UNIVERSIDAD ESTATAL PENINSULA DE SANTA
ELENA
FACULTAD DE CIENCIAS DEL MARESCUELA DE BIOLOGIA MARINA
TEMA:
COMPARACIÓN DEL NIVEL PROTEICO DEL HÍGADO EN 4 ESPECIES DE PECES COMERCIALES DE LA
PROVINCIA DE SANTA ELENA DURANTE NOVIEMBRE 2011-FEBRERO 2012
INFORME FINAL
ASIGNATURA:
BIOQUÍMICA
DOCENTE:
Q.F. MERY RAMÍREZ
INTEGRANTES
SAÁ GÓMEZ JOSÉ DANIELSUÁREZ LAINEZ ALEXIS HERNÁN
VITERI SANTANA ERMEL ROLANDO
Santa Elena 2012
Índice.1. INTRODUCCIÓN:........................................................................................................1
1.1.1. Proteínas............................................................................................................1
1.1.2. Composición......................................................................................................1
1.1.3. Estructura...........................................................................................................1
1.1.4. Propiedades químicas.......................................................................................2
1.1.5. Clasificación.......................................................................................................2
1.1.6. Función de las proteínas...................................................................................3
1.2. El valor nutritivo de Pescados y Mariscos............................................................3
1.3. Principales características generales de las especies estudiadas..........................5
1.3.1. HOJITA:.............................................................................................................5
1.3.2. SARDINA:..........................................................................................................6
1.3.3. PÁMPANO:........................................................................................................6
1.3.4. CARITA:.............................................................................................................8
2. OBJETIVOS:.............................................................................................................10
2.1. Objetivo General.................................................................................................11
2.2. Objetivos específicos:.........................................................................................11
2.3. Hipótesis:............................................................................................................11
3. METODOLOGÍA........................................................................................................11
3.1 Área de estudio:...................................................................................................11
3.2. Tratamiento y análisis de muestras:...................................................................12
3.3. Materiales:..........................................................................................................12
3.4. Métodos:.............................................................................................................13
3.4.1 Procedimiento...............................................................................................13
3.4.2 Determinación de la concentración...............................................................13
4. RESULTADOS:.........................................................................................................14
5. CONCLUSIÓN:..........................................................................................................17
6. RECOMENDACIONES:............................................................................................18
7. ANEXOS
8. BIBLIOGRAFÍAS
1. INTRODUCCIÓN:
1.1.1. Proteínas
Las proteínas están consideradas como el constituyente más importante de
cualquier célula viviente y representan el grupo químico más abundante en el
cuerpo de los animales, con excepción del agua; en promedio, las proteínas
son componentes esenciales tanto del núcleo celular como del protoplasma
celular y por lo tanto constituyen el grueso del tejido muscular, órganos
internos, cerebro, nervios y piel.
1.1.2. Composición
Las proteínas son compuestos orgánicos muy complejos con un alto peso
molecular. En común con los carbohidratos y lípidos, sus elementos
constitutivos son carbono (C), hidrógeno (H) y oxígeno (O) y además contienen
alrededor de un 16% de nitrógeno (N: rango 12–19%), y en ocasiones fósforo
(P) y azufre (S).
1.1.3. Estructura
Las proteínas difieren de otras macromoléculas biológicamente importantes,
tales como los carbohidratos y lípidos en su estructura básica. Así por ejemplo;
en contraste con la estructura de dichos grupos químicos, que a menudo están
formados por la repetición de unidades idénticas o muy similares (p. ej. la
glucosa es la unidad que se repite como elemento constitutivo del almidón,
glicógeno y celulosa), las proteínas por el contrario, pueden estar formadas
hasta por 100 unidades básicas diferentes (aminoácidos). Por lo que
consecuentemente es posible tener una gran variabilidad y rango de
compuestos, no sólo en relación a la composición, sino también en cuanto a la
forma de la proteína.
