RESUMEN
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RESUMEN
Stevia rebaudiana Bert. (yerba dulce), es una
planta arbustiva semiperenne, originaria del noreste del
Paraguay, perteneciente a la familia de las compuestas.
Su importancia económica radica en que, en sus hojas,
posee una sustancia, denominada esteviósido, constituida
por una mezcla de por lo menos seis glucósidos
diterpénicos, que es 100 a 400 veces más dulce que la
sacarosa y que por sus características físico-químicas y
toxicológicas permite su inclusión en la dieta humana
para ser utilizada como un edulcorante dietético
natural, sin efectos colaterales.
Su inclusión en el código alimentario nacional
(Resolución 101 del 22-2-1993) y la posibilidad de
exportación ha incrementado el interés en esta especie
por parte de los productores.
Naturalmente se propaga por aquenios, pero el bajo
valor cultural de las semillas (10 al 15 %) y la
heterogeneidad de las poblaciones resultantes indican la
necesidad de desarrollar y/o ajustar técnicas
alternativas, sencillas y económicas, que permitan la
propagación masiva de genotipos selectos.
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El objetivo del presente trabajo de intensificación
es estudiar algunos factores que afectan la propagación
vegetativa de esta especie, para lo cual se utilizaron
estacas apicales y subapicales, provenientes de plantas
clonadas, de origen japonés, que se encuentran en el
campo experimental de nuestra facultad, las que se
trataron con una solución rizogénica de ácido
indolbutírico (25 mg/l durante 24 horas), plantándose
posteriormente en bandejas de plástico, sobre un
sustrato de turba y humus de lombriz (1:1) ó turba y
arena (1:1). A las cuatro semanas, se evaluó, porcentaje
de enraizamiento, longitud y peso de raíces y peso de la
parte aérea.
Esta experiencia se repitió a lo largo del período
de crecimiento anual (desde primavera a fin de otoño),
siempre que en el stand de plantas madres, los vástagos
alcancen un tamaño que permita extraer estacas apicales
y subapicales.
Se realizó un ensayo factorial con medidas
repetidas en el tiempo, con un diseño de bloques al azar
y los resultados se evaluaron a través de un análisis de
varianza.
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INTRODUCCION
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INTRODUCCIÓN:
De los cuatro sabores básicos: dulce, salado,
amargo y agrio, el primero es el que produce mayor
placer fisiológico, al ser humano. Tradicionalmente,
este sabor estaba íntimamente relacionado con la
sacarosa y aún hoy, el sabor de este compuesto se
utiliza como patrón de comparación de la calidad e
intensidad del sabor dulce de un producto. Además de su
sabor, la sacarosa presenta una serie de propiedades
físicas, químicas y biológicas que la convierten en un
ingrediente ideal para la industria de la alimentación y
la cocina familiar.
Lamentablemente, existen motivos por los cuales su
uso debe ser limitado y/o eliminado de la dieta de
muchas personas (ejemplo: diabetes, obesidad), y sin
embargo, el hombre no parece dispuesto a renunciar al
placer que le produce el sabor dulce, por lo que ha
buscado sustancias naturales o artificiales capaces de
sustituir al azúcar.
A pesar de la gran cantidad de sustancias que
poseen sabor dulce, muy pocas de ellas se utilizan en
forma extensiva como edulcorantes. Las razones que
limitan su uso son de diversa índole: legales,
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económicas, toxicológicas, etc.; y es por ello que en la
actualidad existen pocos edulcorantes que se utilizan en
forma extensiva y cuya comercialización alcance un
volumen apreciable. Los más importantes son: sacarina,
ciclamato, aspartamo, acesulfame-K y esteviósido
(Cardozo y Rodríguez, 1986).
El poder edulcorante de estas sustancias varía
entre si y para la cuantificación del sabor dulce de las
mismas se recurre a métodos de carácter subjetivo,
basados en la degustación. Los resultados obtenidos con
estas sustancias puras y estos métodos no pueden ser
extrapolados para predecir su comportamiento en la
formulación de un alimento
Al producirse la mezcla de un edulcorante con las
demás sustancias componentes de la formulación de un
alimento, normalmente se producen interacciones y
cambios más o menos profundos en el sabor. Algunos de
estos cambios pueden ser favorables y aprovecharse para
mejorar la calidad o el poder de los edulcorantes, ya
que en los mismos, al mezclarse, se produce una
expansión del sabor dulce, es decir, se consigue una
dulzura superior a la simple aditividad de los poderes
de ambos edulcorantes por separado (Morita, 1977).
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Por lo general, el sabor dulce de un edulcorante
nunca es "puro" como en la sacarosa, ya que normalmente
viene acompañado de sabores secundarios no deseados. El
caso más común de sabor secundario es el amargo y/o
metálico, debido a que los centros receptores del mismo
se hallan localizados en las vecindades de los del sabor
dulce. Existen sustancias, que adicionadas en pequeñas
cantidades, son capaces de suprimir o disminuir algunos
sabores indeseables, utilizándose ampliamente en la
formulación de los alimentos. Ejemplo: la mezcla
ciclamato-sacarina en la relación 10:1.
Asimismo, existen otras sustancias que, adicionadas
en pequeñas cantidades, aumentan la intensidad de
determinados sabores de la mezcla, por ejemplo, el
cloruro de sodio y los condimentos (Morita, 1977).
1 - Propiedades de un edulcorante ideal:
Un edulcorante "ideal" deberá satisfacer los
siguientes requerimientos: (Ishima y Kakayama, 1976).
- Tener el sabor dulce de la sacarosa, sin
componentes secundarios indeseables.
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- Tener bajo contenido calórico, referido a una
misma base de poder edulcorante. Esta condición
puede ser satisfecha bien por poseer un alto
poder edulcorante o por no ser metabolizado por
organismo.
- Poseer propiedades físicas similares a la
sacarosa: resistencia a las temperaturas
elevadas y a los ph comunes en los alimentos,
ser soluble en agua, poseer similares
características de textura y viscosidad que la
sacarosa en iguales condiciones, no ser
higroscópico, etc.
- Ser inerte con respecto a las sustancias
presentes en la formulación de alimentos y no
interferir en sus sabores.
- No ser tóxico por si mismo, ni producir
sustancias tóxicas por descomposición o
reacción.
- Ser estable y mantener sus características con
el tiempo.
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- No poseer propiedades carcinógenicas
En la práctica, no existe ninguna sustancia que
satisfaga todas estas condiciones, lo que obliga, en
algunos casos a limitar el uso de un edulcorante dado
para algunas aplicaciones o recurrir a mezclas de
edulcorantes, uso de aditivos, etc.
2 - Caracterización de los edulcorantes de uso
extensivo: (Ishima y Kakayama, 1976)
2.1 - Sacarina:
Este compuesto es ácido y poco soluble en agua, por
lo que normalmente se utiliza como sal de sodio o
calcio. Es un producto de síntesis. Su poder
edulcorante, referido a la sacarosa, varía de 200 a 700,
dependiendo de la concentración (300 en sus usos más
comunes).
La mayor limitación para su uso es su sabor amargo
y metálico, muy difícil de enmascarar hasta la aparición
del ciclamato. Asimismo, en los últimos años, el uso de
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la sacarina se ha cuestionado duramente, por comprobarse
que producía tumores malignos, en mezclas con ciclamato,
prohibiéndose su uso en EE.UU. y Canadá.
Actualmente, se comercializa en Argentina,
Australia, Austria, Bélgica, Brasil, Francia, Holanda,
Italia, Japón, México, Portugal, Sudáfrica, Reino Unido,
EE.UU., España y Alemania.
2.2 - Ciclamato:
Normalmente se usa como sal sódica o cálcica, y es
muy soluble en agua. El poder edulcorante referido a la
sacarosa es de 30 en las concentraciones más utilizadas.
La calidad del sabor es muy diferente al de la sacarosa,
ya que además de estar acompañado de sabores agrio y
amargo, tiene distintas velocidades de percepción y de
duración de sabor. Es un producto de síntesis.
En 1969, se descubrieron las propiedades
carcinogénicas de la ciclohexilamina, producto de la
metabolización del ciclamato, siendo prohibido su uso en
EE.UU., Canadá y Reino Unido.
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Actualmente se utiliza en: Argentina, Bélgica,
Brasil, Francia, Italia, Holanda, Alemania, México,
Portugal, España y Sudáfrica.
2.3 - Aspartame:
Presenta una solubilidad del 1% a 20ºC; se produce
industrialmente a partir de aminoácidos por diversos
caminos. El poder edulcorante se encuentra entre 100 y
400, aunque a las concentraciones habituales varía entre
150 y 200.
Su sabor es muy parecido al de la sacarosa, hasta
el punto que algunas personas prefieren su sabor al de
la misma.
Es un edulcorante muy adecuado para una gran
variedad de alimentos, debido a la similitud de su
sabor con la sacarosa, aunque debe evitarse su
utilización en los casos de cocción o calentamientos
prolongados.
Actualmente está permitido en Argentina, Francia,
Bélgica, Luxemburgo, Filipinas, Brasil y EE.UU.
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2.4 - Acesulfame-K:
Es la sal potásica de un derivado de la
oxatiazinona. Tiene un poder edulcorante de 170 a 300.
Presenta buen sabor y buenas propiedades de mezcla.
3 - Características edulcorantes del esteviósido:
3.1 - La Stevia rebaudiana Bert contiene en sus hojas,
principios edulcorantes que han sido reconocidos y
utilizados por siglos por las poblaciones nativas que
viven en la zona de origen de esta especie (Paraguay)
(Sumida, 1980).
La designación de esteviósido, principio
edulcorante de la especie, se debe a los investigadores
franceses Bridel y Lavielle que en 1931 cristalizaron el
principio edulcorante y determinaron que es 300 veces
más dulce que el azúcar, y que no posee efectos tóxicos
al realizar pruebas de laboratorio con animales (Bridel
y Lavielle, 1931).
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Asimismo, se demostró que el esteviósido es el
edulcorante natural no nitrogenado más dulce que se
encuentra en la naturaleza y que está compuesto
solamente de carbono, hidrogeno y oxígeno, siendo su
formula C38 H60 O18.
En 1952 un equipo de investigadores americano del
National Institute of Arthritis and Metabolic Diseases,
dirigidos por el Doctor Hewit y Fletcher jr.,
determinaron la estructura química del esteviósido; el
que resultó ser un glucósido diterpénico con un aglycon
denominado steviol (Mosetting y Nes, 1955).
Durante la década de 1970, investigadores
japoneses de las Universidades de Hiroshima y Hokkaido
identificaron otros principios edulcorantes en las hojas
de Stevia: Rebaudiósidos A, B, C, D y E, Dulcósidos A y
B y otros de menor importancia. El rebaudiósido A es el
que presenta el mayor grado de dulzor (aproximadamente
350-400 veces más dulce que el azúcar) y, es por ello
que, se procura seleccionar individuos con altos
contenidos de este componente (Kohda, 1976).
3.2 - Propiedades físico-químicas del esteviósido de
interés en el procesado de alimentos:
(Fujita, 1979)
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-Resistencia al calor: presenta estabilidad a las
temperaturas habituales en el procesado de
alimentos. Se funde a 238 º C.
-Alteración del color: no se observa
oscurecimiento, aún en las condiciones más
rigurosas de procesado de alimentos.
-Solubilidad: es altamente soluble en agua, alcohol
etílico y metílico e insoluble en éter.
-Resistencia al ph: es suficientemente estable
entre ph 3 a 9.
-Contenido de calorías: no es metabolizado por el
organismo, por lo tanto se convierte en no
calórico, y es adecuado para usos dietéticos.
-Capacidad osmótica: presenta buenas propiedades
osmóticas para la preparación de pikles dulces
(Japón).
