Protocolo
PROTOCOLO DE PROCEDIMIENTOS DE QUIMICA SANGUINEA DEL HOSPITAL LA MARIA
Área de Laboratorio Clínico
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Tabla de contenido
1. Introducción y alcance________________________________________________52. Objetivo_____________________________________________________________53. Roles y Responsabilidades___________________________________________54. QUIMICA SANGUINEA________________________________________________6
Equipo analizador: Cobas c311________________________________________________6
Especificaciones técnicas___________________________________________________6
Cobas Link_________________________________________________________________8
Muestras con y sin código de barras________________________________________10
Operación de rutina previa_________________________________________________12
Control de Calidad_________________________________________________________13
Solicitud de mediciones de CC_______________________________________________16
5. DETERMINACIONES DE QUIMICA SANGUINEA________________________16Ácido úrico________________________________________________________________16
Alanino Aminotransferasa (ALT/GPT)_______________________________________22
Aspartato Aminotransferasa (AST/GOT)_____________________________________26
Albúmina__________________________________________________________________28
Albúmina en Suero_________________________________________________________28
Albúmina en orina (microalbuminuria)_______________________________________32
Amilasa___________________________________________________________________36
Bilirrubina Directa_________________________________________________________41
Bilirrubina Total___________________________________________________________45
Calcio_____________________________________________________________________48
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Complemento C3__________________________________________________________52
2.10 Complemento C4_______________________________________________________55
2.11 Colesterol_____________________________________________________________58
2.12 Creatinina_____________________________________________________________62
2.13 Creatinkinasa (CK)_____________________________________________________68
CreatinKinasa Fracción MB__________________________________________________72
Dimero D__________________________________________________________________79
Factor Reumatoide__________________________________________________________83
Fosfatasa Alcalina__________________________________________________________86
Fósforo____________________________________________________________________90
Gamma Glutamiltransferasa (GGT)___________________________________________95
Glucosa___________________________________________________________________98
Hemoglobina Glicosilada____________________________________________________102
HDL Colesterol____________________________________________________________109
Hierro____________________________________________________________________114
Lactato___________________________________________________________________118
2.25 Lactato Deshidrogenasa (LDH)__________________________________________122
Lipasa____________________________________________________________________125
Magnesio_________________________________________________________________128
Prealbúmina______________________________________________________________133
Proteína C Reactiva (PCR)__________________________________________________136
Proteínas Totales en Suero y Plasma_________________________________________139
Proteínas Totales en Orina y LCR____________________________________________143
Triglicéridos_______________________________________________________________149
Otras Lipoproteínas (Perfil Lípidico)__________________________________________152
Urea/BUN_________________________________________________________________155
Osmorlaridad sérica________________________________________________________159
Química de Líquidos Estériles_________________________________________________160
Líquido Cefalorraquídeo LCR________________________________________________160
Glicemia__________________________________________________________________161
Cloruros__________________________________________________________________161
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Proteínas totales___________________________________________________________162
Lactato___________________________________________________________________162
Líquido Sinovial (Articular)__________________________________________________162
Glucosa__________________________________________________________________163
Ácido úrico________________________________________________________________163
Proteínas totales___________________________________________________________163
Líquidos de Cavidades Serosas_____________________________________________163
Gradiente de albúmina plasmática-albúmina de líquido ascítico (GASA)___________165
Glucosa__________________________________________________________________166
Amilasa___________________________________________________________________166
Triglicéridos_______________________________________________________________167
Panel Cardíaco (Troponina I, Mioglobina)_______________________________________167
Cobas b 121 (BEG). GASES ARTERIALES Y ELECTROLITOS____________________178
6. ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE________________________________1807. ANEXOS___________________________________________________________2048. REFERENCIAS_____________________________________________________2069. Historial de versiones_______________________________________________208
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1. Introducción y alcance
El laboratorio clínico E.S.E la María ha aumentado su participación en el apoyo al
diagnóstico, seguimiento y tratamiento de las enfermedades, las decisiones
clínicas basadas en los resultados de los exámenes de laboratorio se toman
adecuadamente cuando las condiciones bajo las cuales se ha recogido la sangre u
otras muestras, están adecuadamente identificadas y estandarizadas.
Aplica al personal de laboratorio encargado de la toma y procesamiento de
muestras del área de química sanguínea y de la gestión de la calidad para la
validación de sus resultados; aplicable a las muestras procedentes de los distintos
servicios hospitalarios, y de los usuarios que acceden al laboratorio por consulta
externa.
2. ObjetivoEstandarizar los procedimientos en el área de química clínica como herramienta
del sistema de gestión de calidad del laboratorio Clínico para unificar conceptos,
minimizar los riesgos asociados al proceso y entregar resultados confiables y
basados en la evidencia científica disponible.
3. Roles y Responsabilidades
Área: Rol:
Responsabilidades:
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4. QUIMICA SANGUINEA
Equipo analizador: Cobas c311
Especificaciones técnicas
El analizador cobas c 311 es un analizador automático controlado por software
para el análisis de química clínica. Está concebido para determinaciones in vitro
tanto cuantitativas como cualitativas usando una gran variedad de tests para
análisis. El analizador cobas c 311 lleva a cabo ensayos fotométricos y
mediciones por iónselectivo y utiliza suero/plasma, orina, LCR y sobrenadante
como tipos de muestra.
Sistema
Analizador completamente automatizado de
acceso aleatorio para Química clínica, Electrolítos
e inmunoensayos homogéneos (HIA)
Rendimiento de pruebas Hasta 300 pruebas por hora por técnica de
fotometría
Concepto de reactivos Reactivos cobas c con códigos de barras y listos
para usar
Capacidad de reactivos a
bordo
Hasta 45 ensayos (42 posiciones para cartucho
frio y 3 canales para ISE)
Parámetros
programables
Hasta 117 fotométricos, 3 pruebas ISE, 8
parámetros calculados y 3 índices séricos
Tipos de muestra Suero, plasma, orina, LCR y sangre total
Capacidad de muestras a
bordo
108 posiciones con acceso continuo y capacidad
de interrupción STAT
Tipos de contenedores Tubos primarios: 5-10 mL
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de muestra
Copas de muestra: 2.5 mL
Micro copa: 1.5 mL
Volumen de la muestra 1.0 a 35 µL en pasos de 0.1 µL
Detección de coágulos
en la muestra
Si
Base de datos de la
muestra
10.000 muestras de rutina/STAT
Métodos de prueba 1 punto + verificación de prozona, 2 puntos,
cinética de 2 puntos, 2 puntos + verificación de
prozona, 3 puntos, 1 punto + cinética A, Cinética A
+ índice sérico, cinética A con blanco, Cinética B
Métodos de calibración Lineal, no lineal de puntos múltiples, calibración de
2 puntos, factor K hasta 100 calibradores pre
programables, almacenamiento de hasta 180
curvas, calibración preventiva de los cartuchos en
stand-by
Métodos de control de
calidad
Tiempo real, control individual y acumulativo, auto
QC, hasta 100 diferentes controles pre
programables, control de calidad preventivo
después de la calibración de los cartuchos en
stand by
Nueva corrida/repetición/
confirmatoria
Nueva corrida automática/ nueva corrida manual,
se soporta repetición y confirmatoria (espejo)
automática
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Exactitud/Precisión de los resultados medidos
Un resultado incorrecto puede ser motivo de un error de diagnóstico,
representando en consecuencia un riesgo para el paciente.
Para asegurar el uso debido del instrumento, mida muestras de control y
monitoree el instrumento durante la operación.
No utilice reactivos, calibradores o controles que hayan caducado. Tenga
en cuenta las condiciones de almacenamiento especificadas. De lo
contrario, pueden obtenerse resultados inexactos.
Para tareas de diagnóstico, los resultados siempre se deben evaluar junto
con el historial del paciente, el examen médico y otros datos.
Áreas y componentes del analizador
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Cobas Link
Plataforma cobas link La plataforma cobas link es la puerta de enlace para
recuperar y distribuir información (por ejemplo, instrucciones de uso, hojas de
valores, notas importantes, y configuraciones del analizador específicas para tests
y lotes) desde la red Roche
Tele Service-Net hasta los analizadores cobas en el laboratorio. Cobas link es una
parte integral y obligatoria de los analizadores de plataforma modular de cobas.
Tele Service-Net (TSN) TeleService-Net es la infraestructura técnica que ofrece a
los analizadores cobas y a los operadores información importante sobre los
productos de Roche.
Tele Service-Net ofrece varias aplicaciones con las que es posible administrar y
visualizar datos e información de instrumentos conectados remotamente.
Estación de datos cobas link La estación de datos cobas link es un ordenador de
escritorio exclusivo con teclado, ratón, monitor e impresora.
Biblioteca electrónica de cobas La biblioteca electrónica de cobas (e-library) es la
interfaz de usuario para trabajar con cobas link en la estación de datos cobas link.
La aplicación principal de cobas link para el operador es la biblioteca electrónica
de cobas, que consta de boletines técnicos (insertos de reactivo) electrónicos y
códigos de barras electrónicos. Esta aplicación se utiliza para buscar, revisar e
imprimir los boletines técnicos (insertos de reactivo) en formato electrónico.
Hay disponible un manual del operador independiente de la biblioteca electrónica
de cobas.
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Utilizar los códigos de barras electrónicos a través de la descarga
El operador puede descargar los códigos de barras electrónicos que necesite
desde la estación de datos de cobas link hasta el analizador.
Hay disponibles los siguientes tipos de códigos de barras electrónicos:
Datos de aplicaciones
Datos de calibradores
Datos de controles
Si los datos de una aplicación concreta (parámetros de la aplicación, datos de
calibradores y datos de controles) no están disponibles en el analizador, esta
información se debe descargar desde cobas link.
Para iniciar la biblioteca electrónica
1 Inicie una sesión en la estación de datos de cobas link con el nombre de usuario
y la clave correspondientes de la biblioteca electrónica.
La clave correspondiente es RemoteRemos, y la Contraseña someRetomeR
2 Confirme con OK.
Aparecerá la pantalla de inicio de la biblioteca electrónica (Nuevas entradas).
Para obtener la información completa del uso de la aplicación Cobas Link
consultar en el Manual del Operador, disponible en el computador del área de
Química Clínica.
Muestras con y sin código de barras
Identificación de las muestras Cuando el sistema se utiliza en el modo de código
de barras, las etiquetas de cada muestra son leídas con el lector de códigos de
barras del disco de muestras. La etiqueta de código de barras de la muestra
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contiene el ID de muestra que se utiliza para identificar la muestra y con fines de
selección de tests.
El número de ID de muestra permite que el sistema realice un seguimiento de las
muestras. Para realizar el seguimiento de las muestras con el software, seleccione
Seguimiento Muestras en la pantalla Panorámica del Sistema.
Cuando se trabaja con muestras con código de barras, en el software sólo se
deben definir posiciones de urgencia.
Cuando se trabaja con ID de pacientes, se deben asignar posiciones al software
para muestras de rutina y urgentes para todos los tipos de muestras.
Modo sin código de barras Si el sistema se utiliza en el modo sin código de barras,
las muestras se identifican mediante un número de secuencia y su posición en el
disco de muestras. Esta asignación debe realizarse en la pantalla Trabajo >Sel.
Tests.
Cuando se trabaja con muestras sin código de barras, se debe definir la posición
de cada categoría de muestra (controles, calibradores y posiciones de urgencia)
en el software.
Compartimento de reactivos
Los reactivos para las aplicaciones fotométricas se almacenan en un
compartimento cerrado a temperatura controlada (5-15C) que contiene dos
anillos concéntricos con un total de 42 posiciones para los cobas c pack. Hay 14
posiciones en el anillo interior y 28 posiciones en el anillo exterior.
Para evitar la evaporación de los reactivos, este compartimento cuenta con una
tapa.
Gracias a su diseño, esta tapa no se puede abrir ni quitar. Los cobas c pack se
introducen y se extraen del compartimento mediante un tipo de puerta (con acceso
controlado por el software).
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Sistema de gestión de reactivos
Los reactivos para todas las aplicaciones de Roche se suministran en cobas c
packs. Estos casetes contienen de una a tres botellas de reactivos especialmente
diseñados y disponen de etiquetas con código de barras con información detallada
sobre el reactivo y el test.
El sistema de gestión de reactivos consta de los siguientes componentes:
Disco de reactivos (dentro del compartimento de reactivos)
Estación de carga de reactivos
Lector de códigos de barras
Perforador
Estación de carga de reactivos
Utilice la estación de carga de reactivos para cargar y descargar los cobas c
packs.
Ambos procesos se deben iniciar mediante el software
Tras hacer clic en el botón Cargar, el analizador gira el disco de reactivos hasta
una posición libre. La estación de carga de reactivos está diseñada de forma que
un pack cobas c se puede cargar en sólo una posición del disco de reactivos. Así
se descarta la posibilidad de colocar un casete en una posición incorrecta del
disco de reactivos o de utilizar reactivos inadecuados.
Operación de rutina previa
Antes de iniciar la operación de rutina debe preparar primero el sistema para
operación. La operación de rutina previa comprende las siguientes tareas:
Realizar intervenciones de mantenimiento
Borrar los datos y hacer una copia de seguridad de los mismos, si es
necesario
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Preparar los reactivos, detergentes y diluyentes
Realizar una calibración (De ser necesaria)
Medir los controles de calidad
Descargar parámetros, si es necesario
El área Flujo Trabajo en la parte superior de la pantalla Panorámica del Sistema
guía al operador a través de la operación de rutina previa.
Botón Mantenimiento DiarioEl botón Mantenimiento Diario indica cuándo están a punto de caducar los
intervalos de mantenimiento.
Al seleccionar Mantenimiento Diario en el área Flujo Trabajo aparece la pantalla
Mantenimiento. Utilice la pantalla Mantenimiento para ejecutar intervenciones de
mantenimiento.
Se deben Realizar también mantenimientos semanales y mensuales, que se
indican claramente en el manual del operador disponible en el computador de la
sección de química sanguínea.
Control de Calidad
Efectúe con regularidad mediciones de CC para monitorear constantemente el
rendimiento del equipo. Tras la medición de muestras de CC, los resultados se
pueden transferir a un Host o validar en el Host o se pueden validar en el
analizador.
Los siguientes métodos de CC están disponibles en un analizador cobas c 311:
CCdiario (intradía), CC acumulado (largo plazo) y CC en tiempo real.
CC diario y acumulado Todos los resultados de las mediciones de CC se pueden
ver en la pantalla CC >Estado serie y en la pantalla CC >Diario. Se recomienda
transferir los datos CC al final del día desde CC diario a CC acumulado. En el CC
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acumulado se encuentra toda la información sobre control de calidad a largo plazo
almacenada en el analizador.
CC Tiempo Real Con independencia del CC diario y acumulado, la función CC en
tiempo real permite la evaluación de la medición del CC inmediatamente después
de que los resultados estén disponibles (tiempo real) utilizando el algoritmo
Westgard.
El CC en tiempo real correspondiente a un test siempre utiliza dos clases de
controles y compara los resultados del CC con los valores de la media y la
desviación estándar (DS) conocidos de los controles.
CC Rutina Cada test tiene uno o varios controles asignados. Además, no sólo se
debe asignar un test a un control, sino que también se debe activar para ese
control con el fin de posibilitar la medición de CC. El CC Rutina comprende todos
los tests activados de todos los controles instalados. Se puede solicitar una
medición de CC de todos estos tests (por ejemplo, al inicio de un turno de trabajo)
con un único comando (Panorámica del Sistema >Selección Calibración y CC >CC Rutina).
CC Reactivo en Standby Es posible solicitar mediciones de CC individuales para
cobas c packs en modo Standby. Los cobas c packs en Standby son los packs ya
cargados en el equipo, pero que no están en uso actualmente.
CC tras calibración Para esta clase de mediciones de CC, no se precisa ninguna
configuración especial.
Las mediciones de CC se llevan a cabo para todos los tests calibrados sin
peticiones explícitas del operador, cuando el control se ha activado y está
cargado.
CC Manual Esta función permite medir los CC de cualquier test según su propio
criterio.
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Al finalizar la operación diaria, los resultados de medición del CC se deben
acumular.
Al acumular resultados de CC, los datos correspondientes a los
resultadosacumulados se borran de la pantalla CC >Diario y se transfieren a la
pantalla CC >Acumulado.
Asignar CC Rutina El botón Asignar CC Rutina selecciona todos los tests de CC
Rutina (sólo reactivos activos) para una medición de control. Los tests de CC de
rutina comprenden todos los tests activados de todos los controles instalados.
Los tests que no se van a medir se pueden deseleccionar en la pantalla
Estado: seleccione los tests en la lista de estado y, a continuación, pulse el botón
Deselecc
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CC Rutina Para mostrar una lista de todos los tests de CC de rutina actualmente
activados,
Seleccione CC Rutina.
CC Botella Stand By Utilice este botón para seleccionar cobas c packs para CC
en stand by.
Solicitud de mediciones de CC
Es posible solicitar mediciones de CC individuales para cobas c packs activos y
en Standby cobas c packs activos actualmente en uso. Los cobas c packs en
Standby son los packs ya cargados en el equipo, pero que no están en uso
actualmente.
Para ejecutar controles de reactivos activos1. Seleccione CC >Estado.
2. Si se va a realizar CC de rutina, seleccione CC Rutina para seleccionar todos
los tests actualmente cargados y activados en el analizador para un CC. Si desea
seleccionar tests individuales, vaya al paso 3.
3 Seleccione el test y control apropiados. Puede marcar varios tests y controles.
4 Pulse Selecc. En la columna Selección aparece una barra de color verde. En la
columna Causa aparece Manual. El botón Selecc. Se convierte en Deselecc.
5 Seleccione Guardar para solicitar la medición de los controles seleccionados.
.
Para ejecutar controles de reactivos en Standby1 En CC >Estado, seleccione CC Botella Stand By para abrir la ventana CCBotella Stand By.
Elija Selecc. Para seleccionar todos los tests y controles resaltados. En la
columna
Selección aparece una barra de color verde. El botón Selecc. Se convierte en
Deselecc.
4 Seleccione OK para solicitar la medición de los controles seleccionados.
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5. DETERMINACIONES DE QUIMICA SANGUINEA
Ácido úricoCaracterísticasEl ácido úrico es el producto final del metabolismo de la purina en el organismo
humano. El ácido úrico se determina en el diagnóstico y el tratamiento de
numerosos trastornos renales y metabólicos, tales como la insuficiencia renal, la
gota, la leucemia, la psoriasis, la inanición y otros trastornos nutricionales, así
como en pacientes bajo tratamiento con citostáticos.
Existen dos procedimientos para la determinación cuantitativa del metabolito de la
purina que se basan en la oxidación del ácido úrico. Uno de ellos consiste en la
reducción, en solución alcalina, de ácido fosfotúngstico a azul de tungsteno que es
medido fotométricamente. Sin embargo, este método está sujeto a interferencias
debidas a fármacos y a otras sustancias reductoras, no sólo al ácido úrico.
El otro procedimiento, descrito por Praetorius y Poulsen, emplea la enzima uricasa
para oxidar el ácido úrico, eliminando así las interferencias intrínsecas del proceso
químico de oxidación. La uricasa puede emplearse en métodos que determinan el
consumo del ácido úrico por mediciones UV o, en combinación con otras enzimas,
en un test colorimétrico.
Otro método colorimétrico ha sido desarrollado por Town et al. La muestra se
incuba con un reactivo que contiene ascorbato-oxidasa y un sistema de
aclaramiento. En una reacción preliminar, el ácido ascórbico presente en la
muestra es eliminado para que no interfiera en la reacción indicadora de POD.
Una vez que se añade el reactivo iniciador, la uricasa comienza a oxidar el ácido
úrico.
El presente test de Roche consiste en el método colorimétrico descrito más arriba
con ligeras modificaciones. En esta reacción, el peróxido reacciona en presencia
de la peroxidasa (POD),
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N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina (TOOS) y la 4-aminofenazona para
formar un colorante quinona-diimina. La intensidad cromática del colorante rojo
formado es proporcional a la concentración del ácido úrico y se mide
fotométricamente.
Principio del testTest enzimático colorimétrico.
El ácido úrico es desdoblado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno.
La intensidad cromática de la quinona-diimina formada es directamente
proporcional a la concentración del ácido úrico y es determinada midiendo el
aumento de la absorbancia.
a) N-etill-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina
Medidas de precaución y advertencias
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.
Los valores de muestras de plasma tratado con EDTA son inferiores a los valores
obtenidos en suero en aproximadamente un 7 %.
Orina: Determinar el ácido úrico en orina lo antes posible. No refrigerar.
Para prevenir la precipitación de ureato en muestras de orina, añadir hidróxido de
sodio para mantener la orina en estado alcalino (pH > 8.0).
Para obtener la estabilidad de ácido úrico indicada, añadir NaOH antes de recoger
la muestra. Las muestras de orina se diluyen de 1 + 10 con agua destilada o
desionizada o con una solución de NaCl al 0.9 %. La dilución se toma en cuenta al
calcular los resultados.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar elensayo.
Estabilidad en suero/plasma: 15 5 días a 2-8 °C
6 meses a (-15) -(-25) °C
Estabilidad en orina16 (tras adición de NaOH): 4 días a 15-25 °C
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Calibración
Calibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a DI/EM.17
Factores de conversión: mg/dL x 59.5 = μmol/L mg/dL x 10 = mg/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración del
ácido úrico de 7 mg/dL (417 μmol/L).
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 40 para la bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 684 μmol/L o 40 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aproximadamente 621 μmol/L o 1000 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 1500. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
El ácido ascórbico < 0.17 mmol/L (< 3 mg/dL) no interfiere en el test.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: El dobesilato de calcio
provoca valores artificialmente bajos de ácido úrico.
La uricasa reacciona de forma específica con el ácido úrico. Otros derivados de la
purina pueden inhibir la reacción de ácido úrico.
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En concentraciones terapéuticas, Dicynone (etamsilato) puede provocar valores
falsamente bajos.
Las intoxicaciones por paracetamol suelen tratarse con N-acetilcisteína.
Tanto la N-acetilcisteína, usada en concentraciones terapéuticas como antídoto,
como el metabolito de paracetamol, la N-acetil-p-benzoquinona imina (NAPQI),
pueden causar valores falsamente bajos.
