erentes
concentraciones de cido a%scsico (A.A), con el o%etivo de reducir los
ciclos de trans&erencia de los cultivos mantenidos en un medio nutritivo
%sico tal como el /:
En el 2nstituto de 2nvesti'aciones de 1iandas =ropicales (2<212=), para el a6o
40! &ue presentado el si'uiente proyecto por Aym 9ayas, Manuel Ca%rera,
Arletys /antos, Mila'ros .asail, Jor'e *ópez, 1ctor Medero, oel .eovides"
el cual nos ha%la del E&ecto del manitol y el nitrato de plata en la
conservación in vitro de la malan'a (Kanthosoma spp")"
El mantenimiento en campo de los .ancos de >ermoplasma resulta muy
costoso, adems de los ries'os a ue se exponen" El cultivo de teidos
constituye una solución a estos pro%lemas siendo conveniente utilizar una
com%inación de tcnicas de almacenamiento en los cultivos de propa'ación
ve'etativa para no depender de una sola" El cultivo in vitro o&rece nuevas
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 6/25
alternativas para el meoramiento de la productividad y la producción de
material de siem%ra sano en malan'a (Kanthosoma spp")" *a presente
investi'ación se desarrolló en el *a%oratorio de Cultivo de =eidos del 2nstituto
de 2nvesti'aciones de 1iandas =ropicales (2<212=), Cu%a, con el o%etivo deestudiar las condiciones para la conservación en crecimiento mnimo in vitro
de 'ermoplasma de esta especie" Como material ve'etal se utilizó el clon de
Malan'a Kanthosoma L2<212= MK4008N" El esta%lecimiento del material
ve'etal y su posterior multiplicación &ueron realizadas se'7n la metodolo'a
recomendada por >arca et al" (!OOO)"
En la $niversidad <acional de Colom%ia, sede .o'ot, para el a6o 40!4 &ue
presentada la si'uiente tesis por Andrea 1suez, y Camilo E" *ópez la cual
nos ha%la de la identi&icación de polimor&ismos en 'enes candidatos de
resistencia en yuca (Manihot-esculenta Crantz)"
*a yuca (Manihot esculenta) es la %ase de la alimentación para ms de !000
millones de personas en el mundo" *a producción es severamente a&ectada
por en&ermedades ocasionadas por di&erentes pató'enos" *as plantas de
yuca han desarrollado una serie de protenas de resistencia (9) para
de&enderse de in&ecciones virales, %acterianas y &7n'icas, las cuales son
capaces de reconocer molculas espec&icas de los pató'enos" $n repertorio
amplio de estas protenas ha sido identi&icado en varias especies ve'etales,
no o%stante, a pesar de con&erir resistencia a pató'enos diversos, presentan
unos pocos dominios conservados" A partir de la reciente li%eración de la
secuencia completa del 'enoma de yuca se identi&icaron secuencias
similares a protenas 9 en este 'enoma"
En la $niversidad <acional de Colom%ia, sede .o'ot, para el a6o 40!# &ue
presentada la si'uiente tesis por /imón Corts, Jos 3avid Corts, Janeth
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 7/25
Julieta *adino, :aul Chavarria'a y Camilo *ópez la cual nos ha%la del
silenciamiento de 'enes de la ruta de %iosntesis de almidón en yuca"
*a yuca (Manihot-esculenta Crantz) presenta un alto contenido de almidón
en sus races almacenadoras, por lo ue es una potencial materia prima para
el mercado de a'ro-com%usti%les" En este proyecto se aprovecha la
estrate'ia del silenciamiento 'nico mediado por A9< de inter&erencia
(A9<i), para silenciar al'unos de los 'enes de la ruta de
%iosntesis del almidón y as o%tener variedades con contenidos y estructura
de almidón di&erentes" *os 'enes ue codi&ican para >.//, /.E y A>:asa
se ampli&icaron y clonaron en el vector %inario de silenciamiento
pPE**/>A=E" Estas construcciones &ueron empleadas para trans&ormar Callo Em%rio'nico ria%le (CE) de yuca de la variedad D0###" /e
o%tuvieron dos lneas trans'nicas correspondientes a la construcción
pPE**/>A=E@/.E las ue &ueron con&irmadas" Estas plantas presentaron
pro%lemas de crecimiento y de&ormaciones en las hoas" *os resultados
