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7/23/2019 Tincion Azul de Cresil Brillante

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Macedonio

coma

c

Lerdo # 30 CuajimalpaMxico, D.F 05000

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Insertos

Tinciones Hematolgicas

ANTES DE USAR:

a) Dejar madurar el colorante de Wright 15 das despus de suelaboracin.

TCNICA

1. Colocar el frotis perfectamente seco en la charola de tincin y cubrircon una capa gruesa de colorante (2 mL aproximadamente).

2. Teir durante 5 minutos.

3. Agregar solucin buffer hasta que se forme un menisco (+ 2.5 mL).

4. Soplar con una pipeta suavemente para mezclar las soluciones.

5. Teir durante 6 minutos.

6. Lavar con agua destilada evitando la precipitacin del colorante.

7. Secar al aire.

8. Cubrir con resina sinttica (Permount) y cubreobjetos del No. 1.

TINCIN DE WRIGHT

1 WRIGHT1 BUFFER

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TCNICA

1. Colocar, en un tubo de ensayo 2 gotas de sangre y 2 gotas de lasolucin colorante y mezclar.

2. Incubar a 37 C manteniendo tapado el tubo para evitar la evaporacin.

3. Realizar frotis de la mezcla a los 15 minutos, 1, 2, 3 y 4 horas deincubacin.

4. Secar al aire.


6. Hacer conteo de reticulocitos en 1000 clulas de cada frotis.

NOTA: Correr la prueba paralelamente con una sangre normal.

Reticulocitos en PORCENTAJE hacer la siguiente regla de tres

1000 clulas 100%

N de Reticulocitos Xcontados

= Reticulocitos en porcentaje

Reticulocitos ABSOLUTOS hacer la siguiente regla de tres

Valor total 100%de eritrocitos en BH

X Valor de reticulocitos

en porcentaje

TINCIN PARA RETICULOCITOS, HEMOGLOBINA HY HEMOGLOBINAS INESTABLES

1 SOLUCIN COLORANTE AZUL DE CRESILO BRILLANTE AL 1%

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= Reticulocitos absolutos

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Colocar en un tubo:

a) Metabisulfito de sodio 0.05grb) Agua destilada 2.5 mL

Preparar al momento de usarse

TCNICA

1. Colocar 1 gota de solucin de metabisulfito de sodio al 2% en unportaobjetos y una gota de sangre anticoagulada.

3. Mezclar con un aplicador.

4. Tomar una pequea porcin con la orilla de un cubreobjetos ycolocar ste cuidadosamente sobre un portaobjetos, evitando laformacin de burbujas.

5. Sellar las orillas del cubreobjetos con parafina fundida.

6. Observar al microscopio a los 15, 30, 60 minutos, 2 horas y 24 horas

INDUCCIN DE DREPANOCITOS

1 Solucin de metabisulfito de sodio al 2%

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Preparacin solucin C

Colocar en un vaso de precipitado:

- Solucin A (Ferrocianuro de potasio) 25 mL- Solucin B (HCl al 4%) 25 mL(Preparar la solucin al momento de usarse)

1. Fijar los frotis con vapores de formol por 5 minutos ( aproximadamente de 6a 8 gotas de Formol)

2. Vaciar la mezcla de incubacin solucin C precalentada a 56 C en unvaso de Copplin, inmediatamente colocar los frotis (previamente fijados) ytapar

3. Incubar por 30 minutos.

4. Lavar con agua de la llave.

5. Secar al aire.

6. Contrateir con solucin de rojo rpido nuclear por 5 minutos.


8. Secar al aire.

9. Cubrir en resina sinttica (Permount) y cubreobjetos del No. 1.

NOTA: La solucin C debe ser desechada en residuos txicos

TINCIN DE PERLS

1 SOLUCIN A (FERROCIANURO DE POTASIO AL 4%)1 SOLUCIN B (HCL AL 4%1 ROJO RAPIDO NUCLEAR1 FORMOL

(Conservacin de reactivos a temperatura ambiente en lugarfresco y seco)

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Conservacin:

Solucin fijadora a 4 C

Colorantes a temperatura ambiente en lugar fresco y seco.