La venopunción debe efectuarse antes de administrar metamizol. Si la
venopunción se realiza inmediatamente después o durante la administración de
metamizol, pueden obtenerse resultados falsamente bajos.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
OrinaFármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.20 Excepciones: El dobesilato de calcio,
la levodopa y la metildopa pueden provocar valores artificialmente bajos de ácido
úrico.
En muestras de orina, altas concentraciones de ácido homogentísico provocan
resultados falsos.
En concentraciones terapéuticas, Dicynone (etamsilato) puede provocar valores
falsamente bajos.
Debido a que el acetaminofén, la acetilcisteína y el metamizol se metabolizan
rápidamente, no es probable que interfieran en el test (aunque no se puede
excluir).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición
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Suero/plasma
0.2-25.0 mg/dL (11.9-1487 μmol/L)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los
resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se
multiplican automáticamente por el factor 2.5.
Orina
2.2-275 mg/dL (131-16362 μmol/L)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los
resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se
multiplican automáticamente por el factor 2.5.
Valores teóricosSuero/plasma
Hombres: 3.4-7.0 mg/dL (202.3-416.5 μmol/L)
Mujeres: 2.4-5.7 mg/dL (142.8-339.2 μmol/L)
Orina (intervalo de referencia según Krieg y Colombo)
1ª orina de la mañana 37-92 mg/dL (2200-5475 μmol/L)
Orina de 24 horas 200-1000 mg/día (1200-5900 μmol/día) correspondiente a
13-67 mg/dL (773-3986 μmol/L) (partiendo de un volumen de orina de 1.5 L/24 h)
Orina (intervalo de referencia según Tietz)
Dieta normal 250-750 mg/24 horas
Nutrición baja en purinas
Mujeres < 400 mg/24 horas
Hombres < 480 mg/24 horas
Nutrición alta en
Purinas < 1000 mg/24 horas
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Alanino Aminotransferasa (ALT/GPT)
Generalidades
La presencia de la enzima alanina aminotransferasa (ALT) se registra en tejidos
de varios tipos. La ALT se encuentra especialmente en el hígado, razón por la cual
su actividad se determina en el diagnóstico de hepatopatías. Concentraciones
séricas elevadas de ALT acompañan la hepatitis, la cirrosis, la ictericia obstructiva,
el hepatocarcinoma y el alcoholismo. Concentraciones levemente elevadas de
ALT se determinan en pacientes que han sufrido un infarto de miocardio sin
complicaciones.
Si bien tanto la aspartato aminotransferasa sérica (AST) como la ALT aumentan
en procesos patológicos que afectan la integridad de los hepatocitos, la ALT es de
ambas la enzima más específica del hígado.
Además, un aumento en la actividad de la ALT es más persistente que un
aumento en la actividad de la AST.
En pacientes con deficiencia de vitamina B6, la actividad sérica de la
aminotransferasa puede disminuir. Una reducción aparente de la actividad de la
aminotransferasa puede estar relacionada con valores disminuidos de fosfato de
piridoxal, el grupo prostético de las aminotransferasas, obteniendo así un aumento
de la relación apoenzima-holoenzima.
Principio del testEl presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien su
estabilidad y funcionamiento han sido mejorados. La ALT cataliza la reacción entre
la L-alanina y el 2-oxoglutarato. El piruvato formado es reducido por NADH en una
reacción catalizada por la lactato deshidrogenasa (LDH) para formar L-lactato y
NAD+.
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
– Suero (sin hemólisis).
– Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.
Separar el suero o el plasma inmediatamente del coágulo o de las células.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 3 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
> 7 días a (-60) - (-80) °C6
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones
Calibración a dos puntos
- con cada lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula original de
la IFCC pero sin activación por PYP, utilizando pipetas calibradas con un
fotómetro manual que proporciona valores absolutos y la absorptividad específica
del substrato.
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Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de ALT
de 30 U/L (0.5 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 par bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 90 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 56 μmol/L o 90 mg/dL).
La contaminación con eritrocitos provoca resultados aumentados, ya que el nivel
de analito en los eritrocitos es mayor que en los sueros normales. La magnitud de
la interferencia depende del contenido de analito en los eritrocitos lisados.
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 150. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Las muestras lipémicas pueden causar alarmas debido a valores de absorbancia
elevados (> Abs). Seleccionar el tratamiento de muestra diluida para el
reprocesamiento automático.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: En concentraciones
fisiológicas, la sulfasalazina y la sulfapiridina plasmáticas pueden llevar a
resultados falsos.
En concentraciones terapéuticas, el dobesilato de calcio y la isoniazida provocan
valores artificialmente bajos y la furosemida valores artificialmente altos de la ALT.
El fármaco Cyanokit (hidroxocobalamina) puede causar interferencias con los
resultados.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
25
|
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición5-700 U/L (0.08-11.7 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
La dilución de las muestras por la función de repetición es de 1:10. Los resultados
de las muestras diluidas por la función de repetición se multiplican
automáticamente por el factor 10.
Valores teóricosDe acuerdo al método estándar optimizado (comparable con el método IFCC sin
activación por fosfato de piridoxal13):
Hombres hasta 41 U/L (hasta 0.68 μkat/L)
Mujeres hasta 33 U/L (hasta 0.55 μkat/L)
Valores calculados: Para convertir de 25 °C a 37 °C, se empleó el factor
1.85.
Aspartato Aminotransferasa (AST/GOT)GeneralidadesLa enzima aspartato-aminotransferasa (AST) se encuentra ampliamente
distribuida en los tejidos del organismo, principalmente en el tejido hepático,
cardíaco, muscular y renal. Los niveles séricos de la enzima aumentan en caso de
enfermedades que afectan estos tejidos. Asimismo las afecciones hepatobiliares
tales como la cirrosis, el carcinoma metastásico y la hepatitis viral producen
niveles séricos elevados de AST. Como consecuencia de un infarto de miocardio,
la AST sérica se encuentra aumentada y alcanza su valor máximo 2 días después
de ocurrido.
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|
Los valores séricos de AST pueden estar disminuidos en pacientes en diálisis
renal o con una deficiencia de la vitamina B6. La reducción aparente de la AST
puede estar relacionada con la disminución del nivel de fosfato de piridoxal, el
grupo prostético de AST, que trae como consecuencia un incremento en la
relación entre la apoenzima y la holoenzima.
Se han aislado 2 isoenzimas de la AST, la citoplasmática y la mitocondrial.
En el suero normal sólo se halla la isoenzima citoplasmática, mientras que en el
suero de pacientes con enfermedades coronarias y hepatobiliares, pueden
detectarse tanto la citoplasmática como la mitocondrial.
Principio de testEl presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien su
estabilidad y funcionamiento han sido mejorados.La AST de la muestra cataliza la
transferencia de un grupo amino entre L-aspartato y 2-oxoglutarato para obtener
oxaloacetato y L-glutamato.
A continuación y en presencia de la malato deshidrogenasa (MDH), el
oxaloacetato reacciona con NADH para formar NAD+.
La velocidad de oxidación de NADH es directamente proporcional a la actividad
catalítica de la AST. Se determina midiendo la reducción de la absorbancia.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
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|
Estabilidad: 24 horas a 15-25 °C5
7 días a 2-8 °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibración calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula original de
la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona
valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Límites e intervalosIntervalo de medición5-700 U/L (0.08-11.7 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición
del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del ciclo es de
1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del
ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.
Valores teóricosDe acuerdo al método estándar optimizado (comparable con el método IFCC sin
activación por fosfato de piridoxal):
Hombres: hasta 40 U/L (hasta 0.67 μkat/L)
Mujeres: hasta 32 U/L (hasta 0.53 μkat/L)
Valores calculados: Se ha empleado el factor 2.13 para la conversión de 25 °C a
37 °C.
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Albúmina
Albúmina en Suero
La albúmina es una proteína carente de carbohidratos que constituye
aproximadamente el 55-65 % de la totalidad de las proteínas plasmáticas. Sirve
para mantener la presión oncótica en el plasma, está involucrada en el transporte
y almacenamiento de numerosos ligandos y constituye una fuente endógena de
aminoácidos. La albúmina fija y desdobla varios compuestos, como la bilirrubina,
el calcio y ácidos grasos de cadena larga. La albúmina se une asimismo a iones
tóxicos de metales pesados y a múltiples fármacos, razón por la cual la
disminución de la albúmina en sangre puede tener importantes consecuencias
farmacocinéticas.
Excepto en caso de deshidratación, la hiperalbuminemia no reviste gran
importancia diagnóstica. La hipoalbuminemia que acompaña numerosas
enfermedades y se debe a diversos factores: a una síntesis reducida como
consecuencia de una hepatopatía o por absorción disminuida de proteínas, aun
aumento en el catabolismo originado por una lesión tisular (quemaduras graves) o
una inflamación, a la malabsorción de aminoácidos (enfermedad de Crohn), a la
proteinuria debida a un síndrome nefrótico o a la pérdida de proteínas a través de
las heces (por neoplasia). En casos graves de hipoalbuminemia, la concentración
plasmática de la albúmina máxima alcanza 2,5 g/dL (380 μmol/L). Debido a la baja
presión osmótica en el plasma, el líquido pasa de los capilares sanguíneos al
tejido (edema). La determinación de la albúmina permite supervisar a pacientes
bajo dieta controlada y constituye un test excelente del funcionamiento hepático.
Principio del testTest colorimétrico.
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Con un pH de 4,1 la albúmina tiene un carácter suficientemente catiónico como
para formar un compuesto con el verde de bromocresol (BCG), colorante aniónico,
formando un complejo azul verdoso.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
No emplear plasma con fluoruro.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 2-5 meses a 15-25 °C
5 meses a 2-8 °C
4 meses a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2OS2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibraciones calibración a 2 puntos
- en el analizador, tras 4 semanas
- tras cambiar de lote de reactivos
- y según lo requiera el control de calidad
Factores de conversión:
g/L x 15,2 = μmol/L
μmol/L x 0,0658 = g/L
g/L x 0, 1 = g/dL
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Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de albúmina de 35 g/L (532 μmol/L).Ictericia: Sin interferencias
significativas hasta un índice I de 60 (concentración de la bilirrubina conjugada y
no conjugada: aprox. 1.026 μmol/L ó 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1.000
(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1.000 mg/dL).
Lipemia: Sin interferencia significativa hasta un índice L de 550. No existe una
concordancia satisfactoria entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la
concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
En pacientes con insuficiencia renal, los métodos colorimétricos empleados para la
determinación de albúmina pueden llevar a resultados de test falsamente elevados
debido a interferencias con otras proteínas. Los métodos inmunoturbidimétricos
son menos afectados.
Límites e intervalos
Intervalo de medición2-60 g/L (30,4-912 μmol/L, 0,2-6 g/dL) Determinar las muestras con
concentraciones superiores a través de la función de repetición del ciclo. La
dilución automática de las muestras por la función de repetición del ciclo es de 1:5.
Los resultados de las muestras diluidas por la función de repetición del ciclo se
multiplican automáticamente por el factor 5.
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Límites inferiores de mediciónLímite inferior de detección del test 2 g/L (30,4 μmol/L, 0,2 g/dL)
Valores teóricosEstudio del intervalo de referencia
Adultos 3,97-4,94 g/dL 39,7-49,4 g/L 603-751 μmol/L
Valores de consenso:
Adultos 3,5-5,2 g/dL 35-52 g/L 532-790 μmol/L
Intervalos de referencia según Tietz11
Neonatos 0-4 días 2,8-4,4 g/dL 28-44 g/L 426-669 μmol/L
Niños 4 días-14 años 3,8-5,4 g/dL 38-54 g/L 578-821 μmol/L
14-18 años 3,2-4,5 g/dL 32-45 g/L 486-684 μmol/L
Albúmina en orina (microalbuminuria)
La albúmina es una proteína no glicosilada de un peso molecular de 66000
daltons. Su síntesis, que tiene lugar en las células del parénquima hepático,
alcanza 14 g por día. Desde el punto de vista cuantitativo, constituye el
componente proteico más importante (> 50 %) del plasma, el líquido
cefalorraquídeo y la orina. La excreción baja pero anormal de albúmina es
denominada microalbuminuria. Según sus causas se distingue en glomerular (p.ej.
microangiopatía diabética, hipertensión, lesión glomerular mínima), tubular
(resorción inhibida) o posrenal. La albúmina sirve también como proteína
marcadora de diferentes formas de proteinuria. En la proteinuria glomerular
selectiva se excretan a la orina entre 100 y 3000 mg de albúmina por g de
creatinina. Una proteinuria glomerular no selectiva se caracteriza por la excreción
elevada de proteínas con un peso molecular más alto (IgG superior al 10 % de la
albúmina). La proteinuria prerrenal se reconoce por la discrepancia entre la
albúmina y las proteínas totales (albúmina inferior al 30 % con aumento
simultáneo de las proteínas totales). Un aumento simultáneo de los niveles de
32
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albúmina y microproteínas se registra en las proteinurias glomérulo-tubulares que
aparecen por sobrecarga de la resorción tubular en glomerulopatías (p. ej.
síndrome nefrótico), en nefropatías glomerulares túbulo-intersticiales combinadas
o en insuficiencia renal debida a nefropatía diabética u otras causas (proteinuria
por rebosamiento). En el plasma, la albúmina tiene dos funciones principales:
mantener la presión oncótica (80 % debida a la albúmina plasmática) y el
transporte. Es la proteína transportadora de mayor importancia para sustancias
poco hidrosolubles como ácidos grasos libres, bilirrubina, iones metálicos,
hormonas y fármacos.
La concentración de albúmina está disminuida en caso de hiperhidratación,
insuficiencia de síntesis hepatocelular, trastornos de la secreción al espacio
intravascular, trastornos en la distribución entre el espacio intra y extravascular,
catabolismo y pérdida de albúmina, en la reacción de fase aguda y analbuminemia
congénita.
Los trastornos de la barrera hematoencefálica pueden cuantificarse eficazmente
mediante el cociente de albúmina en LCR/suero. Cocientes elevados de albúmina
indican un trastorno de la barrera hematoencefálica.
Si se determinan simultáneamente la IgG en LCR y suero, tomando en cuenta los
cocientes individuales de albúmina, se puede diferenciar entre la IgG sanguínea y
la sintetizada por el SNC. En casos de esclerosis múltiple, encefalitis crónica por el
VIH, neurosífilis y la encefalitis por herpes simple, predomina la existencia de IgG.
Para determinar la albúmina se dispone de varios métodos tales como la
inmunodifusión radial, la nefelometría y la turbidimetría.
Principio de testPrueba inmunoturbidimétrica.
Los anticuerpos anti-albúmina reaccionan con el antígeno de la muestra formando
un complejo antígeno-anticuerpo que se mide turbidimétricamente después de la
aglutinación.
Calibradores S1: H2O
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S2-6: C.f.a.s. PUC
Modo de calibración: RCM
Frecuencia de calibraciones
Calibración completa
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Orina
Suero
Plasma tratado con heparina de litio o EDTA bipotásico.
LCR
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
LCR
Estabilidad: hasta 3 días a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C indefinidamente a (-60)-(-80) °C
Suero, plasma
Estabilidad: 10 semanas a 15-25 °C
5 meses a 2-8 °C
4 meses a (-15)-(-25) °C
Orina
Orina espontánea, de 24 horas o la segunda orina de la mañana.
Estabilidad: 147 días a 15-25 °C
1 mes a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C
Limitaciones del análisis - interferenciasOrina
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Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
albúmina de 20 mg/L (0.30 μmol/L; 2 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de bilirrubina
conjugada de 855 μmol/L (50 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina de 248 μmol/L (400 mg/dL).
No se registraron interferencias por acetona ≤ 60 mmol/L, cloruro amónico≤ 0.11
mol/L, calcio ≤ 40 mmol/L, creatinina ≤ 0.18 mol/L, γ-globulina ≤ 500 mg/L, glucosa
≤ 0.19 mol/L, urea ≤ 0.8 mol/L, ácido úrico≤ 5.95 mmol/L ni con urobilinógeno≤ 378
μmol/L.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Efecto prozona (high-dosehook): Aplicando la verificación cinética, no se
produjeron resultados falsos sin aviso con concentraciones de albúmina hasta
40000 mg/L (608 μmol/L, 4000 mg/dL).
Suero/plasmaCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
albúmina de 35 g/L (532 μmol/L; 3500 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración
aproximada de bilirrubina conjugada y no conjugada: aprox. 1026 μmol/L ó 60
mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración aproximada de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1000 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):18 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1500. La
correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la concentración de
triglicéridos no es concluyente.
Los factores reumatoides ≤ 1200 UI/mL no interfieren en el test.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
extendido en concentraciones terapéuticas.
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En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
LCRCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
albúmina de 240 mg/L (3.65 μmol/L; 24 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina de 620 μmol/L (1000 mg/dL).
Efecto prozona (high-dosehook): Aplicando la verificación cinética, no se
produjeron resultados falsos sin aviso con concentraciones de albúmina hasta
30000 mg/L (456 μmol/L, 3000 mg/dL).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de mediciónOrina
Cobas c 311: 3–200 mg/L (0.05–3.04 μmol/L, 0.3–20 mg/dL)
Valores teóricosOrina
2a orina de la mañana:
Adultos: < 20 mg de albúmina/g de creatinina o bien
< 2.26 g (34.35 μmol) de albúmina/mol de creatinina
Niños (3-5 años):20 < 20 mg/L (0.304 μmol/L, 2 mg/dL) de albúmina < 37 mg de
albúmina/g de creatinina
Orina de 24 horas: < 20 mg/L (0.304 μmol/L, 2 mg/dL) < 30 mg/24 h (0.456
μmol/24 h)
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AmilasaLas α-amilasas (1,4-α-D-glucanohidrolasas, EC 3.2.1.1) catalizan la hidrólisis de
carbohidratos polímeros tales como la amilosa, la amilopectina y el glucógeno por
desdoblamiento de los enlaces 1,4-α-glucosídicos. En los poli y oligosacáridos,
algunos enlaces glucosídicos se hidrolizan simultáneamente. La maltotriosa, la
unidad más pequeña de este grupo, se convierte a maltosa y glucosa, si bien muy
lentamente. Se distinguen dos tipos de α-amilasas: el tipo pancreático (tipo P) y el
tipo salival (tipo S). El tipo P se forma casi exclusivamente en el páncreas y es, por
lo tanto, organoespecífico, mientras que el tipo S se sintetiza en diferentes
órganos.
Este último se encuentra en las glándulas salivales, las lágrimas, el sudor, la leche
materna, el líquido amniótico, los pulmones, los testículos y el epitelio de las
trompas uterinas.
La determinación de la α-amilasa juega un papel importante en el diagnóstico de
las enfermedades del páncreas ya que éstas presentan síntomas clínicos poco
específicos. La α-amilasa se emplea sobre todo en el diagnóstico y seguimiento
de la pancreatitis aguda. La hiperamilasemia no sólo puede producirse en la
pancreatitis aguda o en la fase inflamatoria de la pancreatitis crónica, sino también
en la insuficiencia renal por filtración glomerular reducida, los tumores pulmonares
u ováricos, la neumonía, las afecciones de las glándulas salivales, la cetoacidosis
diabética, el trauma cerebral así como en intervenciones quirúrgicas o en caso de
una macroamilasemia. Para confirmar la especificidad pancreática, se recomienda
determinar adicionalmente otra enzima específica del páncreas, como la lipasa o
la α-amilasa pancreática.
Los numerosos métodos descritos para la determinación de la α-amilasa miden la
reducción del sustrato de forma viscosimétrica, turbidimétrica, nefelométrica o
amiloclástica o bien registran la formación de productos de degradación por
sacarimetría o cinéticamente por reacciones sucesivas catalizadas por enzimas. El
presente método se basa en el probado proceso de degradación del sustrato
4,6-etilideno-(G7)-1,4-nitrofenil-(G1)-α,D-maltoheptaósido (Ethylidene
37
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ProtectedSubstrate = EPS) por la α-amilasa y la consecuente hidrólisis de todos
los productos de degradación a p-nitrofenol por la acción de la α-glucosidasa
(liberación del cromóforo del 100 %). Los resultados del presente método
correlacionan con los obtenidos por CLAR (cromatografía de líquidos de alta
resolución). El presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien
su estabilidad y funcionamiento han sido mejorados.
Principio del testPrueba enzimática colorimétrica conforme con lo estipulado por la IFCC Los
oligosacáridos definidos tales como el 4,6-etilideno-(G7)
p-nitrofenil-(G1)-α,D-maltoheptaósido (etilideno-G7PNP) se desdoblan bajo la
acción catalítica de la α-amilasa. La -glucosidasa actúa sobre los fragmentos
G2PNP, G3PNP y G4PNP así formados que se hidrolizan entonces
completamente a p-nitrofenol y glucosa.
La intensidad cromática del p-nitrofenol formado es directamente proporcional a la
actividad de la α-amilasa. Se determinamidiendo el aumento de la absorbancia.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero
Plasma tratado con heparina de litio.
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Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Orina: Recoger la orina sin aditivos. La α-amilasa es inestable en orina ácida.
Realizar el test imediatamente o alcalizar las muestras para su almacenamiento
(apenas sobre pH 7).
Estabilidad en suero o plasma: 7 días a 15-25 °C
1 mes a 2-8 °C
Estabilidad en orina: 2 días a 15-25 °C
10 días a 2-8 °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
•si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un reactivo del
sistema Roche utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que
proporciona valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la actividad de
analito de cada muestra.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferenciasUna ligera modificación de la coloración amarilla de la solución 2 no influye en el
funcionamiento del test.
No pipetear con la boca y evitar el contacto del reactivo con la piel porque La
saliva y el sudor contienen α-amilasa!
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Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
amilasa de 100 U/L (1.67 μkat/L).
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 500 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 310 μmol/L o 500 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):15 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1500.
No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
En algunos casos, las muestras que presentan elevada turbidez (índice L) y al
mismo tiempo una alta actividad de amilasa pueden causar la alarma >React o
>Abs.
Las muestras lipémicas muy turbias pueden causar alarmas debido a valores de
absorbancia elevados.
EDTA.Glucosa: Sin interferencias por glucosa hasta 111 mmol/L (2000 mg/dL). La
recuperación aumenta en aprox. el 10 % si la concentración de glucosa equivale a
250 mmol/L (4500 mg/dL).
Ácido ascórbico: Sin interferencias por ácido ascórbico hasta 5.68 mmol/L (100
mg/dL).