parecen su'erir ue el silenciamiento de los 'enes implicados en la
%iosntesis de almidón compromete la via%ilidad de las plantas de yuca"
En la $niversidad Central de 1enezuela ($C1)" acultad de A'ronoma, para
el a6o 40!0 &ue presentada la si'uiente tesis por Maril7 Chirinos, 9osala
1elsuez /", Arnaldo <o'uera, Mi'uel :rez, Jons Mata y 3elia :olanco la
cual nos ha%la del Cultivo de anteras en dos clones de yuca
El cultivo de anteras de yuca, Manihot esculenta Crantz, es una estrate'ia demeoramiento 'entico para la producción de plantas haploides, permitiendo
la selección de clones meorados y la detección de 'enes &avora%les
mediante las tcnicas moleculares" <o se ha precisado un protocolo ue
ase'ure la producción de plantas haploides en el cultivo, para ello se evaluó
la respuesta mor&o'nica de dos clones de yuca@ $C1-4B4D (dulce) y
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 8/25
$C14B? (amar'a), para tal &in se eval7o el tama6o del %otón &loral (!-
!,?mm y 4-4,?mm) ue determinar la &ase de desarrollo óptimo de la
microspora" /e evaluaron dos medios de cultivo@ Murashi'e y /Qoo' (M/) y
Chu et al", (<D) am%os suplementados con dos concentraciones de auxina"El teido calloso se di&erenció mor&o'nicamente en races, esto pudiera estar
asociado con las auxinas aplicadas al medio"
2.2. MARCO CONTE0TUAL
El proyecto a desarrollar tiene como contexto@
2.2.1. #e$e%&'&e De C"'"b&
Colom%ia es un pas u%icado al noroccidente de amrica del sur con una
'ran variedad de pisos trmicos desde suelos desrticos y zonas muy &ras
hasta campos h7medos y su%tropicalesF la &lora colom%iana es una de las
ms ricas de Amrica, &undamentalmente por su variedad" *a razón se
encuentra en la compleidad 'eoló'ica de su suelo y las numerosas re'iones
naturales en nuestro territorio"
Colom%ia es considerado un pas netamente a'rcola y productor de
materias primas" En Colom%ia, la a'ricultura se caracteriza por los
monocultivos tecni&icados por re'ión ue son@ ca6a de az7car, ca&, &lores,
al'odón, pltano, %anano, sor'o, maz, arroz, palma a&ricana, papa y yucaestos son los ms importantes"
El cultivo de la yuca tiene tanta importancia para la economa a'raria del
pas, ue se convierte en uno de los ren'lones ms si'ni&icativos por su
tradición y se u%ica en el tercer lu'ar de los cultivos permanentes en
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas-i… 9/25
Colom%ia, por esta razón tener prdidas en este cultivo a&ecta directamente a
la economa del pas"
2.2.2. #e$e%&'&e e' e&%t&e$t" e' Met&
El departamento del Meta est localizado en la re'ión central del pas, siendo
uno de los 4 departamentos de Colom%ia" Este territorio posee variedad de
pisos trmicos desde pramos (!"##5 del total), zonas &ras (#"#B5 del total),
/u%tropicales (?"0D5 del total) y clidos (8O"05 del total) y respecto al
clima es muy variado, puede de repente ha%er precipitaciones en la
cordillera, expandindose la lluvia por todo el departamento"
*a economa del departamento del Meta se %asa principalmente en laa'ricultura, la 'anadera, el petróleo, el comercio y la industria" *os
principales cultivos son el arroz, palma a&ricana, pltano y maz, adems de
los de cacao, ctricos y otros &rutales"
En el departamento del Meta la yuca no es uno de los cultivos principales ya
ue est distri%uida en otros departamentos del pas (Antiouia, Atlntico,
.olvar, Cauca, Cesar, Córdo%a, Ma'dalena, <orte de /antander, /antander
y /ucre), aunue este cultivo, no es un cultivo exi'ente en cuanto a suelo, seda desde en suelos muy po%res en elementos nutritivos hasta en auellos
con una alta &ertilidad" :re&eri%lemente los suelos han de tener
un pP li'eramente cido, entre D y B, con una cierta cantidad de materia
or'nica" El suelo del departamento del Meta es &uertemente cido y se
ha%a utilizado principalmente para la 'anadera, desde hace unas dcadas