TCNICA

1. Fijar los frotis durante dos minutos (utilizar solucion fijadora atemperatura ambiente).

2. Lavar con agua de la llave.3. Secar perfectamente al aire.4. Sumergir en la solucin colorante durante 30 segundos.5. Lavar con agua de la llave.6. Secar perfectamente al aire.

7. Contrateir por 30 segundos con solucin de safranina.8. Lavar con agua de la llave.9. Secar al aire.10. Cubrir con resina sinttica (Permount) y cubreobjetos del No. 1.

Precaucin: La solucin de tincin deber ser manejada con cuidado por contenermaterial cancergeno.

TINCIN DE MIELOPEROXIDASA

1 SOLUCIN FIJADORA1 SOLUCIN DE COLORANTE1 SOLUCIN DE SAFRANINA

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Conservacin a 4 C:

- Solucin fijadora- Solucin de cido perydico al 1%- Reactivo de shiff

- Hematoxilina de Gill a temperatura ambiente en un lugar fresco y seco.

TCNICA

1. Fijar los frotis por 5 minutos (utilizar la solucin fijadora a temperaturaambiente).


3. Secar al aire.4. Colocar en cido perydico durante 10 minutos (utilizar la solucin a

temperatura ambiente)

5. Lavar con agua de la llave y secar perfectamente.

6. Sumergir en el reactivo de Shiff por 20 minutos. (utilizar el reactivo atemperatura ambiente).


8. Contrateir con hematoxilina de Gill por 10 minutos.



TINCIN DE PAShiff

1 SOLUCIN FIJADORA1 SOLUCIN DE CIDO PERYDICO AL 1%1 REACTIVO DE SHIFF1 REACTIVO DE HEMATOXILINA DE GILL

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SOLUCIN DE INCUBACIN

Preparacin Nitrito de sodio 4% (Agregar al tubo 1)Nitrito de sodio 0.0300 gr

Agua Destilada 750 L

Tubo 1 Preparacin de Solucin de pararosanilina hexazotizada

Solucin de pararosanilina 750 L

Nitrito de sodio al 4% 750 L

(Preparar en cada ocasin)

Tubo 2 Preparacin de Solucin de -Naphthyl acetato

-Naphthyl acetato 25 mg

Etiln glicol monometil eter 1.25 mL(Preparar en cada ocasin)

Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivos:

a. Amortiguador de fosfatos 1/15 M, pH 7.6 22.5 mLb. Tubo 1: Solucin de pararosanilina hexazotizada 1.5 mLc. Tubo 2: Solucin de -Naphthyl acetato 1.25 mL

d. Agregar 4 gotas de NaOH 1N y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas)

TCNICA

1. Fijar los frotis con solucin fijadora a 4 C por 30 segundos.2. Lavar con agua de la llave.3. Secar a temperatura ambiente.4. Colocar los frotis en la mezcla de incubacin a 37 C por 45 minutos en la oscuridad.5. Lavar con agua de la llave.

6. Contrateir con verde de metilo al 1% durante 5 minutos.7. Lavar con agua de la llave.8. Secar a temperatura ambiente.9. Cubrir con resina sinttica (Permount) y cubreobjetos del No. 1.

ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA (ANAE)

1 Solucin fijadora (Mantener a 4 C)1 a-Naphthyl acetato (Mantener a 4 C)1 Etilen glicol monometil ter1 Nitrito de sodio1 Solucin de pararosanilina1 Amortiguador de fosfatos pH 7.61 Verde de Metilo al 1%1 Hidroxido de sodio NaOH

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SOLUCIN DE INCUBACIN 1

Preparacin Nitrito de sodio 4% (Agregar al tubo 1)

Nitrito de sodio 0.0300 grAgua Destilada 750 L

Tubo 1 Preparacin de Solucin de pararosanilina hexazotizada

Solucin de pararosanilina 750 L

Nitrito de sodio al 4% recin preparado 750 L

(Preparar en cada ocasin)