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepción: Los fármacos basados en icodextrina pueden provocar valores de
amilasa disminuidos.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
Orina
40
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Ácido ascórbico: Sin interferencias por ácido ascórbico hasta 2.27 mmol/L (40
mg/dL). Con concentraciones de ácido ascórbico de 22.7 mmol/L (400 mg/dL) se
registra una recuperación reducida en un 15 %.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros examines.
Valores teóricosSuero/plasma Hombres/ mujeres
0.47-1.67 μkat/L 28-100 U/L
Orina espontánea Hombres mujeres
0.27-8.20 μkat/L
0.35-7.46 μkat/L
16-491 U/L
21-447 U/L
Cociente de α-amilasa/creatinina
Hombres mujeres
0.97-4.73 μkat/g
1.25-6.51 μkat/g
58-283 U/g
75-390 U/g
Bilirrubina DirectaLa bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial por la degradación de los
eritrocitos viejos. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras
hemoproteínas es eliminado, metabolizado a bilirrubina y transportado al hígado
en forma de complejo con la albúmina sérica. En el hígado, la bilirrubina se
solubiliza por conjugación con el ácido glucurónico para ser transportada por el
41
|
conducto biliar y eliminada por el tracto digestivo. El incremento de los niveles de
bilirrubina sin conjugar (indirecta) en el torrente sanguíneo se debe a
enfermedades o circunstancias en las cuales, a causa de procesos hemolíticos, se
produce más bilirrubina de la que el hígado es capaz de metabolizar. La
inmadurez hepática y otros numerosos trastornos en los que el mecanismo de
conjugación de la bilirrubina se encuentra afectado pueden causar aumentos
similares de la bilirrubina circulante sin conjugar. La obstrucción del conducto biliar
o el daño de la estructura hepatocelular causan un aumento en los niveles tanto
de la bilirrubina conjugada (directa) como en los de la bilirrubina sin conjugar
(indirecta) en el torrente sanguíneo.
Principio del testMétodo diazo.
En un tampón ácido, la bilirrubina conjugada y la δ-bilirrubina (bilirrubina directa)
reaccionan directamente con la sal de 3,5-diclorofenildiazonio para
formarazobilirrubina de color rojo.
La intensidad cromática del colorante azoico rojo es directamente proporcional a la
concentración de bilirrubina directa (conjugada) que se mide fotométricamente.
Nota: Bajo la influencia de la luz azul, utilizada por ejemplo en la fototerapia de
neonatos, una parte de la bilirrubina sin conjugar se transforma a un isómero
hidrosoluble denominado fotobilirrubina que es un sustrato para pruebas de
bilirrubina directa. Esta fracción es detectada por la BILD2 y puede llevar a
resultados superiores a los normales en niños sanos.
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero: Recoger las muestras de suero en tubos estándar.
Plasma tratado con heparina de litio, EDTA di y tripotásico.
No exponer las muestras a la luz directa.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 42 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
6 meses a (-15) - (-25) °C
CalibraciónCalibrador S1: H2O
S2: Calibrador c.f.a.s.
43
|
Modo de calibración Regresión lineal
Intervalo de calibraciones
Calibración a dos puntos
- con cada lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Factores de conversión: μmol/L x 0.0585 = mg/dL
mg/dL x 10 = mg/L
mg/dL x 17.1 = μmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de la bilirrubina directa de 34 μmol/L (2 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 25 (concentración
de hemoglobina: aprox. 15.5 μmol/L o 25 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 750. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepción: La fenilbutazona proporciona resultados artificialmente bajos de
bilirrubina.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
En ciertos casos, cuando casi la totalidad de la bilirrubina que reacciona se
encuentra en forma directa, el valor de la bilirrubina directa puede resultar
ligeramente más elevado que el de bilirrubina total. Si es así, el resultado para la
44
|
bilirrubina total debe indicarse tanto para la bilirrubina directa como para la
bilirrubina total.
Límites e intervalosIntervalo de medición1.5-291 μmol/L (0.09-17 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2. Los
resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se multiplican
automáticamente por el factor 2.
Valores teóricosBilirrubina directa ≤ 5 μmol/L (≤ 0.30 mg/dL)
El límite superior de 10 μmol/L para la bilirrubina directa en neonatos se cita en la
literatura.
Bilirrubina TotalLa bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial por la degradación de los
eritrocitos viejos. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras
hemoproteínas es eliminado, metabolizado a bilirrubina y transportado al hígado
en forma de complejo con la albúmina sérica. En el hígado, la bilirrubina se
solubiliza por conjugación con el ácido glucurónico para ser transportada por el
conducto biliar y eliminada por el tracto digestivo.
El incremento de los niveles de bilirrubina sin conjugar (indirecta) en el torrente
sanguíneo se debe a enfermedades o circunstancias en las cuales, a causa de
procesos hemolíticos, se produce más bilirrubina de la que el hígado es capaz de
metabolizar. La inmadurez hepática y otros numerosos trastornos en los que el
mecanismo de conjugación de la bilirrubina se encuentra afectado pueden causar
aumentos similares de la bilirrubina circulante sin conjugar. La obstrucción del
conducto biliar o el daño de la estructura hepatocelular causan un aumento en los
45
|
niveles tanto de la bilirrubina conjugada (directa) como en los de la bilirrubina sin
conjugar (indirecta) en el torrente sanguíneo.
Principio del testMétodo diazo colorimétrico
En un medio fuertemente ácido y en presencia de un agente disolvente adecuado,
la bilirrubina total se acopla a 3,5-diclorofenildiazonio.
La intensidad cromática del colorante azoico rojo es directamente proporcional a la
concentración de bilirrubina total y se mide fotométricamente.
Medidas de protección y advertencias
46
|
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero
Plasma tratado con heparina de litio, EDTA di y tripotásico (El uso de plasma
EDTA con niveles elevados de hematocrito puede provocar valores ligeramente
disminuidos.) Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar
el ensayo.
Estabilidad: 31 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
6 meses a (-15) - (-25) °C
a) Si las muestras se protegen de la luz
Límites e intervalosIntervalo de medición2.5-650 μmol/L (0.146-38.0 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas con la función de repetición se multiplican automáticamente por
el factor 2.
Valores teóricosAdultos9 hasta 21 μmol/L (hasta 1.2 mg/dL)
Niños ≥ 1 mes de edad hasta 17 μmol/L (hasta 1.0 mg/dL)
Hombres hasta 24 μmol/L (hasta 1.4 mg/dL)
Mujeres hasta 15 μmol/L (hasta 0.9 mg/dL)
Alto riesgo de desarrollar una hiperbilirrubinemia clínicamente significativa:
Neonatos: a término y casi a término
Edad del neonato:
47
|
24 horas ≥ 137 μmol/L) (≥ 8.0 mg/dL))
48 horas ≥ 222 μmol/L) (≥ 13.0 mg/dL))
84 horas ≥ 290 μmol/L) (≥ 17.0 mg/dL))
Tales niveles de hiperbilirrubinemia se consideran significativos y generalmente
requieren una estrecha supervisión y posiblemente una evaluación ulterior o
incluso una intervención.
CalcioCaracterísticasEl calcio es el elemento mineral más abundante en el organismo. Aprox. Un 99 %
se encuentra en los huesos, fundamentalmente en su forma de hidroxiapatito. El
calcio restante se halla distribuido entre los diferentes tejidos y líquidos
extracelulares en los que desempeña un papel central en numerosos procesos de
sustancial importancia para la vida. Más allá de su función relacionada con el
esqueleto, el calcio también está implicado en la coagulación sanguínea, la
conducción neuromuscular, la excitabilidad del músculo esquelético y cardíaco, la
activación enzimática y la preservación de la integridad y permeabilidad de la
membrana celular.
Se cree que los niveles séricos y por tanto el contenido corporal de calcio están
controlados por la parathormona (PTH), la calcitonina y la vitamina D.
Un desequilibrio en cualquiera de estos moduladores produce alteraciones en los
niveles de calcio sérico y corporal. El incremento de los niveles de PTH sérica o de
vitamina D está generalmente asociado a la hipercalcemia. Un aumento en los
niveles de calcio sérico también puede observarse en el mieloma múltiple y en
otras afecciones neoplásicas. La hipocalcemia puede acompañar al
hipoparatiroidismo, la nefrosis y la pancreatitis.
Principio del test
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|
Bajo condiciones alcalinas, los iones de calcio reaccionan con el
5-nitro-5’-metil-BAPTA (NM-BAPTA) para formar un complejo. En un segundo
paso, el complejo formado reacciona con EDTA.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero: Se prefiere suero fresco recogido en ayunas.
Plasma: tratado con heparina de litio.
Se recomienda separar las muestras de suero o plasma inmediatamente de las
células sanguíneas, ya que el contacto prolongado con el coágulo puede causar
valores reducidos de calcio. El suero de pacientes que reciben EDTA (en el
tratamiento de la hipercalcemia) no es apto para el análisis, ya que el EDTA fija el
calcio en quelatos e impide que esté disponible para reaccionar con NM-BAPTA.
Se ha observado una coprecipitación del calcio con la fibrina (p.ej. plasma
heparinizado), los lípidos o la proteína desnaturalizada en condiciones de
almacenamiento o congelamiento.
Orina
Recoger las muestras de orina en frascos lavados con ácido. Recoger las
muestras de 24 horas en recipientes con 20-30 mL de HCl de 6 mol/L para impedir
la precipitación de sales de calcio. A veces, las sales de calcio precipitadas no se
disuelven por completo tras la adición de HCI a la orina recogida.
Estabilidad en suero/plasma: 57 días a 15-25 °C
3 semanas a 2-8 °C
8 meses a (-15) - (-25) °C
49
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Estabilidad en orina: 52 días a 15-25 °C
4 días a 2-8 °C
3 semanas a (-15)-(-25) °C
Antes de analizar las muestras de suero u orina que hayan estado almacenadas,
mezclarlas bien.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente al material de
referencia SRM 956 c, nivel 2.
Limitaciones del análisis – interferencias
Criterio: Recuperación dentro de ± 0.22 mmol/L (0.9 mg/dL) del valor inicial de las
muestras ≤ 2.2 mmol/L (8.8 mg/dL) y dentro de ± 10 % para muestras> 2.2
mmol/L.
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aprox. 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L o 1000 mg/dL).
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Lipemia (Intralipid):6 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000.
Existe una mínima correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la
concentración de triglicéridos.
Magnesio: Sin interferencias significativas hasta una concentración de 15 mmol/L.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
Orina
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de bilirrubina
conjugada de 1026 μmol/L (60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina de 621 μmol/L (1000 mg/dL).
Magnesio: Sin interferencias significativas hasta una concentración de 60 mmol/L.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de mediciónSuero/plasma
0.20-5.0 mmol/L (0.8-20.1 mg/dL)
Orina
0.20-7.5 mmol/L (0.8-30.1 mg/dL)
Determinar las muestras de orina con concentraciones superiores a través de la
función de repetición del ciclo. Con la función de repetición, las muestras se
51
|
diluyen 1:5. Los resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se
multiplican automáticamente por el factor 5
Valores teóricosSuero/plasma
Recién nacidos (0-10 días de edad): 1.90-2.60 mmol/L (7.6-10.4 mg/dL)
Niños (10 días-2 años de edad): 2.25-2.75 mmol/L (9.0-11.0 mg/dL)
Niños (2-12 años de edad): 2.20-2.70 mmol/L (8.8-10.8 mg/dL)
Niños (12-18 años de edad): 2.10-2.55 mmol/L (8.4-10.2 mg/dL)
Adultos (18-60 años de edad): 2.15-2.50 mmol/L (8.6-10.0 mg/dL)
Adultos (60-90 años de edad): 2.20-2.55 mmol/L (8.8-10.2 mg/dL)
Adultos (> 90 años de edad): 2.05-2.40 mmol/L (8.2-9.6 mg/dL)
Orina
2.5-7.5 mmol/24 h (100-300 mg/24 h) con una alimentación normal.
Complemento C3
CaracterísticasEl sistema del complemento se activa por una vía clásica y por una vía alternativa.
Ambas desembocan en una vía terminal común. Dado que el factor C3 del
complemento es el factor común de las dos vías, su concentración y la de sus
productos de degradación (incluyendo C3c) sirven para indicar el grado de
activación del sistema de complemento. Cuando los valores disminuyen, significa
que se ha producido una activación. La determinación adicional de C4 permite una
diferenciación más precisa. Si se obtienen valores normales de C4, es probable
que la activación tenga lugar por la ruta alternativa. Se observan concentraciones
disminuidas en numerosas enfermedades inflamatorias e infecciosas. Las causas
principales son el lupus eritematoso sistémico (LES), la artritis reumatoidea, la
endocarditis bacteriana subaguda, la viremia, las infecciones parasitarias o la
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|
sepsis bacteriana. En presencia del factor nefrítico C3, los valores del factor del
complemento C3 de pacientes con lipodistrofia parcial o
glomerulonefritismembrano-proliferativa se hallan fuertemente disminuidos.
Por ser C3 una proteína de fase aguda, el organismo produce mayores cantidades
de C3 durante los procesos inflamatorios. Su concentración se incrementa en
enfermedades sistémicas, estados inflamatorios crónicos no infecciosos
(especialmente en la poliartritis crónica) y en situaciones fisiológicas especiales
(durante la gestación). En estos casos, el aumento raramente duplica el valor
normal y puede ocultar una reducción del consumo del complemento.
Para la determinación del factor C3 del complemento se dispone de varios
métodos tales como la nefelometría, la inmunodifusión radial y la turbidimetría.
Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica.
El C3c humano forma un precipitado con un antisuero específico que se determina
por turbidimetría.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 54 días a 15-25 °C
8 días a 2-8 °C
8 días a (-15)-(-25) °C
El grado de fragmentación de C3 a C3c depende de la fecha de extracción y las
condiciones de conservación de la muestra. Así, los valores obtenidos en
53
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muestras frescas son hasta en un 25 % inferior a aquellos obtenido en muestras
recogidas cierto tiempo atrás según el grado de fragmentación.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s. Proteins
Modo de calibración RCM2
Intervalo de calibraciones Calibración completa
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Factores de conversión: g/L x 100 = mg/dL
mg/dL x 0.01 = g/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de C3c de 0.9 g/L.
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 par-bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aprox. 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L o 1000 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):8 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 2000. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Los factores reumatoides hasta 1200 UI/mL no interfieren en el test.
Efecto prozona (high-dosehook): No se produjeron resultados falsos hasta una
concentración de C3c de 12.5 g/L.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
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|
Límites e intervalosIntervalo de medición0.04-5.0 g/L (4-500 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2. Los
resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se multiplican
automáticamente por el factor 2.
Valores teóricos0.9-1.8 g/L (90-180 mg/dL)
2.10 Complemento C4
Generalidades
El sistema de complemento puede activarse por la vía clásica y por la vía
alternativa. El factor de complemento C4 participa en la activación a través de la
vía clásica. Si bien la disminución de C4 es común, raras veces falta por completo.
El C4 está disminuido o falta por completo en enfermedades del inmunocomplejo,
el lupus eritematoso sistémico (LES), la tiroiditis autoinmune y la dermatomiositis
juvenil. En pacientes con deficiencia de C4, la aparición del LES muchas veces
puede comprobarse muy temprano, siendo su curso más grave en pacientes con
niveles normales de complemento. En infecciones como la meningitis bacteriana y
la vírica, sepsis por estreptococos y estafilococos así como en neumonía, el C4
está disminuido.
La determinación adicional de C4 en pacientes con valores disminuidos del factor
C3 del complemento permite una diferenciación ulterior. Si en estos casos la
concentración de C4 es normal, es probable que la activación se efectúe por la vía
alternativa. La determinación de C4 se emplea principalmente para el seguimiento
de los valores reducidos del complemento en sangre.
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|
La formación de C4, por ser una proteína de fase aguda, se acelera durante
procesos inflamatorios. Su concentración se incrementa en enfermedades
infecciosas sistémicas, estados inflamatorios crónicos no infecciosos
(especialmente en la poliartritis crónica) y en situaciones fisiológicas especiales
(durante la gestación). En estos casos, el aumento raramente duplica el valor
normal y puede ocultar una reducción del consumo del complemento.
Para determinar el factor C4 del complemento se dispone de métodos tales como
la nefelometría, la inmunodifusión radial y la turbidimetría.
Principio de testPrueba inmunoturbidimétrica. El C4 humano forma un precipitado con un antisuero
específico que se determina por turbidimetría.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio o EDTA bipotásico.
Centrifugue las muestras que contengan precipitado antes de efectuar la prueba.
Estabilidad: 52 días a 15-25 °C
2 días a 2-8 °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s. Proteins
Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.sProteins específico del lote por los factores
indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar de la
curva de calibración de 6 puntos.
S2: 0.140 S5: 1.31
56
|
S3: 0.328 S6: 2.64
S4: 0.655
Modo de calibración RCM2
Frecuencia de calibraciones
Calibración completa
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Factores de conversión:
mg/dL x 0.01 = g/L
g/L x 100 = mg/dL
mg/dL x 0.050 = μmol/L
g/L x 5.00 = μmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de C4 de 0.1 g/L (0.5 μmol/L, 10 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración
aproximada de bilirrubina conjugada y no conjugada: 1026 μmol/L ó 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 500 (concentración
aproximada de hemoglobina: 311 μmol/L ó 500 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):8 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000. La
correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la concentración de
triglicéridos no es concluyente.
Los factores reumatoides hasta 600 UI/mL no interfieren en el test.
Efecto prozona (high-dosehook): No se obtienen resultados falsos con
concentraciones de C4 de hasta 5 g/L (25 μmol/L, 500 mg/dL).
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
extendido en concentraciones terapéuticas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
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Para el diagnóstico, los resultados del ensayo siempre deben interpretarse
conjuntamente con el historial médico del paciente, el análisis clínico así como los
resultados de otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición0.02-1.0 g/L (0.1-5 μmol/L, 2.0-100 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores por la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:2. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 2.
Valores teóricos0.1-0.4 g/L (0.5-2.0 μmol/L o 10-40 mg/dL)
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden
aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios
valores.
2.11 Colesterol
CaracterísticasEl colesterol es un esteroide con un grupo hidroxilo secundario en la posición C3.
Se sintetiza en tejidos de varios tipos, pero especialmente en el hígado y en la
pared intestinal. Aprox. tres cuartos del colesterol se forman por síntesis, mientras
que el cuarto restante proviene de la alimentación. La determinación del colesterol
se emplea para cribar el riesgo aterosclerótico, así como para diagnosticar y tratar
enfermedades con niveles elevados de colesterol o trastornos de los
metabolismos lipídico lipoproteico. La determinación del colesterol fue descrita por
vez primera por Liebermann en 1885 y luego por Burchard en 1889. Según el
principio de Liebermann-Burchard, el colesterol forma un compuesto verde
58
|
azulado a partir de carbohidratos polímeros insaturados en un medio en el que
están presentes el ácido acético, el anhídrido acético y el ácido sulfúrico
concentrado. En el método de Abell y Kendall, que es más específico pero más
complejo desde un punto de vista técnico, se emplean también reactivos
cáusticos. En 1974, Roeschlau y Allain describieron el primer método
completamente enzimático.
Este método se basa en la determinación de la Δ4-colestenona tras el
desdoblamiento enzimático del éster de colesterol por la colesterol esterasa,
después de la transformación del colesterol por la colesterol oxidasa, así como la
medición subsiguiente del peróxido de hidrógeno formado a través de una
reacción de Trinder. La optimización del desdoblamiento de los ésteres (> 99.5 %)
permite la estandarización por estándares primarios y secundarios y una
comparación directa con los métodos de referencia de CDC y NIST. Las muestras
recogidas tras la ingestión de alimentos pueden dar resultados ligeramente
inferiores a las obtenidas en ayunas.
El test de colesterol de Roche cumple con los objetivos sentados en 1992 por los
Institutos Nacionales de la Salud de los EE.UU. (NIH) equivalentes al 3 % o aún
inferiores para la precisión y la desviación.
El presente test ha sido estandarizado frente a Abell/Kendall así como por dilución
isotópica/espectrometría de masa. Los datos de funcionamiento e informaciones
aquí presentados son independientes de la estandarización.
Principio del testMétodo enzimático colorimétrico.
Los ésteres de colesterol se desdoblan por la acción de la colesterol esterasa a
colesterol libre y ácidos grasos. La colesterol oxidasa cataliza entonces la
oxidación de colesterol a colest-4-en-3-ona y peróxido de hidrógeno. En presencia
de peroxidasa, el peróxido de hidrógeno formado produce la unión oxidativa del
fenol y la 4-aminofenazona para formar un colorante rojo de quinona-imina.
59
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La intensidad cromática del colorante formado es directamente proporcional a la
concentración de colesterol. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio o EDTA bipotásico.
No emplear plasma con citrato, oxalato o fluoruro.
Se puede emplear muestras recogidas en ayunas o después de comer.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
Estabilidad: 157 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
3 meses a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibraciones calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado por el método de
Abell/Kendall así como por dilución isotópica/espectrometría de masa.16
Factores de conversión: mmol/L x 38.66 = mg/dL
mmol/L x 0.3866 = g/L
mg/dL x 0.0259 = mmol/L
60
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Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor incial con una concentración de
colesterol de 5.2 mmol/L (200 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 16 para la bilirrubina
conjugada y de 14 para la bilirrubina sin conjugar, lo cual equivale a una
concentración aproximada de bilirrubina conjugada de 274 μmol/L ó 16 mg/dL y a
una concentración aproximada de bilirrubina sin conjugar de 239 μmol/L ó 14
mg/dL.
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 700 (concentración
de hemoglobina: aprox. 435 μmol/L ó 700 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 2000. La
correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la concentración de
triglicéridos no es concluyente.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados obtenidos con el test siempre deben evaluarse
junto a la anamnesis del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de otros
análisis.
Límites e intervalosIntervalo de medición0.1-20.7 mmol/L (3.86-800 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del
ciclo es de 1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de
repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.
Valores teóricosInterpretación clínica según las recomendaciones de la Sociedad Europea de
Aterosclerosis:
61
|
mmol/L mg/dL Trastorno del metabolismo de lípidos
Colesterol < 5.2 (< 200)
Triglicéridos < 2.3 (< 200) No
Colesterol 5.2-7.8 (200-300) Sí, si el colesterol-HDL < 0.9 mmol/L (< 35 mg/dL)
Colesterol > 7.8 (> 300)
Triglicéridos > 2.3 (> 200) Sí
Umbrales de corte recomendados por el Programa Nacional Educativo sobre el
Colesterol (NCEP), panel de tratamiento de adultos, para estimar el riesgo en la
población de los EE.UU.