es ue ha incursionado la a'ricultura "
2.2.. #e$e%&'&e e V''&!*e$*"
*a ciudad de 1illavicencio, capital del 3epartamento del meta, perteneciente
a la re'ión de la ;rinouia, se encuentra u%icada en el :iedemonte de
la Cordillera ;riental, al <oroccidente del departamento, con temperaturas
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 10/25
alrededor de 4BR C, y una altura de #DB msnmF posee 'ran riueza
hidro'r&ica"
*a zona rural de 1illavicencio posee variedad de suelos y pisos trmicos,
entre los cuales se destacan suelos arcillosos y arenosos con textura &ina,
%aa retención de humedad con suelos erosionados y suscepti%les a la
erosiónF de i'ual manera se encuentra distintos tipos de pisos trmicos
partiendo desde 44? metros so%re el nivel del mar hasta alturas de 4"000
msnm, ue permiten entornos con climas medios (!8RC-4?RC), &ros (!4RC-
!8RC) y en su mayora climas clidos (4?RC-4BRC)F de modo similar el relieve
tiene inclinaciones de hasta B?5 hacindose complicado el cultivo
a'ropecuario" /e'7n un artculo de El =iempo, 1illavicencio es el primer productor a nivel departamental de arroz secano ue unto con otros
municipios consolidan al Meta como el primer productor de arroz a nivel
nacionalF del mismo modo en 1illavicencio se puede hallar cultivos de
pltano, caucho natural, palma de aceite y soya, siendo en este 7ltimo lder a
nivel departamental"
/u economa se %asa en la a'ricultura, la 'anadera, y la minera
convirtindose en la despensa de ciudades en el interior del pas, siendoimportante su dinmica 'enerada por las vas de comunicación con otros
municipios del meta hacindose &icha clave para el desarrollo de los llanos
orientales" En la ciudad se encuentran 'randes industriasF en arroz@
2<3$/=92A :9;3$C=;9A 3E A99;S / A, M;*2<;/ 9;A / AF en
lcteos@ *AC=E;/ *A CA=29A, *AC=E;/ E* 9EC9E;, $E/;/
;>$9= :E/*ACF concentrados@ A*2ME<=;/ C;<CE<=9A3;/
2=A*C;*F semillas@ /EM2**A<; *=3AF %e%idas .A1A92A / A"*a siem%ra y producción de yuca en 1illavicencio a7n se encuentra &uera de
los planes de cultivo y leos de ser una cadena productiva, sus suelos no son
los meores para el cultivo de este producto perenne, trasladando su siem%ra
a municipios vecinos como la zona del Ariari en donde presenta mayor
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 11/25
&ertilidad en suelos, por tanto meor desarrollo del productoF deando a
disposición los suelos de 1illavicencio para la siem%ra de soya, pltano,
cacao, palma de aceite y 'anadera (ver anexo A)"
2.. MARCO TEORICO
2..1. A#ROINDUSTRIA ALIMENTARIA
3esde Pace mucho tiempo *atinoamrica ha sido un exportador de materiasprimas sin ser capaz de trans&ormarlas" *os in'enieros a'roindustriales
en&ocados hacia la a'roindustria alimentaria de%en ser pro&esionales
capaces de procesar productos a'ropecuarios para darle valor a're'ado,
resolviendo pro%lemas re'ionales y creando productos competitivos en un
mundo 'lo%alizado"
Esta carrera se en&oca en la com%inación de tra%ao prctico y teórico
incluyendo la ciencia y la investi'ación de nuevas tecnolo'as en laa'roindustria alimentaria"
Capacidades :ro&esionales@
- =rans&ormar materias primas a'ropecuarias en productos con valor
a're'ado"
- 3esarrollar y promover empresas a'roindustriales"
- 3esarrollar nuevos productos"
- Administrar y controlar la calidad de materias primas, procesos de
trans&ormación y productos terminados"
- :romover la se'uridad e inocuidad alimentaria"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 12/25
- Comercializar alimentos y productos a'ropecuarios no comesti%les"
- 2mplementar proyectos de investi'ación o de inversión a'roindustrial"
- Contri%uir al desarrollo del sector rural a'roindustrial"
- Coordinar y asesorar proyectos y pro'ramas a'roindustriales"
2..1.1. P%"3**4$ 5 e63%& &'e$t&%&