-Fermentabilidad: no es fermentable, ni atacado por
las bacterias orales. No es hidrolizable por
Aspergilus níger, ni por el fermento seco de
levaduras. Se hidroliza con ácido sulfúrico
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diluido y por diastazas.
Otras propiedades:
Dentro de la medicina popular paraguaya se utiliza
como hipoglicemiante (Miquel, 1977), digestivo,
cardiotónico, diurético, antiácido, etc (Jordán Molero,
1984; Yang et al, 1979).
3.3 - Propiedades edulcorantes: (Fujita, 1979)
La mayor parte de los autores coinciden en que el
esteviósido es 300 veces más dulce que la sacarosa y el
rebaudiósido A, 400. Pero debido a las extraordinarias
características de potenciar su dulzura por la acción de
diversas sustancias comunes en la formulación de
alimentos, tales como cloruro de sodio, leche, ácidos,
etc., se puede fijar como valores razonables de poder
edulcorante para la mezcla natural de glucósidos, un
rango de 100 a 400, dependiendo de cada alimento.
3.3.1 - Calidad del sabor dulce:
Conjuntamente con el sabor dulce, el esteviósido
presenta un sabor secundario, persistente, definido como
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sabor a regaliz-mentol, detectable a altas
concentraciones. Este sabor secundario es evidente en el
extracto natural. El rebaudiósido A posee un sabor dulce
más puro.
Este sabor no deseado se puede enmascarar con la
utilización de combinaciones de otras sustancias
edulcorantes. Los mejores resultados se obtienen con
sacarosa y glucosa, siguiéndoles la fructuosa, sorbitol
y malitol.
Con respecto a la velocidad de percepción del sabor
del esteviósido, se observó que la curva de intensidad
percibida en función del tiempo, tiene una gran
similitud con la correspondiente a la sacarosa en lo que
respecta a la ubicación del máximo, pero presenta una
diferencia en la duración o persistencia del sabor,
siendo menor, aunque la similitud es superior a la de
cualquier otro edulcorante actualmente utilizado.
Con el fin de suavizar la persistencia del sabor
dulce, se obtienen buenos resultados con el agregado de
fructuosa, glucosa, péptidos, aminoácidos, ácidos
cítrico, acético, láctico, málico y tartárico.
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El esteviósido presenta sinergismo con el
aspartame, sacarina, glucosa, fructuosa y muchas otras
sustancias edulcorantes.
4 - Inocuidad del esteviósido:
La primera prueba de inocuidad del esteviósido es
la utilización de las hojas de Stevia por los indígenas
guaraníes durante varios siglos, y por los habitantes de
Paraguay, hasta la actualidad, sin observarse efectos
colaterales. Ya aislados los principios activos de la
Stevia, comenzaron los ensayos de laboratorio con el fin
de detectar posibles efectos toxicológicos. En 1931,
Poniaret y Lavielle, observaron que tras la
administración subcutánea del mismo en cobayos, no se
producían afecciones hemolíticas ni otros efectos
tóxicos (Felippe, 1982).
En 1968, Plana y Kuc , informaron que suministrando
una solución de esteviósido a ratas, se observaba una
reducción del 20 al 30 % de la fertilidad.
Posteriormente, Persinos y Whistler, y más tarde,
Doffmmann y Nes demostraron que dicho efecto no se debía
al esteviósido sino al dihidroesteviol, compuesto
inexistente en las hojas de Stevia y producido durante
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la extracción o purificación defectuosas (Felippe,
1982).
En Japón, previo a la utilización masiva del
esteviósido, se realizaron rigurosos ensayos que
probaron su inocuidad. El Ministerio de Salud de Japón,
coordinó un amplió estudio en el cual nueve grupos
científicos estudiaron en forma independiente la acción
del esteviósido. Por unanimidad se concluyó que el
esteviósido, con un 90 % de pureza, no poseía actividad
mutagénica o teratogénica, coincidiendo, además, con
otros estudios realizados anteriormente (Fujita, 1979)
Por otra parte, se observaron efectos beneficiosos
de esta sustancia en la prevención de caries dentales,
no sólo por la disminución de azúcares en la boca, sino
que, además se demostró que el mismo inhibe el
desarrollo de bacterias orales cariogénicas (Felippe,
1977; Sakaguchi y Kan, 1982).
5 - Utilización actual del esteviósido:
La rápida y amplia aceptación que ha tenido el
esteviósido en Japón (consumo aproximado de 4000 ton/año
(CEPEX, 1982)), demuestra significativamente sus
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potencialidades. Se debe recordar que los productos
edulcorantes que dominan el mercado mundial (sacarina,
ciclamato), cuentan con serios cuestionamientos por sus
propiedades nocivas para la salud (Felippe, 1977;
Sakaguchi y Kan, 1982; Jordán Molero, 1984), y debe
adicionarse el atractivo que, en la actualidad, para la
opinión pública, tiene el origen natural y edulcorante
del esteviósido.
Además del Japón otros países del Lejano Oriente
donde se produce el esteviósido son Corea del Sur y
Taiwan (CEPEX, 1982).
En Latinoamérica su consumo es habitual en dos
países. En Paraguay se utiliza, en hojas, desde siempre,
y desde 1988 en Brasil, ya que en Maringá (Paraná), se
comenzó la industrialización del mismo (Marcavillaca y
Divo de Sesar, 1993).
Países interesados en la producción y/o
industrialización de Stevia rebaudiana Bert., incluyen a
Alemania, Canadá y EE.UU., lo que implica, que se
necesitarán grandes cantidades de materia prima para
abastecer la demanda.
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Actualmente los usos más destacados del esteviósido
son en: bebidas, gomas de mascar, helados y cremas
heladas, alimentos de bajo contenido calórico, pikles,
salsas y otros productos de sabor delicado (CEPEX,
1985).
6 - Formas de comercialización: (CEPEX, 1982)
En el mercado japonés se encuentran muchos
productos a base de esteviósido o extracto purificado de
stevia, comercializados bajo diversas denominaciones o
marcas comerciales. En su composición únicamente
participan compuestos de origen natural, considerándose
que puede satisfacer las necesidades de cualquier tipo
de producto alimenticio.
7 - Otros campos de aplicación: (CEPEX, 1982)
En el caso de que la sustitución del azúcar por el
esteviósido se hiciere con vistas únicamente a una
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disminución de costos, la proporción recomendada es
sustituir el 30 % de la sacarosa, ya que así se obtiene
el máximo de sinergismo, sin que se note el sabor
característico del esteviósido.
8 - Mercado mundial de edulcorantes: (CEPEX, 1989)
La situación presentada por el mercado mundial de
edulacorantes de alto poder ha presentado muchos cambios
fundamentales debido a las prohibiciones o
cuestionamientos a que fueron sometidos los más
importantes, y a que los efectos indeseables tuvieron
diversa incidencia en los distintos países.
A continuación se analizará la situación aproximada
del mercado para fines de la década de 1980.
8.1 - Sacarina:
Es el edulcorante más utilizado. El consumo y la
producción puede ser desglosado de la siguiente manera:
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Consumo(kg/año) Producción(kg/año)
EE.UU. 3.500.000 2.270.000
Europa 2.000.000 -
Japón 800.000 2.800.000
Otros 2.700.000 3.930.000
Total 9.000.000 9.000.000
El precio actual de la sacarina sódica en EE.UU. es
de 8,42 U$S/kg.
8.2 - Ciclamato:
Antes de su prohibición en EE.UU., se había
constituido en el edulcorante más utilizado en volumen,
ya que solamente en EE.UU. su producción había alcanzado
los 9.500.000 kg/año. En la actualidad, se sigue
produciendo en dicho país, pero en una escala reducida y
para exportación. No se conoce el consumo mundial. El
consumo en Europa alcanzó los 1.300.000 kg en 1982. Su
precio fue de 9,90 U$S/kg.
8.3 - Aspartame:
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Se considera que su producción aproximada fue de
1.000.000 kg, en 1983. Este volumen es considerable,
teniendo en cuenta que la aprobación de uso era muy
reciente, y con muchas limitaciones, en EE.UU., Gran
Bretaña, Francia, Bélgica y otros países. Su precio en
dicho año fue de 152 U$S/kg.
8.4 - Esteviósido:
En Japón, en 1979, la producción y consumo fue de
140.000 kg, aunque se consideraba que en dicho año el
mercado japonés podía absorber 1.400.000 kg, equivalente
al 10 % del consumo de sacarosa en poder edulcorante. En
ese mismo año la producción mundial era de
aproximadamente 700.000 kg, incluyendo Japón, China
Popular y Corea. No se cuenta con información oficial
respecto a precios, pero se estima en alrededor 120
U$S/kg (Marcavillaca, comunicación personal).
9 - Perspectivas del esteviósido:
9.1 - Mercado mundial:
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El mercado total de edulcorantes de alto poder y
bajo contenido calórico, es equivalente a entre 12 a 15
millones de kg de esteviósido por año. La conquista de
una pequeña fracción de este volumen, por el
esteviósido, representaría cifras significativas.
Teniendo en cuenta que los tres productos
edulcorantes que dominan el mercado mundial,
especialmente en los países occidentales, cuentan con
serios cuestionamientos por sus propiedades nocivas para
la salud, las posibilidades del esteviósido como
sustituto de los mismos son buenas, presentándose como
su principal limitación la imposibilidad de provisión de
materia prima en tan gran escala. Además, antes de
entrar a competir en el mundo occidental
industrializado, deberá pasar por todas las pruebas
previas a su aprobación, especialmente las de la Food
and Drug Administration de EE.UU. En este organismo, se
encuentra actualmente en los próximos 10 productos en
ser aprobados (Marcavillaca, comunicación personal).
10 - Evolución histórica:(Marcavillaca y Divo de Sesar,
1993)
1887- Se tuvo la primera referencia de la especie,
llegando la noticia al naturalista Dr. Moisés Bertoni, a
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través de mineros e indios de la región de Caaguazú y
Monday de la República del Paraguay.
1899- El Dr. Bertoni describe a la planta como
Eupatorium.
1900- El químico paraguayo Ovidio Rebaudi, realiza
los primeros estudios del componente dulce de la hoja.
1904- Bertoni verifica que la planta pertenece al
género Stevia.
1905- Se registra como Stevia rebaudiana Bertoni en
los libros internacionales.
1908- Juan B. Aranda Jiménez en Puerto Bertoni-Alto
Paraná, realiza el primer cultivo extensivo, obteniendo
1000 kg/ha de hoja seca. P. Rasennack (Alemania) realiza
los primeros análisis químicos y cristaliza el
componente dulce de la hoja.
1909- Karl Dietrich (Alemania) aísla dos sustancias
dulces de la muestra enviada por Aranda Jimenéz y las
denomina eupatrina y rebaudina.
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1913- Aranda Jimenéz envía muestras a Europa a los
laboratorios de Amberes, Wiesbadenn y Hamburgo, donde se
aíslan también los mismos compuestos.
1915- Kobert considera a la eupatrina como una
saponina y concluye que existen dos tipos: una ácida y
otra neutra con propiedades hemolíticas.
1919- Se envían muestras a la Facultad de Agronomía
y Veterinaria de la República Argentina, donde se
realizan análisis y estudios de las hojas, llegándose a
la conclusión que se trata de una especie de alto valor
económico por su poder endulzante.
1921- El Dr. Bertoni pide que el cristal denominado
eupatorino sea designado con un nombre que recuerde el
género de la planta, para lo cual propuso stevina y la
Unión Internacional de Química lo adoptó como
esteviósido.