Nivel ideal de colesterol < 5.2 mmol/L (< 200 mg/dL)
Colesterol elevado límite 5.2-6.2 mmol/L (200-240 mg/dL)
Colesterol alto ≥ 6.2 mmol/L (≥ 240 mg/dL)
2.12 Creatinina
CaracterísticasLa insuficiencia renal crónica es un problema de salud de incidencia mundial que
conlleva un riesgo sustancial de morbilidad y mortalidad cardiovasculares.
Las normas actuales definen la insuficiencia renal crónica, independientemente de
su causa, como el daño renal o la tasa de filtración glomerular (TFG) inferior a 60
mL/min por 1.73 m2 durante un período mínimo de 3 meses.
La determinación de creatinina en suero o plasma es la prueba más común para
evaluar la función renal. La creatinina es un producto de degradación de fosfato de
creatina muscular producido constantemente por el cuerpo (dependiente de la
masa muscular). La creatinina se filtra en los glomérulos y, en condiciones
normales, no es reabsorbida por los túbulos en una cantidad apreciable. Una
pequeña pero significativa cantidad se secreta activamente.
Una subida de los niveles de creatinina en la sangre solamente es observada
cuando hay un marcado daño en los nefrones. Por lo tanto, esta prueba no puede
emplearse para la detección precoz de la insuficiencia renal.
62
|
El aclaramiento de creatinina medido a partir de la concentración de creatinina en
orina y suero o plasma y la tasa del flujo urinario constituye una prueba mucho
más sensible y con mayor capacidad de estimar la tasa de filtración glomerular
(TFG). Esta prueba requiere una muestra de orina recogida con precisión temporal
(usualmente de 24 horas) y una muestra de sangre. Sin embargo, dado que este
test está sujeto a errores debido a la recogida de orina en función del tiempo, se
intentó estimar la TFG solamente a partir del cálculo de la concentración de
creatinina en suero o plasma. Entre los numerosos métodos sugeridos, la
ecuación de Cockroft y Gault y el método basado en los resultados del estudio de
MDRD obtuvieron la mayor aceptación general. Mientras que la primera ecuación
está basada en datos obtenidos con el método de Jaffé convencional, una nueva
versión de la segunda se emplea para métodos de creatinina que pueden
rastrearse a DI-EM. Ambos métodos son aptos para adultos En niños debe
emplearse la fórmula de Bedside Schwartz.
Adicionalmente al diagnóstico y tratamiento de la insuficiencia renal y al control de
la diálisis renal, la medición de creatinina se emplea también para calcular la
excreción fraccional de otros analitos en orina (p. ej. La albúmina y la α-amilasa).
Son numerosos los métodos para determinar la creatinina. Los tests automáticos
establecidos en el laboratorio de rutina incluyen la prueba de Jaffé con picrato
alcalino en sus diferentes modificaciones y la determinación enzimática.
Principio de testEl método enzimático se basa en la conversión de la creatinina a glicina,
formaldehído y peróxido de hidrógeno por la acción de la creatininasa, la
creatinasa y la sacrosina oxidasa. Catalizado por la peroxidasa, el peróxido de
hidrógeno liberado reacciona con la 4-aminofenazona y el HTIBa para formar
cromógeno de quinonaimina. La intensidad cromática del cromógeno de
quinonaimina formado es directamente proporcional
a la concentración de creatinina en la mezcla de reacción.
63
|
Durante la incubación en R1, la creatinina de la muestra es destruida por la
creatinasa, SOD y catalasa.
a) ( ácido 2,4,6-triyodo-3-hidroxibenzoico)
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
Orina.
No emplear aditivos para recoger la orina. Pero si se requiere un conservante para
otros analitos para recoger la orina, sólo puede aceptarse el ácido clorhídrico (14-
47 mmol/L de orina, p. ej. 5 mL de HCI al 10 % ó 5 mL de HCI al 30 % por litro de
orina) o bien el ácido bórico (81 mmol/L, p. ej. 5 g por litro de orina).
Estabilidad en suero/plasma: 7 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
3 meses a (-15)-(-25) °C
Estabilidad en orina (sin conservante):
2 días a 15-25 °C
6 días a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C
Estabilidad en orina (con conservante):
3 días a 15-25 °C
8 días a 2-8 °C
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|
3 semanas a (-15)-(-25) °C
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibración
- al cabo de 4 semanas dentro de laestabilidad (Calibración de blanco)
Calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a ID/MS
(espectrometría de masa con dilución isotópica).
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factores de conversión:
μmol/L x 0.0113 = mg/dL
μmol/L x 0.001 = mmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
creatinina sérica de 80 μmol/L (0.9 mg/dL) y de creatinina en orina de 2500 μmol/L
(28.3 mg/dL).
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 15 para la bilirrubina
conjugada y de 20 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 257 μmol/L ó 15 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin
conjugar: aprox. 342 μmol/L o 20 mg/dL).
65
|
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 800 (concentración
de hemoglobina: aprox. 497 μmol/L ó 800 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 2000. No
existe una correlación concluyente entre el índice L (correspondiente a la turbidez)
y la concentración de triglicéridos.
Ácido ascórbico: Valores de ácido ascórbico inferiores a 1.70 mmol/L ó 300 mg/L
no interfieren en el test.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepciones: La rifampicina, la levodopa y el dobesilato de calcio (p.ej. Dexium)
pueden acarrear resultados falsamente reducidos de creatinina. La N-etilglicina en
concentraciones terapéuticas y la DL-prolina en concentraciones ≥ 1 mmol/L (≥
115 mg/L) deparan valores falsos elevados.
Sin interferencias significativas hasta una concentración de creatina de 4 mmol/L
(524 mg/L).
Las muestras hemolizadas de neonatos, niños o adultos con valores de la
hemoglobina fetal ≥ 600 mg/dL interfieren en el test.
En concentraciones terapéuticas, la 2–fenil-1,3–indandiona (fenindiona) interfiere
en el test.
Si la velocidad de filtración glomerular (VFG) se estima según la fórmula de
Schwartz, se pueden obtener resultados falsos elevados.
Orina
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de bilirrubina
conjugada de 1197 μmol/L (70 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina conjugada de 621 μmol/L (1000 mg/dL).
El ácido ascórbico < 22.7 mmol/L (< 4000 mg/L), la glucosa < 120 mmol/L (< 2.162
mg/dL) y el urobilinógeno < 676 μmol/L (< 40 mg/dL) no interfieren en el test.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
extendido en concentraciones terapéuticas.
66
|
Excepciones: El dobesilato de calcio (p.ej. Dexium), Levodopa y la α-metildopa
pueden acarrear resultados falsamente reducidos de creatinina.
Altas concentraciones de ácido homogentísico en muestras de orina provocan
resultados falsos.
Intervalo de mediciónSuero/plasma
5-2700 μmol/L (0.06-30.5 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:4. Los resultados de las muestras diluidas usando la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 4.
Orina
100-54000 μmol/L (1.1-610 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:2.5. Los resultados de las muestras diluidas usando la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 2.5.
Valores teóricosSuero/plasma
Adultos
Mujeres 45-84 μmol/L (0.51-0.95 mg/dL)
Hombres 59-104 μmol/L (0.67-1.17 mg/dL)
Niños
Neonatos (prematuros) 29-87 μmol/L (0.33-0.98 mg/dL)
Neonatos (a término) 27-77 μmol/L (0.31-0.88 mg/dL)
2-12 m 14-34 μmol/L (0.16-0.39 mg/dL)
de 1 - < 3 años 15-31 μmol/L (0.18-0.35 mg/dL)
de 3 - < 5 años 23-37 μmol/L (0.26-0.42 mg/dL)
de 5 - < 7 años 25-42 μmol/L (0.29-0.47 mg/dL)
67
|
de 7 - < 9 años 30-47 μmol/L (0.34-0.53 mg/dL)
de 9 - < 11 años 29-56 μmol/L (0.33-0.64 mg/dL)
de 11 - < 13 años 39-60 μmol/L (0.44-0.68 mg/dL)
de 13 - < 15 años 40-68 μmol/L (0.46-0.77 mg/dL)
Orina
1ra orina de la mañana
Mujeres 2.55-20.0 mmol/L (29-226 mg/dL)
Hombres 3.54-24.6 mmol/L (40-278 mg/dL)
Orina de 24 horas:
Mujeres 6-13 mmol/24 (720-1510 mg/24 h)
Hombres 9-19 mmol/24 h (980-2200 mg/24 h)
Aclaramiento de creatinina 66-143 mL/min
2.13 Creatinkinasa (CK)
CaracterísticasLa enzima CK es un dímero compuesto de subunidades procedentes del músculo
(M) o del cerebro (B). Se han identificado tres isoenzimas: MM, MB y BB. La CK
sérica normal está formada principalmente por la isoenzima CK-MM. Se observan
niveles séricos elevados de CK en las enfermedades del músculo esquelético,
especialmente en la distrofia muscular. La fracción CK-MB se encuentra sobre
todo en el tejido miocárdico y su presencia se detecta, por regla general, en las 48
horas siguientes al inicio de un infarto de miocardio. La determinación de la CK
total y la CK-MB en el diagnóstico del infarto de miocardio constituye la aplicación
individual más importante de la medición de la CK en química clínica. La actividad
de la CK sérica también está aumentada en los estados posteriores a isquemia
cerebral, enfermedades cerebrovasculares agudas y traumatismos craneales.
En 1977, la Sociedad Alemana de Química Clínica (DGKC) y en 1989 la
Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) recomendaron métodos
68
|
estandarizados para determinar la CK con reacción inversa y activación por NAC.
El presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC y de la DGKC pero
ha sido mejorado en cuanto al rendimiento y la estabilidad.
Test UV
La velocidad de formación de NADPH es directamente proporcional a la actividad
catalítica de la CK. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.
Cantidades equimolares de NADPH y ATP se forman simultáneamente. La
velocidad de formación de NADPH medida por fotometría es directamente
proporcional a la actividad de CK.
Precauciones
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
69
|
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero (sin hemólisis). El suero sin hemolizar es la muestra más adecuada y
recomendada por la IFCC.
Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio.
Advertencia: Se pueden obtener resultados divergentes en suero y plasma debido
a diferentes grados de hemólisis como consecuencia del procedimiento de
obtención de muestras.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 72 días a 15-25 °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula original de
la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona
valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
creatina quinasa de 140 U/L (2.34 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para la bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
70
|
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 200 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 124 μmol/L o 200 mg/dL). La magnitud de la
interferencia puede variar según el contenido exacto de eritrocitos.
Lipemia (Intralipid):8 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos. En caso de muestras altamente
lipémicas (índice L > 1000) puede producirse un aviso de alta absorbancia.
Seleccionar el tratamiento de muestra diluida para el reprocesamiento automático.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.9,10 Excepción: El fármaco Cyanokit
(hidroxocobalamina) puede causar interferencias con los resultados.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
Valores teóricosLos intervalos de referencia dependen en gran medida del grupo de pacientes y de
la situación clínica específica.
Para individuos sanos según Klein et al.:12
CK μkat/L U/L
Hombres 0.65-5.14 39-308
Mujeres 0.43-3.21 26-192
Valores de consenso:
CK μkat/L U/L
Hombres < 3.20 < 190
Mujeres < 2.85 < 170
Valores de consenso:
CK-MB μkat/L U/L
Hombres/mujeres < 0.42 < 25
71
|
Infarto de miocardio: La probabilidad de lesión miocárdica es alta si se cumplen las
tres siguientes condiciones:
μkat/L U/L
1 CKhombres> 3.17 > 190
CKmujeres> 2.79 > 167
2 CK-MB > 0.40 > 24
3 La actividad de la CK-MB constituye el 6-25 % de la actividad de la CK total.
Según Tietz:
CK μkat/L U/L
Hombres > 19 años 0.33-3.34 20-200
Mujeres > 19 años 0.33-3.01 20-180
Para garantizar una alta sensibilidad en el diagnóstico de cardiopatías, se
recomienda emplear los valores indicados por Tietz. La eventual pérdida de
especificidad diagnóstica puede compensarse determinando adicionalmente la
CK-MB y/o la troponina T. Si existe la sospecha de un infarto de miocardio, se
recomienda seguir las propuestas estratégicas indicadas en el documento de
consenso de cardiólogos europeos y americanos.
Si, a pesar de la sospecha de infarto de miocardio, los valores registrados se
mantienen por debajo de los límites indicados, puede tratarse de un infarto
reciente. En tales casos deberán repetirse las determinaciones al cabo de 4 horas.
En personas sanas, los valores de CK pueden variar según el grado de ejercicio
físico y la raza.
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden
aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios
valores
72
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CreatinKinasa Fracción MB
CaracterísticasLa creatina quinasa (CK) aparece en forma de tres isoenzimas que son dímeros
compuestos por dos tipos de subunidades monoméricas. Las isoenzimas
comprenden las tres combinaciones posibles de los monómeros, M (derivado del
músculo esquelético) y B (derivado del cerebro), según lo representa la
denominación MM, MB y BB.
Si bien son numerosos los órganos que contienen CK, las isoenzimas se
distribuyen de forma diferente en cada uno. El músculo esquelético es muy rico en
isoenzima MM, mientras que el cerebro, el estómago, el intestino, la vesícula y los
pulmones contienen principalmente la isoenzima BB. La isoenzima MB se
determina sólo en el tejido miocárdico en cantidades considerables (del 15 al 20
%). Así, la actividad sérica total de CK se encuentra aumentada en varias
enfermedades. Esta falta de especificidad constituye una limitación de su valor
diagnóstico. Sin embargo, las notables diferencias existentes entre los patrones
isoenzimáticos en los diferentes órganos han convertido a la CK en una de las
enzimas más útiles para el diagnóstico del infarto agudo de miocardio. La CK-MB
aparece en el suero indicando de esta manera su presencia exclusiva en el tejido
miocárdico.
En el laboratorio clínico, la determinación en serie de las isoenzimas CK se aplica
con mayor frecuencia para corroborar el diagnóstico del infarto de miocardio.
Tras la inmunoinhibición de la subunidad CK-M con anticuerpos, la actividad de la
CK-B se determina mediante un método estandarizado para la determinación de
CK con reacción inversa y activación por NAC, según lo recomendado por la
Sociedad Alemana de Química Clínica (DGKC) en 1977 y por la Federación
Internacional de Química Clínica (IFCC) en 2002. El presente test cumple con las
recomendaciones de la IFCC y la DGKC pero ha sido mejorado en cuanto al
funcionamiento y la estabilidad.
Principio del testTest UV inmunológico
73
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Las subunidades CK-M son inhibidas por anticuerpos específicos. Puesto que la
CK-BB pocas veces aparece en suero, se considera que la activida de la CK-B se
deriva de la CK-MB presente en la muestra. La actividad de las subunidades CK-B
se determina y multiplica por 2 para poder estimar la actividad de la CK-MB. La
CK es activada por la N-acetilcisteína (NAC). En una reacción primaria, la CK
activada cataliza la desfosforilación del fosfato de creatina para formar creatina y
ATP. En una reacción de acoplamiento catalizada por la hexoquinasa (HK), la
glucosa es fosforilada por ATP para formar D-glucosa-6-fosfato (G6P).
Finalmente, la glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6PDH) cataliza la oxidación de
G6P por NADP+ para formar el 6-fosfogluconato y NADPH.
La velocidad de formación de NADPH es directamente proporcional a la actividad
catalítica de la CK-MB. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la
absorbancia.
Medidas de precaución y advertenciasSólo para el uso diagnóstico in vitro.
74
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero (sin hemólisis). El suero sin hemolizar es la muestra más adecuada y
recomendada por la IFCC.
Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio
En concentraciones normales, la heparina de litio no interfiere con el presente test
aunque la IFCC previene contra su uso.
No emplear plasma preparado con otros anticoagulantes.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad en suero: 98 horas a 20-24 °C
8 días a 2-8 °C
4 semanas a -20 °C
Estabilidad en plasma con heparina: 98 horas a 20-24 °C
5 días a 2-8 °C
8 días a -20 °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
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S2: C.f.a.s. CK-MB
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones
Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la formulación
original de la IFCC3 con adición de anticuerpos empleando pipetas calibradas
junto con un fotómetro manual obteniendo valores absolutos y la absortividad
específica de sustratos.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - InterferenciasSe recomienda determinar la actividad total de la CK en la muestra antes de
efectuar el test de CK-MB. La cantidad de anticuerpos anti-subunidad CK-M
humana en el reactivo CK-MB es suficiente para inhibir completamente una
actividad de CK-MM de hasta 2000 U/L. Si la actividad total de la CK excede 2000
U/L, la muestra requiere ser diluida porque no puede garantizarse la inhibición
completa de la subunidad CK-M. El método CK-MB no determina únicamente la
CK-MB, sino también la CK-BB, la CK mitocondrial o la IgG-CK-BB presentes en
el suero de pacientes. Estas últimas fuentes de actividad de la CK-B pueden
distinguirse por la elevación persistente de la CK-MB durante un período de
tiempo prolongado. La presencia de isoenzimas CK atípicas puede confirmarse
por electroforesis.
Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
creatina quinasa MB de 25 U/L (0.42 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 40 para la bilirrubina
conjugada y de 20 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aproximadamente 684 μmol/L o 40 mg/dL; concentración de la
bilirrubina sin conjugar: aproximadamente 342 μmol/L o 20 mg/dL).
76
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Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 10 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 6 μmol/L o 10 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 100. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos. En caso de muestras lipémicas (índice
L > 100) puede producirse un aviso de alta absorbancia. Seleccionar el
tratamiento de muestra diluida para el reprocesamiento automático.
En pacientes predispuestos a formar macro-CK pueden medirse valores altos de
CK-MB no plausibles respecto del valor de la CK total, porque las macroformas se
componen en su mayoría de subunidades de CK-B. Ya que estos pacientes
generalmente no han sido víctimas de un infarto de miocardio, se requieren
medidas diagnósticas adicionales.
Adenilato quinasa: La adenilato quinasa (AK) puede causar interferencias
positivas. La AK en sangre puede provenir de los eritrocitos, los músculos y el
hígado. A fin de reducir a un mínimo la interferencia por AK, el reactivo incluye
AMP y Ap5A. Esta mezcla de AMP/Ap5A provoca que se inhiba el 97 % de la AK
proveniente de los eritrocitos y los músculos, así como el 95 % de la AK
proveniente del hígado. Una leve actividad residual de la AK no influye el análisis
de la CK total, si bien puede afectar las actividades bajas de CK-MB.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: En concentraciones
fisiológicas, la sulfasalazina o la sulfapiridina plasmáticas pueden llevar a
resultados falsos.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
77
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Límites e intervalosIntervalo de medición3-500 U/L (0.05-8.35 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
En este caso, las muestras se diluyen de 1:1.99. Los resultados de las muestras
diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por el factor
1.99.
Valores teóricosLos intervalos de referencia dependen en gran medida del grupo de pacientes y de
la situación clínica específica.
Para personas sanas: Intervalo de referencia (37 °C) según Klein et al. y valores
de consenso:
< 25 U/L (< 0.421 μkat/L)
Para el diagnóstico del infarto de miocardio mediante una combinación entre CK y
actividad de la CK-MB, con un valor consensual de CK basado en experiencias a
largo plazo:
1. CK hombres> 190 U/L (3.12 μkat/L)
CKmujeres> 167 U/L (2.87 μkat/L)
2. CK-MB > 24 U/L (0.40 μkat/L)
3. La actividad de la CK-MB constituye el 6-25 % de la actividad de la CK total.
En caso de sospechar un infarto de miocardio, proceder según las estrategias
diagnósticas propuestas en el documento de consenso de cardiólogos europeos y
estadounidenses.
Si, a pesar de la sospecha de infarto de miocardio, los valores registrados se
mantienen por debajo de los límites indicados, puede tratarse de un infarto
reciente. En este caso deberían repetirse las determinaciones al cabo de 4 horas.
78
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Dimero D
CaracterísticasLa trombina convierte el fibrinógeno en fibrina soluble desdoblando los
fibrinopéptidos A y B. Los monómeros de fibrina se polimerizan espontáneamente.
El factor XIII activo reticula dos dominios D y genera un coágulo de fibrina sólido.
Así se forma un nuevo determinante antigénico resistente a la plasmina (el dímero
D). Por consiguiente, los fragmentos que contienen dímero D se forman cuando la
plasmina disuelve un coágulo de fibrina.
Una gran parte de los productos de degradación de la fibrina son olígomeros X de
alto peso molecular. El test Tina-quant D-Dimer tiene una alta afinidad con estos
productos de degradación de alto peso molecular. La degradación completa hasta
obtener moléculas de dímero D tiene lugar solamente in vitro o bajo terapia de
lisis.
El dímero D constituye un marcador de la activación de la coagulación altamente
sensible. Si se encuentran valores de dímero D inferiores al valor de corte, la
trombosis venosa profunda de las extremidades inferiores (TVP) o bien la embolia
pulmonar (EP) pueden excluirse con alta sensibilidad.
Se recomienda no emplear nunca el resultado de dímero D de forma aislada, sino
combinándolo siempre con una herramienta de evaluación clínica de la
probabilidad, como por ejemplo la escala de Wells. Se recomienda excluir la
TVP/EP únicamente si su probabilidad clínica es baja o moderada (no alta) y el
resultado de la prueba Tina-quant D-Dimer es normal (< 0.5 μg UEF/mL).
Es un hecho conocido que pacientes con TVP distal o EP subsegmental/periférica
pueden presentar valores normales en el test Tina-quant D-Dimer. La relevancia
clínica de este tipo de trombos de pequeño tamaño sigue sin ser elucidada. Los
buenos resultados obtenidos en aquellos estudios en los que los pacientes fueron
tratados a partir del resultado obtenido en el test Tina-quant D-Dimer con un
seguimiento trimestral hacen suponer que estos trombos de pequeño tamaño no
tienen consecuencias adversas para los pacientes.