Crisis alimentarias y en&ermedades han deado al descu%ierto la exi'encia
ue se de%e hacer en los sistemas de control sanitario a &in de hacer &rente a
variaciones de cam%ios climticos" Esta pro%lemtica determinó uease'urar la inocuidad alimentaria pasara por diversos en&oues ue
comprende la cadena productiva con la ue se est tra%aando" :ara
ase'urar la inocuidad alimentaria se hace necesario@
- :revenir la inocuidad alimentaria de la cadena productiva con %uenas
tcnicas en el maneo del producto"- 3ise6ar y 'estionar un sistema de control de alimentos a &in de llevar
un se'uimiento durante el desarrollo del cultivo"
2..2. ASPECTOS #ENERALES DE LA YUCA
*a yuca (Manihot esculenta), es sem%rada desde Mxico hasta .rasilF as
mismo est distri%uida ampliamente en nuestro pas, desarrollndose
principalmente entre los climas medios y clidos (/immonds <"F =axonoma y
mor&olo'a de la yuca)" Con respecto a sus caractersticas, se'7n sea su
variedad y las condiciones medio am%ientales, esta planta alcanza en
promedio !"? metros de altura, el cultivo dura en promedio !4 meses,%sicamente su importancia dentro de la a'ricultura se de%e a las pocas
la%ores para su producción, adems de ue se produce cosechas &avora%les
%ao condiciones en las ue di&cilmente otra especie no podra hacerlo"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 13/25
2... IMPORTANCIA DE LA YUCA (MANIHOT ESCULENTA) EN LA
RE#IÓN
El comportamiento del cultivo de yuca (Manihot esculenta) durante los
7ltimos a6os el departamento del Meta, ha sido relativamente esta%le ya ue
en promedio se han ido cultivando cerca de ?"000 Qilo'ramos anuales"
3e%ido a la importancia de los %iocom%usti%les ue existen en la actualidad y
o%servando las ventaas comparativas del departamento del Meta &rente a
estas circunstancias, actualmente se estn esta%leciendo empresas en la
re'ión con el &in de esta%lecer y aumentar los campos de yuca"
*a yuca (Manihot esculenta) es usada com7nmente en el ho'ar y en la
industria" /u importancia en el uso domstico es la alimentación tanto
humana como animal, de%ido a ue se adapta a distintos tipos de clima y
suelos, lo ue permite cultivar la planta sin mayores costos" :or otro lado en
la industria es usada para la &a%ricación de concentrados utilizados en
sectores 'anaderos avcolas, as como la invención de nuevos productos
adhesivos"
En la yuca (Manihot esculenta) ca%e la pro%a%ilidad de 'enerar com%usti%les
a manera de etanol de%ido a su 'ran producción de 400 * de alcohol por
tonelada de materia seca hacindose acreedora de la se'unda especie ms
productora de alcohol"
2../. CULTIVOS IN VITRO
*a micro-propa'ación, es una tcnica desarrollada para la producción masivade plantas, ue ha sido utilizada con xito desde a6os anteriores no muy
leanos" El cultivo in-vitro tiene la ventaa de multiplicar rpidamente material
clonado li%re de en&ermedades (Pold'ate y Sandvoort, isiolo'a del cultivo
in-vitro")"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 14/25
En la mayor parte de los procedimientos empleados en la actualidad no se
hace re&erencia al control e&ectivo del desarrollo de las plantas in-vitro" /in
em%ar'o, las tasas de crecimiento, desarrollo y muchas de las caractersticas
&isioló'icas y mor&oló'icas de las plantas &ormadas in-vitro estnin&luenciadas por el am%iente &sico, umico y 'aseoso de los recipientes"
2../.1. C&%&*te%+t*& e' &be$te $ !t%" e$ '& *%"-%"&6&*4$
*"$!e$*"$&'
/on muchos los &actores ue inciden en el crecimiento mor&o'nesis de las
plantas in vitro"
*os protocolos de propa'ación >eneralmente desarrollan proyectos a partir de la modi&icación de las condiciones umicas del medio, manteniendo
como una constante 'eneral los &actores medioam%ientales del cultivo,
donde los explantes se desarrollan %ao condiciones aspticas dentro de un
recipiente hermtico con %aos niveles de luz, en un medio ue contiene