1931- Bridel y Lavielle, químicos franceses,
cristalizan el esteviósido con un 6 % de rendimiento y
determinaron que su poder endulzante era 300 veces mayor
que el azúcar de caña y rectificaron la fórmula,
quedando finalmente en C38H60O18. Pomaret y Lavielle
refutan el trabajo de Kobert, demostrando que el
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esteviósido no tenía relación con la saponina y que la
propiedad hemolítica era debido a las impurezas
presentes, además encontraron que el esteviósido no es
asimilado por el organismo, siendo eliminado en su forma
original.
1942- Es publicado en Inglaterra un artículo que
presenta al esteviósido como sustituto del azúcar.
1945- El Instituto Biológico Argentino ensaya y
obtiene algunos preparados para diabéticos.
1946- Una expedición encabezada por Aranda Jimenéz,
contratada por el Servicio Técnico Interamericano de
Cooperación Agrícola, se dirigió al lugar de origen en
la zona de Amanbay y llegó a traer 780 plantitas que
plantaron en el Instituto Agronómico de Caacupé.
1951- Nuevamente, Aranda Jimenéz y Arturo Florentín
del Ministerio de Agricultura y Ganadería recolectaron
en el mismo lugar, 350 plantas, que plantaron en el
Colegio de Agricultura "Mariscal Estigarribia" de San
Lorenzo.
1952- The National Institute of Arthritis and
Metabolic Diseases en Bethesda, Maryland, EE.UU.,
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estudia la estructura química y hace investigaciones con
el esteviósido.
1953- El Dr. Miguel Ovidio de Paraguay, concluye un
estudio sobre el esteviósido y su efecto sobre la
glucemia.
1954- El químico inglés F. Bell después de varios
estudios describe al esteviósido como el único
edulcorante, comparado con los demás conocidos.
1959- Se planta en el Jardín Botánico de Río de
Janeiro la especie, y en el mismo año el botánico José
Correa Gomez lleva nuevas plantas desde Paraguay al
Instituto de Botánica de San Pablo. Durante la década
del 50 se realizaron numerosos estudios en los distintos
laboratorios del mundo despertando gran interés el
edulcorante presente en Stevia.
1961- Luis Enrique De Gásperi inicia un cultivo
extensivo en Horqueta (Concepción), con plantitas
multiplicadas en la zona de Capitán Bado.
1962- Ángel Gonzaléz Aranda y Hnos. en la Colonia
Ex-Combatientes de Horqueta (Concepción), instala un
vivero y cultivo extensivo con plantitas traídas de la
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zona de Capitán Bado, lugar denominado Cerro Cuatía,
sobre el arroyo Taracá
1963- Ruddat, Lang y Mosetting, encontraron que el
steviol ejerce la misma función que la Giberelina A3.
1966- Se inicia en Paraguay la venta de ka´á-he´é
en forma natural bajo la denominación de "Dulce té del
Paraguay" del señor De Gasperi. Se registra la Patente
de Invención al señor De Gásperi sobre "Utilización de
Ramas y Tallos de Stevia" y otra sobre "Extracto de la
hoja".
1967- Se inicia la investigación de la stevia en
Kosakoka, Japón, con muestras llevadas desde Paraguay.
Von Schmelling estudió el método de aislamiento del
esteviósido y su uso como edulcorante no calórico.
1969- Sumida lleva la especie al Japón y Tayomenka
Kaisha Ltda. empezó a investigar sobre muestras enviadas
del Paraguay por Akira Suggi donde identificaron otra
sustancia, el rebaudiósido. El prof. Derek Bonton
(Premio Nobel de Química) en el Colegio Imperial de
Ciencia y Tecnología de Londres expone un trabajo sobre
stevia.
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1970- Los japoneses llevan nuevas plantas al Japón
y la industrial Química Shuda comienza el cultivo y la
investigación. La Compañía Tamasei inicia el cultivo
experimental en chacras del Ministerio de Salud. Carlos
Oviedo, paraguayo, concluye un estudio sobre "Acción
hipoglicemiante de la Stevia". Se inician
investigaciones con stevia en Brasil, en distintos
institutos.
1971- El Ministerio de Agricultura y Producción
Acuática del Japón inicia el cultivo experimental de
stevia. Haku Miura de la Universidad de Hokaido comienza
la investigación y el análisis de la planta. La firma
Química Industrial Shuda realiza la primera
comercialización del producto con el nombre de
"Steviarol". En la colonia japonesa Yguazú se realizan
trabajos de investigación de Stevia rebaudiana Bertoni.
1972- La Compañía Química Tamasei obtiene el primer
éxito en el Japón en la comercialización del
esteviósido.
1973- Se inicia el cultivo experimental de la
stevia en las 50 dependencias del Ministerio de
Agricultura del Japón en las distintas zonas del país.
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1974- Isao Ohira, en Pedro Juan Caballero,
Paraguay, instala un vivero e inicia un cultivo
extensivo de stevia. La Cía. Química Tamasei registra
como marcas comerciales "Stevicus y Steviosin".
1975- En Japón se organiza una organización de la
stevia, formada por las compañías Shuda, Tamasei,
Química Nikkon, Celulosa Yamasaki Kokokiku, Química
Ikeda, Kosho Kagaku y otras para realizar todos los
estudios sobre el cultivo, la industrialización y
comercialización del esteviósido.
1976- En Paraguay, aparece la marca "Pirungá" del
señor Ángel González para la venta de la yerba dulce en
todas sus formas, autorizados por el Ministerio de
Salud. En el 6º Congreso Latinoamericano de
Farmacología, realizado en Buenos Aires, se presentan
los siguientes trabajos preparados por el Centro de
Investigación de la Stevia en San Pablo: "El efecto
inductor de la pérdida de peso corporal y la obesidad" y
"Los efectos antiarrítmicos reguladores del corazón". La
Dra. Gila Anmaral de Von Schmellings en la 28º. Reunión
Anual para el progreso de la Ciencia, presenta el
trabajo "Stevia rebaudiana Bertoni y sus efectos
hipoglicemiantes en conejos alexamizados", corroborando
el efecto antidiabético de la planta. Se inicia la
31
primera reunión general de la Sociedad de la Stevia en
el Japón. Ishima y Katayama, experimentan mezclas con
diversos azúcares y esteviósido, obteniendo buenas
respuestas y/o resultados en sabor en relación con la
fructuosa. Se crea en San Pablo, Brasil, el Centro de
Investigaciones de la Stevia. Se incrementa la
producción en otros países del Sudoeste Asiático (Corea,
Taiwan, Filipinas, Indonesia y Malasia).
1977- La Compañía Química Shuda, obtiene el
registro del producto rebaudiósido. Se inicia la
exportación masiva de hoja seca de Ka´a-he´e desde
Paraguay a Japón.
1978- Se incorpora a la Sociedad Química Maruzen,
Química Vegetal Zyomu. En un estudio realizado por la
Sociedad de la Stevia del Japón, se demostró que no es
tóxica, que no afecta al embarazo y el efecto negativo
anticoncepcional. Maruzen Kasei S.A. revela que los
ácidos tartárico, láctico, cítrico, acético y málico
disminuyen el efecto residual del esteviósido.
1979- Se inicia la provisión masiva de hoja al
Japón proveniente de Taiwan, Corea, Filipinas y otros
países. El Dr. Mauro Alvarez del Departamento de
Farmacia y Bioquímica de la Universidad de Maringá-
32
Brasil, obtiene una metodología para la extracción y
cristalización del esteviósido. Se crea la Cooperativa
de Productores de Ka´á-He´é Ltda., para el fomento,
producción y comercialización de la especie en Paraguay.
En la Universidad de California, en Davis, Clinton C.
Shock realiza investigaciones con semilla llevada de
Paraguay.
1980- Una misión oficial de la Cooperativa de
Productores de Ka´á-He´é de Paraguay, con el apoyo del
Ministerio de Agricultura y Ganadería viajan al Japón, a
fin de investigar el cultivo y su industrialización. Se
incorporan la Compañía Farmacéutica Oriental y la
Química Industrial Gran Japón INKI a la Sociedad
Japonesa de Stevia. La producción de Japón llega a 60
toneladas de hoja. Por decreto Nº 15.595 del 5 de mayo
de 1980, la Cooperativa de Productores de Ka´á-He´é del
Paraguay obtiene la personería jurídica y es inscripta
bajo el Nº 163 de Cooperativismo del M.A.G. que está
regulada por la Ley 349/72 y por el Decreto Nº 27.348
que lo reglamenta.
1981- Se incorporan las Compañía Fuji Furu, Química
Industrial Kyosui y Kokubum a la Sociedad. Se inicia el
estudio sobre aspectos crónicos a largo plazo del
esteviósido. Se realiza el Primer Seminario Brasilero
33
sobre Stevia, organizado por el Instituto de Tecnología
de Alimentos (ITAL). Se instala un vivero en la Colonia
Pte. Stroessner-Alto Paraná, Ruta internacional Nº 7 km
28.
1982- Se instala el Vivero La Fortuna en el km 296
de la Ruta Internacional Nº 7 (Colonia Pte. Stroessner-
Alto Paraná), con variedades mejoradas y se inicia
promoción del cultivo en dicha zona. Se inicia el
Segundo Seminario Brasilero de la Stevia organizado por
ITAL. El Ministerio de Agricultura y Ganadería por
resolución 23/05-02-82, declara de interés para el
desarrollo agrícola al ka´a-he´e y el fomento de su
cultivo. Se instala una planta piloto de extracción del
esteviósido en la universidad Estadual de Maringá,
Brasil. Shoch, Clinton (EE.UU.), expresa que los
compuestos químicos de la especie de mayor interés son
el esteviósido y el rebaudiósido A, aunque existan otros
seis componentes dulces.
1983- Se realiza el Primer Simposio Nacional de la
Stevia en Asunción-Paraguay, organizado por la Coop.
Productores de la especie. Inicia su producción la
planta piloto instalada en la Universidad de Maringá con
10 kg/día de esteviósido. Francisco Jordán Molero,
introduce en el Instituto Agronómico Nacional de Caacupé
34
una colección de plantas procedentes de distintos
lugares del Paraguay y del Brasil.
1984- Finaliza los estudios la Sociedad de Stevia
del Japón, concluyendo que el edulcorante es apto para
el consumo humano sin efectos colaterales. La Dra. Laura
Fracchia del I.N.T.N. de Paraguay, obtiene un método de
cristalización del esteviósido en el laboratorio de la
Institución.
1985- En el Instituto de Fisiología de I.N.T.A.-
Castelar, el Ing. Agr. Manuel C. Marcavillaca inicia sus
estudios sobre la acción giberélica de stevia y realiza
ensayos sobre propagación vegetativa de la especie.
1986- INGA Stevia Industrial S.A. (Brasil) empresa
formada para la explotación agrícola, industrial y
comercial de la stevia, firma contrato con la
Universidad Estadual de Maringá y el Banco Do Brasil,
para la explotación de la licencia y patente del
esteviósido a nivel industrial. El Ministerio de Salud
del Brasil, autoriza el uso del esteviósido como
edulcorante natural en alimentos y bebidas dietéticas.
Se realiza el Tercer Seminario Brasilero, organizado por
ITAL. La empresa Phoenix Agrícola S.A. del Paraguay en
su planta piloto llega a la cristalización del
35
esteviósido, rebaudiósido y separa, con tecnología
nacional la clorofila.
1987- Se constituye la Sociedad Fortuna Stevia del
Paraguay S.R.L., empresa dedicada a la promoción,
cultivo, acopio, industrialización y comercialización de
Ka´á-He´é que, con tecnología propia elabora el extracto
acuoso de la hoja. El Ing. Agr. Marcavillaca (Argentina)
logra las primeras plantas de stevia micropropagadas e
integra ensayos en laboratorio y a campo con el objetivo
de establecer las condiciones óptimas de manejo del
cultivo.