79
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Los productos de degradación de la fibrina constituyen un marcador sensible para
la coagulación intravasal diseminada (CID)/coagulopatía de consumo. El control
de la evolución de la concentración de los productos de degradación de la fibrina
se emplea para
• confirmar o refutar un diagnóstico de sospecha
• estimar el riesgo de pacientes con CID
• controlar un tratamiento ya iniciado
Más allá de su importancia para el diagnóstico de la TVP, EP y CID, los valores de
dímero D pueden reflejar otras causas asociadas a la formación de fibrina como el
trauma, complicaciones en el embarazo, enfermedades malignas o anomalías
vasculares. Así, los niveles elevados de dímero D deben ser interpretados en el
contexto de las posibles dolencias subyacentes y sus síntomas clínicos.
Principio del testTest inmunoturbidimétrico potenciado por partículas.
Las partículas de látex de tamaño uniforme, revestidas con anticuerpos
monoclonales (fragmentos F (ab’)2) se dirigen contra el epítopo del dímero D.
Cuando se añaden muestras que contienen dímero D se forman complejos
antígeno-anticuerpo que producen un aumento de la turbidez en la mezcla de
reacción. El cambio de la absorbancia en función del tiempo depende de la
concentración de los epítopos del dímero D contenidos en la muestra. El
precipitado se determina por turbidimetría.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Plasma citratado
Recoger la sangre venosa en tubos estándar de muestra para análisis de
coagulación.
80
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También puede emplearse plasma tratado con heparina de litio 2 y EDTA bi y
tripotásico. A diferencia de su comportamiento en tubos citratados, la muestra no
se diluye al emplear tubos conteniendo heparina o EDTA. Por esta razón, los
valores de dímero D obtenidos en muestras de plasma heparinizado o EDTA son,
promedialmente, en un 19 % superiores en todo el intervalo de medición. Sin
embargo, si se adaptan los valores de calibración y de control, se obtienen los
mismos valores para todo el material de muestra.
CUIDADO: Para evitar valores erróneos en muestras de pacientes, se recomienda
efectuar las determinaciones de dímero D uniformemente en plasma citratado o en
plasma con heparina/EDTA.
Descongelar las muestras congeladas a 37° C y a continuación, mezclarlas bien.
Antes de realizar el test, dejar reposar 15 minutos a temperatura ambiente y a
continuación, analizar inmediatamente. Para los análisis de coagulación, no volver
a congelar una muestra descongelada.
Emplear las muestras sin diluir.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
Estabilidad: 8 horas a 15-25 °C
4 días a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1-S6: D-Dimer Gen.2 Calibrator Set
Modo de calibración Spline
Frecuencia de calibraciones Calibración completa
- tras cambiar de lote de reactivos
- cada 6 meses si se trata del mismo lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente
al método Asserachrom D-Dimer.28
Factores de conversión: μg UEF/mL = mg UEF/L
μg UEF/mL x 1000 = ng UEF/mL
81
|
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de dímero D de 0.5 μg de UEF/mL.
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para la bilirrubina
conjugada y de 30 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 1026 μmol/L ó 60 mg/dL y de la bilirrubina sin conjugar: aprox.
513 μmol/L ó 30 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 500 (concentración
de hemoglobina: aprox. 310 μmol/L ó 500 mg/dL).
Lipemia: Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000.
Existe una mínima correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la
concentración de triglicéridos. Los factores reumatoides hasta 100 UI/mL no
interfieren en el test. Las concentraciones de heparina hasta 100 UI/mL no
interfieren en el test.
Efecto prozona (high-dose hook): No se produjeron resultados falsos hasta una
concentración de dímero D de 220 μg UEF/mL.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Otros: Durante la terapia de lisis en caso de altas concentraciones de fragmentos
de dímero D se pueden obtener mediciones falsas reducidas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
Para el diagnóstico, los resultados obtenidos con el test siempre deben evaluarse
junto a la anamnesis del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de otros
análisis.
Valores teóricos< 0.5 μg de equivalente de fibrinógeno/mL (μg UEF/mL).
El equivalente de fibrinógeno indicado se basa en la cantidad de fibrinógeno
empleado en la preparación del estándar original de Asserachrom.
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Límites e intervalosIntervalo de medición0.15-9.00 μg UEF/mL
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. En muestras con concentraciones superiores, la función de
repetición del test disminuye el volumen de la muestra por el factor 2.4. Los
resultados son multiplicados automáticamente por este factor.
Factor Reumatoide
GeneralidadesLos factores reumatoideos son un grupo heterogéneo de autoanticuerpos dirigidos
contra los determinantes antigénicos de la región Fc de las moléculas de IgG.
Desempeñan un papel importante en el diagnóstico de la artritis reumatoidea, pero
también pueden aparecer en otras enfermedades reumáticas inflamatorias, así
como en diferentes enfermedades no reumáticas. Asimismo pueden manifestarse
en personas clínicamente sanas mayores de 60 años. A pesar de estas
consideraciones, la prueba de los factores reumatoides constituye un criterio
diagnóstico para la clasificación de la artritis reumatoide según el Colegio de
Reumatología de los EE.UU.
(American College of Rheumatology). Los autoanticuerpos se encuentran en
inmunoglobulinas de todo tipo, sin embargo, los métodos corrientes se limitan
generalmente a comprobar los factores reumatoideos del tipo IgM.
El método clásico de determinación de los factores reumatoideos es la
aglutinación con eritrocitos ovinos sensibilizados para IgG o bien con partículas de
látex. Los problemas específicos de estos métodos semicuantitativos son su
escasa precisión y reproducibilidad de laboratorio a laboratorio, así como su difícil
estandarización. Por esta razón, se han desarrollado nuevos métodos de
determinación tales como la nefelometría, la turbidimetría, los
enzimoinmunoanálisis y los radioinmunoanálisis. El test RF de Roche se basa en
83
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el principio de aglutinación inmunológica con intensificación de la reacción por
látex.
Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica.
El antígeno IgG inactivado por calor fijado a partículas de látex, reacciona con los
anticuerpos anti-FR de la muestra formando un complejo antígeno-anticuerpo que
se mide turbidimétricamente después de la aglutinación.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Suero
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
Estabilidad: 24 horas a 15-25 °C
3 días a 2-8 °C
4 semanas a (-15)-(-25) C (congelar sólo una vez)
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2-6: Preciset RF
Modo de calibración RCM
Frecuencia de calibraciones Calibración completa
- después de 180 días (observe la fecha de caducidad)
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado con el estándar 64/2 de la
OMS
Limitaciones del análisis - Interferencias
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Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración del
FR de 14 UI/mL.
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 40 para la bilirrubina
conjugada y de 60 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 40 mg/dL ó 624 μmol/L y de la bilirrubina no conjugada: aprox.
60 mg/dL ó 1026 μmol/L).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 300 (concentración
de hemoglobina: aprox. 186 μmol/L ó 300 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):14 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 2000. La
correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la concentración de
triglicéridos no es concluyente.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Efecto prozona (high-dose hook): Aplicando la verificación cinética y con
concentraciones de FR hasta 6000 UI/mL, no hubo resultados erróneos sin aviso.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).
Existe la posibilidad de que otras sustancias y/o factores interfieran con el
presente test y causen resultados poco fiables.
Para el diagnóstico, los resultados obtenidos con el test siempre deben evaluarse
junto a la anamnesis del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de otros
análisis.
Límites e intervalosIntervalo de medición10-130 UI/mL
Determinar las muestras con concentraciones superiores por la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:5. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 5.
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Valores teóricos< 14 UI/mL
Fosfatasa Alcalina
CaracterísticasLa fosfatasa alcalina consta de cuatro genotipos estructurales en suero: el tipo de
origen hepático, óseo y renal, el tipo intestinal, el tipo placentario y la variante de
las células germinales. La fosfatasa alcalina se encuentra en los osteoblastos, los
hepatocitos, los riñones, el bazo, la placenta, la próstata, los leucocitos y el
intestino delgado. El tipo de origen hepático, óseo y renal es de particular
importancia.
Se registran valores elevados de fosfatasa alcalina en todas las formas de la
colestasis, especialmente en la ictericia obstructiva. Su actividad también está
elevada en enfermedades del esqueleto tales como la enfermedad de Paget, el
hiperparatiroidismo, el raquitismo, la osteomalacia, así como en fracturas y
tumores malignos. En niños y adolescentes se observa frecuentemente un fuerte
incremento de la actividad de la fosfatasa alcalina, pues cuando el crecimiento
óseo se acelera, la actividad de los osteoblastos aumenta.
El método de determinación fue descrito primeramente por King y Armstrong,
modificado por Ohmori, Bessey, Lowry y Brock, y finalmente optimizado por
Hausamen y cols. En 1983, la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC)
recomendó un método estandarizado para determinar la fosfatasa alcalina con una
concentración de substrato óptima y el empleo de 2-amino-2-metil-1-propanol
como tampón y los cationes magnesio y cinc. El test aquí descrito ha sido
desarrollado a partir de estas recomendaciones y ha sido mejorado en cuanto al
rendimiento y la estabilidad. La prueba ha sido estandarizada frente a la fórmula
de referencia de la IFCC indicada más arriba.
Principio del testTest colorimétrico según un método estandarizado
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En presencia de iones de magnesio y cinc, las fosfatasas desdoblan el
p-nitrofenilfosfato a fosfato y p-nitrofenol.
El p-nitrofenol liberado es directamente proporcional a la actividad catalítica de la
ALP. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.
Medidas de precaución y advertencies
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero.
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Plasma tratado con heparina de litio.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 7 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
2 meses a (-15) -(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula propuesta
por la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona
valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
fosfatasa alcalina de 100 U/L (1.67 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 200 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 124 μmol/L o 200 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 2000. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común empleando concentraciones terapéuticas.
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En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición5-1200 U/L (0.084-20.0 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
En este caso, las muestras se diluyen de 1:5. Los resultados de las muestras
diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente por el
factor 5.
Valores teóricos(Valores medidos a 37 °C)
Adultos
Hombres (n = 221) 40-129 U/L (0.67-2.15 μkat/L)
Mujeres (n = 229) 35-104 U/L (0.58-1.74 μkat/L)
Valores de consenso
Hombres 40-130 U/L (0.67-2.17 μkat/L)
Mujeres 35-105 U/L (0.58-1.75 μkat/L)
Niños)
De 1 día de edad < 250 U/L (< 4.17 μkat/L)
De 2-5 días de edad < 231 U/L (< 3.84 μkat/L)
De 6 días-6 meses de edad < 449 U/L (< 7.49 μkat/L)
De 7 meses-1 año de edad < 462 U/L (< 7.69 μkat/L)
De 1-3 años de edad < 281 U/L (< 4.67 μkat/L)
De 4-6 años de edad < 269 U/L (< 4.48 μkat/L)
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De 7-12 años de edad < 300 U/L (< 5.00 μkat/L)
De 13-17 años de edad
(Mujeres)
< 187 U/L (< 3.11 μkat/L)
De 13-17 años de edad
(Hombres)
< 390 U/L (< 6.51 μkat/L)
a) Calculado a partir de intervalos de referencia publicados para el método
ALP opt. (DGKC) empleando un factor de 0.417 derivado de una comparación de
métodos.
Fósforo
CaracterísticasEl 88 % del fósforo que se encuentra en el organismo se localiza en los huesos en
forma de fosfato cálcico como apatito Ca2 + [Ca3(PO4)2]32-. El calcio restante
participa en el metabolismo intermediario de los carbohidratos y se halla en
sustancias fisiológicamente importantes como los fosfolípidos, los ácidos nucleicos
y el ATP. En la sangre, el fósforo está presente en forma de fosfato inorgánico y
ácido fosfórico fijado orgánicamente. La pequeña proporción de fósforo orgánico
extracelular existente se halla casi exclusivamente en forma de fosfolípidos.
El fósforo y el calcio se encuentran en la sangre en una relación de 6 a 10.
El aumento de la concentración de fósforo provoca una disminución del nivel de
calcio, mecanismo que se ve influido por una interacción entre la parathormona y
la vitamina D. Así, el hipoparatiroidismo, la intoxicación con vitamina D y la
insuficiencia renal con escasa filtración glomerular de fósforo provocan
hiperfosfatemia. La hipofosfatemia acompaña el raquitismo, el hiperparatiroidismo
y el síndrome de Fanconi.
El fósforo inorgánico se determina preferentemente a partir de la formación de
fosfomolibdato de amonio con posterior reducción a azul de molibdeno.
90
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Este método tiene el inconveniente que la estabilidad de los reactivos suele ser
problemática. El método aquí presentado se basa en la reacción del fosfato con
molibdato de amonio para formar fosfomolibdato de amonio sin reducción. La
adición de un acelerador permite obtener una reacción más rápida y la aplicación
de un blanco de muestra proporciona resultados más precisos.
Principio del testMétodo por radiación ultravioleta con molibdato.
En presencia de ácido sulfúrico, el fosfato inorgánico forma un complejo de
fosfomolibdato de amonio con el molibdato de amonio que se expresa con la
fórmula (NH4)3[PO4(MoO3)12].
La concentración del fosfomolibdato formado es directamente proporcional a la
concentración de fosfato inorgánico y se mide fotométricamente.
Obtención y preparación de las muestras
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Emplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.
Orina
Recoger la orina en recipientes sin detergente. Una vez recogida la orina,
acidificar con ácido clorhídrico (pH < 3).
Estabilidad en suero/plasma: 24 horas a 15-25 °C
4 días a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
Estabilidad en orina:
Orina de 24 horas: 6 meses a 2-8 °C (muestras acificadas)
Guardar en el refrigerador mientras se recoge.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el Ensayo
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a 2 puntos
• Tras cambiar de lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente al material primario
de referencia NERL.
Factores de conversión: mmol/L x 3.10 = mg/dL
mmol/L x 31 = mg/L
mg/L x 0.0323 = mmol/L
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Limitaciones del análisis - interferencias6Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
fosfato de 0.87 mmol/L (2.7 mg/dL).
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 40 para la bilirrubina
conjugada y de 60 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aproximadamente 684 μmol/L o 40 mg/dL; concentración de la
bilirrubina sin conjugar: aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Se produce una interferencia positiva significativa a un índice H > 300
(concentración de hemoglobina: aproximadamente 186 μmol/L o 300 mg/dL).
Nota: Esta interferencia se debe al fosfato inorgánico producido por acción de la
fosfatasa sobre el fosfato orgánico, ambos liberados de los eritrocitos tras
hemólisis.
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1250. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común empleando concentraciones terapéuticas.
Excepción: Los fosfolípidos contenidos en diversas formulaciones farmacéuticas
liposomales (p.ej. AmBisome) pueden ser hidrolizados por el pH ácido del test
llevando a valores elevados de fosfato.
Orina
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición
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Suero/plasma
0.10-6.46 mmol/L (0.31-20.0 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por
el factor 2.
Orina
1.1-92 mmol/L (3.4-285 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por
el factor 2.
Valores teóricosSuero/plasma
Adultos
0.81-1.45 mmol/L (2.5-4.5 mg/dL)
Niños:
Edad Hombres Mujeres
mmol/L (mg/dL) mmol/L (mg/dL)
1-30 días 1.25–2.25 (3.9–6.9) 1.40–2.50 (4.3–7.7)
1–12 m 1.15–2.15 (3.5–6.6) 1.20–2.10 (3.7–6.5)
1–3 años 1.00–1.95 (3.1–6.0) 1.10–1.95 (3.4–6.0)
4–6 años 1.05–1.80 (3.3–5.6) 1.05–1.80 (3.2–5.5)
7–9 años 0.95–1.75 (3.0–5.4) 1.00–1.80 (3.1–5.5)
10–12 años 1.05–1.85 (3.2–5.7) 1.05–1.70 (3.3–5.3)
13–15 años 0.95–1.65 (2.9–5.1) 0.90–1.55 (2.8–4.8)
16–18 años 0.85–1.60 (2.7–4.9) 0.80–1.55 (2.5–4.8)
Orina
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1a orina de la mañana: 13-44 mmol/L (40-136 mg/dL)
Orina de 24 horas: 13-42 mmol/d (0.4-1.3 g/d
Gamma Glutamiltransferasa (GGT)
CaracterísticasLa γ-glutamiltransferasa contribuye al diagnóstico y seguimiento de las
enfermedades hepatobiliares. La actividad enzimática de la GGT constituye
frecuentemente el único parámetro cuyos valores aumentan en este tipo de
enfermedades y es considerado como uno de los indicadores más sensibles.
Además, la prueba de la γ-glutamiltransferasa es un test sensible para cribar el
alcoholismo encubierto. En el suero de pacientes bajo medicación a largo plazo
con fenobarbital y fenitoína también se detectan actividades aumentadas de GGT.
En 1969, Szasz describió la primera determinación cinética de la GGT en suero
empleando la γ-glutamil-p-nitroanilida como substrato y la glicilglicina como
aceptor. A fin de sortear el problema presentado por la escasa solubilidad de
la-γ-glutamil-p-nitroanilida, Persijn y van der Slik investigaron varios derivados del
compuesto para hallar que la estabilidad y solubilidad del sustrato soluble en agua
L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida son superiores. Los resultados del test se
correlacionan con los obtenidos con el sustrato original.
En 2002, la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) recomendó el
procedimiento estandarizado para determinar la GGT, que incluyen una
concentración de sustrato optimizada, el empleo de NaOH, el tampón de
glicilglicina y una muestra iniciadora de la reacción. El reactivo GGT líquido
cumple con la formulación recomendada por Szasz, si bien su estabilidad y
funcionamiento han sido mejorados. El test ha sido estandarizado de forma
opcional frente al método original de la IFCC y de
Szasz. Los datos de funcionamiento e informaciones aquí presentados son
independientes de la estandarización.
95
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Principio del test Método enzimático, colorimétrico La γ-glutamiltransferasa transfiere el grupo
γ-glutamílico de L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida a la glicilglicina.
La cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoato liberada es proporcional a la actividad de
la GGT en la muestra. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la
absorbancia.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero: Recoger las muestras de suero en tubos estándar.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 7 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente test ha sido estandarizado tanto frente a la formulación
original de la IFCC (de 2002)5 como frente al método GGT publicado por Persijn y
van der Slik (de1976).
96
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Utilizar el valor apropiado del calibrador para la aplicación correspondiente.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis – interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
γ-glutamiltransferasa de 40 U/L (0.67 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 50 para la bilirrubina
conjugada y de 20 para la bilirrubina no conjugada (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 855 μmol/L o 50 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin
conjugar: aproximadamente 342 μmol/L o 20 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 200 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 124 μmol/L o 200 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):10 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1500.
No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnótico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en
cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición3-1200 U/L (0.05-20.0 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
La dilución de las muestras por la función de repetición es de 1:11. Los resultados
de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se multiplican
automáticamente por el factor 11.
Valores teóricosEstandarización frente a Szasz (Persijn, van der Slik)
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Hombres 8-61 U/L 0.13-1.02 μkat/L
Mujeres 5-36 U/L 0.08-0.60 μkat/L
Estandarización frente al método IFCC
Estudio del intervalo de referencia a 37 °C (corregido en 2005)
Hombres (n = 216) 10-71 U/L 0.17-1.19 μkat/L
Mujeres (n = 228) 6-42 U/L 0.10-0.70 μkat/L
Valores consensuales (IFCC)16
Hombres < 60 U/L < 1.00 μkat/L
Mujeres < 40 U/L < 0.67 μkat/L
Glucosa
CaracterísticasLa glucosa es el carbohidrato más importante de la sangre periférica que, al
oxidarse, constituye la mayor fuente de energía celular en el organismo.
La glucosa proveniente de la alimentación se convierte a glucógeno para ser
almacenada en el hígado o a ácidos grasos para ser almacenada en el tejido
adiposo. El estrecho intervalo de concentración de la glucosa en sangre
(glucemia) es controlado por numerosas hormonas, siendo las más importantes
las sintetizadas en el páncreas.
La causa más frecuente de hiperglucemia es la diabetes mellitus, producida por
una deficiencia en la secreción o en la acción de la insulina.
Además, existen numerosos factores secundarios que contribuyen a elevar los
niveles de glucemia, incluyendo la pancreatitis, la disfunción tiroidea, la
insuficiencia renal y las hepatopatías.
La hipoglucemia se observa con menor frecuencia. Está causada por estados
tales como el insulinoma, el hipopituitarismo o el exceso de insulina. La
determinación de la glucosa en orina (glucosuria) se utiliza como procedimiento de
cribado de la diabetes y constituye un auxiliar en la evaluación de la glucosuria, la
detección de defectos en los túbulos renales y la gestión de la diabetes mellitus.
La determinación de la glucosa en el líquido cefalorraquídeo se utiliza en la
98
|
evaluación de la meningitis, la implicación neoplásica de las meninges y trastornos
neurológicos.
Principio del testTest por radiación ultravioleta
Método enzimático de referencia empleando hexoquinasa.
La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa a glucosa-6-fosfato por ATP.
En presencia de NADP, la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa oxida el
glucosa-6-fosfato a gluconato-6-fosfato. No se oxidan otros hidratos de carbono.
La velocidad de formación de NADPH durante la reacción es directamente
proporcional a la concentración de glucosa y se determina fotométricamente.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio, EDTA dipotásico, EDTA con fluoruro
sódico/disódico, EDTA con fluoruro potásico/disódico, oxalato con fluoruro
sódico/potásico y EDTA con fluoruro sódico/citrato/disódico.
Recoger la sangre por punción venosa con un sistema de tubos al vacío en
individuos que estén en ayunas. La estabilidad de la glucosa en las muestras
depende de la temperatura de almacenamiento, la contaminación bacteriana y la
glucólisis. Separar las muestras de plasma o suero sin conservante (NaF) de las
células o del coágulo dentro del lapso de media hora tras su extracción. Si la
sangre se deja coagular tras su extracción y reposar sin ser centrifugada a
temperatura ambiente, la glucosa en suero disminuye en una tasa promedio de 7
99
|
% por hora (0.28-0.56 mmol/L o 5-10 mg/dL). Esta reducción se debe a la
glucólisis. Ésta puede ser inhibida recogiendo las muestras en tubos que
contienen fluoruro sódico.
Estabilidad (sin hemólisis): 8 horas a 15-25 °C 72 horas a 2-8 °C
Estabilidad en plasma con fluoruro: 6- 3 días a 15-25 °C
Orina.
Utilizar un frasco pardo para recoger la orina. Antes de recoger orina de 24 horas,
añadir 5 mL de ácido acético glacial al frasco para conservar la glucosa. Si las
muestras de orina no se conservan adecuadamente pierden, conservadas a
temperatura ambiente durante 24 horas, hasta el 40 % de su contenido de
glucosa.3 Por esta razón, conservar las muestras en hielo mientras se recogen.