nutrientes ue 'arantizan un crecimiento heterótro&o adems de una elevada
humedad relativa"
2../.2. &*t"%e 73e $,'35e$ e$ '& *%"-%"&6&*4$
*os &actores ms relevantes ue determinan el xito en el proceso de micro-
propa'ación en sus di&erentes &ases son las si'uientes@
- :lanta donadora@ /e'7n /tyler la edad &isioló'ica del explante in&luye en su
respuesta in vitro :ues los reuerimientos hormonales y nutricionales varan
con la &uente del explante"
- Explante@ *a /elección del explante puede hacerse teniendo en cuenta el
sistema de propa'ación de la plantaF as en las plantas ue se reproducen
por semilla %otnica las &uentes ms usual son a partir de em%riones o de la
plntula"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 15/25
actores &sicos@ *a or'ano'nesis puede estar a&ectada por una 'ran
variedad de &actores como luz temperatura, consistencia del medio y :h (*itz
y Jarret, :ropa'ación va or'ano'nesis)"
/e'7n Chee, la temperatura de incu%ación para la mayora de las &amilias
oscila entre 4# y 48R C, y sólo en un reducido n7mero de especies la
&luctuación en los re'menes de dicho &actor puede estimular la
or'ano'nesis (Chee, Micro-propa'ación)"
:or otro lado se'7n 1illalo%os la luz es un &actor &undamental en la
mor&o'nesis /e involucra varios componentes como intensidad, &otoperiodo
y calidad de este modo, %ao condiciones in vitro, la planta es un ser
heterótro&o u depende las &uentes de car%ohidratos del medio, ya ue
se'7n Ando, en la concentración de C;4 durante el perodo est por de%ao
del punto de compensación y aumenta de manera constante durante el
perodo oscuro (1illalo%os, ;%tención de plantas de clavel)"
Medio de cultivo@ El medio de cultivo como soporte y &uente de los elementos
para el crecimiento de los explantes, est condicionada por di&erentes
componentes del potencial hdricoF >am%or', se re&iere a la relación entre la
composición &isicoumica y el xito en cultivo de teidos (>am%or', :lant
tissue culture media in-vitro)"
Entre otros &actores ue a&ectan la or'ano'nesis est el pP del medio, la
humedad relativa, la consistencia del medio, entre otros"
2..8. SISTEMAS DE MULTIPLICACION DE YUCA
3esde el punto de vista del cultivo de teidos, la yuca (Manihot esculenta) sepuede multiplicar %ao dos condicionesF la primera, en condiciones ex vitro, a
travs
de la semilla %otnica (sexual), y a partir de estructuras de la planta
o clulas somticasF %ao condiciones in vitro se puede hacer por esuees
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 16/25
(meritemos o pices), estacas (nudos) o a partir de clulas somticas
('eneración de novos de estructuras meristematicas)"
2..8.1. M9t"" e:3&'
*a semilla %otnica de yuca (Manihot esculenta) 'enerada como resultado de
la polinización cruzada ue puede darse por las caractersticas &lorales de
esta especie, y la &alta de &ecundación en al'unos materiales comerciales, no
'arantiza a nivel comercial homo'eneidad en cuanto a las caractersticas
productivas del material parental ni la cantidad para el esta%lecimiento de
'randes extensiones, por lo ue siempre ue se dispon'a de material ve'etal
su&iciente, se recurre a sistemas de propa'ación a partir de estacas, por su
parte, es importante aclarar ue por ser la semilla el resultado de
cruzamiento 'entico, su producción es la puerta de entrada a pro'ramas de
meoramiento"
2..8.2. M9t"" &e:3&'
Pace re&erencia al empleo de partes o clulas somticas para la 'eneración
de nuevas plantas, entre estos mtodos podemos citar@
Mtodo tradicional@ *os tallos son el medio de multiplicación asexual de la
especie al servir como semilla para la producción comercial de la yuca"
A nivel comercial, los productores de yuca se autoa%astecen del material al
momento de la cosecha, ya ue las estacas provenientes de plantas