1988- INGA Stevia Industrial S.A. inaugura la
primera industria en Occidente el 8 de agosto de 1988 en
Maringá-Brasil, con una capacidad instalada de 9
toneladas por día de procesamiento de hoja, y que en la
primera fase solamente utilizará 3.000 kg/día, por falta
de materia prima, obteniendo un rendimiento del 10 % en
esteviósido.
1993- Se incorpora el esteviósido al Código
Alimentario Nacional (Resolución 101 del 22 de febrero
de 1993).
36
11 - Caracterización de la Stevia rebaudiana Bert.:
11.1 - Origen y distribución:
La mayoría de los estudiosos admiten que el ka´á-he
´é es una planta auténticamente paraguaya, originaria de
la Región Oriental del país, donde era utilizada por los
indios como edulcorante y para fines medicinales (Shock,
1982).
Según distintas fuentes se encuentra desde las
sierras del Mbaracayú, Campos Altos del Amambay hasta el
Monday, zonas de San Pedro, Capitán Bado, Yhú, Bella
Vista, San Salvador, Vacá Retá, entre el río Ypané e
Ybyraró, próximo al Cerro Cuarepotí, en Itacuí y en
Campos de Cerro Cuatía (Shock, 1982). La región se
encuentra entre 22-26º sur y 54-57º oeste. Los
Departamentos de Amambay, Concepción, San Pedro,
Canendiyú, Alto Paraná y Caaguazú estarían representados
en la zona mencionada. Otros autores indican que la
planta es autóctona de las fronteras del Paraguay con
Brasil (Pagliosa, 1982) encontrándose en el suroeste del
Brasil en la región de Amambay, división del Paraguay
con Matto Grosso do Sul. ha sido colectada en Ponta Porá
(Felippe, 1982). Monteiro (1982) menciona estudios de
37
especies brasileñas de Stevia y su interrelación con el
ka´á-he´é y de revisión taxonómica - morfológica de la
serie Multiaristatae de Stevia en Brasil. Sumida (1980)
observa que Stevia crece naturalmente o es cultivada en
los distritos de Amambay e Iguazú, frontera de Brasil,
Paraguay y Argentina (latitud 25ºS). Se ha naturalizado
en todo el Noreste Argentino. Se cultiva en Brasil en
Santa Catarina, Paraná, Sao Paulo, Matto Grosso do Sul y
Goias; en Paraguay en el Alto Paraná, Horquetas, Pedro
Juan Caballero, Capitán Bado, Quiindy, Coronel Oviedo y
la región del Chaco.
Actualmente Japón, China, Brasil y Paraguay parecen
ser los principales productores. Del Japón se ha
extendido a todo el sudeste asiático (Jordán Molero,
1984).
11.2 - Descripción botánica:
Stevia rebaudiana Bert. (yerba dulce), es una
planta arbustiva originaria del noreste de Paraguay,
perteneciente a la familia de las compuestas, que crece
en estado silvestre en forma de planta aislada. Fue
descripta botánicamente en 1905, por el naturalista
38
Moisés Santiago Bertoni, como una planta herbácea de 40
a 80 cm de altura.
La raíz es fibrosa, filiforme y perenne, formando
abundante cepa que apenas ramifica y no profundiza,
distribuyéndose cerca de la superficie; es el único
órgano de la planta que no contiene el esteviósido (De
Vargas, 1980). En plantas que se propagan asexualmente
por pedazos de tallos en arena gruesa, se ha observado
abundante ramificación del sistema radicular. Sumida
(1980) observó que las raíces finas abundan en la
superficie y las gruesas en las zonas más profundas del
suelo.
El tallo es anual, subleñoso, más o menos
pubescente, con tendencia a inclinarse, es más o menos
ramificado. Durante su desarrollo inicial no posee
ramificaciones, tornándose multicaule después del primer
ciclo vegetativo llegando a producir hasta 20 tallos en
3 a 4 años. En condiciones óptimas, el tallo puede
llegar hasta un metro y medio de altura (Sagakuchi,
1982).
Las hojas son elípticas oval o lanceoladas,
pequeñas, simples; borde o margen dentado; a veces en
39
verticilos; algo velludas. La hoja es el órgano con
mayor contenido del edulcorante (C.C.N., 1980).
Una planta tarda más de un mes en producir todas
sus flores. En Paraguay florece en octubre, diciembre y
marzo pero se clasifica como una planta de día corto,
situando el fotoperíodo crítico en 12 - 13 horas según
el ecotipo. La flor es hermafrodita pequeña y
blanquecina, en capítulos pequeños terminales o
axilares, agrupados en panículas corimbosas (Shock,
1982).
La polinización es entomófila; se dice que la
planta es autoincompatible (protandria) de tipo
esporofítico y clasificada como apomíctica obligatoria
(Monteiro, 1982).
El fruto es un aquenio que es diseminado por el
viento. Se clasifica en: claro estéril, oscuro fértil y
oscuro estéril (Gattoni, 1945).
El género Stevia tiene más de 100 especies en el
continente americano, de donde es originaria, pero
Stevia rebaudiana Bert. es la única especie con
principios edulcorantes en las hojas (Grashoff, 1972).
40
En el Paraguay es conocida con su denominación: Ka'á-
He'é, que significa yerba dulce en español.
11.3 - Ecotipos:
Esta especie presenta numerosos ecotipos.
Mitsuhashi (1975), seleccionó 28 ecotipos diferentes.
Para diferenciarlos se basó principalmente en sus
características morfológicas. Al determinar el contenido
de esteviósidos estos variaron entre 2,07 y 18,34 %.
Sumida (1980) describe una serie de experimentos donde
22 variedades de Stevia rebaudiana Bert. fueron
estudiadas para correlacionar, varias características de
la planta con la heredabilidad. Se observó 11
características morfológicas y 6 características de
contenido. De estas 17 características, solamente el
peso seco de hojas mostró una baja correlación con la
heredabilidad. Sumida, concluyó, que características
morfológicas y de contenido, principalmente de
principios activos, tienen efecto seleccionador
evidente.
11.4 - Citología:
41
Observaciones de Brucher (1974), revelan que la
planta es diploide, conteniendo 22 cromosomas.
Estudios de poliploídia fueron realizados por
Brucher (1974), por Utsunomiya (1977) y Sato y Kawakami
(1975). Estos últimos investigadores obtuvieron
variedades de alta calidad. La poliploídia puede
resultar un buen método para obtener aumentos de
productividad en términos de masa foliar y contenido de
principio activo, reduciendo el área plantada y por ello
los costos (Handro, 1984).
11.5 - Clima:
La región donde crece el ka´a-he´e es subtropical,
semihúmeda, con 1.400 a 1.800 mm. de lluvia, que se
distribuyen regularmente durante todo el año y
temperaturas extremas de -6º a 43ºC, con promedio de
24ºC. Según Sakaguchi (1982) la temperatura más
apropiada para Stevia es de 15 a 30ºC con un límite
inferior de -3ºC. Soporta medias mínimas de 5ºC.
42
La habilidad para resistir inviernos, aparentemente
es determinada por la temperatura del suelo. La amplitud
crítica está entre 0 a 2ºC. Mudas de 5 cms. con 10 hojas
soportaron temperaturas de -5ºC por 70 minutos
(Sagacuchi, 1982), lo que implica que las áreas
potenciales de producción de la especie podría
extenderse a latitudes mayores. En nuestra facultad
existe una pequeña parcela, con 50 plantas desde hace
aproximadamente 2 años. Durante el invierno su parte
aérea se seca, rebrotando desde la base en primavera.
La planta resiste la humedad pero no la sequía, y
esto puede explicarse por la morfología de su sistema
radicular.
Desarrolla mejor donde la estación de crecimiento
es larga, donde la intensidad de luz es alta, con
temperaturas tibias, riesgos mínimos de heladas luego de
la brotación y sin períodos de larga sequía. Los
fotoperíodos largos aumentan la longitud de los
entrenudos, área foliar, peso seco y aceleran la
aparición de hojas. La materia seca se reduce a la mitad
con fotoperíodos, de días cortos. Azúcares, proteínas y
esteviósidos aumentan tanto en valores absolutos como
relativos en días largos (Sagacuchi, 1982).
43
Para la producción de mudas (propagación) es
necesario temperaturas por sobre los 15ºC.
11.6 - Suelos:
Se la puede cultivar en suelos muy variados. En su
estado natural, la planta crece en suelos tanto de baja
fertilidad, ácidos, de tipo arenoso como hasta orgánicos
y con alta humedad (Shock, 1982). Algunos autores
recomiendan tierras areno-arcillo-humífera-ferruginosa o
simplemente arena humífera. Se desarrolla bien en suelos
colorados del Alto Paraná. La tierra ideal es la areno-
arcillosa con regular proporción de humus. Se adapta
bien a suelos arcillosos con buen drenaje, no así a
lugares con exceso de humedad. Prospera bien en suelos
de desmonte, no así en tierras recién desmontadas, con
mucha materia orgánica, por problemas de enfermedades
(C.C.N., 1980). La planta crece naturalmente en suelos
de ph 4-5, pero crece bien entre 6.5-7.5 siempre que no
sean salinos (Shock, 1982).
12 - Características agronómicas:
44
Stevia rebaudiana Bert. es una especie semiperenne
que en cultivo puede durar entre 5 y 6 años, con 2 o 3
cortes anuales; el rendimiento anual de hoja seca en
Paraguay oscila entre 1500 y 2500 kg/ha, en condiciones
de secano y alrededor de 4300 kg/ha con riego (Jordán
Molero, 1984).
En Japón, en 1 o 2 cosechas por año, el rendimiento
de hoja seca varía entre 3000 y 3500 kg/ha en el primer
año, 4000 a 4500 kg/ha en el segundo, 4000 a 6000 kg/ha
en el tercero, disminuyendo a 4000 kg/ha en el cuarto
(Sumida, 1980).
Según distintos autores la densidad de plantación
puede variar entre 20.000 a 400.000 pl/ha, en hileras
sencillas, dobles o triples. Altas densidades, reducen
el desarrollo de ramas laterales y el rendimiento en
peso seco por planta, aumentando el número de plantas
muertas luego de la cosecha y las dificultades en la
misma (Sakaguchi, 1982).
Se estima que la densidad optima de 88000 pl/ha, se
da a distancias de 75 cm entre hileras y 15 cm dentro de
la misma (Jordán Molero, 1984).
45
12.1 - Propagación sexual de Stevia rebaudiana (Bert):
Se reproduce sexualmente por aquenios, observándose
alta heterogeneidad en las poblaciones resultantes. La
planta es de polinización cruzada y gran parte de sus
aquenios son estériles; son livianos y de fácil
dispersión por el viento. La floración no es uniforme,
lo mismo que la maduración de la semilla, siendo la
recolección lenta y difícil. Para mejorar la calidad de
las semillas se recomienda incorporar apiarios en la
plantación. El porcentaje de germinación varia entre 10
y 38 %. La longevidad de los aquenios es corta y ya a
los 4 meses el potencial de germinación se reduce un 40-
70 %, después de 8 meses es casi nulo. Las semillas
deben guardarse en condiciones de baja humedad, baja
temperatura, preferentemente en la oscuridad y en
envases herméticos (Felippe et al., 1971; De Vargas,
1980; Sagakuchi et al., 1982; Jordán Molero, 1984).
12.2 - Propagación vegetativa de Stevia rebaudiana
(Bert):
Esta especie puede propagarse vegetativamente por
separación de hijuelos. Este método sólo puede
46
utilizarse para pequeñas plantaciones, ya que el número
de mudas producidas es reducido.
En la base del tallo, o bajo tierra, en la
primavera temprana aparecen pequeños vástagos, muchos
con sus respectivas raíces que pueden separarse y
plantarse en el lugar definitivo (Jordán Molero, 1984).