LCR.
El líquido cefalorraquídeo puede contener bacterias u otros componentes
celulares. Por esta razón, las muestras de LCR destinadas a la determinación de
glucosa deben analizarse inmediatamente o conservarse a 4 °C o a -20 °C.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
- con cada lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a DI/EM.
Factores de conversión: mmol/L x 18.02 = mg/dL
mmol/L x 0.1802 = g/L
mg/dL x 0.0555 = mmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
glucosa de 3.9 mmol/L (70.3 mg/dL).
100
|
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aproximadamente 621 μmol/L o 1000 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000. No
existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la
turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Orina
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Intervalo de mediciónSuero, plasma, orina y LCR
0.11-41.6 mmol/L (2-750 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente
por el factor 2.
Valores teóricosPlasma
En ayunas 4.11-6.05 mmol/L (74-109 mg/dL)
Orina
1ra orina de la mañana 0.3-1.1 mmol/L (6-20 mg/dL)
101
|
Orina de 24 horas 0.3-0.96 mmol/L (6-17 mg/dL) (orina promedio de 1350 mL/24
h)
Suero, plasma
Adultos 4.11-5.89 mmol/L (74-106 mg/dL)
60-90 años 4.56-6.38 mmol/L (82-115 mg/dL)
> 90 años 4.16-6.72 mmol/L (75-121 mg/dL)
Niños 3.33-5.55 mmol/L (60-100 mg/dL)
Neonatos (1 día) 2.22-3.33 mmol/L (40-60 mg/dL)
Neonatos (> 1 día) 2.78-4.44 mmol/L (50-80 mg/dL)
Orina
Orina de 24 horas < 2.78 mmol/24 h (< 0.5 g/24 h)
Orina aleatoria 0.06-0.83 mmol/L (1-15 mg/dL)
LCR
Niños 3.33-4.44 mmol/L (60-80 mg/dL)
Adultos 2.22-3.89 mmol/L (40-70 mg/dL)
Los valores de glucosa en LCR deberían equivaler al aproximadamente
60 % de los valores en plasma. Para una interpretación clínica adecuada,
compararlos siempre con los valores de plasma obtenidos paralelamente.
Hemoglobina Glicosilada
Características La hemoglobina (Hb), un componente de los eritrocitos, es una proteína de color
rojo formada por cuatro subunidades proteicas de las cuales cada una contiene
una porción hemo. Su función principal es el transporte de oxígeno y de dióxido de
carbono en la sangre. Cada molécula de Hb es capaz de fijar cuatro moléculas de
oxígeno. La Hb consiste en una serie de subfracciones y derivados. Dentro de
este grupo heterogéneo de hemoglobinas, la HbA1c constituye una de las
hemoglobinas glucosiladas, una subfracción formada por la adición de varios
azúcares a la molécula Hb. La HbA1c se forma en dos pasos por la reacción no
enzimática de la glucosa con el grupo amino N-terminal de la cadena β de la
102
|
hemoglobina de adultos normales (HbA). El primer paso es reversible y resulta en
la HbA1c lábil que se reordena en el segundo paso de la reacción para generar la
HbA1c estable.
En los eritrocitos aumenta la cantidad relativa de HbA transformada en HbA1c
estable según la concentración promedio de glucosa en sangre. La conversión a
HbA1c estable se encuentra limitada por la duración de la vida media de los
eritrocitos, de aproximadamente 100 a 120 días. En consecuencia, la
concentración de HbA1c determinada refleja el nivel promedio de glucemia en los
2 a 3 meses previos a la medición. Por eso, la HbA1c permite controlar los niveles
de glucemia a largo plazo en individuos con diabetes mellitus. Las
concentraciones de glucosa más recientes influyen más fuertemente en el nivel de
HbA1c.
La relación aproximada entre la HbA1c y el valor medio de glucemia durante los 2
a 3 meses previos ha sido analizada en numerosos estudios.
En un estudio reciente se obtuvo la siguiente correlación:
Estandarización IFCC
• Glucosa media estimada [mmol/L] = 0.146 x HbA1c (mmol/mol) + 0.834 o
• Glucosa media estimada [mg/dL] = 2.64 x HbA1c (mmol/mol) + 15.03
Estandarización según el DCCT/NGSP7
• Glucosa media estimada [mmol/L] = 1.59 x HbA1c (%) - 2.59 o
• Glucosa media estimada [mg/dL] = 28.7 x HbA1c (%) - 46.7
Si el metabolismo del diabético no se controla adecuadamente, aumenta el riesgo
que sufra complicaciones tales como la nefropatía y la retinopatía diabéticas. Por
indicar el nivel medio de glucemia, la HbA1c proporciona para diabéticos un
pronóstico de la evolución de las complicaciones propias de la enfermedad.
Para el control a largo plazo de la glucemia, generalmente resulta suficiente
determinar la HbA1c cada 3 ó 4 meses. En ciertas situaciones clínicas, como en la
diabetes gestacional o al modificar el tratamiento de forma relevante, puede ser
conveniente medir la HbA1c en intervalos de 2 a 4 semanas.
103
|
Principio del testEl presente método utiliza TTABa) como detergente en el reactivo hemolizante
para eliminar la interferencia producida por los leucocitos (TTAB no lisa los
leucocitos). La muestra no requiere ser pretratada para eliminar la HbA1c lábil.
El ensayo determina todas las variantes de la hemoglobina glucosiladas en el
término N de la cadena ß cuyas regiones reconocibles por anticuerpos sean
idénticas a las de la HbA1c. De este modo, el test puede emplearse para averiguar
tanto el estado metabólico de pacientes con uremia como las hemoglobinopatías
más frecuentes (HbAS, HbAC, HbAE).
a) TTAB = bromuro de tetradeciltrimetilamonio
Hemoglobina A1c
La determinación de HbA1c se basa en el inmunoensayo turbidimétrico de
inhibición (TINIA) para sangre total hemolizada.
▪ Muestra y adición de R1 (tampón/anticuerpo)
La glucohemoglobina (HbA1c) en la muestra reacciona con el anticuerpo anti-
HbA1c para formar complejos solubles antígeno anticuerpo.
Debido a que existe un único punto específico de fijación para el anticuerpo anti-
HbA1c en la molécula de HbA1c, no pueden formarse complejos insolubles.
▪ Adición de R2 (tampón/polihapteno) e inicio de la reacción:
Los polihaptenos reaccionan con los anticuerpos anti-HbA1c excesivos y forman
un complejo anticuerpo-polihapteno insoluble que puede ser determinado
turbidimétricamente.
Hemoglobina
La hemoglobina liberada de la muestra hemolizada es transformada a un derivado
con un espectro de absorción característico y se mide bicromáticamente durante la
fase de preincubación (muestra + R1) de la reacción inmunológica descrita. Por
consiguiente no se requiere un reactivo Hb por separado.
El resultado final se expresa como HbA1 en mmol/mol o HbA1c en % y se calcula
a partir del cociente HbA1c/Hb de la manera siguiente:
Protocolo 1 (HbA1c en mmol/mol según la IFCC):
104
|
HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) × 1000
Protocolo 2 (HbA1c porcentual según el DCCT/NGSP):HbA1c (%) = (HbA1c/Hb) × 91.5 + 2.15
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Sangre venosa o capilar anticoagulada o hemolizado.
Los únicos anticoagulantes aceptables son la heparina de litio, el EDTA di y
tripotásico, el fluoruro/EDTA disódico, la heparina sódica y el fluoruro/oxalato
potásico.
Estabilidad: 3 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C
Congelar sólo una vez. Mezclar la muestra cuidadosamente antes del uso.
Preparación de hemolizado para la aplicación en hemolizado (Este punto del
proceso se realiza automáticamente al interior del equipo Cobas c311)
Calibración de las aplicaciones en sangre total y hemolizado
HbCalibradores S1-S2: C.f.a.s. HbA1c
Modo de calibración Lineal
HbA1cCalibradores S1-S6: C.f.a.s. HbA1c
Modo de calibración Spline
Intervalo de calibraciones Hb y HbA1c: se recomienda efectuar una calibración
completa
- después de 29 días (observe la fecha de caducidad)
105
|
- tras cambiar de lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Siempre calibrar las pruebas Hb y HbA1c al mismo tiempo. Desactivar la
calibración automática en caso de control de calidad no exitoso.
Trazabilidad: Este método ha sido estandarizado frente al método de referencia
aprobado por la IFCC para la medición de la HbA1c en sangre humana y puede
transferirse a resultados que pueden rastrearse hasta el método DCCT/NGSP
mediante cálculo.
Nota relativa a las aplicaciones en sangre total y hemolizadoPara estas aplicaciones, los valores de calibrador C.f.a.s. HbA1c concuerdan con
el lote de reactivos. En la respectiva hoja de valores electrónicamente disponible
se indican los valores de calibrador exactos para cada aplicación y cada
combinación de lote de calibrador C.f.a.s. HbA1c y reactivo Tina-quant HbA1c
Gen.3. Introducir el valor asignado al calibrador específico del lote y de la
aplicación. Emplear únicamente el calibrador C.f.a.s. HbA1c apropiado.
La calibración sólo puede efectuarse si el analizador está equipado con el pack de
reactivo cobas c Hemolyzing Reagent Gen.2, 51 mL, Ref. 04528182 190
Cálculo del cociente de la HbA1c
Para calcular el valor de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y el valor de la
HbA1c en % (DCCT/NGSP)
Limitaciones – interferencia para la aplicación en sangre total y hemolizado1. Para el diagnóstico, los valores de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y los valores
de la HbA1c en % (DCCT/NGSP) deben emplearse conjuntamente con la
información obtenida por otros procedimientos diagnósticos y evaluaciones
clínicas.
2. El test está concebido exclusivamente para la medición exacta y precisa de la
HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP). Por ello, no deben darse a
conocer los resultados individualmente obtenidos para Hb total y HbA1c.
3. Interpretar siempre con gran cautela cualquier tipo de resultado de pacientes
con variantes de Hb. Las hemoglobinas anormales pueden afectar la vida media
106
|
de los eritrocitos o la velocidad de glucosilación en vivo. En estos casos, aun
obteniendo resultados analíticamente correctos, no se dispone de un control del
nivel glucémico equivalente al de personas con hemoglobina normal. No emplear
la HbA1c para diagnosticar la diabetes cuando se sospecha que la presencia de
variantes de Hb (p. ej. HbSS, HbCC o HbSC) influye en la correlación entre el
valor de HbA1c y el control glucémico.
4. Toda causa de disminución de la supervivencia eritrocitaria o de la vida media
de los eritrocitos reducirá la exposición de éstos a la glucosa disminuyéndose el
valor de HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP) aun cuando el nivel
promedio de glucemia sea elevado en función del tiempo. La reducción de la vida
media de los eritrocitos puede deberse, entre otros, a la anemia hemolítica u otras
enfermedades hemolíticas, a células falciformes de carácter homocigoto, al
embarazo o a hemorragias crónicas o recientes de gran magnitud. Asimismo, las
transfusiones de sangre recientes pueden alterar los valores de HbA1c en
mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP). Se recomienda interpretar los resultados
de HbA1c de los respectivos pacientes con cautela y no considerarlos para el
diagnóstico de la diabetes mellitus.
5. Este test no detecta la HbF glucosilada, ya que no contiene la cadena beta
glucosilada característica de la HbA1c. Sin embargo, la HbF se mide en el test de
Hb total y por consiguiente, las muestras con altas concentraciones de HbF (> 10
%) pueden producir resultados de HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en %
(DCCT/NGSP) inferiores a los previstos.
6. Los valores de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y los valores de la HbA1c en %
(DCCT/NGSP) no son aptos para el diagnóstico de la diabetes gestacional.
7. En casos muy raros de diabetes tipo 1 de evolución rápida, los valores de la
HbA1c aumentan con retraso en comparación con los valores de la glucosa. En
tales casos, la diabetes mellitus debe diagnosticarse en base a las
concentraciones plasmáticas de la glucosa y/o los síntomas clínicos típicos.
Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial.
107
|
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para la bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas con una concentración de
Intralipid de hasta 600 mg/dL. No existe ninguna correlación satisfactoria entre la
concentración de triglicéridos y turbidez.
Glucemia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de glucosa de
55.5 mmol/L (1000 mg/dL). No se requieren muestras recogidas en ayunas.
Factores reumatoides: Sin interferencias significativas hasta un nivel de factor
reumatoide de 750 UI/mL.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Otros: Los anticuerpos anti-HbA1c empleados en el presente estuche no producen
reacciones cruzadas con HbA0, HbA1a, HbA1b, hemoglobina acetilada,
hemoglobina carbamilada, albúmina glucosilada ni con HbA1c lábil.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Valores teóricosProtocolo 1 (HbA1c en mmol/mol según la IFCC): 29-42 mmol/mol de HbA1c
Protocolo 2 (HbA1c porcentual según el DCCT/NGSP): 4.8-5.9 % de HbA1c
Según las recomendaciones de la
Asociación Americana de Diabetes, los valores superiores a 48 mmol/mol de
HbA1c (IFCC) o 6.5 % de HbA1c (DCCT/NGSP) pueden emplearse para el
diagnóstico de la diabetes mellitus.25,29 Los pacientes con valores de HbA1c
dentro del intervalo de 39-46 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o 5.7-6.4 % de HbA1c
(DCCT/NGSP) corren el riesgo de desarrollar una diabetes.
Si la diabetes no se controla adecuadamente, las concentraciones de HbA1c
pueden alcanzar e incluso superar 195 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o los 20 % de
HbA1c (DCCT/NGSP). Se recomienda la intervención terapéutica a partir de
108
|
niveles de 64 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o 8 % de HbA1c (DCCT/NGSP). Los
diabéticos con niveles de HbA1c inferiores a 53 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o del
7 % de HbA1c (DCCT/NGSP) cumplen con los objetivos fijados por la Asociación
Americana de Diabetes.
Los niveles de HbA1c inferiores al intervalo de referencia establecido pueden
indicar un episodio reciente de hipoglucemina, la presencia de variantes de Hb o
bien la reducción de la vida media de los eritrocitos.
HDL Colesterol
CaracterísticasLas lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoproteins, HDL) son
responsables del transporte inverso del colesterol de las células periféricas al
hígado. En el hígado, el colesterol es transformado a ácidos biliares que son
excretados al intestino a través de las vías biliares. El seguimiento del colesterol
HDL en suero es de importancia clínica porque existe una correlación inversa
entre la concentración sérica del colesterol HDL y el riesgo de sufrir
arteriosclerosis. Concentraciones elevadas del colesterol
HDL protegen contra cardiopatías coronarias mientras que concentraciones
disminuidas del colesterol HDL, especialmente en combinación con valores
elevados de triglicéridos, implican un elevado riesgo cardiovascular. Se han
creado estrategias para aumentar el nivel de colesterol HDL con el objeto de tratar
las enfermedades cardiovasculares.
Se dispone de diversos métodos para determinar el colesterol HDL, incluyendo la
ultracentrifugación, la electroforesis y la cromatografía líquida de alta presión
(CLAP), que están basados tanto en la precipitación como en la determinación
directa. Este último método se emplea en la rutina. La determinación directa del
colesterol HDL en muestras de suero ha sido abordada desde numerosas
perspectivas que incluyen el uso de partículas de respuesta magnética como
109
|
combinaciones de polianiones y metales, así como el uso de polietilenglicol (PEG)
con anticuerpos anti-apoproteína B y
anti-apoproteína CIII.
Este método automatizado destinado a la determinación directa del colesterol HDL
en suero y plasma utiliza enzimas modificadas por PEG y sulfato de dextrano. Las
enzimas colesterol esterasa y colesterol oxidasa modificadas por PEG presentan
actividades catalíticas selectivas frente a las fracciones de lipoproteínas
aumentándose la reactividad en el orden siguiente: LDL < VLDL ≈ quilomicrones <
HDL.
Los resultados obtenidos con muestras recogidas después de comer son
ligeramente inferiores a los obtenidos en ayunas. Con el método betaquant se
obtuvieron resultados postprandiales comparables.
El test directo de Roche para la determinación del colesterol HDL cumple con los
objetivos sentados en 1998 por el National Institute of Health (NIH) y del National
Cholesterol Education Program (NCEP) en lo relativo a un funcionamiento
analítico aceptable. Los resultados obtenidos con este método se correlacionan
con aquellos obtenidos por métodos basados en la precipitación y en la
ultracentrifugación.
Principio del test Test colorimétrico enzimático homogéneo.
En presencia de iones de magnesio, el sulfato de dextrano forma complejos
hidrosolubles, selectivamente con LDL, VLDL y quilomicrones resistentes contra
las enzimas modificadas por PEG.
La concentración del colesterol HDL se determina enzimáticamente por la
colesterol esterasa y colesterol oxidasa acopladas con PEG a los grupos amínicos
(aprox. 40 %).
La colesterol esterasa provoca el desdoblamiento de los ésteres de colesterol a
colesterol libre y ácidos grasos.
110
|
En presencia de la peroxidasa, el peróxido de hidrógeno formado reacciona con 4-
aminoantipirina y HSDA para formar un colorante purpúreo azul. La intensidad del
colorante es directamente proporcional a la concentración de colesterol que se
mide fotométricamente.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.
El plasma con EDTA produce valores disminuidos.
Es posible emplear muestras recogidas en ayunas o después de comer.
Recoger la sangre empleando un tubo o una jeringa de vacío. Se recomienda
analizar las muestras el mismo día en que fueron recogidas.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 7 días a 2-8 °C
30 días a (-60) -(-80) °C
Se comunica que EDTA estabiliza las lipoproteínas.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
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S2: C.f.a.s. Lipids
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: Este método ha sido estandarizado frente al método de referencia
definido por el CDC (método de comparación designado).
Factores de conversión: mmol/L x 38.66 = mg/dL
mmol/L x 0.3866 = g/L
mg/dL x 0.0259 = mmol/L
Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
colesterol de 1 mmol/L (38.7 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 30 para la bilirrubina
conjugada y de 60 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aproximadamente 513 μmol/L o 30 mg/dL; concentración de la
bilirrubina sin conjugar: aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1200
(concentración de hemoglobina: aproximadamente 745 μmol/L o 1200 mg/dL).
Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 1800. Sin
interferencias por triglicéridos nativos hasta 13.7 mmol/L
(1200 mg/dL). No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que
corresponde a la turbidez) y la concentración de triglicéridos.
Otros: Las concentraciones elevadas de ácidos grasos libres y de proteínas
desnaturalizadas pueden causar valores falsos elevados de colesterol HDL.
En casos aislados, concentraciones elevadas de inmunoglobulinas pueden
proporcionar resultados falsos elevados de colesterol HDL.
Las concentraciones de ácido ascórbico de hasta 2.84 mmol/L (50 mg/dL) no
interfieren con el test.
Una función hepática anormal afecta el metabolismo de lípidos; en estos casos, el
valor diagnóstico de los resultados de colesterol HDL y LDL es limitado. En ciertos
112
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pacientes con una función hepática patológica, los resultados de colesterol HDL
pueden diferir considerablemente respecto de los obtenidos por el método de
comparación designado.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Las intoxicaciones por paracetamol suelen tratarse con N-acetilcisteína. Tanto la
N-acetilcisteína, usada en concentraciones terapéuticas como antídoto, como el
metabolito de paracetamol, la N-acetil-p-benzoquinona imina (NAPQI), pueden
causar valores falsamente bajos.
La venopunción debe efectuarse antes de administrar metamizol. Si la
venopunción se realiza inmediatamente después o durante la administración de
metamizol, pueden obtenerse resultados falsamente bajos.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición0.08-3.12 mmol/L (3-121 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas con la función de repetición se multiplican automáticamente por
el factor 2.
Valores teóricosSin riesgo Riesgo moderado Alto riesgo
Mujeres: > 1.68 mmol/L 1.15-1.68 mmol/L < 1.15 mmol/L
(> 65 mg/dL) (45-65 mg/dL) (< 45 mg/dL)
Hombres: > 1.45 mmol/L 0.90-1.45 mmol/L < 0.90 mmol/L
113
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(> 55 mg/dL) (35-55 mg/dL) (< 35 mg/dL)
Directivas del Programa Educativo del Colesterol de los EstadosUnidos (NCEP):31
< 40 mg/dL: Colesterol HDL bajo (principal factor de riesgo para enfermedades
cardiovasculares)
≥ 60 mg/dL: Colesterol HDL alto (factor "negativo" de riesgo para enfermedades
cardiovasculares)
El colesterol HDL se ve afectado por una serie de factores como el tabaquismo, el
deporte, las hormonas, el sexo y la edad.
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden
aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios
valores.
Hierro
CaracterísticasEl hierro ingerido es absorbido principalmente como Fe2+ en el duodeno y el
yeyuno superior. La forma trivalente y el componente Fe3+ unido al grupo hemo
del hierro de la alimentación requieren para su reducción vitamina C.
La asimilación diaria de hierro es de aprox. 1 mg. Los iones de Fe2+ que penetran
en las células de la mucosa se unen a sustancias de transporte.
Antes de pasar al plasma, la ceruloplasmina los oxida a Fe3+, ligándose entonces
en esta forma a la transferrina. Los iones de hierro se transportan en el plasma
sanguíneo en forma de complejos de transferrina-hierro, siendo la capacidad
máxima de transporte de cada molécula de proteína de 2 iones de Fe3+. El hierro
sérico se encuentra fijado casi por completo a la transferrina.
La determinación del hierro (no hemínico) sirve para el diagnóstico y el tratamiento
de anemias ferropénicas, hemocromatosis (una enfermedad en la que los dos
pigmentos férricos, la hemosiderina y la hemofuscina, forman depósitos tisulares
que se manifiestan por pigmentación cutánea) y nefropatías crónicas. El hierro se
determina en el diagnóstico y el seguimiento de anemias microcíticas (debidas por
114
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ejemplo a trastornos del metabolismo férrico y hemoglobinopatías), anemias
macrocíticas (debidas por ejemplo a la deficiencia de vitamina B12 o de ácido
fólico y a trastornos metabólicos de origen desconocido inducidos por fármacos),
así como de anemias normocíticas y renales (deficiencia de eritropoyetina),
anemias hemolíticas, hemoglobinopatías, enfermedades de la médula ósea y
daños tóxicos de la médula ósea.
Son numerosos los métodos fotométricos destinados a la determinación del hierro.