maduras permiten su aprovechamiento como semilla inmediatamente
despus de cortadas"
:ara ello, idealmente, las estacas de%en seleccionarse %ao criterios
&itosanitarios óptimos, &sicos como %uen 'rosor, apariencia &resca, con el &in
de sacar porciones de !? a 40 cm ue sern &inalmente las ue se utilizan
para el esta%lecimiento"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 17/25
2..;. MULTIPLICACIÓN IN VITRO DE YUCA
El proceso esta%lecido por C2A=, a partir de la &ormación de yemas axilares,
se %asa en la &ormación de %rotes a partir de las yemas ue se encuentran
en las axilas de las hoas ue son posteriormente divididos y su%cultivados
cclicamente"
A pesar de ue este mtodo no es el ms rpido, ha sido el ms empleado a
nivel comercial por su adapta%ilidad a un 'ran n7mero de especies y por ue
con este sistema se reportan los menores ndices de variación 'entica, sin
em%ar'o, se'7n Alvard y Col existe la posi%ilidad de automatizar al'unas
etapas del proceso con la utilización de sistemas de inmersión temporal de
los explantes"
El proceso de micro propa'ación, actualmente tiene revalidado lo propuesto
por Murashi'e !OB#, uien di&erencia%a en este proceso 7nicamente tres
&ases, pues el resultado acumulado de di&erentes investi'adores ha permitido
identi&icar cinco &ases crticas para lo'rar resultados esperados"
&e <. 3enominada &ase preparativa, de%e 'arantizar las condiciones de
limpieza a los teidos ue van a in'resar a la%oratorio y ue el clon
corresponda al material ue se necesita"
En esta &ase, es necesario realizar un procedimiento umico &un'icida y
%actericida para limpieza de los teidos, adems de la &ertilización con una
solución nutritiva %rotes vi'orosos y sanos ue podrn ser empleados
la%oratorio aproximadamente cuatro semanas despus"
*os procesos de desin&ección a los cuales, se somete el material ve'etal
durante la &ase 0 de la micro propa'ación, son su&icientes para eliminar los
microor'anismos pató'enos y no pató'enos ue se encuentran en las
del teido ve'etal" *as en&ermedades sistmicas, producidas por %acterias,
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 18/25
virus,
:hytoplasmas y 9icQettsias pueden escapar y diseminarse por el
material ue se propa'a"
&e I= Consiste en esta%lecer 2n vitro el material o%tenido de la &ase anterior,
con el &in de o%tener plantas via%les *os o%etivos a alcanzar en esta &ase, no
de%en ser demasiado am%iciosos propósito 'eneral de%e ser lo'rar un cultivo
axenico y via%le"
Es preciso aclarar, ue en el presente tra%ao las dos &ases anteriores &ueron
desarrolladas en C2A=, y ue en $nillanos se desarrolló a partir de la &ase ll"
ue #E o de :roli&eración, 'arantizar una cantidad %sicamente %usca enmedio o de determinada de material para posteriormente desarrollar la &ase lll
o de enraizamiento"
&e ''= Multiplicación, se'7n ;rellana esta es la &ase ms importante in
vitro, y es en ella donde se determinante en todo pro'rama de propa'ación
de&ine, no solo el n7mero de plantas a o%tener, sino su calidad 'entica,
por ser en esta &ase donde se podran producir las variantes somachonales"
*a proli&eración, puede lo'rarse con el uso de sustancias re'uladoras del
crecimiento como componentes en un medio de cultivo previamente
esta%lecido y un adecuado maneo del proceso in-vitro"
Es importante tener presente ue con la edad in vitro, o el n7mero de
su%cultivos, cam%ia la reacción de los explantesF a medida ue aumenta el
n7mero de %rotes por explante, adems puede incrementarse la &ormación
de yemas adventicias"
&e III= Enraizamiento, se considera la ms voluminosa de todo el proceso
pues cada una de las plantas &ormadas durante la &ase anterior, de%e ser
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 19/25
cultivada in vitro, para ue &orme adems de hoas verdaderas, su&icientes
races ue le permitan a%sor%er los nutrientes de su nuevo sustrato"