Otra forma de propagación vegetativa es a través de
estacas; método que convenientemente ajustado podría ser
usado a escala comercial.
Diferentes autores obtuvieron respuestas variables
al utilizar estacas apicales o subapicales, con diversos
sustratos, en distintas épocas del año y al incluir
tratamiento rizogénico (Felippe, 1977; De Vargas, 1980;
Sumida, 1980; Shock, 1982; Jordán Molero, !983 y 1984).
El cultivo de tejidos es otro método de propagación
vegetativa que permite obtener plantaciones más
uniformes, además de la rápida multiplicación clonal
(Yang, 1979 y 1981; Marcavillaca, 1985).
Marcavillaca et al (1993) proponen la combinación
de macro y micropropagación; las plantas micropropagadas
se utilizan como banco de plantas madres y en sólo 3
47
ciclos de multiplicación (1 de micro y 2 de
macropropagación), se lograría a partir de una sola
planta, material para cultivar 3 ha (225.000 plantas).
13 - Propagación vegetativa:
La historia de la producción vegetal se ha
caracterizado por el desarrollo de tecnologías de
avanzada que facilitan y optimizan la propagación
vegetativa. La posibilidad de controlar el ambiente (uso
de nieblas, calefactores, termostatos, serenos, etc),
amplia el espectro de especies que pueden seleccionarse
y multiplicarse de esta forma (Marsden, 1955).
La propagación vegetativa o asexual se utiliza para
producir una planta que posea el mismo genotipo que la
planta madre (planta donadora) y esto es posible porque
todas las células de una planta poseen la información
necesaria y/o suficiente para reproducir la planta
entera (Hartmann et al., 1992).
En la multiplicación por estacas solo es necesario
que un nuevo sistema de raíces adventicias se
desarrolle, ya que la estaca posee yemas con aptitud
48
potencial para desarrollar nuevos vástagos (Hartmann et
al., 1992).
Las raíces adventicias son de dos tipos: raíces
preformadas y raíces de herida (inducidas). Las raíces
preformadas se forman naturalmente durante los primeros
periodos de desarrollo del vástago, pudiendo emerger
antes de la realización de estacas o permaneciendo en
dormición hasta que se realicen las mismas y sean
colocadas en condiciones ambientales favorables. Las
raíces de herida desarrollan sólo después que la estaca
es cortada, por efecto de la herida producida en la
preparación de la misma. Estas raíces, son consideradas
como formadas de novo (nueva formación)(Davies y
Hartmann, 1988).
Cuando se prepara una estaca, las células más
cercanas a la superficie son lesionadas y expuestas,
comenzando la respuesta de cicatrización de la herida
(Cline y Neely, 1983). En el proceso de regeneración de
raíces, ocurren los siguientes tres pasos:
- A medida que las células externas, lesionadas,
se mueren, se forma una lámina necrótica que
sella la herida con un material suberoso y se
49
tapona el xilema con gomas. Esta lámina ayuda a
proteger la superficie del corte de
desecamientos y patógenos.
- Por detrás de la lámina, células vivas comienzan
a dividirse después de algunos días y una capa
de células parenquimatosas (callo), forma una
peridermis.
- Ciertas células, en la vecindad del cambium
vascular y floema, comienzan a dividirse e
inician la formación de raíces adventicias.
13.1 - Bases fisiológicas de la iniciación de raíces
adventicias:
Varias clases de reguladores de crecimiento, tales
como auxinas, cytokininas, giberelinas y etileno e
inhibidores, como el ácido abscísico y fenólico,
influyen sobre la iniciación de raíces. De ellas, la
auxina es la que tiene el mayor efecto sobre la
formación de raíces en estacas (Hartmann et al., 1992).
50
13.1.1 - Efecto de las hojas sobre el enraizamiento:
(Hartmann et al., 1992)
Es ampliamente conocido que la presencia de las
hojas en la estaca, ejerce una fuerte influencia,
estimulando la iniciación de raíces.
La traslocación de carbohidratos desde las hojas
sin duda contribuye, a la formación de raíces, sin
embargo, la mayor promoción del enraizamiento por efecto
de las hojas y yemas, es posiblemente resultado de otros
factores más directos (Breen, 1974). Hojas y yemas, son
conocidas como poderosos centros productores de auxinas,
y los efectos son observados directamente por debajo de
ellos, demostrando el transporte polar, desde el ápice a
la base. Estacas de ciertas especies son fácilmente
enraizadas, mientras que estacas de otras enraízan con
mayor dificultad.
13.1.2 - Fotosíntesis de las estacas:
La fotosíntesis de las estacas no es un
requerimiento absoluto para la formación de raíces. Esto
puede ser observado en estacas con muchas hojas, que se
llevan a un sitio oscuro y con estacas deshojadas
51
(nofotosíntetizantes), que enraízan (Davis y Potter,
1981). Pero puede generalizarse que, la fotosíntesis en
estacas, es probablemente más importante después de la
iniciación de raíces y ayudaría en el desarrollo y
crecimiento más rápido de las raíces (Davis, 1989).
13.2 - Factores que afectan la multiplicación por
estacas:
13.2.1 - Diferencias entre plantas individuales
procedentes de semilla:
Al enraizar estacas tomadas de plantas individuales
de una especie, que de ordinario se propaga por
semillas, la experiencia ha demostrado que pueden
existir amplias diferencias entre estacas tomadas de
ellas (efectos y/o variabilidad del genotipo )(Hartmann
et al., 1992).
13.2.2 - Diferencias entre las zonas apicales y básales
de la rama: (Hartmann et al., 1992)
52
En la composición química de las ramas hay marcadas
diferencias de la base a la punta. En las estacas
tomadas de distintas partes de las ramas en ocasiones se
observa variabilidad en la producción de raíces y en
muchos casos el mayor porcentaje de enraíce se obtiene
en estacas procedentes de la porción basal de la rama.
Puede ocurrir que en tallos de un año o más de
edad, los carbohidratos se hayan acumulado en la base de
las ramas y tal vez se han formado algunas iniciales de
raíz, posiblemente bajo la influencia de sustancias
promotoras de raíces procedentes de yemas y de hojas, y
por lo tanto el mejor material para estacas puede
provenir de la porción basal de esas ramas.
Pero, el mejor enraizamiento de las estacas
apicales podría explicarse por la posibilidad de que en
el ápice se encuentre una mayor concentración de
sustancias endógenas promotoras del enraizamiento ya que
las mismas se originan en las secciones apicales (yemas
apicales). También, las estacas apicales son más jóvenes
y en consecuencia, hay más células capaces de volverse
meristemáticas. En las especies que enraízan fácilmente,
este factor es de poca importancia, cualquiera sea la
posición de la estaca en la rama.
53
13.2.3 - Estado reproductivo o vegetativo:
En la mayoría de las plantas se pueden hacer
estacas de ramas en condición vegetativa o en condición
reproductiva. Nuevamente, en especies que enraízan
fácilmente no existen grandes diferencias entre
distintos estados fenológicos en que se encuentre la
planta, pero en especies que enraízan con dificultad,
éste puede ser un factor de importancia. Por ejemplo, en
dalia, las estacas que portan yemas florales tienen
mayor dificultad para enraizar que las estacas que
tienen solamente yemas foliares (Biran y Halevy, 1973).
13.3 - Sustratos para el enraizamiento:
Hay diversos medios y mezclas de éstos que se usan
con el fin de hacer enraizar estacas. Para obtener
buenos resultados se requieren las siguientes
características (Richards; Warneke y Aljibury, 1964):
- El medio debe ser lo suficientemente firme y
denso para mantener las estacas en su sitio
54
durante el enraíce; su volumen no debe variar
mucho, ya sea seco o mojado; resulta perjudicial
que tenga un encogimiento excesivo al secarse.
- Debe retener la suficiente humedad para que no
sea necesario regarlo con mucha frecuencia.
- Debe ser lo suficientemente poroso, de modo que
se escurra el exceso de agua y permita una
aireación adecuada.
- Debe estar libre de malezas, nemátodos y otros
patógenos.
- No debe tener un nivel excesivo de salinidad.
- Debe poderse esterilizar con vapor o químicos
sin que sufra efectos nocivos.
- Debe existir una adecuadada provisión de
nutrientes para todo el período, aunque
suplementaciones con fertilizantes de lenta
liberación son frecuentemente recomendados.
55
Un medio ideal de propagación, debe estar provisto
de suficiente porosidad para permitir una buena
aireación y una alta capacidad de retención de agua,
debe tener un buen drenaje y estar libre de patógenos
(Hartmann et al., 1992).
13.3.1 - Arena:
La arena está formada por pequeños granos de
piedra, de alrededor de 0.05 a 2 mm de diámetro,
dependiendo su composición mineral de la que tenga la
roca madre. En propagación, generalmente, se emplea
arena de cuarzo. De preferencia se debe fumigar o tratar
con calor antes de usarla para esterilizarla.
Virtualmente no contiene nutrientes minerales y no tiene
capacidad amotiguadora (Buffer) o capacidad de
intercambio cationico. Casi siempre se usa en
combinación con algún material orgánico (Hartmann et
al., 1992).
13.3.2 - Turba:
56
La turba se forma con restos de vegetación
acuática, de marismas, ciénagas o pantanos, que se ha
preservado bajo el agua en un estado de descomposición
parcial.
La turba de pantanos esta formada por restos de
pastos, juncos y otras plantas de pantanos. Este tipo de
turba es variable en su composición y color. Su pH varía
alrededor de 4 a 7.5 y su capacidad de retención de
humedad es de 10 veces su peso seco (Hartmann et al.,
1992).
13.3.3 - Humus de lombriz:
El humus de lombriz con forma de restos vegetales,
restos animales (no deben utilizarse crudos) y restos
domiciliarios orgánicos, que acumulados, forman un
compost, y con el agregado de lombrices que digieren la
materia orgánica, resulta en un producto final, llamado
vermicompuesto, semejante al humus, atóxico para los
vegetales y excelente mejorador de suelos.
Algunas características del humus de lombriz
modifican las propiedades físico - químicas y
microbiologicas del suelo: a)- le comunica al suelo
57
mayor porosidad y aireación, mejorando también la
infiltración y favoreciendo el desarrollo radical; b)-
se liberan gradualmente los nutrientes que las plantas
necesitan, pues al mantener el pH dentro de un rango
cercano a la neutralidad (6-7)( con gran poder buffer) ,
les permite una mayor solubilidad. El tenor de
microelementos: Cu, Mn, Mo y Zn, es elevado; c)-
contiene los mismos microorganismos benéficos que tiene
el suelo, pero en mayor cantidad, destacándose los que
transforman la celulosa y los que intervienen en la
asimilación de nitrógeno y fósforo; d)- aumento de la
velocidad de emergencia de las plántulas; e)- permite
una larga permanencia de ciertos hongos benéficos del
suelo. Estos microorganismos que suelen ser efectivos
para controlar hongos dañinos del suelo, suelen tener en
él poca durabilidad. El humus de lombriz les permite un
buen desarrollo tórnadolo efectivo en la lucha, por
ejemplo contra dampig off ( Mirabelli, 1995).
13.4 - Mezclas de suelo para cultivo en maceta:
(Hartmann et al., 1992)
En los sistemas de propagación, las estacas
enraizadas algunas veces se plantan directamente en el
campo, pero por lo general, esto no es satisfactorio
58
para la sobrevivencia de las mismas, por ello con
frecuencia se les inicia en una mezcla de suelo en
diversos recipientes.
Para lograr mezclas de suelo más uniformes y de
mejor textura para macetas, a veces se añade arena a la
tierra y algo de materia orgánica, en forma de turba,
viruta de madera o corteza desmenuzada. También se usan
otras mezclas, sin el agregado de tierra, para la
propagación y cultivo de plantas. Pueden citarse mezclas
de turba y perlita o turba y arena, pero al ser pobres
en nutrientes, necesitan el agregado de fertilizantes.