Todos siguen los siguientes pasos:
▪ Liberación de los iones de Fe3+ del complejo de transferrina por medio de ácidos
o detergentes,
▪ Reducción de los iones de Fe3+ a iones de Fe2+,
▪ Eeacción de los iones de Fe2+ para formar un complejo cromático.
El presente método se basa en el método FerroZine sin desproteinización.
Principio del testTest colorimétrico.
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero (sin hemólisis).
Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio. No usar plasma con EDTA u
oxalato.
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Separar el suero o el plasma de las células o del coágulo dentro de 1 hora.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 7 días a 15-25 °C
3 semanas a 2-8 °C
Varios años a (-15) - (-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a 2 puntos
• Después de cambiar el cobas c pack
• Tras 7 días en el analizador
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Intervalo de medición0.90-179 μmol/L (5.00-1000 μg/dL, 0.05-10.0 mg/L)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En muestras con concentraciones superiores, la función de repetición
del test disminuye el volumen de la muestra por el factor 2.1. Los resultados son
multiplicados automáticamente por este factor.
Límites inferiores de mediciónLímite de detección inferior del test
0.90 μmol/L (5.00 μg/dL, 0.05 mg/L)
Valores teóricosAdultos: 5.83-34.5 μmol/L (33-193 μg/dL)
La concentración de hierro en suero y plasma depende de la ingestión de hierro y
está sujeta a variaciones circadianas.
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Lactato
CaracterísticasLa glucólisis anaeróbica aumenta marcadamente el lactato en la sangre,
provocando un aumento de los niveles de piruvato, especialmente bajo esfuerzo
prolongado. La causa común de niveles incrementados de piruvato y lactato
sanguíneos es la anoxia secundaria a condiciones como el choque, la neumonía y
la insuficiencia cardíaca congestiva. También puede haber acidosis láctica en la
insuficiencia renal y la leucemia.
La deficiencia de tiamina y la cetoacidosis diabética están asimismo asociadas a
niveles incrementados de lactato y piruvato.
En la meningitis bacteriana, se observa un aumento de los niveles de lactato en el
líquido cefalorraquídeo (LCR). Asimismo se observan niveles elevados de LCR en
la hipocapnia, el hidrocefalo, los abscesos cerebrales, la isquemia cerebral y
cualquier condición clínica asociada a una oxigenación reducida del cerebro y/o
una presión intracraneal incrementada.
En el diagnóstico y el tratamiento de la acidosis láctica (acidez anormalmente
elevada en la sangre) se emplean mediciones de lactato que evalúan el estado
acidobásico.
Desde hace algunos años, se van imponiendo en la determinación del lactato los
métodos enzimáticos frente a los métodos colorimétricos y de valoración. Por lo
general, los métodos enzimáticos son más sencillos, ofreciendo mayor
especificidad, exactitud y reproducibilidad.
El primer método enzimático descrito para la determinación del lactato se basó en
la transferencia de hidrógeno del lactato al ferricianuro potásico mediante lactato
deshidrogenasa. Pero este método tenía el inconveniente de ser bastante
laborioso por lo que no fue bien aceptado.
Los métodos posteriores se referían a la medición ultravioleta de la formación de
la NADH. En 1974, Gutmann y Wahlefeld1 describieron un procedimiento de
lactato que mide la NADH formada por oxidación de lactato catalizado por LD,
empleando la hidracina como agente de captación del piruvato.
118
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Un método descrito por Noll2 se basa asimismo en la acción catalítica de la LD,
pero incluye ALT en la mezcla de reacción para eliminar más rápidamente el
piruvato formado por la conversión del lactato.
El método aquí presentado emplea una reacción enzimática para transformar el
lactato en piruvato. El peróxido de hidrógeno producido por esta reacción se
emplea después en una reacción enzimática para generar un colorante. Este
método ofrece una mayor estabilidad del reactivo que los métodos enzimáticos
ultravioletos anteriores.
Principio de testTest colorimétrico.
El L-lactato es oxidado a piruvato por la enzima específica lactato oxidasa
(LOD). La peroxidasa (POD) se emplea para generar un colorante utilizando el
peróxido de hidrógeno producido en la primera reacción.
La intensidad cromática del complejo formado es directamente proporcional a la
concentración de L-lactato. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero: No emplear muestras de suero.Plasma tratado con fluoruro sódico/oxalato potásico y fluoruro sódico/heparina
sódica.
Centrifugar dentro de los 15 minutos después de obtener la muestra.
LCR: El LCR puede usarse en la forma obtenida.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
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Nota1. El nivel de lactato aumenta rápidamente bajo actividades físicas. El tiempo
requerido para volver a valores normales de lactato depende del estado físico
individual. Generalmente bastan 30 minutos de reposo.
2. Las muestras de sangre deben extraerse de una vena libre de estasis, si bien
una hemostasis mínima (inferior a 30 segundos) no afecta el nivel de lactato. Evite
en lo posible el uso de un torniquete.
3. Una vez activado el proceso de glucólisis en muestras de sangre, su nivel de
lactato puede aumentar rápidamente. Ya que la presencia de las células favorece
el proceso de glucólisis, resulta fundamental separarlas rápidamente de la muestra
a fin de obtener resultados exactos de lactato. El plasma heparinizado es
aceptable, si se inhibe la glucólisis conservando la sangre completa en hielo y
separando el plasma de las células en el plazo de 15 minutos tras la recogida.
Estabilidad en plasma (separado): 8 horas a 15-25 °C 14 días a 2-8 °C
Estabilidad en LCR: 3 horas a 15-25 °C 24 horas a 2-8 °C 2 meses a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibración calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un estándar
primario.
Factores de conversión: mmol/L x 9.009 = mg/dL
mmol/L x 90.09 = mg/L
mg/dL x 0.111 = mmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
lactato de 2.2 mmol/L (19.8 mg/dL).
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Plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 28 para la bilirrubina
conjugada y de 60 para la bilirrubina no conjugada (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 479 μmol/L ó 28 mg/dL y de la bilirrubina no conjugada: aprox.
1026 μmol/L ó 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1000 mg/dL).
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepción: El dobesilato de calcio provoca valores falsamente bajos de lactato.
Fluctuando de lote a lote de reactivo, se registran interferencias positivas con el
glucolato, un metabolito del etilenglicol.
LCR
Sin interferencias conocidas.
Con fines diagnósticos, los resultados obtenidos con el test siempre deben
evaluarse junto al historial del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de
otros análisis.
Límites e intervalosIntervalo de medición0.2-15.5 mmol/L (1.8-140 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del
ciclo es de 1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de
repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.
Valores teóricosPlasma 0.5-2.2 mmol/L (4.5-19.8 mg/dL) Venoso
LCR: 1.1-6.7 mmol/L (10-60 mg/dL) Neonatos
1.1-4.4 mmol/L (10-40 mg/dL) de 3-10 días
1.1-2.8 mmol/L (10-25 mg/dL) > 10 días de edad
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1.1-2.4 mmol/L (10-22 mg/dL) Adultos
2.25 Lactato Deshidrogenasa (LDH)
CaracterísticasLa enzima lactato deshidrogenasa (LDH) se halla ampliamente distribuida en los
tejidos, especialmente en el corazón, el hígado, los músculos y los riñones. La
LDH sérica puede dividirse en cinco isoenzimas diferentes, discernibles a partir de
su movilidad electroforética. Cada isoenzima es un tetrámero compuesto de dos
subunidades diferentes. Estas subunidades corresponden al corazón y músculo,
de acuerdo a sus cadenas de polipéptidos. Existen dos homotetrámeros, la LDH-1
(corazón) y la LDH-5 (músculos), así como tres isoenzimas híbridas.
Niveles elevados de LDH sérica acompañan diversos cuadros patológicos.
La actividad más alta se observa en pacientes con anemia megaloblástica,
carcinoma diseminado y choque. Un aumento moderado se produce en los
trastornos musculares, el síndrome nefrótico y la cirrosis. En caso de infarto de
miocardio o pulmonar, leucemia, anemia hemolítica y hepatitis no vírica, la
actividad de la LDH sólo está ligeramente elevada. El presente método se deriva
de la formulación recomendada por la IFCC, y ha sido mejorado en cuanto al
rendimiento y la estabilidad.
Principio del testAnálisis por radiación ultravioleta.
La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la conversión de L-lactato a piruvato.
En este proceso, el NAD se reduce a NADH.
La tasa inicial de formación de NADH es directamente proporcional a la actividad
catalítica de la LDH. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la
absorbancia
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras. Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí
Indicados:
Suero (sin hemólisis).
Plasma tratado con heparina de litio. El plasma debe estar exento de hemólisis y
de células.
Separar el suero o el plasma inmediatamente del coágulo o de las células.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 7 días a 15-25 °C
La muestra puede conservarse durante 4 días a 2-8 °C o durante 6 semanas a -20
°C. En algunas enfermedades (p. ej., hepatopatías, afecciones
musculoesqueléticas, tumores malignos), las isoenzimas LDH-4 y LDH-5 se
encuentran aumentadas e inestables en muestra refrigeradas y congeladas.
Así pues, las muestras de los pacientes que padecen estas enfermedades pueden
dar un valor erróneo de LDH.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la formulación
original de la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que
proporciona valores absolutos y la absortividad ε específica del substrato.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferencias
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Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la
lactato deshidrogenasa de 200 U/L (3.34 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis Sin interferencias significativas hasta un índice H de 15 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 9.6 μmol/L o 15 mg/dL).
La contaminación con eritrocitos provoca resultados aumentados, ya que el nivel
de analito en los eritrocitos es mayor que en los sueros normales. La magnitud de
la interferencia depende del contenido de analito en los eritrocitos lisados.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Límites e intervalosIntervalo de medición10-1000 U/L (0.17-16.7 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los resultados de las
muestras diluidas con la función de repetición se multiplican automáticamente por
el factor 2.5.
Valores teóricos: Según la IFCC, medidos a 37 °C:
Mujeres 135-214 U/L (2.25-3.55 μkat/L)
Hombres 135-225 U/L (2.25-3.75 μkat/L)
Niños (2-15 años) 120-300 U/L (2.00-5.00 μkat/L)
Recién nacidos (4-20 días) 225-600 U/L (3.75-10.0 μkat/L)
Valores de consenso:
Hombres y mujeres hasta 250 U/L (hasta 4.2 μkat/L)
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Lipasa
CaracterísticasLas lipasas son glucoproteínas con un peso molecular de 47000 daltons.
Se definen como hidrolasas de triglicéridos que catalizan el desdoblamiento de
triglicéridos a diglicéridos con formación subsiguiente de monoglicéridos y ácidos
grasos. Junto con la α-amilasa, la lipasa pancreática constituye indudablemente el
parámetro químico-clínico más importante en el diagnóstico diferencial de
enfermedades pancreáticas. A nivel internacional, la determinación de la actividad
de la lipasa ha adquirido mayor importancia gracias a su alta especificidad y su
liberación rápida. Después de una pancreatitis aguda, la actividad de la lipasa
aumenta en el plazo de 4 a 8 horas, alcanza su máximo a las 24 horas y vuelve a
disminuir tras 8 a 14 días. Sin embargo, no existe correlación alguna entre la
actividad de la lipasa determinada en suero y el grado de la lesión pancreática.
Se han descrito numerosos métodos para determinar la lipasa en los que la
disminución del substrato se mide por turbidimetría o nefelometría o se
comprueban los productos de degradación formados.
El presente método se basa en el desdoblamiento de un substrato cromático
específico para la lipasa emulsionado con ácidos biliares, el éster
1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido glutárico- (6-metilresorufina). El presente test
comprueba específicamente la actividad de la enzima pancreática combinando el
ácido biliar con la colipasa. En caso de ausencia de colipasa, la actividad de la
lipasa es prácticamente inexistente.
La colipasa activa solamente la lipasa pancreática y no las otras enzimas
Lipolíticas presentes en el suero. La alta proporción de colatos garantiza que las
esterasas presentes en el suero no pueden reaccionar con el substrato cromático
debido a la alta tensión negativa de su superficie.
Principio del test
125
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Test enzimático colorimétrico con éster de 1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido
glutárico-(6-metilresorufina) como substrato.
El sustrato cromático de lipasa, el éster de 1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido
glutárico- (6-metilresorufina) es desdoblado bajo la acción catalítica de la solución
de lipasa alcalina formando 1,2-O-dilauril-rac-glicerol y un producto intermedio
inestable, el éster de ácido glutárico-(6-metilresorufina). En una solución alcalina,
éste se descompone espontáneamente para formar ácido glutárico y
metilresorufina. La adición de detergente y colipasa aumenta la especificidad
analítica para la lipasa pancreática.
La intensidad cromática del colorante rojo formado es directamente proporcional a
la actividad de la lipasa y puede ser determinada fotométricamente.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 1 semana a 15-25 °C
1 semana a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
Calibración
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Calibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
- con cada lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado manualmente frente a un
reactivo del sistema Roche utilizando pipetas calibradas y un fotómetro manual
que proporciona valores absolutos y la absorptividad ε específica del substrato.
Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una actividad
de la lipasa de 60 U/L (1.00 μkat/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 50 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aprox. 855 μmol/L o 50 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 620 μmol/L o 1000 mg/dL).
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos deuso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición3-300 U/L (0.05-5.01 μkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.
La dilución de las muestras por la función de repetición es de 1:10. Los resultados
127
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de las muestras diluidas por la función de repetición se multiplican
automáticamente por el factor 10.
Magnesio
CaracterísticasEl magnesio constituye, junto con el potasio, uno de los cationes intracelulares
más importante. El Mg2+ es cofactor de numerosos sistemas enzimáticos. Así que
todas las reacciones enzimáticas dependientes del ATP requieren Mg2+ como
cofactor en el complejo ATP-magnesio.
Aproximadamente el 69 % de los iones de magnesio se encuentra depositado en
los huesos. El resto participa en el metabolismo intermediario, alrededor del 70 %
se halla en forma libre, mientras que el otro 30 % está fijado a proteínas
(especialmente a la albúmina), citratos, fosfato y a otros formadores de complejos.
El nivel sérico de Mg2+ permanece constante dentro de un intervalo muy estrecho
(0.65-1.05 mmol/L). La regulación de la concentración de magnesio se produce
mayormente mediante los riñones, en particular a través de la rama ascendente
del asa de Henle.
El presente test se emplea para el diagnóstico y el control del curso de la
hipomagnesemia (falta de magnesio) y de la hipermagnesemia (exceso de
magnesio). Son numerosos los estudios que demuestran la existencia de una
correlación entre la falta de magnesio y alteraciones de la homeostasis del calcio,
potasio y fosfato relacionadas con trastornos cardíacos tales como las arritmias
ventriculares que no responden a una terapia convencional, la sensibilidad
aumentada contra la digoxina, los espasmos de las arterias coronarias y la muerte
súbita. Otros síntomas concomitantes adicionales consisten en diversos trastornos
neuromusculares y
neuropsiquiátricos. La hipermagnesemia acompaña a la insuficiencia renal aguda
y crónica, al suministro excesivo de magnesio y su liberación a partir del espacio
intracelular.
128
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La determinación de magnesio se lleva a cabo a través de la espectrometría de
absorción atómica (AAS), así como mediante métodos complexométricos.
El método aquí descrito se basa en la reacción del magnesio con el azul de xilidil
en una solución alcalina que contiene EGTA a fin de enmascarar el calcio
presente en la muestra.
Los niveles urinarios de magnesio se determinan por pruebas de depleción de
magnesio.
Principio del testMétodo colorimétrico con determinación del punto final.
▪ Muestra y adición de R1
▪ Adición de R2 e inicio de la reacción:
En solución alcalina, el magnesio forma un complejo purpúreo con azul de xilidil, el
sal de diazonio. La concentración de magnesio se mide fotométricamente por la
disminución de la absorbancia del azul de xilidil.
Precauciones y advertencias
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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.
Suero
Plasma tratado con heparina de litio.
No emplear anticoagulantes que forman complejos tales como EDTA, fluoruro y
oxalato.
Los sistemas de recogida de muestras de diversos fabricantes pueden contener
diferentes materiales que, en ciertos casos, pueden llegar a afectar los resultados
de los análisis. Si las muestras se procesan en tubos primarios (sistemas de
recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de los tubos.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad en suero/plasma: 7 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
Orina:
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Acidificar las muestras de orina a un pH 1 empleando HCl concentrado a fin de
prevenir la precipitación de fosfato amónico-magnésico. Recoger las muestras de
orina en un recipiente que no sea de metal. El instrumento prediluye
automáticamente las muestras de orina con NaCl al 0.9 %.
Estabilidad en orina: 3 días a 15-25 °C
3 días a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos
• Con cada lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido calibrado frente a espectrometría de
absorción atómica.
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factores de conversión: mmol/L x 2.43 = mg/dL
mg/dL x 0.411 = mmol/L
mval/L x 0.5 = mmol/L
mval/L x 1.22 = mg/dL
mval/L = mEq/L
InterferenciasSuero/plasma
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Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 60 mg/dL o 1026 μmol/L).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 800 (concentración
de hemoglobina: aproximadamente 496 μmol/L o 800 mg/dL).
La hemólisis produce resultados aumentados según el contenido exacto del
analito en los eritrocitos lisados.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,
particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).
Orina
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de mediciónSuero/plasma
0.10-2.0 mmol/L (0.243-4.86 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
muestras diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente
por el factor 2.
Orina
0.56-11.0 mmol/L (1.36-26.7 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las
132
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muestras diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente
por el factor 2.
Valores teóricos:Suero/plasma:
Neonatos: 0.62-0.91 mmol/L (1.5-2.2 mg/dL)
5 meses-6 años: 0.70-0.95 mmol/L (1.7-2.3 mg/dL)
6-12 años: 0.70-0.86 mmol/L (1.7-2.1 mg/dL)
12-20 años: 0.70-0.91 mmol/L (1.7-2.2 mg/dL)
Adultos: 0.66-1.07 mmol/L (1.6-2.6 mg/dL)
60-90 años: 0.66-0.99 mmol/L (1.6-2.4 mg/dL)
> 90 años: 0.70-0.95 mmol/L (1.7-2.3 mg/dL)
Orina (24 h):
3.0-5.0 mmol/d (72.9-121.5 mg/d)
Prealbúmina
CaracterísticasLa prealbúmina es una proteína rica en triptófano que tiene una masa molar de
55000 daltons y que se sintetiza en los hepatocitos. En la electroforesis a un pH
de 8.6, precede a la albúmina gracias a su mayor velocidad de migración anódica
y representa una cantidad relativa de < 2.5 %. Su función consiste en unir y
transportar las proteínas fijadoras del retinol (con un peso molecular inferior a
21000 daltons) impidiendo su filtración glomerular. El 30 al 50 % de la prealbúmina
circulante forma un complejo con la proteína fijadora de retinol. Además, fija y
transporta la tiroxina (T4), aunque su afinidad con esta hormona es inferior a la de
la globulina fijadora de tiroxina.
Debido a que la prealbúmina tiene una corta vida media de apenas 2 días, su
concentración sérica disminuye muy rápidamente en caso de que la síntesis
hepatocelular sea insuficiente debido a lesiones hepáticas agudas o a una
alimentación deficiente en proteínas. Se ha publicado que la prealbúmina puede
133
|
actuar como reactante negativo de fase aguda, con concentraciones que
disminuyen muy rápidamente durante inflamaciones agudas.
Para la determinación de la prealbúmina se dispone de diferentes métodos tales
como la inmunodifusión radial, la nefelometría y la turbidimetría.
Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica.
La prealbúmina humana forma un precipitado con un antisuero específico que se
determina por turbidimetría.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.
El uso de plasma tratado con heparina de litio puede provocar valores disminuidos
en unos 6 %. El uso de plasma tratado con EDTA dipotásico puede provocar
valores disminuidos en aproximadamente 5 %.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 3 días a 2-8 °C
6 meses a (-15) - (-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2-S6: C.f.a.s. PAC
Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.s PAC específico del lote por los factores
indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar de la
curva de calibración de 6 puntos.
S2: 0.200 S5: 1.75
134
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S3: 0.400 S6: 2.75
S4: 0.800
Modo de calibración RCM2
Intervalo de calibraciones
Calibración completa
• Tras cambiar de lote de reactivos
• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la preparación de
referencia certificada ERM-DA470k/IFCC en suero humano del Instituto de
materiales y medidas de referencia (IRMM, por sus siglas en inglés).
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factores de conversión: mg/dL x 0.01 = g/L
g/L x 100 = mg/dL
g/L x 18.2 = μmol/L
mg/dL x 0.182 = μmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
prealbúmina de 0.4 g/L (7.28 μmol/L; 40 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:
aproximadamente 1026 μmol/L o 60 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L o 1000 mg/dL).
Los factores reumatoides hasta 400 UI/mL no interfieren en el test.
Efecto prozona (high-dose hook): No se obtienen resultados falsos con
concentraciones de prealbúmina de hasta 2.5 g/L (45.5 μmol/L, 250 mg/dL).
135
|
Límites e intervalosIntervalo de medición0.03-0.8 g/L (0.55-14.6 μmol/L, 3-80 mg/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del
ciclo es de 1:3. Los resultados de las muestras diluidas por la función de repetición
del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 3.
Valores teóricos0.2-0.4 g/L (3.64-7.28 μmol/L o 20.0-40.0 mg/dL)
Proteína C Reactiva (PCR)
GeneralidadesLa proteína C-reactiva es la proteína de fase aguda clásica de las reacciones
inflamatorias. Se sintetiza en el hígado y se compone de cinco cadenas
polipeptídicas idénticas en forma de un anillo de cinco eslabones con un peso
molecular de 105000 daltons. La CRP es el reactante de fase aguda más sensible
y su concentración aumenta muy rápidamente en procesos inflamatorios. La CRP
en complejo activa la vía clásica del complemento.
La respuesta de la CRP frecuentemente precede a los síntomas clínicos,
incluyendo la fiebre. En individuos normales sanos, sólo se detectan vestigios de
CRP con niveles de hasta 5 mg/L. Al iniciarse la respuesta de fase aguda, la
concentración sérica de la CRP aumenta rápida y acentuadamente.