1
1.1.4. Propiedades químicas
Las proteínas son compuestos coloidales por naturaleza, con diferente grado
de solubilidad al agua, pasando desde la queratina que es insoluble, hasta las
albúminas que son altamente solubles. Todas las proteínas pueden ser
“desnaturalizadas” por el calor, ácidos fuertes, álcali, alcohol, acetona, úrea y
por sales de metales pesados. Cuando las proteínas son desnaturalizadas
pierden su estructura única, y consecuentemente poseen diferentes
propiedades químicas, físicas y biológicas (p. ej. inactivación de enzimas por el
calor).
1.1.5. Clasificación
Las proteínas pueden ser clasificadas en tres grupos principales de acuerdo a
su forma, solubilidad y composición química:
a. Proteínas fibrosas: son aquellas proteínas animales insolubles, que
generalmente son muy resistentes al desdoblamiento enzimático
digestivo. Las proteínas fibrosas existen como cadenas filamentosas
alargadas. Ejemplos de proteínas fibrosas incluyen el colágeno (principal
proteína del tejido conectivo), la elastina (presente en los tejidos
elásticos, tales como arterias y tendones), y la queratina (presente en el
pelo, uñas, lana y pezuñas de mamíferos).
b. Proteínas globulares: incluyen todas las enzimas, antígenos y proteínas
hormonales. Las proteínas globulares, a su vez se subdividen en
albúminas (proteínas solubles al agua coagulables con calor, se les
encuentra en el huevo, leche, sangre y en muchos vegetales); las
globulinas (insolubles o escasamente solubles en agua, están presentes
en el huevo, leche, sangre y sirven como principal reserva proteínica en
las semillas de vegetales); e histonas (proteínas básicas, de bajo peso
molecular, solubles al agua, se les encuentra en el núcleo celular,
asociadas con el ácido desoxirribonucleico-ADN).
c. Proteínas conjugadas: son proteínas que al ser hidrolizadas, dan lugar a
grupos no proteínicos y aminoácidos. Algunos ejemplos, incluyen las
2
fosfoproteínas (la caseína de la leche, fosvitina de la yema del huevo),
glicoproteínas (secreciones mucosas), lipoproteínas (membranas
celulares), cromoproteínas (hemoglobina, hemocianina, citocromo,
flavoproteínas), y nucleoproteínas (combinación de proteínas con ácidos
nucleícos, presentes en el núcleo celular).
1.1.6. Función de las proteínas
La función de las proteínas puede ser resumida como sigue:
Reparación del tejido dañado y desgastado (mantenimiento de tejido) y
formación de tejido nuevo (síntesis de nuevas proteínas durante el
crecimiento).
La proteína suministrada en la dieta, puede ser catabolizada y actuar
como fuente de energía o puede servir como substrato para la formación
de lípidos y carbohidratos en el tejido.
La proteína suministrada en la dieta, es requerida dentro del cuerpo del
animal para la formación de hormonas, enzimas y una variedad muy
amplia de otras substancias biológicamente importantes, tales como los
anticuerpos y hemoglobina.
1.2. El valor nutritivo de Pescados y Mariscos
Desde el punto de vista nutritivo, el pescado es un alimento con una
composición parecida a la de la carne, aunque también con marcadas
diferencias.
Su composición nutritiva y el valor energético difieren según la especie. Incluso
dentro de la misma varía en función de diversos factores, como la estación del
año y la época en que se captura, la edad de la pieza, las condiciones del
medio en el que vive y el tipo de alimentación.
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El agua, las proteínas y las grasas son los nutrientes más abundantes y los que
determinan aspectos tan importantes como su valor calórico natural, sus
propiedades organolépticas (las que se aprecian por los sentidos: olor, color,
sabor), su textura y su capacidad de conservación.