El humus de lombriz puede utilizarse satisfactoriamente
por todas las buenas características que presenta.
59
JUSTIFICACION OBJETIVO HIPOTESIS
60
JUSTIFICACIÓN:
La inclusión del esteviósido en el Código
Alimentario Nacional (Resolución 101 del 22-2-93) y la
posibilidad de exportación ha incrementado el interés en
esta especie por parte de productores.
El bajo valor cultural de las semillas (10 al 15 %)
(Felippe et al, 1971) y la heterogeneidad de las
poblaciones resultantes (Pagliosa, 1982), indican la
necesidad de desarrollar y/o ajustar técnicas
alternativas, sencillas y económicas, que permitan la
propagación masiva de genotipos selectos (Marcavillaca
et al, 1993).
OBJETIVO:
El objetivo del presente trabajo de intensificación
es estudiar, como el origen de la estaca, la época del
año y/o estado fenológico, el sustrato de enraizamiento
y la presencia de sustancias rizogénicas, afectan la
propagación vegetativa de Stevia rebaudiana Bert.
HIPÓTESIS:
61
- Las respuestas en el enraizamiento de Stevia
rebaudiana Bert. están condicionada por la
posición de la estaca en la planta (estaca
apical vs estaca subapical).
- El tipo de sustrato afecta la longitud y peso
de las raíces formadas.
- Durante el período de crecimiento anual (desde
primavera a fines de otoño), pueden realizarse
varios ciclos de multiplicación (cortes de
estacas), con el mismo stand de plantas madres
con porcentajes de enraizamiento razonables.
62
MATERIALES Y METODOS
63
MATERIALES Y MÉTODOS:
Estas experiencias se realizaron con material
extraído de plantas de Stevia rebaudiana Bert. (tres
clones: A-B-C), de origen japonés, que se mantienen en
el campo experimental de la Facultad de Agronomía (UBA)
(fotografía), las que se riegan y fertilizan
periódicamente; los ensayos se iniciaron luego del
rebrote primaveral cuando el crecimiento en la mayoría
de los vástagos fue tal que permitió extraer estacas
apicales (Ap) y subapicales (Sap) de aproximadamente 10-
12 cm (2 o 3 nudos).
Las bases de las estacas (2 cm), apicales (Ap) y
subapicales (Sap) se trataron durante 24 hs, en una
solución de ácido indolbutírico (IBA)(25 mg/l, en
solución alcohólica al 10 %) (Marcavillaca et al, 1993).
Previamente, a las mismas, se les disminuyó el número de
hojas presentes en los nudos inferiores, para disminuir
la superficie de transpiración (Hartmann et al, 1992).
Posteriormente se plantaron en bandejas de plástico
(32 por 32 por 18 cm), sobre un sustrato de turba y
arena (Ta)(1:1) ó turba y humus de lombriz (Tl)(1:1), y
colocando 36 estacas por bandeja (12 estacas de cada
clon), realizándose tres repeticiones de cada
64
tratamiento. Sobre las bandejas se construyó un armazón
de alambre, abovedado y se cubrió con una lámina de
polietileno, para crear una cámara húmeda, manteniéndose
las mismas a la sombra. Al comienzo del ensayo y a las
dos semanas se pulverizó con Captan (1,5 gr/l de
solución), para disminuir la posibilidad de enfermedades
fúngicas. A las cuatro semanas se contabilizó el número
de estacas muertas y enraizadas, determinándose,
porcentaje de enraizamiento (%E), longitud de raíces
(LgR) por el método de Tennant (1975)(ver anexo) y peso
seco de raíces (PSR) y parte aérea (PSA).
Este primer ensayo se inició el 29 de noviembre de
1994 (F1) y se repitió durante todo el período anual de
crecimiento, cada vez que los vástagos de las plantas
madres alcanzaron una longitud tal que permitió el corte
de estacas apicales y subapicales; el segundo se realizó
el 12 de enero de 1995 (F2); el tercero el 2 de marzo de
1995 (F3) y el cuarto el 6 de abril de 1995 (F4) y las
evaluaciones se iniciaron el 29 de diciembre de 1994, el
15 de febrero de 1995, el 4 de abril de 1995 y 9 de mayo
1995, respectivamente.
En el ensayo iniciado el 12 de enero de 1995 (F2),
a las estacas correspondientes al clon A se les incluyó
otro factor: con y sin tratamiento hormonal (IBA y
65
noIBA), factor que también fue estudiado en las fechas
restantes (F3 y F4) para los tres clones (A, B, C),
tipos de estaca (Ap y Sap) y sustratos (Ta y Tl) (Tabla
1).
En cada una de las fechas de los ensayos se tomaron
muestras de estacas (n=10) apicales (Ap) y subapicales
(Sap) y se estimó peso seco de las mismas.
Para evaluar peso seco se separaban las raíces de
la parte aérea. En por lo menos cinco estacas de cada
tratamiento, se determinó la longitud de las raíces y
luego se secó todo el material enraizado en estufa a
50ºC, durante 72 hs, pesándose posteriormente en balanza
analítica (precisión: 10-4 gr). El peso de la parte
aérea se ajustó según:
Crecimiento de la parte aérea (CpA)= Peso seco aéreo
total - media del peso seco inicial de cada fecha y tipo
de estaca.
Se realizó un ensayo factorial, con medidas
repetidas en el tiempo, con un diseño de bloques al azar
y los resultados se evaluaron a través de un análisis de
varianza, para el mismo se utilizó el programa
estadístico Number Cruncher Statistical System (NCSS)
66
(Hintze, 1991). Las variables estudiadas fueron:
porcentaje de enraizamiento (%E), longitud de raíces
(LgR), peso seco de raíces (PSR) y peso seco de la parte
aérea (PSA) y relación peso de las raíces/peso total
(rPSR/PT) con:
Peso total= Crecimiento de la parte aérea (CpA) + peso
de las raíces (PSR).
Cuando las variables analizadas son porcentaje de
enraizamiento o relación peso de raíces/peso total,
previamente se realizó transformación de datos
(arcoseno).
67
RESULTADOS Y DISCUSION
68
RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
Durante las realizaciones del ensayo al
contabilizar el número de individuos muertos, a los 15 y
28 días se observó que el número de los mismos era mayor
en los tratamientos de turba y arena. Sobre un total de
432, 462 y 576 estacas para cada una de las fechas, las
pérdidas fueron en la primer fecha 61 y 70, segunda
fecha 46 y 53 y en la tercer fecha 40 y 75, para turba y
humus de lombriz y turba y arena respectivamente;
valores que implican 22% de perdida total para las tres
fechas juntas.
La cuarta fecha (F4), se excluyó del análisis de
los datos ya que sólo esporádicamente algunas estacas
subapicales enraizaron. A comienzos del mes de marzo,
con fotoperiódos de 13 1/2 hs comienza la floración en
los tres clones. Se ha postulado la hipótesis de la
existencia de un complejo hormonal complementario de la
floración, y las giberelinas, que se sintetizan en esta
etapa, serían las responsables esenciales de la
formación y crecimiento de los tallos florales (Barceló
Coll et al, 1983).
Se ha observado que las giberelinas, en
concentraciones relativamente elevadas, de manera
69
consistente han inhibido la formación de raíces
adventicias (Sircar, 1974). Esta inhibición sería un
efecto local directo que impediría la división temprana
de las células que intervienen en la transformación de
tejido maduro a una condición meristemática (Brian et
al, 1960). En estacas de hoja de Begonia se observó que
el ácido giberélico inhibía la formación, tanto de yemas
como de raíces adventicias, probablemente, bloqueando
las divisiones celulares organizadas, que inician la
formación de los primordios de yemas y de raíces (Heide,
1969).
En la mayoría de las plantas se pueden hacer
estacas de ramas en condición vegetativa o en condición
reproductiva. En especies que enraízan fácilmente no
existen grandes diferencias entre los distintos estados
fenológicos en que se encuentre la planta, pero en
especies que enraízan con dificultad, éste puede ser un
factor de importancia. Por ejemplo, en el arándano azul
(Vaccinium atrococcum), las estacas de madera dura
conteniendo yemas florales no enraízan tan bien como las
que sólo tienen yemas foliares. Cuando se usó madera
vegetativa, enraizó un 39% de las estacas, pero cuando
las estacas contenían una o más yemas florales, ninguna
enraizó (Hartmann et al., 1992). En dalia, las estacas
que portan yemas florales tienen mayor dificultad para
70
enraizar que las estacas que tienen solamente yemas
foliares (Biran y Halevy, 1973). En los rododendros, la
remoción temprana de las yemas florales potenciales
aumentó el enraizamiento, presumiblemente debido a la
eliminación de un estímulo promotor de la floración
antagonista del enraizamiento. La remoción posterior de
las yemas florales todavía aumentó el enraíce, tal vez
eliminando la competencia por los materiales necesarios
para la formación de raíces (Hartmann et al., 1992). La
floración es un fenómeno complejo que puede disminuir
la competencia entre destinos en perjuicio del
enraizamiento. En nuestro caso en F4 solo enraizaron
algunas estacas subapicales las cuales poseen muy pocas
yemas florales. Manchado de Carvalho y Zaidan (1995)
también observaron en esta especie bajos a nulos
porcentajes de enraizamiento cuando las plantas madres
se encuentran en estado reproductivo. Con muchas
especies ornamentales (Abelia, Ligustrum, Ilex, etc)
cuando se trabaja en escala comercial, se remueven yemas
florales en las estacas para un desarrollo de raíces más
rápido, un crecimiento vegetativo temprano y una mayor
eficiencia en la producción de la cicatrización
(Hartmann et al., 1992).
71
Porcentaje de enraizamiento:
Los resultados obtenidos se observaron en las
figuras 1, 2, y 3 y las tablas 2, 3 y 4. Se encontraron
diferencias altamente significativas entre clones (F**
14,47) y entre sustratos (F** 66,68) y no significativas
(ns) entre tipo de estaca y entre fechas de corte
(figura 1 y tabla 2). Los porcentajes de enraizamiento
fueron siempre altos, variando entre 55 y 75% (tabla 2).
Al estudiar la tercer fecha, con inclusión de
tratamiento rizogénico (figura 2 y tabla 3), se hallaron
diferencias significativas (F* 5,62) entre estacas y
altamente significativas entre sustratos (F** 47,75) y
entre tratamientos hormonales (F** 12,83). Los
porcentajes de enraizamiento variaron entre 35 y 74%
(tabla 3). Al estudiar el clon A (figura 3 y tabla 4)
incluyendo tratamiento con y sin hormona (IBA-noIBA), se
encontraron diferencias altamente significativas entre
sustratos (F** 47,75) y entre tratamientos rizogénicos
(F** 12,83) y significativas al 8% entre estacas (F*
3,07). Los porcentajes de enraizamiento variaron entre
41 y 90% (tabla 4).
72
Longitud de raíces:
Los resultados obtenidos se observan en las figuras
4, 5, y 6 y las tablas 5, 6 y 7. Se encontraron
diferencias altamente significativas entre fechas (F**
7,08), entre clones (F** 10,09), entre estacas
(F**27,13) y entre sustratos (F** 294,29) (figura 4 y
tabla 5) y entre las interacciones Fecha x Estaca (F**
8,39) (tabla 5.1), Clon x Estaca (F** 8,45) (tabla 5.2)
y significativas entre Fecha x Clon (F* 4,09) (tabla
5.3), las longitudes variaron entre 75 y 225 cm (tabla
5). Al analizar la tercer fecha, con inclusión de
tratamiento rizogénico (figura 5 y tabla 6) se
encontraron diferencias altamente significativas entre
sustratos (F** 75,25) y entre hormonas (F** 14,04) y
significativas entre estacas (F* 3,33) y entre clones
(F* 3,4). Las medias variaron entre 66 y 189 cm (tabla
6). Al estudiar el clon A durante dos fechas (F2 y F3),
se encontraron diferencias altamente significativas
entre sustratos (F** 58,74), entre tratamientos
hormonales (F** 8,85) y las longitudes extremas fueron
51 y 222 cm (figura 6 y tabla 7).