Tubo 2 Preparacin de Solucin de -Naphthyl acetato

-Naphthyl acetato 50 mg

Etiln glicol monometil ter 1.25 mL(Preparar en cada ocasin)

Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivosa. Amortiguador de fosfatos 1/15 M, pH 7.6 22.5 mLb. Tubo 1: Solucin de pararosanilina hexazotizada 1.5 mLc. Tubo 2: Solucin de -Naphthyl acetato 1.25 mL

d. Agregar 4 gotas de NaOH 1N y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas)

PASO 1

1. Fijar los frotis con solucin fijadora a 4 C por 30 segundos.2. Lavar con agua de la llave.3. Secar a temperatura ambiente.4. Colocar los frotis en la mezcla de incubacin a 37 C por 45 minutos en la

oscuridad.5. Lavar con agua de la llave.

6. Secar a termperatura ambiente

1 Solucin fijadora (Mantener a 4 C)1 a-Naphthyl acetato (Mantener a 4 C)1 Etilen glicol monometil ter1 Nitrito de sodio1 Solucin de pararosanilina1 Amortiguador de fosfatos pH 7.61 Hidroxido de sodio NaOH

1 Amortiguador de Fosfatos pH 7.41 NN. Dimetilformamida1 Naftol ASD (Mantener a 4 C)1 Fast Blue BBN (Mantener a 4 C)

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ESTERSAS DOBLES

SOLUCIN DE INCUBACIN 2

Tubo 3 (Colocar los reactivos en el siguiente orden y disolver perfectamente)

NN. Dimetilformamida 1.25 mLNaftol ASD 0.005 gFast Blue BBN 0.025 g

Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivos

a. Amortiguador de fosfatos 1/15M pH 7.4 23.5 mLb. Tubo 3 1.25 mLc. Mezclar y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas)

PASO 2

7. Introducir los frotis ya tratados con ANAE en la solucin de incubacin 2,e incubar por 25 minutos a 37 C en la oscuridad.

8. Enjuagar y dejar secar a temperatura ambiente.9. Cubrir con resina sinttica (Permount) y cubreobjetos del No. 1.

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La esencia del diagnstico

hematolgico se encuentra en ellaboratorio

COMAC MEXICO es una empresa mexicana dedicada a lafabricacin y distribucin de reactivos y material de

laboratorio clnico en todo el territorio nacional.

Fundada en el ao 2009 con la finalidad de suministrar

reactivos de la ms alta calidad que permitan llegar aldiagnstico hematolgico correcto.

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KENDALL

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Los asistentes al curso de Tinciones Hematolgicas podrn obtener nuestros

colorantes a un costo especial, les adjunto el costo que normalmente cuestan:

Precios de lista

Wright con Buffer 1000mL $700.00

Wrjgth con Buffer 500mL $440.00

Citoquimica para Mieloperoxidasa 100mL $1,000.00

Paschif 100mL $1,000.00

Perls 100mL $1,000.00

Azul de cresilo brillante 100ml $500.00

Esterasas (ANAE) 3 pruebas $700.00

Total $5,340.00

Precios mas el 16% de IVA


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Sabemos que un colorante debe ser de excelente calidad en el rea de hematologa para poder observar la morfologa deserie roja y serie blanca, y poder llegar a un diagnostico preciso, recordando la infinidad de patologas que podemosencontrar y algunas no poderlas diagnosticar por una mala tincin.En el laboratorio utilizamos el colorante de Wright de la familia de Romanosky, si su elaboracin se realiza con losmateriales adecuados como son el colorante de Wright en polvo, metanol y un buffer con pH especifico tendremos lacoloracin correcta en cada estructura.

Le ofrecemos a usted un costo especial para el laboratorio de consumos frecuentes de este colorante.

Cantidad Descripcin Catalogo Costo Unitario Total

1 Wright preparado 500mL CM500WR-C $440,00 $440,00Buffer 6.8 pH para Wright 500mL CM500WR-BF




Nota: Para respetar el costo especial, el consumo mnimo es de 2 L por mes.