TRABAJO PRÁCTICO N° 2TRABAJO PRÁCTICO N° 2•MEDIOS DE CULTIVOMEDIOS DE CULTIVO• SIEMBRA Y TRANSPLANTESIEMBRA Y TRANSPLANTE
Lic.Soria Josè
MEDIOS DE CULTIVO.
• Definición: es toda preparación artificial, sólida, semisólida o líquida que suministra al microorganismo cada una de las sustancias fundamentales, una fuente de energía y condiciones ambientales adecuadas para el desarrollo y la supervivencia del microorganismo.
• CULTIVOS: son las poblaciones de microorganismos que se obtienen en los medios de cultivo.
• Los cultivos pueden ser:• a) puros o axénicos• b) mixtos
Existe gran diversidad de condiciones químicas y físicas en las cuales puede ocurrir el crecimiento
microbiano, pero siempre se requieren una fuente de energía y una fuente de carbono
Un solo tipo de microorganismo
Varios tipos de microorganismo
Clasificación de Microorganismo según su fuente de energía y fuente de carbono
Composición de los medios de cultivos
• 1. Elementos energéticos y constitutivosa) Macro elementosb) Micro elementos o trazasc) Factores de crecimiento
• 2. Agua
• 3. Agentes solidificantés:
1. Elementos energéticos y constitutivosa) Macro elementos
Fuente de Carbono
Fuente de nitrógeno
CO2 para autótrofos,
azúcares para heterotrofos
“Se necesita el carbono para la construcción de muchas moléculas necesarias para la célula”
“El nitrógeno es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de pared”
NO3-, NH3 ó N2. (autótrofos)
Aminoácidos y proteínas
1. Elementos energéticos y constitutivosa) Macro elementos
Azufre
calcio, magnesio y potasio
sodio
Producir aminoácidos (cisteína y metionina) y diferentes coenzimas
SO42-, tiosulfato o sulfuro
Fuente de: Se adiciona como: La célula lo utiliza para:
Fósforo Fosfatos de sódio o potasio
Funciona como BufferPara producción de ATP, fosfolipidos y Ac Nucleicos
sales inorgánicas Co factores de enzimas
Na ClEstabiliza la
presión osmótica
1. Elementos energéticos y constitutivosb) Micro elementos o trazas
Son metales que se requieren en muy pequeñas cantidades. Participan en la estructura de las enzimas, vitaminas, transportadores de electrones como citocromos. Son contaminantes de los macroelementos y se incorporan junto a ellos en los medios de cultivo.
Frecuentemente esenciales:
Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn
Inhibidores del crecimiento:
Au, Ag, Cd, Cr, Pb, y cualquier microelemento a concentración mayor que 10-4 M puede resultar tóxico para el desarrollo de los microorganismos.
1. Elementos energéticos y constitutivosb) Factores de Crecimiento
Son compuestos orgánicos específicos requeridos en muy bajas concentraciones y que no pueden ser sintetizados por la célula
Si la secuencia de producción enzimática, de un determinado componente.(Por ej: Histidina) esta interrumpida por alguna alteración, este componente no
podrá sintetizarse por la célula y se convertirá en un factor de crecimiento.
Ejemplos de factores de crecimiento : vitaminas, como las del complejo B algunos aminoácidos ,purinas y pirimidinas
2. Agua
•El agua representa el 80-90% del peso total de una célula
•Es fundamental para la realización de todos los procesos metabólicos
•Funciones enzimáticas, solvatación de materiales orgánicos e inorgánicos, y donación de electrones para organismos fotosintéticos
En los medios de cultivo se usa agua destilada,
libre de iones como Ca2+ y Mg2+
3. Agentes solidificantésCuando se agregan a un medio de cultivo permiten aislar colonias bacterianas. El mas utilizado es el Agar. Su uso es opcional
Placa de petri
Se adiciona el medio de cultivo con agar fundido
El agar se enfríay se solidifica
Permite aislarColonias bacterianas
El AgarEl Agar es un polisacárido ácido derivado de algas marinas, formado principalmente por galactosa con un grupo sulfato.
Se usa sin problemas en medios de cultivo porque las bacterias NO lo digieren.
Sus características:Sus características:
-Funde a 80-100°C y permanece líquido hasta 50-55°C.
- Permanece sólido a 37°C, temperatura de incubación de la mayoría de las bacterias patógenas del hombre.
-No es tóxico para las bacterias
-Utilizado al 1.5-2%, permite el aislamiento de colonias (poblaciones de microorganismos derivadas de una única célula), lo que resulta imposible en medios líquidos!!