73
Peso de raíces:
Los resultados obtenidos se observan en las figuras
7, 8 y 9 y las tablas 8, 9 y 10. Se encontraron
diferencias altamente significativas entre clones (F**
5,7) y entre sustratos (F** 165,8) y significativas
entre fechas (F* 2.90), con medias que variaron entre 7
y 31 mg (figura 7 y tabla 8). Al analizar la tercer
fecha con inclusión de tratamiento rizogénico (figura 8
y tabla 9), se encontraron diferencias altamente
significativas entre sustrato (F** 31,86) y entre
tratamientos rizogénicos (IBA-noIBA) (F** 6,33) y los
pesos variaron entre 8 y 23 mg (tabla 9). Estudiando el
clon A durante dos fechas (F2 y F3) se observaron
diferencias altamente significativas entre sustratos
(F** 31,31) y significativas entre hormonas (F* 4,23) y
los pesos de todos los tratamientos variaron entre 5 y
19 mg (tabla 10).
Peso de parte aérea:
En esta parte del ensayo se analiza el crecimiento
verificado de la parte aérea, por encima del peso
inicial de las estacas iniciales, durante el
enraizamiento. Los datos observados se muestran en las
74
figuras 10, 11 y 12 y las tablas 11, 12 y 13. Se
encontraron diferencias significativas entre fechas (F**
122,72), entre clones (F** 5,37), entre estacas (F**
13,29) y entre sustratos (F** 9,71) y significativas en
la interacciones Fecha x Clon (F* 3,85) (figura 10 y
tablas 11 y 11.1) y los pesos variaron entre 31 y 64 mg.
Al analizar la tercer fecha se encontraron diferencias
altamente significativas entre sustratos y hormonas (F**
7.29 y 5,63 respectivamente) y significativas entre
clones (F* 3,76) y estacas (F* 4,08), con pesos que
variaron entre 14 y 26 mg (tabla 12). Cuando se estudió
el clon A durante dos fechas (F2 y F3) con respecto a
estas variables se encontraron diferencias altamente
significativas entre sustratos (F** 6,22) y
significativas entre estacas (F** 4,75) (figura 12), con
pesos que variaron entre 15 y 26 mg (tabla 13).
Relación peso de raíces parte aérea:
Los datos observados se muestran en las figuras 13,
14 y 15 y las tablas 14, 15 y 16. Se encontraron,
diferencias altamente significativas entre fechas (F**
26,73), entre estacas (F** 12,10) y entre sustratos (F**
36,32) y las mismas variaron entre 0,04 y 0,15 (tabla
14). Al analizar la tercer fecha con tratamiento
75
rizogénico, se observaron diferencias altamente
significativas entre sustratos (F** 10,1) y entre
estacas (F** 6,08) y significativas entre clones (F*
2.64) (figura 14) y las estacas variaron entre 0,12 y
0,21 (tabla 16). Al analizar al clon A durante dos
fechas (F2 y F3), se encontraron diferencias altamente
significativas entre fechas (F** 7,27) y significativas
entre sustratos (F* 4,23), entre estacas (F* 3,78) y
entre hormonas (F* 4,25) (figura 15), mientras que las
medias variaron entre 0,1 y 0,18 (tabla 16).
Al analizar en conjunto las distintas variables
(porcentaje de enraizamiento, longitud de raíces, peso
de raíces, peso de la parte aérea y relación peso de
raíces/peso total), surge de inmediato la superiodidad
del sustrato humus de lombriz y turba, sobre turba y
arena, ya que en todos los ensayos se observaron mayores
valores que sobre cualquier tratamiento (tablas 2 a 16),
incluso al estudiar el largo de raíces y/o peso
correspondientes a los tratamientos sin hormona, eran
mayores que los de turba y arena con hormona (tablas 6.1
y 9.1). Es evidente que las características físico-
químicas del mismo lo convierten, en un sustrato
altamente recomendable para la propagación a escala
comercial de distintas especies, ya que por su
76
consistencia y tamaño de partículas, permite un anclaje
adecuado de las estacas, el mantenimiento de altos
tenores de humedad, sin disminuir la porosidad y
aireación que facilitan el intercambio gaseoso,
liberando gradualmente los nutrientes necesarios.
Asimismo, podría postularse que los menores porcentajes
de pérdidas con este sustrato serían consecuencia de la
presencia en el mismo de poblaciones de microorganismos
benéficos.
En la mayoría de los ensayos se encontraron
diferencias significativas entre clones, lo que da idea
de la variabilidad existente entre los mismos. Se
esperaba encontrar menor heterogeneidad entre ellos, ya
que a pesar de ser clones, las semillas que los
originaron provenían de una misma planta. La
heterogeneidad de las poblaciones resultantes de la
multiplicación sexual, señalan la necesidad de trabajar
con material seleccionado y propagado vegetativamente
(Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993). Al evaluar
porcentajes de enraizamiento en la tercer fecha no hubo
diferencias entre clones (figura 2 y tabla 3), pero si
en la calidad de las raíces formadas (longitud y peso,
figuras 5 y 8 y tablas 6 y 9). La aptitud para
diferenciar raíces de especies herbáceas suele ser alta
y es por ello que las diferencias genotípicas suelen ser
77
menos evidentes. En los clones A y C siempre se
encontraron mejores respuestas que en el B. Entre A y C
las diferencias son menos notorias e incluso, al
analizar una misma variable, se observan diferencias
particulares estacionales (interacción Clon x Fecha).
Cuando se estudian las tres fechas siempre es superior
el clon A (peso de raíces y parte aérea, figuras 7 y 10
y tablas 8 y 11), pero en la tercer fecha, C supera a A
(longitud y peso de raíces, figuras 5 y 8 y tablas 6 y
9), lo que indicaría una mejor aptitud de este clon para
climas más frescos. Las temperaturas medias de cada una
de las fechas de corte fueron 25, 24 y 21 1/2ºC.
Al analizar el factor fecha, se observan que aunque
no se encontraron diferencias significativas en todas
las variables, la tendencia indicaría que la mejor fecha
fue la segunda, luego la tercera y por último la
primera. Durante la primer fecha (29 de noviembre al 29
de diciembre de 1994), las temperaturas estuvieron muy
por encima de las habituales (mínima media 20ºC y máxima
media 30,2ºC), lo que implica que las estacas, a pesar
de estar en la sombra, debieron registrar algún tipo de
éstres. Las únicas variables que fueron superiores en
esta fecha fueron peso de la parte aérea y de raíces.
Altas temperaturas tienden a promover el desarrollo y/o
crecimiento de las yemas, en detrimento del desarrollo
78
radicular (Hartmann et al, 1992)(figuras 7 y 10 y tablas
8 y 11). También hubo crecimiento importante de las
raíces pero el de la parte aérea fue mucho mayor. En la
relación peso de raíces/peso total (figura 13 y tabla
14), las diferencias son altamente significativas y en
la primer fecha la partición hacia raíces fue mucho
menor. Las temperaturas de las fechas restantes fueron
mínima media 19.3 y 16,9ºC y máxima media 29,2 y 27,2ºC
respectivamente. Temperaturas diurnas del aire entre 21
y 27ºC, con temperaturas nocturnas cercanas a 15ºC son
satisfactorias para la mayoría de las especies de clima
templado cálido (Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993). La
iniciación de raíces en estacas está regulada por la
temperatura, pero el crecimiento de las mismas es
fuertemente dependiente de los carbohidratos
disponibles. Las estacas iniciales de la segunda y
tercer fecha fueron más livianas que las de la primera,
pero la relación peso de raíces/peso total fue mucho
mayor en estas dos fechas (figura 13 y tabla 14). La
respiración se redujo probablemente como consecuencia de
las menores temperaturas, permitiendo una mayor
partición de los fotosintatos hacia las raíces. Los
resultados estacionales obtenidos en estos ensayos son
válidos para latitudes similares a las nuestras; en
Campinas, Estado de San Pablo, Brasil, los mejores meses
para el enraizamiento de estacas van de Mayo a
79
Septiembre, época en que a nuestras latitudes la
especie entra en reposo vegetativo (Machado de Carvalho
y Zaidan, 1995). Asimismo, los resultados obtenidos por
los autores son mucho menores a los nuestros (65% vs
31%).
En las estacas apicales se observan mejores
respuestas en las variables, longitud de raíces, peso de
las mismas y relación peso de raíces/peso total (figuras
4, 5, 6, 7, 8, 13, 14 y 15 y tablas 5, 6, 7, 8, 9, 14,
15 y 16). La mejor aptitud para el enraizamiento de las
estacas apicales, podría explicarse por la probabilidad
de mayores concentraciones de sustancias endógenas
promotoras del enraizamiento sintetizadas en las yemas
apicales. Asimismo las estacas apicales son más jóvenes
y por consiguiente existe mayor cantidad de células
meristemáticas (Hartmann et al, 1992). Sin embargo en el
porcentaje de enraizamiento se observó mejores
resultados con las estacas subapicales (figuras 1, 2 y 3
y tablas 2, 3 y 4), en este caso al ser más pesadas
podría haberse favorecido la acumulación de
carbohidratos, promoviendo el enraizamiento. Machado de
Carvalho y Zaidan (1995), rechazan el enraizamineto de
estacas subapicales, pues no logran respuestas
adecuadas.
80
Todas las variables relativas al enraizamiento se
ven favorecidas con la inclusión de tratamiento
rizogénico (figuras 2, 3, 5, 6, 8, 9, 14 y 15 y tablas
3, 4, 6, 7, 9, 10, 15 y 16), por lo que podríamos
afirmar que los mismos, no solo favorecen el porcentaje
de enraizamiento (inducción de raíces), sino la calidad
de las mismas, longitud (en número y tamaño), ya que el
mismo, era mayor en los tratamientos con IBA (datos no
presentados); además estos tratamientos estimulan el
desarrollo de las raíces formadas, favoreciendo la
partición de carbohidratos hacia las mismas (relación
peso de raíces/peso total, figuras 14 y 15 y tablas 15 y
16)
81
CONCLUSIONES Y CONSIDERACIONES FINALES
82
CONCLUSIONES
- Los mejores resultados cuantitativos de las
distintas variables (longitud de raíces, pesos
de raíces y parte aérea y relación peso de
raíces/peso total) en el enraizamiento de
estacas se observan con estacas apicales, pero
asimismo se logran respuestas adecuadas con
estacas subapicales.
- Los tratamientos rizogénicos afectan los
porcentajes de enraizamiento, mejorando la
calidad de las raíces formadas (número, largo y
peso).
- El enraizamiento es posible durante todo el
ciclo vegetativo.
- El humus de lombriz y turba es un sustrato
altamente conveniente para ser utilizado en
la propagación.
- Las diferencias encontradas en los clones
utilizados sugiere que la heterogeneidad de
una población de Stevia rebaudiana Bert.
permite la selección de distintos genotipos
83
para caracteres determinados.
CONSIDERACIONES FINALES
Stevia rebaudiana Bert. se presenta a nivel
mundial, como muy promisoria, para la producción de
edulcorantes naturales de bajo contenido calórico. Si un
pequeño porcentaje del mercado de edulcorantes, pudiera
ser ocupado por el esteviósido, serían necesarias
grandes cantidades de materia prima.