El contenido medio de proteínas de pescados y mariscos es de 18 gramos por
cada 100 gramos de alimento comestible, si bien los pescados azules y los
crustáceos pueden superar los 20 gramos de proteínas por 100 gramos de
producto. Es decir, 100 gramos de casi cualquier pescado aportan alrededor de
una tercera parte de la cantidad diaria recomendada de proteínas. La proteína
de pescados y mariscos es de elevado valor biológico, al igual que la que
contienen otros alimentos de origen animal, con un perfil de aminoácidos
esenciales muy parecidos entre ellos y este patrón apenas se altera tras los
procesos de congelación y secado a los que son sometidos algunos pescados.
El tipo de proteínas del pescado es lo que determina su textura o consistencia,
su digestibilidad, su conservación, así como los cambios de sabor y color que
experimenta el pescado durante su trayectoria comercial hasta llegar al
consumidor. En concreto, el pescado posee una proporción de colágeno
inferior a la carne. El colágeno es una proteína del tejido conjuntivo que
confiere mayor firmeza y dureza, motivo por el cual el pescado es más tierno y
es más fácil de digerir que la carne y el marisco.
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1.3. PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LAS ESPECIES
ESTUDIADAS
1.3.1. HOJITA: Nombre científico: Chloroscombrus orqueta
Nombre común: hojita
Clasificación científica
Reino: Animalia
Filo: Chordata
Clase: Actinopterygii
Subclase: Neopterygii
Infraclase: Teleostei
Superorden: Acanthopterygii
Orden: Perciformes
Familia: Carangidae
Género: Chloroscombrus
Especie: C. orqueta
Distribución geográfica
Se encuentra desde el sur de California (Estados Unidos) hasta el Perú, incluyendo el Golfo de California.
Orqueta, Bonito ojón, Casabe, Jurel pardo, Jurel citarita, Horqueta del Pacífico
Se distingue por su forma ovalada, muy comprimido, con el perfil ventral más convexo que el perfil dorsal; radios dorsales VIII + I, 25-28; radios anales II + I, 25-28; sin aletillas detrás de la aleta dorsal y anal; línea lateral con un arco anterior pronunciado y corto; 6-12 escudetes muy débiles en la base de la cola; cuerpo escamado.
Cuerpo y cabeza color azul oscuro metálico arriba, plateado en los costados y el vientre; una mancha oscura en el borde superior del opérculo; también tiene una mancha negra en forma de montura en la parte superior de la base de la cola; aleta caudal amarilla.
Tamaño: hasta 31 cm.
Hábitat: pelágico, forma cardúmenes en ambientes costeros de poca profundidad, también entra en esteros.
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1.3.2. SARDINA:
Nombre Científico: Sardinops sagax sagax
Nombre Común: Sardina
Nombre en Inglés: Sardine
Nombre FAO: Sardina peruana.
Característica de la especie
La sardina es una especie pelágica, con cuerpo alargado y grueso que se
adelgaza hacia el vientre. Cabeza aguda, aplanada por arriba y en los lados
moderadamente comprimido; sus tamaños pueden alcanzar hasta los 36 cm de
longitud total. Presenta color azulino en el lomo y plateado en los lados; con
manchas oscuras a los costados. Viven en ambientes relativamente cálidos,
con rangos de temperatura del agua que oscilan entre 17° y 25°C. La salinidad
puede variar entre 34,8 y 35,3 UPS.
La sardina tiene hábitos gregarios formando cardúmenes.
Patrones de distribución y abundancia
La distribución de esta especie es amplia en el Pacífico Sur oriental, desde
Ecuador hasta Chile (01°39'– 37°00'S), incluyendo los alrededores de las Islas
Galápagos.
La distribución longitudinal alcanza las 200 millas náuticas e incluso sobrepasa
esta distancia. Verticalmente llegan hasta los 100 m de profundidad.
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1.3.3. PÁMPANO:
NOMBRE CIENTÍFICO: PEPRILUS MEDIUS
FAMILIA: STROMATEIDAE
ORDEN: PERCIFORMES
CLASE: ACTINOPTERYGII
Distribución Geográfica:
Su distribución va desde 32° 437 N hasta 18° 20' S en el Océano Pacifico Oriental.
