SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD CLÍNICA DE UNA TÉCNICA PARA EL DIAGNÓSTICO
DE HISTOPLASMOSIS
BIOQ. GUILLERMINA ARPAIA
Diagnóstico Puesta a punto
Definiciones Objetivos
Directo y cultivos
ID CIEWB
Gold standard
>Técnicas
complementarias
>
>
Diagnóstico Puesta a punto
Definiciones Objetivos
>151 kDa
Pc
Asp
CN
Resultados
>Sensibilidad
analítica
>
Especificidad analítica
>
>
151 kDa 27 kDa
INESPECÍFICAS ESPECÍFICAS
8,6 µg/wellDil suero 1/100Conjugado 1X
1/100 1/500 1/4500 1/7000 1/12000 1/16000
Diagnóstico Puesta a punto
Definiciones Objetivos
Sensibilidad >
Especificidad
>
Validez >
Capacidad del test para detectar un individuo enfermo
S= __VP___ VP + FN
Capacidad de una prueba diagnóstica para detectar un
individuo sano
E= __VN___ VN + FP
Grado en que un test mide lo que se supone que debe medir
SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD
Diagnóstico Puesta a punto
Definiciones Objetivos
Hasta Tinelli y el Maipo
no paro…
RESOLVER LO QUE LAS DEMÁS NO PUEDEN…
85% pacientes HIV
Marcador de SIDA(CD4<300)
80-100% de muerte
>
>
Sensibilidad y especificidad diagnóstica
Patrones de banda
específicos
Materiales y métodos
Resultados
Conclusiones y discusión
Proyecciones a futuro
>
>Poblaciones estudiadas
Criterios de inclusión
Histoplasmosis confirmada (gold standard)
Otras patologías Aspergilosis Paracoccidioidomicosis Candidiasis TBC
Controles negativos
Control interno: pool Hc
De pacientes:
Ausencia de micosis concomitantes. Ausencia de otras patologías.
De controles negativos
Materiales y métodos
Resultados
Conclusiones y discusión
Proyecciones a futuro
Western blot >
15 kDa
26 kDa
37 kDa
52 kDa
Controlinterno Histoplasma Pc Asp Candida CN
Cálculos >
S banda X = __VP___ VP + FN
VP= Nº sueros H con banda X FN= Nº sueros H sin banda X
E banda X =__VN___=
VN + FP VN= Nº sueros no H sin banda X FP= Nº sueros no H con banda X
BANDAkDa
SENSIBILIDAD% ESPECIFICIDAD%
15 4 100
27 21 95
38 4 91
53 46 81
BANDAkDa
BANDAkDa
SENSIBILIDAD%
15 y/o27 25
38 8
53 46
27 y/o38 25
53 58
38 y/o 53 46
Materiales y métodos
Resultados
Conclusiones y discusión
Proyecciones a futuro
>Conclusiones
Criterio de positividad: aparición de banda
53 kDa 53 y/o 27 kDa
Nuestro WB tendría mayor sensibilidad que las técnicas ID
y CIE ( S en HIV= 25-30%)
Herramienta diagnóstica en casos en que ID y/o CIE dan
negativos
>Situaciones particulares…
CASO 1 : Paciente de 40 años, HIV+, 8 meses
atrás comienza con dolor de encía, buen estado general.
Lesiones granulomatosas en encía superior y paladar duro. Sin
adenopatías. Semiología respiratoria normal.
WB
Servicio de Micología:
Directo (lesión paladar) + Cultivo +
HcID negativa
CIE negativa
IDR negativa
>Situaciones particulares…
CASO 2 : Paciente 62 años, HIV +, refiere
dolor en arcada dentaria superior de tres meses de evolución
WB
Servicio de Micología:
Directo (bx labio superior) + Cultivo +
HcID negativa
CIE positiva
(1+ 1-)
IDR negativa
>Situaciones particulares…
Proporción de sueros con ID/CIE negativa que detectamos con
nuestro WB3/15 sueros
Discusión >
Obtener un antígeno a partir de una o más cepas
Cepas de diferentes formas clínicas
Diferentes estadios de crecimiento
Deglicosilación
SDS PAGE: 1 cepa SDS PAGE: 2 cepas
Materiales y métodos
Resultados
Conclusiones y discusión
Proyecciones a futuro
Aumentar nuestro N Comprobar variabilidad antigénica de
las cepas Evaluar S y E del método usando antígenos
deglicosilados Modificar variables de la técnica que
mejoren parámetro de validez
Contrastar WB con otras técnicas inmunoserológicas
Integrar nuestra técnica con datos clínicos, epidemiológicos y micológicos
MUCHAS GRACIAS!!!!!!
Bibliografía
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• Zancopé-Oliveira, R M; Bragg, S L; Reiss, E; Wanke, B; Peralta, J M. Effects of histoplasmin M antigen chemical and enzymatic deglycosy-lation on cross-reactivity in the enzyme-linked immunoelectrotransfer blot method. Clin Diagn Lab Immunol. 1994;1:390–393.
• Wheat, L. J., Wheat, H., Connolly, P., Kleiman, M., Supparatpinyo, K. S., Nelson, K., Bradsher, R. & Restrepo, A. (1997). Cross-reactivity in Histoplasma capsulatum var.capsulatum antigen assays of urine samples from patients with endemic mycoses. Clin Infect Dis 24, 1169–1171
• Pizzini, C. V., Zancopé-Oliveira, R. M., Reiss, E., Hajjeh, R., Kaufman, L. & Peralta, J. M. (1999). Evaluation of a Western blot test in an outbreak of acute pulmonary histoplasmosis. Clin Diagn Lab Immunol 6, 20–23
Bibliografía• BCQ Leimann, CV Pizzini, MM Muñiz, PC Albuquerque, PCF Monteiro, RS Reis,
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OliveiraI Diagnosis of histoplasmosis Braz. J. Microbiol. vol.37 no.1 São Paulo Jan./Mar. 2006.
• Guimarães, A.J.; Pizzini, C.V.; De Matos Guedes, H.L.; Albuquerque, P.C.; Peralta, J.M.; Hamilton, A.J.; Zancope-Oliveira, R.M. ELISA for early diagnosis of histoplasmosis. J. Med. Microbiol., 53(Pt 6), 509-514, 2004
• Negroni R, Iovannitti C, Arechavala A, Carnovale S, Euguchi K. Preparación y estudio de un exoantígeno de la fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum para reacciones serológicas. Rev Iberoamed Micol 1998; 15:282-5.
Agradecimientos• Servicio de Micología del Hospital Muñiz
• Cátedra Micología de la Facultad de Medicina UBA
• Instituto Malbrán. Servicio de Parasitología, área Trichinosis
• Laboratorio Central del Hospital Muñiz
• Servicio de Virología, Sección HIV del Hospital Muñiz
• Coordinadoras de Residencia Bioquímica y Microbiología y Residencia de Microbiología: Dra. Dorotea Baiges y Dra. Alicia Arechavala
• Dr. Ricardo Negroni
• Jorge
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