Debido a la heterogeneidad de las poblaciones en
cuanto al contenido de esteviósido, es imprescindible
partir de material seleccionado el cual debería ser
forzosamente propagado vegetativamente. Por lo tanto, es
indispensable contar con métodos de enraizamiento que
empleando técnicas sencillas y económicas puedan ser
utilizado a escala industrial.
Los resultados observados en esta experiencia
contribuirán al mejoramiento de los ya existentes.
Podría sugerirse que la continuidad de estos ensayos,
incluyan otros que estudien la posibilidad de prolongar
el período de propagación inhibiendo de algún modo la
84
floración. Asimismo, sería interesante establecer el
tiempo mínimo necesario para la formación de raíces.
Hemos observado, que utilizando humus de lombriz y
turba, no solo se mejoran las variables concernientes a
la calidad de las raíces, sino que además también se
afecta la velocidad en que las mismas se forman. La
etapa de enraizamiento se fijó en cuatro semanas porque
las estacas de turba y arena solo comienzan a enraizar a
partir de los 21 días. Mientras que las de turba y humus
de lombriz, ya habían comenzado la formación de raíces a
los 15 días. Acortamientos de esta etapa permitirían una
mayor rotación y eficiencia en el uso de los recursos
(ciclos, instalaciones, etc), factores que deben ser
tenidos en cuenta al diseñar un sistema de propagación a
escala industrial.
85
FIGURAS Y TABLAS
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
FOTOGRAFIA
112
FOTOGRAFIA: Planta de Stevia rebaudiana Bert. del
Banco de Plantas Madres de la
Facultad de Agronomía (UBA).
113
ANEXO
114
ANEXO
Medición de raíces. Método de Tennant:
En las fechas de evaluación correspondientes se
cortaron las raíces a ras del tallo, se lavaron y se
midieron siguiendo el siguiente método:
Se construyó una grilla cuadriculada (0,5 cm),
plastificándose posteriormente. Las raíces de cada una
de las plantas muestreadas se distribuyó sobre la grilla
al azar y con ayuda de una lupa de mano (2,5 veces de
aumento), se contabilizó el número total de
intersecciones horizontales y verticales que cada
porción de raíz cruzaba.
El largo total de las raíces de cada una de las
plantas se obtuvo utilizando la siguiente fórmula de
transformación:
Largo de raíz= 11/14 * número de intersecciones * unidad
de grilla (cm.).
Unidad de grilla correspondiente= 0,5 cm.
115
BIBLIOGRAFIA
116
BIBLIOGRAFÍA:
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125
ÍNDICE
Pág.
- Resumen ...........................................1
- Introducción ......................................4
1 - Propiedades de un edulcorante ideal ...........7
2 - Características de los edulcorantes de uso
extensivo .....................................9
2.1 - Sacarina ...................................9
2.2 - Ciclamato .................................10
2.3 - Aspartame .................................11
2.4 - Acesulfame-K ..............................12
3 - Características edulcorantes del esteviósido .12
3.1 - Introducción ..............................12
3.2 - Propiedades físico-químicas de interés
en el procesado de alimentos ..............14
3.3 - Propiedades edulcorantes ..................15
3.3.1 - Calidad del sabor dulce ................16
4 - Inocuidad del esteviósido ....................17
5 - Utilización actual del esteviósido ...........19
6 - Formas de comercialización ...................20
7 - Otros campos de aplicación ...................21
8 - Mercado mundial de edulcorantes ..............21
8.1 - Sacarina ..................................22
8.2 - Ciclamato .................................22
8.2 - Aspartame .................................23
8.4 - Esteviósido ...............................23
126
Pág.
9 - Perspectivas del esteviósido .................24
9.1 - Mercado mundial ...........................24
10 - Evolución histórica ..........................25
11 - Caracterización de la Stevia rebaudiana Bert..37
11.1 - Origen y distribución .....................37
11.2 - Descripción botánica ......................39
11.3 - Ecotipos ..................................41
11.4 - Citología .................................42
11.5 - Clima .....................................43
11.6 - Suelos ....................................44
12 - Características agronómicas ..................45
12.1 - Propagación sexual de Stevia rebaudiana
Bert. .....................................46
12.2 - Propagación vegetativa de Stevia rebaudiana
Bert. .....................................47
13 - Propagación vegetativa .......................48
13.1 - Bases fisiológicas de la iniciación de
raíces adventicia..........................51
13.1.1 - Efecto de las hojas sobre el
enraizamiento ..........................51
13.1.2 - Fotosíntesis de las estacas ............52
13.2 - Factores que afectan la multiplicación por
estacas ...................................53
13.2.1 - Diferencias entre plantas individuales
procedentes de semilla .................53
127
Pág.
13.2.2 - Diferencias entre las zonas apicales y
basales de la rama .....................53
13.2.3 - Estado reproductivo o vegetativo .......54
13.3 - Sustratos para el enraizamineto ...........55
13.3.1 - Arena ..................................57
13.3.2 - Turba ..................................57
13.3.3 - Humus de lombriz .......................58
13.4 - Mezclas de suelo para cultivo en maceta ...59
- Justificación, Objetivo e Hipótesis ..............61
- Materiales y métodos .............................64
- Resultados y discusión ...........................69
- Figuras y tablas .................................87
- Fotografía ......................................113
- Anexo. Método de Tennant ........................115
- Bibliografía ....................................117
128
ÍNDICE DE FIGURAS Y TABLAS
Figura Pág.
1- Porcentaje de enraizamiento, de 3 fechas (F1-
F2-F3),para los distintos factores (fecha,
clon, estaca y sustrato) .......................88
2- Porcentaje de enraizamiento, de la tercer
fecha (F3), para los distintos factores
(clon, estaca, sustrato y hormona) .............89
3- Porcentaje de enraizamiento, del clon A, para
2 fechas (F2-F3), de los distintos factores
(fecha, estaca, sustrato y hormona) ............90
4- Longitud de raíces, de 3 fechas(F1-F2-F3),para
los distintos factores (fecha, clon, estaca y
sustrato) ......................................91
5- Longitud de raíces, de la tercer fecha (F3),
para los distintos factores (clon, estaca,
sustrato y hormona) ............................92
6- Longitud de raíces, del clon A, para 2 fechas
(F2-F3), de los distintos factores (fecha,
estaca,sustrato y hormona) .....................93
7- Peso de raíces, de 3 fechas (F1-F2-F3), para
los distintos factores (fecha, clon, estaca y
sustrato) ......................................94
8- Peso de raíces, de la tercer fecha (F3), para
los distintos factores (clon, estaca, sustrato
y hormona) .....................................95
129
Pág.
9- Peso de raíces, del clon A, para 2 fechas
(F2-F3), de los distintos factores (fecha,
estaca, sustrato y hormona) .....................96
10- Peso de la parte aérea, de 3 fechas (F1-F2-F3),
para los distintos factores (fecha, clon,
estaca y sustrato) ..............................97
11- Peso de la parte aérea, de la tercer fecha
(F3), para los distintos factores (clon,
estaca, sustrato y hormona) ...................98
12- Peso de la parte aérea, del clon A, para 2
fechas (F2-F3), de los distintos factores
(fecha, estaca, sustrato y hormona) ............99
13- Relación Peso de raíces/Peso total, de 3
fechas (F1-F2-F3), para los distintos
factores (fecha, clon, estaca y sustrato) .....100
14- Relación Peso de raíces/Peso total, de la
tercer fecha (F3), para los distintos factores
(clon, estaca, sustrato y hormona) ............101
15- Relación Peso de raíces/Peso total, del clon
A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos
factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ..102
130
Tabla Pág.
1- Resumen de los factores ensayados .............103
2- Porcentaje de enraizamiento, de 3 fechas (F1-
F2-F3),para los distintos factores (fecha,
clon, estaca y sustrato) ......................104
3- Porcentaje de enraizamiento, de la tercer
fecha (F3), para los distintos factores
(clon, estaca, sustrato y hormona) ............104
4- Porcentaje de enraizamiento, del clon A, para
2 fechas (F2-F3), de los distintos factores
(fecha, estaca, sustrato y hormona) ...........104
5- Longitud de raíces, de 3 fechas(F1-F2-F3),para
los distintos factores (fecha, clon, estaca y
sustrato) .....................................105
5.1- Longitud de raíces, de 3 fechas(F1-F2-F3),
interación Fecha x Estaca (F1-F2-F3 x
Ap-Sap) ......................................106
5.2- Longitud de raíces, de 3 fechas(F1-F2-F3),
interación Clon x Estaca (A-B-C x Ap-Sap) ....106
5.3- Longitud de raíces, de 3 fechas(F1-F2-F3),
interación Fecha x Clon (F1-F2-F3 x A-B-C) ...106
6- Longitud de raíces, de la tercer fecha (F3),
para los distintos factores (clon, estaca,
sustrato y hormona) ...........................105
131
Pág.
6.1- Longitud de raíces, de la tercer fecha (F3),
interación Sustrato x Hormona (Tl-Ta x
IBA-noIBA) ...................................107
7- Longitud de raíces, del clon A, para 2 fechas
(F2-F3), de los distintos factores (fecha,
estaca, sustrato y hormona) ...................105
8- Peso de raíces, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los
distintos factores (fecha, clon, estaca y
sustrato) .....................................108
9- Peso de raíces, de la tercer fecha (F3), para
los distintos factores (clon, estaca, sustrato
y hormona) ....................................108
9.1- Peso de raíces, de la tercer fecha (F3),
interación Sustrato x Hormona (Tl-Ta x
IBA-noIBA) ...................................109
10- Peso de raíces, del clon A, para 2 fechas
(F2-F3), de los distintos factores (fecha,
estaca, sustrato y hormona) ...................108
11- Peso de la parte aérea, de 3 fechas (F1-F2-F3),
para los distintos factores (fecha, clon,
estaca y sustrato) ............................110
11.1- Peso de la parte aérea, de 3 fechas (F1-F2-F3),
interación Fecha x Clon (F1-F2-F3 x A-B-C) ..111
132
Pág.
12- Peso de la parte aérea, de la tercer fecha (F3),
para los distintos factores (clon, estaca,
sustrato y hormona) ...........................110
13- Peso de la parte aérea, del clon A, para 2
fechas (F2-F3), de los distintos factores
(fecha, estaca, sustrato y hormona) ...........110
14- Relación Peso de raíces/Peso total, de 3 fechas
(F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha,
clon, estaca y sustrato) ......................112
15- Relación Peso de raíces/Peso total, de la tercer
fecha (F3), para los distintos factores (clon,
estaca, sustrato y hormona) ...................112
16- Relación Peso de raíces/Peso total, del clon A,
para 2 fechas (F2-F3), de los distintos
factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ..112
133
AGRADECIMIENTOS
- Al Ing. Agr. Manuel C. Marcavillaca, que cedió el
material inicial de propagación, que posibilitó la
realización de este trabajo de intensificación y me
permitió el acceso a su bibliografía personal.
- A la Ing. Agr. Marta Divo de Sesar, por dedicarme su
tiempo y conocimientos, por inculcarme orden y
prolijidad, tanto en el trabajo como en la escritura y
presentación de este trabajo de intensificación.
- A los Ing. Agr. Fernando Vilella, Pablo Pristupa y al
Técnico Agrícola Emilio Mirabelli, por los consejos y
aportes brindados durante este trabajo.
- A los responsables del Laboratorio de Semillas, por
brindarme las instalaciones y equipos del mismo.
134
A mis padres
135
PROPAGACION VEGETATIVA DE
STEVIA REBAUDIANA BERTONI
Trabajo de Intensificación para optar al título de
Ingeniero Agrónomo.
Alumno: DARÍO R. TAIARIOL
Tutor: Ing. Agr. FERNANDO VILELLA
Facultad de Agronomía. Universidad de Buenos Aires.
1995
136
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