Es una especie bentopelágica costera de aguas cálidas y de fondos blandos,
forma cardúmenes y se distribuye desde el Golfo de California (México) hasta
Pisco (Perú) (CHIRICHIGNO & CORNEJO 2001). Se ubica a profundidades de
entre 10 y 40 m, y en varias zonas climáticas: Subtropical Norteño, Tropical
Norteño, Ecuatorial y Templado Sureño (DISCOVER LIFE 2009)
Composición química
Análisis proximal (%)
Humedad: 74.1 Grasa: 8.0 Proteína: 17.3
Talla mínima de captura
Mediante la R. M. Nº 371-2007-PRODUCE se estableció la talla mínima de
captura (TMC) de esta especie en 23 cm LT, con una tolerancia máxima de
ejemplares juveniles de 20 %, norma sustentada por el informe técnico de
IMARPE titulado “Aspectos biológico-pesqueros y talla mínima de captura de
“chiri” Peprilus medius (Peters) en el norte del mar peruano”.
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1.3.4. CARITA:
Nombre científico: Selene peruviana (Guichenot, 1866)
Nombre común: Espejo, jorobadito, pampanito
Nombre en inglés : Peruvian moonfish
Nombre FAO : [En] Pacific moonfish
Orden: Perciformes
Familia: Carangidae
Selene peruviana, tiene el cuerpo algo rectangular y muy comprimido, la
cabeza moderadamente alta con la nuca redondeada, el perfil del hocico-frente
es empinado y un poco cóncavo, los lóbulos de las aletas dorsal y anal son
cortos en los adultos, las aletas pélvicas son diminutas, los juveniles poseen las
espinas dorsales anteriores alargadas, las espinas de las aletas dorsal y anal
se hunden conforme crece el individuo, las aletas pectorales y la caudal son
amarillentas. Su color es plateado, aunque los juveniles presentan una mancha
negra en el costado.
Es una especie de hábitos carnívoros, que se alimenta de peces óseos y
crustáceos móviles bentónicos (camarones y cangrejos) BLASKOVIC’ et al
(2008), afirman que se alimenta preferentemente de crustáceos (eufáusidos) y
poliquetos (espiónidos). Los carángidos presentan desove pelágico y eliminan
un gran número de huevos pequeños que flotan .La época de máximo desove
ocurre entre los meses de marzo y mayo (VERA 2007).
Comercialmente, sus tallas varían entre 11 y 35 cm LT, y se encuentra
asociado principalmente al “chiri” Peprilus medius y al “pámpano” Trachinotus
paitensis (VERA 2007).
Se ubica en toda la columna de agua, a profundidades de entre 1 y 50 m, y en
varias zonas climáticas (Templado Norte, Subtropical Norteño, Tropical
Norteño, Ecuatorial y Templado Sureño). Es una especie endémica del Pacífico
Oriental Tropical (POT) y del Pacífico.
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Distribución
Es una especie costera que vive en toda la columna de agua, sobre fondos
arenosos, formando cardúmenes. Se distribuye desde Redondo Beach
(EE.UU.), el Golfo de California (México) hasta Bahía Chilca (Perú), aunque
ocasionalmente se desplaza hasta Callao y norte de Chile (CHIRICHIGNO &
CORNEJO 2001). Algunas veces, los juveniles se encuentran en esteros
salobres o en agua dulce.
