TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus,

producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen

cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes,

temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por

cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y

libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando

una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de

las bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su

estudio y observacin son de enorme inters.

FUNDAMENTO

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores

ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el

microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.

La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:

1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.

2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y s

lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.

REALIZACIN

Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las

esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener unos resultados

satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.

1. Preparar los frotis bacterianos indicados.

2. Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la

llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min.

Nota: evitar que la muestra hierva. Aadir ms

colorante si ste se evapora; es importante que

la muestra no se seque.

3. Lavar con abundante agua el exceso de

colorante.

4. Teir con safranina 1 min.

5. Lavar con abundante agua el exceso de

colorante.

6. Secar la preparacin.

7. Observar la preparacin al microscopio.

Anotar la disposicin y la morfologa de las tres

especies del gnero Bacillus.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria

constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un mismo

gnero.

Las tres bacterias empleadas en esta prctica difieren en la disposicin y morfologa de las

endosporas. B. sphaericusposee una endospora esfrica con localizacin terminal y

deformante de la clula vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de

tambor". B. thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la clula

vegetativa, lo que provoca un abombamiento caracterstico denominado "en huso". B.

subtilis forma una espora cilndrica subterminal no deformante.

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