En esta &ase, si no se lo'ra uni&ormidad en las vitroplantas, se pueden dar pro%lemas en la aclimatación y comercialización, al 'enerar con&usión si la
variación corresponde a caractersticas 'enticas o epi'enticas"
Esta &ase, inicia 'eneralmente con el trasplante a un medio de cultivo con
menor concentración de sales" /e'7n 1illalo%os y =horpe el medio de
Murashi'e (!OD4) diluido al ?05 ha dado resultados positivos en di&erentes
especies, as mismo, el cam%io del %alance hormonal, disminuyendo las
citouininas y aumentando las auxinas exó'enas" :ara el caso de yuca, elmedio empleado solo &avorece el desarrollo de teido meristematico activo,
causado posi%lemente por ue ausencia de 'i%erelinas no &acilita el
rompimiento de latencia de yemas y posterior desarrollo de teido areo
en nudosF en este sentido, y teniendo en cuenta ue el aumento del
&otoperiodo incide positivamente en la activación de yemas de al'unas
especies, sena importante evaluar la respuesta de estos 7ltimos al aumento
de horas luz"
&e IV@ Aclimatación, durante esta &ase se pretende adaptar el material
ve'etal desarrollado en la &ase de enraizamiento para ue puedan
desarrollarse posteriormente en condiciones naturales"
/e'7n A'ronet, durante las &ases de crecimiento en la%oratorio, las plantas
crecen %ao condiciones de alta humedad relativa, %aa intensidad luminosa,
temperatura relativamente homo'nea, escaso intercam%io 'aseoso y
medios ricos en compuestos or'nicos, lo ue 'enera un crecimiento ue
di&iere del crecimiento en el campo"
2..;.1. Ste& e I$e%4$ te"%&' &3t"&t>&"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 20/25
Este sistema, desarrollado por =eisson y Alvard, ha sido pro%ado con xito en
em%rio'nesis para propa'ación en di&erentes especies BF as mismo
Esco%ar et al, mostró ue con 92=AT, la tasa de multiplicación aumenta de
!@ en sistema convencional semisólido, hasta !@? a !@!!"0
2..?. ASPECTOS ITOSANITARIOS EN LA PROPA#ACIÓN
VE#ETATIVA
El principal pro%lema ue se %usca solucionar a travs de la implementación
del proceso de multiplicación 2n vitro de yuca en la $niversidad, es la
di&icultad para la consecución de material re'ional li%re de pató'enos para el
esta%lecimiento de reas comerciales" *ópez a continuación explica el
propósito de esta necesidad y de las implicaciones del uso tradicional@
UEl sistema de multiplicación por estacas ue ha sido utilizado
tradicionalmente est asociado a la transmisión de &ito-pató'enos de
importancia económica en el desarrollo del cultivo de yucaU
3icha a&ección se re&lea principalmente por@
• 3isminución en la %rotación de las estacas"• Muerte de estacas despus de la %rotación"• 9educción del vi'or normal de la planta"• 9educción del n7mero de races en'rosadas"• :ermanencia de inoculo potencial para siem%ras a &uturo
:or lo anterior, es necesario el uso de semilla limpia para casos de
propa'ación ve'etativa ya ue el esta%lecimiento de un sistema de
a%astecimiento de estacas de %uena calidad es importante porue@
• Aumenta la productividad del cultivo"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 21/25
• 9educe la diseminación de pla'as y en&ermedades• Aumenta el ciclo de vida de los 'enotipos• :ermite un uso ms e&iciente de los insumos a'rcolas
[email protected] P%$*&'e &t46e$" t%&$t" "% et&*&
A continuación se relacionan los principales pató'enos transmitidos por el
material de siem%ra
[email protected] P&t46e$" t9*"
/on auellos capaces de invadir toda la planta, 'eneralmente no producensntomas en los teidos li'ni&icados y maduros lo cual di&iculta la identi&icación
del material en&ermo a vez Entre los pato'enos sistmicos diseminados por
el material de siem%ra estn@
H"$6"=
Diplodia manihotis, Fusanum solani, Fusanum oisporum ! "phaceloma a la
cual es causante del s7per alar'amiento, y de acuerdo con *ozano (!O84),