Según Ma. Isabel Abdo de la Parra (2010) realizo un estudio en estudio en el
pargo lunarejo Lutjanus guttatus es una especie con un alto valor comercial en
el mercado mexicano y con potencial para su cultivo. Por esto, es necesario
determinar sus requerimientos nutricionales para desarrollar dietas específicas
y adecuadas para el desarrollo de esta especie, actualmente inexistentes en el
mercado mexicano. En el presente estudio, se evaluó el efecto de diferentes
niveles de proteína y lípidos totales en la dieta sobre el crecimiento y
supervivencia de juveniles de pargo lunarejos producidos en laboratorio. Se
formularon nueve dietas semipuras con tres niveles de proteína (40, 45 y 50%)
y tres niveles de lípidos (9, 12 y 15%), con las cuales se alimentaron durante 8
semanas a los juveniles de pargo luranejo (peso promedio = 2,2 ± 0,1 g)
producidos en criadero. Una vez finalizado el experimento, se determinó el
incremento en peso, tasa específica de crecimiento, factor de condición,
consumo de alimento, tasa de conversión alimenticia y porcentaje de
supervivencia de los organismos. Los peces alimentados con las dietas de 45 y
50% de proteína y sus tres niveles de lípidos obtuvieron mayor incremento en
peso corporal y mejores tasa de conversión alimenticia que los organismos
alimentados con las dietas de 40% de proteína y sus tres niveles de lípidos. La
supervivencia, consumo de alimento y factor de condición no fueron afectados
por los diferentes tratamientos. Estos resultados indican que los juveniles de
pargo lunarejo requieren por lo menos 45% de proteína y 9% de lípidos totales
en la dieta, para su mayor crecimiento y supervivencia.
Según Risco Orbe (2005) realizó un proyecto que tuvo como la finalidad de
determinar el efecto del alimento extruido con tres niveles de proteína (35, 40 y
9
45%) en el crecimiento de alevinos de paiche en las instalaciones del Instituto
de Investigaciones de la Amazonía Peruana IIAP – Quistococha. El estudio se
realizó durante los meses de Agosto del 2005 a Enero del 2006 con una
duración de 104 días, utilizándose 45 alevinos de paiche (86.84 ± 15.73 g). Se
utilizaron tres dietas extrusadas (tratamientos) por triplicado con diferente nivel
de proteína. Los peces fueron alimentados diariamente con una tasa
equivalente al 3% de la biomasa corporal, registrándose el crecimiento en peso
y longitud en muestreos quincenales. Los resultados nos revelan que hubieron
diferencias significativas (p<0,05) entre los tratamientos, siendo que los peces
sometidos al T1 presentaron los niveles más bajos de rendimiento que aquellos
sometidos a los tratamientos T2 y T3, no existiendo diferencias significativas
entre los dos últimos, sin embargo los mejores resultados fueron obtenidos en
los peces alimentados con el T2 (Peso final de 581,1 g y TCAA de 1,27).
10
2. OBJETIVOS:
2.1. Objetivo General
Comparar el nivel proteico existente en el hígado de 4 especies de peces
comerciales, mediante método de Bradford por espectrofotometría obteniendo
la información estadística necesaria del órgano estudiado de cada especie.
2.2. Objetivos específicos:
Determinar la concentración proteica del tejido hepático de cada una de
las especies mediante el método de Bradford por Espectrofotometría.
Aplicar las fórmulas estadísticas relacionándolas con la biometría,
concentración de proteínas de cada de las especies analizadas.
2.3. Hipótesis:
Ho: Cada una de las especies estudiadas posee en su hígado la misma concentración de proteínas.
Ha: Las especies estudiadas difieren en la concentración proteica de su tejido hepático.
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3. METODOLOGÍA
3.1 Área de estudio:
Los especímenes fueron comprados en el mercado Central de la Libertad
ubicado en la provincia de Santa Elena.