- Es transparente, lo que facilita la visualización de las colonias.
Condiciones Físicas de un medio de cultivo
Temperatura
Presencia de oxígeno
a) aerobios estrictas: requieren oxígeno para crecer.
b) anaerobios obligados: el O2 les resulta tóxico.
c) anaerobios facultativos: pueden crecer tanto en condiciones aerobias como en condiciones anaerobias
d) microaerófilos: necesitan bajas tensiones de O2 y una atm enriquecida en CO2.
e) anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de O2 y si son expuestos al O2 no mueren.
mesófilos: 35-37°Cpsicrófilos: 15-20°Ctermófilos: 50-60°C
presión osmótica
Humedad:
luz:
pH:
la mayoría de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl
es importante para los microorganismos fotosintéticos
Los microorganismos necesitan un ambiente húmedo para su desarrollo
la mayoría de las bacterias crece en medio neutro o levemente alcalino
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVOCLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su origenPor su origen
químicamente definidos o sintéticos
naturales o complejos
Su composición química se conoce con exactitud, cada
componente es de alta pureza analítica y realiza un aporte específico ej: medios para
autotrofos
Se preparan a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
de composición química no rigurosamente constante: leche,
suero, macerado de maíz,etcEj: medios para quimioheterotrofos
Ej. Medio Definido para fototrofos:
CO2 ……………………….. (fuente de C)NaNO3 …………………… (fuente de N)Na2SO4 ……………………. (fuente de S y Na)KH2PO4 ……………………. (fuente de P y K)Trazas ……………………… variasH2O ………………………… (indispensable para toda función celular)
Conjunto de sales, Especificas Para un
determinado tipo de
microorganismo
Ej- agar nutritivo (para bacterias quimioorganotrofas)
Peptona de carne ………….. 0.5 gExtracto de carne ………….. 0.3 gNaCl ………………………… 0.5 gAgar ……………………… 1.5 – 2 gAgua destilada ……………. 100 ml
Aditivos que no tienen una Composición nutritiva definida
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVOCLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su ConsistenciaPor su Consistencia
Líquidos sólidos semisólidos o blandos
No contienen solidificante
y no permiten el aislamiento
de colonias
incluye agar al 0.3%
Incluyen agar en concentraciones
de 1.5 a 2%
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVOCLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su ComposiciónPor su Composición
Comunes Enriquecidos
incluyen una fórmula nutritiva básica que
permite el crecimiento de microorganismos
poco exigentes.
Tienen una alta calidad nutritiva por el agregado de componentes muy
ricos como leche, sangre, huevo, líquido, etc. Se utilizan en el cultivo de
bacterias exigentes
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVOCLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su función:Por su función:
Medios de enriquecimiento:
son medios líquidoslíquidos que favorecen
la multiplicación de un determinado microorganismo.
Medios selectivos Medios diferenciales
son medios sólidossólidos que favorecen
la multiplicación de un determinado microorganismo.
permiten discriminar entre diferentes tipos de bacterias
basándose en características metabólicas particulares
de cada uno.
PARTE B: SIEMBRAS Y REPIQUES
Siembra: se entiende por siembra al acto de transferir o colocar un microorganismo en un medio de cultivo adecuado. La transferencia se efectúa desde el hábitat natural (nicho ecológico) al medio de cultivo.
Medio de cultivoMuestras
Trasplante o repique: es la transferencia de gérmenes desde un medio de cultivo a otro.
¿Con qué se siembra?¿Con qué se siembra?
Ansas en anillo y un ansa recta
Siembra en placa con medio solido
Crecimiento deColonias bacterianas
Espátula de Drigalski
¿Con qué se siembra?¿Con qué se siembra?
Siembra
Crecimiento deColonias bacterianas
Micropipeta o Pipeta pasteur
Micropipeta Pipeta pasteur
Técnica aséptica para siembras y repiques
A- se esteriliza el ansa a la llama
B- se sostiene el ansa con el índice. Luego con el meñique .se destapa el tubo de muestra .
La "Técnica aséptica" Técnica aséptica" tiene un doble objetivo:
a) evitar que el operador se contamine con microorganismos procedentes de las muestras o cultivos y
b) evitar la contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos procedentes del ambiente o del propio operador
E- se flamea el tubo, paraEvitar su contaminación
F- se tapa con el dedo meñique
C. Se flamea la boca para evitar Contaminación
D- se sumerge el ansa para tomarUn inoculo del tubo
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