aunue no es propiamente sistmico produce esporas en chancros
epidermales, so%re los teidos maduros del tallo y el 'ran n7mero de ellos lo
hace parecer sistmico"
B&*te%&@ #hantomonas aonopodis p$ manihotis@ Causante de anu%lo
%acterial"
P5t"'&&@ Existe una denominada cuero de sapo de alto potencial
limitante de la producción de uca a nivel nacional ue a&ecta las races de la
yuca, esta ha sido reportada con incremento de la &recuencia en Colom%ia,
.rasil y 1enezuela" En Colom%ia por eemplo, incidencias de ms del B05
han sido reportadas en cultivos comerciales de uca en reas de producción
del 1alle del Cauca, Meta y la Costa <orte"
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 22/25
*os sntomas de la en&ermedad consisten de peue6as &isuras lon'itudinales
distri%uidas en la epidermis de la raz" 3ependiendo de la severidad de los
sntomas, la pro&undidad y n7mero de lesiones aumenta la proporción de
races de&ormadas"
Aunue no se tiene claridad so%re el a'ente causal de la en&ermedad, este
proceso de investi'ación ha 'enerado dos corrientes ue discuten si se trata
de un 1irus o un :hytoplasma"
$n reciente estudio, su'iere la existencia de una asociación entre cuero de
sapo y un :hytoplasma sin em%ar'o, actualmente entidades como C2A=,
contin7anla investi'ación para resolver el a'ente causal"
[email protected] P&t46e$" L"*&'>&"
/on auellos cuya capacidad invasora no es sistmica, o sea, ue solo
invaden zonas o partes limitadas del tallo" /u presencia se caracteriza por la
&ormación de chancros, a'allas y reas necróticas"
Entre ellas podemos encontrar a %r&inia caroto$ora p$ caroto$ora causando
pudrición %acterial del tallo, Agrobacterium tume'aciens causando a'alla
%acterial del tallo y roma spp causante de la mancha de anillos circulares"
2.. INNOVACIÓN EN MULTIPLICACIÓN IN VITRO DE POSIBLE
APLICACIÓN EN YUCA.
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 23/25
El proceso de multiplicación se ha visto limitado en su escala a nivel
comercial por los altos costos de producción, principalmente por el uso de
insumos importados y el alto consumo de ener'a elctrica"
En este sentido, las %io&%ricas desarrolladas en Cu%a han desarrollado
tra%aos de investi'ación ue han posi%ilitado la introducción de innovaciones
y meoras en las tcnicas de cultivo de teidos, entre ellas las ms relevantesson@
• $tilización de luz natural indirecta como &uente de iluminación en
cuartos de crecimiento"• 3esarrollo de nuevos mtodos de desin&ección, y esterilización
umico, sin el uso de altas temperaturas"• 3esarrollo de un sistema de control total de la calidad, ue permite la
identi&icación de los puntos crticos en cada una de las &ases"
/e'7n >onzlez un aspecto importante para incluir este producto, es el
hecho de aumentar en un #?5 el ndice de multiplicación varias especies
(ca6a, pltano, papa, %anano, pi6a, malan'a, &orestales)"
i "!" E em lo de :ro a ación de uca in-vitro en *a%oratorio
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 24/25
As mismo, re&erente al control en la contaminación, se muestran niveles ue
en promedio no supera el ?5, adems de los %ene&icios mencionados enahorro de ener'a, tiempo y aumento en la e&iciencia de los procesos
comerciales"
ANE0O A
8/19/2019 PRODUCCIÓN-DE-SEMILLA-DE-YUCA-MANIHOT-SCULENTA-LIBRE-DE-CUERO-DE-SAPO-MEDIANTE-LOS-SISTEMAS-IN-VI…
http://slidepdf.com/reader/full/produccion-de-semilla-de-yuca-manihot-sculenta-libre-de-cuero-de-sapo-mediante-los-sistemas… 25/25
9EE9E<C2A/
• http@VVWWW"&onta'ro"or'VproyectosVinnovaciones-tecnol5C5.'icas-
en-el-maneo-inte'rado-del-cuero-de-sapo-de-la-yuca-manihot-escu• http@VVWWW"ica"'ov"coV'etattachmentV&ae#Dc0d-#&e0-#e%c-8%8O-
#e08c!#Da?eV:u%licacion-0"aspx • http@VVWWW"eltiempo"comVarchivoVdocumentoVMAM-!44O84?• http@VVWWW"eltiempo"comVarchivoVdocumentoVMAM-!D?88
Top Related