3.2. Tratamiento y análisis de muestras:
Las muestras fueron analizadas en el laboratorio de ciencias químicas y
biológicas de la Universidad Estatal Península de Santa Elena
3.3. Materiales:
3 Matraz volumétrico de 1000
ml
6 matraces volumétricos de
100 ml
4 Cápsula de porcelana
4 Pipeta de 5 y 10 ml.
Pipeta Pasteur
6 Vasos precipitación de 50
ml
2 Peras de succión
3 Micropipetas
1 Balanza analítica
1 pHmetro
1 Centrífuga
1 Espectrofotómetro
5 cubetas
24 Puntas desechables
1 Caja de papel aluminio
1 Hielera
1 Calentador
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3.4. Métodos:
Extracción de proteínas:
Solución Stock: buffer de extracción alcalina pH 7.5
TRIZ BASE 50 mM
EDTA 10 Mm
ACIDO ASCÓRBICO 0.2%
CLORURO DE SODIO 150 Mm
MERCAPTO ETANOL 140 ul por cada 100 ml de buffer ( * )
PMSF 50 ul por cada ml de buffer ( * )
TTRITON AL 1.5%
( * ) El Mercapto etanol y el PMSF se adiciona en el momento de realizar la
extracción.
3.4.1 Procedimiento.
1. Maceramos las muestras
2. Adicionamos buffer de extracción alcalina, según la relación 1:3
3. Incubamos por un día en hielo.
4. Centrifugamos a 13000 rpm por 10 minutos.
5. Recolectamos el sobrenadante
3.4.2 Determinación de la concentración
Espectrofotometría a 595nm
Método de Bradford.
1. Preparamos el Bradford; relación 1:4 (para 5ml),
Donde: 1 = 1 ml Bradford concentrado.
4 =4 ml de agua destilada.
2. Preparamos lo suficiente para el número total de muestras.
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Preparación de la muestra:
1. Pipeteamos 10 ul de muestra más 500 ml de Bradford diluido
2. Mezclamos e incubamos por 20 minutos en la oscuridad
Preparación de solución de tinción Coomassie para la curva estándar:
AZUL DE COOMASSIE BLUE R-250 5mg
ETANOL 2.3 ml
ACIDO FOSFÓRICO 5 ml
AGUA DESTILADA
4. RESULTADOS:
Análisis efectuado en las 4 especies de pescado
Tabla 1.
Gráfico 1.
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CONTENIDO DE PROTEINAS EN EL HIGADO DE PESCADO EN mg/g
Especímenes Diciembre Enero Febrero PromedioCarita 0,2483752 0,171445 0,181183 0,2003344
Hojita 0,24448 0,182806 0,189298 0,192003
Pámpano 0,215266 0,190921 0,169822 0,2042837
Sardina 0,2602231 0,189298 0,16333 0,205528
Gráfico 2.
Gráfico 3.
15
CARITA PAMPANO SARDINA HOJITA0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
CONTENIDO PROTEICO EN EL HIGADO DE PESCADO EN mg/g
DiciembreEneroFebrero
Canti
dade
s en
mg
Selen
e peru
viana
Chlorosco
mbrus o
rqueta
Peprilu
s med
ius
Sard
inops sag
ax
0.185
0.19
0.195
0.2
0.205
0.21
Promedio de proteinas por especies en mg/g
Nivel proteico
1 2 30
5
10
15
20
25
30
Relación de talla de cada una de las especies
CARITAHOJITAPAMPANOSARDINA
talla
s en
cm
Gráfico 4.
1 2 30
50
100
150
200
250
300
Relación de masa de cada una de las especies
CARITAPAMPANOSARDINAHOJITA
mas
a en
g
Gráfico 4. Curva de calibración de la solución de Bradford
16
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.60
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
f(x) = 0.162297005496209 x + 0.147103545683972R² = 0.998335339222808
Curva de calibración
Diluciones
Abso
rvan
cia d
e la
mue
stra
5. CONCLUSIÓN:
Fue de vital importancia comprobar la presencia de proteínas en el hígado de
los peces estudiados antes del análisis, tanto cualitativa como
cuantitativamente, mediante la adición del reactivo Ninhidrina específico y
muy determinante el cual nos dio positivo.
En base a los resultados obtenidos determinamos que las cuatro especies
difieren en su contenido proteico, a lo cual nosotros relacionamos con su
disminución de peso y talla durante los análisis. Analizando la hipótesis que
menciona: Ho: Cada una de las especies estudiadas posee en su hígado la
misma concentración de proteínas y la Ha: Las especies estudiadas difieren
en la concentración proteica de su tejido hepático; en la cual se acepta la
hipótesis alternativa porque si existen diferencias, la especie con mayor
contenido proteico fue la sardina con un 20.6%, seguido por el pámpano con
20,4% y con unas décimas de diferencia la hojita y la carita con 19% y 20%
respectivamente.
6. RECOMENDACIONES:
Al ser el hígado uno de los órganos menos estudiado de los peces, se
recomienda analizar otros factores tales como lípidos, carbohidratos
totales un estudio microbiológico entre otros con el fin de crear una
información de contenido nutricional.
Se recomienda realizar una técnica específica para obtener
proteínas totalmente puras, esto disminuirá el margen de error al leer las
muestras.
Realizar estudios comparativos con otros órganos internos de los peces
estudiados para determinar el contenido proteico.
17
Analizar el contenido de proteínas de otras especies comerciales para
comparar los resultados actuales determinando cual es más rico
nutricionalmente.
18
7. ANEXOS:
Preparación de reactivos:
Chloroscombrus orqueta
Peprilus mediusSelene peruviana
Sardinops sagax
Buffer de extracción:
Reactivo de Bradford:
Primera etapa:
Extracción del hígado en los peces capturados.
Cortamos la piel del pescado y extraemos el hígado
Pesamos el hígado
Segunda etapa:
Extracción y conservación de las proteínas:
Colocamos la muestra de Adicionamos 3ml de buffer de extracción
Obtuvimos cada una de las muestras del análisis respectivo
Tercera etapa
Análisis de la
concentración de proteínas
Centrifugamos durante 10 minutos 13000 rpm
Recolectamos el sobrenadante
Incubamos en hielo durante 24 horas
Maceramos hasta obtener una mezcla homogénea
Colocamos en un tubo eppendor
Análisis cualitativo de proteínas en una muestra utilizando el reactivo de la Ninhidrina
Extraimos 20ul y colocamos en una cubeta
Adicionamos 3ml del Bradford diluido
8. BIBLIOGRAFÍAS:
Revista de Biología Marina y Oceanografía Efecto de diferentes niveles de proteína y lípidos totales en la dieta sobre el crecimiento y supervivencia de juveniles de pargo lunarejo Lutjanus guttatus Vol. 45, Nº3: 433-439, diciembre de 2010.
Cervera Pilar, Claper Jaime, Rigolfas Rita. Alimentación y dietoterapia. Segunda Edición. Mc Graw Hill. España 1993.
Revista Bioanálisis. Diagnostico bioquímico. Numero 1. Editorial Khunz. Enero 2005.
CRESCENCIO, R. 2001. Treinamento alimentar de alevinos de pirarucú, Arapaima gigas (Cuvier, 1829), utilizando atrativos alimentares. Disertação de Maestrado. Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia. Manaus-Brasil.
Cho C.Y. 1987. La energía en la nutrición de peces. pp 197-243. En: Nutrición en Acuicultura.Vol II. J. Espinosa de Los Monteros y U. Labarta Editores. FEUGA-CAICYT, Madrid, España. 318 pp.
Gracia-López V, T García-Galano, G Gaxiola-Cortés & J Pacheco-Campos. 2003. Efecto del nivel de proteína en la dieta y alimentos comerciales sobre el crecimiento y la alimentación en juveniles del robalo blanco, Centropomus undecimalis (Bloch, 1792) Ciencias Marinas 29(4B): 585-594.
Morales-Nin B. 1991. Determinación del crecimiento de peces óseos en base a la microestructura de los otolitos. FAO Documento Técnico de Pesca 322: 1-58.
Tacon JA. 1989. Nutrición y alimentación de peces y camarones cultivados. Manual de capacitación. GCP/RLA/102/ITA Proyecto Aquila II. FAO Documento de Campo 4: 1-572.
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