Este aumento puede detectarse tras 6 a 12 horas alcanzando el valor máximo
pasadas 24 a 48 horas. Los niveles superiores a 100 mg/L son consecuencia de
serios estímulos tales como traumatismos de gran magnitud e infecciones severas
(sepsis). La respuesta de la CRP puede ser menos acentuada en pacientes con
hepatopatías. La determinación de CRP sirve para reconocer procesos
136
|
inflamatorios sistémicos, para evaluar el éxito del tratamiento de infecciones
bacterianas con antibióticos, para reconocer infecciones intrauterinas en caso de
amniorrexis prematura, para diferenciar entre las formas activa e inactiva de
enfermedades con infecciones concomitantes, como p.ej. en pacientes con lupus
eritematoso sistémico y colitis ulcerosa, para evaluar la actividad de enfermedades
reumáticas y la eficacia del tratamiento antiinflamatorio, para el reconocimiento
precoz de complicaciones postoperatorias (heridas infectadas, trombosis,
neumonía) y para distinguir entre una infección y una reacción de rechazo tras el
trasplante de médula ósea. El seguimiento postoperatorio de los niveles de
CRP permite comprobar si el paciente se recupera normalmente (los niveles
disminuyen hasta ser normales) o si sufre complicaciones inesperadas (losniveles
permanecen altos). La medición de los cambios en la concentración de CRP
proporciona informaciones útiles para diagnosticar el grado de agudeza y seriedad
de la enfermedad. Asimismo permite establecer hipótesis acerca de su origen.
Generalmente, la persistencia de una concentración sérica elevada de CRP
significa un pronóstico grave que suele indicar la presencia de una infección fuera
de control.
Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica potenciada con partículas. La CRP humana se
aglutina con las partículas de látex recubiertas con anticuerpos monoclonales anti-
CRP. El precipitado se determina por turbidimetría.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio, EDTA bi- o tripotásico.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
Estabilidad: 11 días a 15-25 °C
137
|
2 meses a 2-8 °C
3 años a (-15)-(-25) °C
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s. Proteins
Multiplicar los valores del calibrador C.f.a.s. Proteins específicos del lote por los
factores indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar
de la curva de calibración de 6 puntos.
S2: 0.10000 S5: 2.0000
S3: 0.3325 (c 501/502)
0.3500 (c 311)
S6: 4.0000
S4: 1.0000
Modo de calibración spline 6 puntos
Frecuencia de calibraciones
Calibración completa
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
CálculoLos analizadores calculan automáticamente la concentraciónde analito de cada
muestra.
Factores de conversión: mg/L x 9.52 = nmol/L mg/dL x 95.2 = nmol/L
Mg/L x 0.1 = mg/dL mg/dL x 10 = mg/L
Mg/dL x 0.01 = g/L g/L x 100 = mg/Dl
Limitaciones del análisis - InterferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
CRP de 5.0 mg/L (47.6 nmol/L).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración de
la bilirrubina conjugada y sin conjugar: aprox. 60 mg/dL o 1026 μmol/L).
138
|
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000
(concentración de hemoglobina: aprox. 622 μmol/L ó 1000 mg/dL).
Los factores reumatoides hasta 1200 UI/mL no interfieren en el test.
Efecto prozona (high-dose hook): No se obtienen resultados falsos con
concentraciones de CRP de hasta 1200 mg/L (11424 nmol/L).
Fármacos: Pueden obtenerse valores de CRP falsamente disminuidos obtenidos
de muestras de pacientes tratados con carboxipenicilinas.
Límites e intervalosIntervalo de medición0.3-350 mg/L (2.9-3333 nmol/L)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:2. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 2.
Valores teóricosIntervalo de referencia consensual para adultos:16 < 5 mg/L (< 47.6 nmol/L)
Proteínas Totales en Suero y Plasma
CaracterísticasLas proteínas plasmáticas se sintetizan principalmente en el hígado, las células
plasmáticas, los ganglios linfáticos, el bazo y la médula espinal. En caso de
enfermedad, tanto la concentración de las proteínas totales como sus fracciones
individuales pueden divergir considerablemente de los valores normales. La
hipoproteinemia puede deberse a enfermedades y alteraciones como la
hemorragia, el esprue, el síndrome nefrótico, quemaduras graves, el síndrome de
retención de sales y Kwashiorkor (carencia aguda de proteínas).
La hiperproteinemia puede observarse en casos de deshidratación severa y en
enfermedades como el mieloma múltiple. El porcentaje relativo de las proteínas
139
|
plasmáticas puede modificarse al cambiar el porcentaje de una sola fracción de
estas proteínas. En este caso, la cantidad total de proteína frecuentemente queda
inalterada. La relación entre albúmina y globulina se utiliza frecuentemente como
índice de la distribución entre las fracciones de albúmina y globulina. Esta relación
sufre grandes alteraciones frente a afecciones tales como la cirrosis hepática, la
glomerulonefritis, el síndrome nefrótico, la hepatitis aguda, el lupus eritematoso,
así como en algunas infecciones agudas y crónicas. La medición de la proteína
total se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de una variedad de enfermedades
hepáticas, renales, de la médula ósea así como de otros trastornos metabólicos o
nutricionales.
Principio del testTest colorimétrico.
En solución alcalina, el cobre divalente reacciona con los enlaces peptídicos de las
proteínas formando el color púrpura característico del complejo biuret.
El tartrato sódico potásico impide la precipitación de hidróxido de cobre, mientras
que el yoduro potásico inhibe la autorreducción del cobre.
La intensidad cromática es directamente proporcional a la concentración de
proteína que puede determinarse fotométricamente.
Medidas de precaución y advertencias
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|
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero.
Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Estabilidad: 1 mes a 2-8 °C
6 meses a (-15)-(-25) °C
Separar el suero o el plasma del coágulo o de las células dentro de las 4 horas
después de haber recogido la muestra.
Si la muestra se recoge estando el paciente acostado, la concentración de las
proteínas totales disminuye en 4 a 8 g/L, en comparación con los valores
obtenidos si el paciente está de pie.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibración calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
141
|
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a SRM 927c.
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factor de conversión:g/L x 0.1 = g/dL
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
la proteína total de 66 g/L (6.6 g/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 20 para la bilirrubina
conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada: 20 mg/dL o
342 μmol/L, concentración de la bilirrubina sin conjugar: aprox. 20 mg/dL o 342
μmol/L).
Hemólisis: Sin interferencias significativas
Límites e intervalosIntervalo de medición2.0-120 g/L (0.2-12 g/dL)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:3. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 3.
Valores teóricosValores teóricos según Tietz
Cordón umbilical 48-80 g/L (4.8-8.0 g/dL)
Prematuro 36-60 g/L (3.6-6.0 g/dL)
Neonatos 46-70 g/L (4.6-7.0 g/dL)
1 semana 44-76 g/L (4.4-7.6 g/dL)
7 meses-1 año 51-73 g/L (5.1-7.3 g/dL)
1-2 años 56-75 g/L (5.6-7.5 g/dL)
> 3 años 60-80 g/L (6.0-8.0 g/dL)
142
|
Adultos (ambulatorios) 64-83 g/L (6.4-8.3 g/dL)
Proteínas Totales en Orina y LCR
CaracterísticasLa medición de proteínas en orina se emplea en el diagnóstico y el tratamiento de
enfermedades renales, cardíacas así como de trastornos tiroideos, caracterizados
por proteinuria o albuminuria. La medición de las proteínas en el líquido
cefalorraquídeo (LCR) se emplea en el diagnóstico y el tratamiento de
enfermedades como la meningitis, los tumores cerebrales y las infecciones del
sistema nervioso central.
La orina se forma por ultrafiltración del plasma a través de la pared capilar
glomerular. Las proteínas con una masa molecular relativa superior a 40000 son
retenidas casi completamente, mientras que las sustancias más pequeñas pasan
con facilidad al filtrado glomerular. La mayor parte de las proteínas del LCR se
origina por la difusión del plasma a través de la barrera hematoencefálica. Las
concentraciones aumentan como consecuencia de un incremento en la
permeabilidad de la barrera hematoencefálica o bien debido al aumento en la
síntesis local de inmunoglobulinas.
Los métodos turbidimétricos que emplean el ácido tricloroacético (TCA) o el ácido
sulfosalicílico (SSA) precipitan las proteínas en la muestra según sea su tamaño,
lo cual puede dar lugar a una turbidez inestable y flocular. Los reactivos de los
métodos colorimétricos como el azul de Coomassie y el rojo de pirogalol-molibdato
reaccionan con las proteínas según la composición de sus aminoácidos, pudiendo
teñir los recipientes de vidrio y plástico. Debido a sus mecanismos de reacción, la
sensibilidad tanto de los métodos turbidimétricos como colorimétricos varía
respecto de diversas proteínas, especialmente frente a fragmentos proteicos como
las proteínas
Bence Jones y a las proteínas de pequeño tamaño como la α1-microglobulina.
El ensayo Urinary/CSF Protein de Roche Diagnostics se basa en el método
descrito por Iwata y Nishikaze3 y modificado posteriormente por Luxton, Patel,
143
|
Keir y Thompson.4 En este método, el cloruro de bencetonio reacciona con
proteínas en un medio básico produciendo una turbidez más estable y
uniformemente distribuida que la observada con los métodos con SSA o TCA. En
el presente test, la recuperación de la γ-globulina respecto de la albúmina es
inferior en unos 30 %5 mientras que la adición de EDTA permite neutralizar las
interferencias por iones de magnesio.
Principio del testMétodo turbidimétrico.
La muestra se preincuba en una solución alcalina con EDTA, que desnaturaliza las
proteínas, eliminando así las interferencias por iones de magnesio. Al agregar
cloruro de bencetonio se produce turbidez.
Medidad de protección y advertencias
144
|
145
|
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras. Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí
mencionados.
Orina
Utilizar muestras de orina espontánea o de 24 horas. No emplear conservantes.
Refrigerar la muestra durante la recolección.
LCR
No se requieren aditivos especiales. Si la muestra de LCR está contaminada con
sangre, el resultado del test de proteína no tiene validez.
Se recomienda recoger las muestras para el test de proteína en orina o LCR antes
de suministrar fluoresceína o bien, como mínimo, 24 horas después.
Nota: Para no obstruir los canales del instrumento, no determinar con el presente
test aquellas muestras de orina, LCR o de control cuyas concentraciones de
proteínas superan los 7000 mg/L.
Estabilidad:
Orina: 1 día a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
1 mes a (-15) - (-25) °C
LCR: 1 día a 15-25 °C
6 días a 2-8 °C
> 1 año a (-15)-(-25) °C
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
Las muestras sin centrifugar pueden producir resultados elevados.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2-S6: C.f.a.s. PUC
Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.s.
146
|
PUC específico del lote por los factores indicados a continuación a fin de
determinar las concentraciones estándar de la curva de calibración de 6 puntos.
S2: 0.025
S3: 0.050
S4: 0.125
S5: 0.250
S6: 1.0
Modo de calibración RCM
Intervalo de calibraciones Calibración completa
- con cada lote de reactivos
- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un estándar
primario que puede rastrearse hasta NIST (National Institute of Standards and
Technology).
CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra. Factores de conversión: mg/L x 0.1 =
mg/dL mg/L x 0.001 = g/L
Cálculo de la excreción proteica en la orina de 24 horas: mg/L x volumen total
(litros por 24 horas) = mg/día
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
la proteína total de 120 mg/L (12 mg/dL; 0.12 g/L). Efecto prozona (high-dose
hook): Los resultados de las muestras con altas concentraciones de proteína total
superiores al intervalo de medición de 100000 mg/L serán indicados mediante
alarmas del sistema como > TEST o > ABS.
Orina
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de bilirrubina
conjugada de 342 μmol/L (20 mg/dL).
147
|
Hemólisis: La hemoglobina interfiere en el test.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepción: La levodopa, la metildopa y la cefoxitina disódica causan valores de
proteína total falsamente altos mientras que el dobesilato de calcio provoca
valores de proteína falsamente disminuidos.
Otros: Las muestras que contienen más de 8 g/L de yodo fijado orgánicamente de
medios radiopacos (p. ej. Hexabrix) pueden tener resultados falsamente altos.
En pacientes con la enfermedad genética rara alcaptonuria pueden encontrarse
altas concentraciones de ácido homogentísico. Las concentraciones de ácido
homogentísico > 0.6 mmol/L pueden falsificar los resultados de muestras de orina.
En pacientes bajo tratamiento con sustitutos del plasma basados en gelatina
pueden obtenerse valores aumentados de proteína en orina.
LCR
Hemólisis: La hemoglobina interfiere en el test.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo
en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de
otros exámenes.
Límites e intervalosIntervalo de medición40-2000 mg/L (4-200 mg/dL; 0.04-2 g/L)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:3. Los
resultados de las muestras diluidas por la función de repetición del ciclo se
multiplican automáticamente por el factor 3.
Valores teóricos
148
|
Orina: 24 h: < 140 mg/24 h*
Espontánea: < 150 mg/L*
Valores obtenidos de muestrascentrifugadas
LCR: Intervalo de referencia según Tietz:
150-450 mg/L (15-45 mg/dL)
Intervalo de referencia según Thomas:
200-400 mg/L (20-40 mg/dL)
Triglicéridos
CaracterísticasLos triglicéridos son ésteres del glicerol, un alcohol trivalente con 3 ácidos grasos
de cadenas largas. En parte son sintetizados en el hígado, en parte se ingieren
con la alimentación.
La determinación de los triglicéridos se emplea para diagnosticar y tratar pacientes
con diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción hepática, trastornos del metabolismo
lipídico y otras numerosas enfermedades endocrinas.
La determinación enzimática de triglicéridos descrita por Eggstein y Kreutz aún
requería la saponificación con hidróxido de potasio. Posteriormente se realizaron
varios experimentos para sustituir la saponificación alcalina por una hidrólisis
enzimática con lipasa. Así, Bucolo y David experimentaron con una mezcla de
lipasa y una proteasa, mientras Wahlefeld empleaba para la hidrólisis una
esterasa hepática combinada con una lipasa particularmente efectiva obtenida de
Rhizopus arrhizus.
El presente método se basa en el trabajo de Wahlefeld y utiliza una lipasa
lipoproteica obtenida de microorganismos para hidrolizar completa y rápidamente
triglicéridos a glicerol, con la oxidación posterior a dihidroxiacetonafosfato y
peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado reacciona bajo la acción
catalítica de la peroxidasa con la 4-aminofenazona y 4-clorofenol para formar un
colorante rojo en una reacción de punto final según Trinder. La intensidad
149
|
cromática del colorante rojo formado es directamente proporcional a la
concentración de triglicéridos y puede medirse fotométricamente.
Principio del testTest enzimático colorimétrico.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:
Suero. Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibraciones calibración a 2 puntos
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a espectrometría de
masa por dilución de isótopo.
Cálculo
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Los analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factores de conversión:
mmol/L x 88.5 = mg/dL
mg/dL x 0.0113 = mmol/L
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una
concentración de triglicéridos de 2.3 mmol/L (203 mg/dL).
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 10 para la bilirrubina
conjugada y de 35 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina
conjugada: aprox. 171 μmol/L ó 10 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin
conjugar: aprox. 599 μmol/L ó 35 mg/dL).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina: aprox. 434 μmol/L ó 700 mg/dL
Lím. Prozona: El aviso > Kin indica concentraciones de triglicéridos
extremadamente altas en la muestra. Los resultados normales falsos se deben a
la depleción de oxígeno durante la reacción analítica.
El glicerol endógeno sin esterificar en la muestra puede producir valores séricos
de triglicéridos falsamente elevados.
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
común en concentraciones terapéuticas.
Excepción: El ácido ascórbico y el dobesilato de calcio causan resultados de
triglicéridos artificialmente bajos
Límites e intervalosIntervalo de medición0.1-10.0 mmol/L (8.85-885 mg/dL)
151
|
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:5. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 5.
Valores teóricos según el NCEP (programa de educación nacional delColesterol)Intervalo normal: < 2.26 mmol/L (< 200 mg/dL)
Interpretación clínica según las recomendaciones de la Sociedad
Europea de Aterosclerosis:
Nota: Si se desea tomar en cuenta el glicerol libre, substraer 0.11 mmol/L
(10 mg/dL) del valor de triglicéridos obtenido.
Otras Lipoproteínas (Perfil Lípidico)
Lipoproteínas de muy baja densidad Las lipoproteínas de muy baja densidad, que
suelen denominarse por sus iniciales en inglés, VLDL, son también partículas
grandes, poco densas (d < 1,006 g/ml) y muy ricas en triglicéridos. También tienen
una composición apolipoproteica similar a los quilomicrones, salvo en 2 aspectos
esenciales: no contienen apo A-I y presentan la forma completa de apo B (apo B-
100) porque en el hígado, lugar de síntesis de VLDL, no se expresa la enzima
editora de la apo B. La apo B-100 es la proteína estructural de VLDL y de las
ipoproteínas que se sintetizan en buena parte a partir de su catabolismo: IDL y
LDL y Lp(a). El principal estímulo para la síntesis de VLDL parece ser la captación
y el catabolismo de quilomicrones residuales por parte del hígado. La principal
152
|
función de las VLDL es, de forma análoga a la de los quilomicrones, el transporte
de triglicéridos y su suministro (en forma de ácidos grasos) a los tejidos muscular y
adiposo. El proceso por el cual se generan los ácidos grasos a partir de los
triglicéridos es básicamente idéntico al ya explicado en el caso de los
quilomicrones y, por tanto, depende fundamentalmente de la actividad de la
enzima LPL y de su cofactor apo C-II. El resultado de esta acción es que las VLDL
se hacen más pequenas, ˜ con una relación más pareja en su contenido en
colesterol y triglicéridos y con una mayor densidad, flotando en la
ultracentrifugación como IDL. También, a semejanza de lo que ocurre en el
catabolismo de los quilomicrones, el catabolismo de las VLDL es una de las vías
de síntesis de HDL.
Lipoproteínas de baja densidad (Para más información, ver referencias 4,5.) Las
lipoproteínas de baja densidad, o LDL (d < 1,063 g/ml, > 1,019 g/ml), se
caracterizan por su contenido en apo B-100 y tienen como componente lipídico
mayoritario los ésteres de colesterol. La función de las LDL es el transporte y
entrega de colesterol a las células, incluyendo tejidos periféricos e hígado. Las
LDL son reconocidas por los receptores de LDL situados en la membrana
plasmática que reconocen apo B-100 y apo E (fig. 1). El receptor de LDL es
sintetizado por múltiples estirpes celulares y viaja hacia la membrana plasmática
quedando fijado por una proteína, denominada clatrina, en unas zonas específicas
que se denominan hoyos revestidos. Aproximadamente cada 5 min, hayan unido o
no LDL, estos hoyos revestidos experimentan endocitosis y son transportados
hacia el citoplasma en forma de endosomas. En el caso de que contengan LDL
unidas al receptor, el contenido proteico y lipídico de las mismas es hidrolizado
hasta formar aminoácidos y colesterol no esterificado. El colesterol no esterificado
es tóxico para las células por encima de una cierta concentración y, por tanto,
debe ser o bien utilizado (para síntesis de membranas o de hormonas esteroideas,
por ejemplo), o bien convertido por enzimas del tipo acil: colesterol aciltransferasa
(ACAT) en ésteres de colesterol, forma en que pueden ser guardados como
reservorio celular de colesterol. El receptor de LDL, una vez completado su ciclo
celular, puede ser degradado por la PCSK9 o bien reciclado para volver a
153
|
comenzar el ciclo. Las células pueden también sintetizar de novo colesterol a
través de una larga vía de síntesis (endógena) que tiene como punto crítico de
regulación el paso de hidroximetilglutaril CoA (HM CoA) a mevalonato, paso
catalizado por la HMGCoA reductasa. Sin embargo, la mayor eficiencia de la vía
de síntesis del receptor de LDL hace que predomine sobre la activación de la vía
de síntesis endógena de colesterol, ya que mediante la síntesis de menos
proteínas consiguen acceso a un mayor número de moléculas de colesterol. Los
niveles de colesterol no esterificado intracelular regulan de forma coordinada los 2
sistemas de síntesis de colesterol, asegurando así su coordinación y evitando un
exceso de colesterol intracelular. La expresión y la funcionalidad adecuadas de los
receptores de LDL son un determinante importante de la concentración de LDL
sérico. Como prueba, la hipercolesterolemia familiar, que es una enfermedad
autosómica dominante causada por mutaciones en el gen del receptor de LDL o,
menos frecuentemente, del dominio de ligando de apo B-100 o de PCSK9,
presenta concentraciones séricas elevadas de LDL. En este contexto es
importante conocer que el tipo de medicamentos hipocolesterolemiantes más
usados en clínica, las estatinas, funcionan inhibiendo la HMGCoA reductasa, ya
que de esta forma se consigue un aumento de la síntesis de receptor de LDL
celular, lo que disminuye la concentración sérica de LDL y, por tanto, de colesterol.
Cálculo
Colesterol VLDL
Colesterol total - HDL - LDL = VLDL
Colesterol LDL
LDLc = CT - (HDLc + TG/5) en mg/dl
Existe, no obstante, una limitación a la utilización de esta fórmula y es cuando los
triglicéridos superan los 400 mg/dl situación que como conocemos no es
excepcional. También, aunque es mucho menos frecuente, cuando existe una
disbetalipoproteinemia, ya que las beta- VLDL contienen más colesterol que las
VLDL normales ó si el paciente es homocigoto para la apo E.
154
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Nota: El Software del laboratorio calcula automáticamente estos valores, si se
ingresa el perfil lipídico.
Urea/BUN
CaracterísticasLa urea es el principal producto terminal del metabolismo proteico que contiene
nitrógeno. Se sintetiza en el hígado en el ciclo de la urea a partir del amoníaco
derivado de la desaminación de los aminoácidos. Los riñones excretan la mayor
parte de la urea, si bien también se excreta, en cantidades mínimas, a través de la
transpiración y se degrada en los intestinos por acción bacteriana.
La determinación del nitrógeno de urea en sangre es la prueba más utilizada para
el cribado de la función renal. Su utilización combinada con la determinación de la
creatinina sérica contribuye al diagnóstico diferencial entre los tres tipos de
azoemia: la azoemia prerrenal, renal y la posrenal.
Se observan aumentos de la concentración del nitrógeno ureico en sangre en caso
de perfusión renal inadecuada, shock, hipovolemia (por causas prerrenales),
nefritis crónica, nefroesclerosis, necrosis tubular, glomerulonefritis (por causas
renales) y la obstrucción de las vías urinarias (por causas posrenales). También se
aprecian incrementos pasajeros durante períodos de alta ingestión proteica. En
presencia de hepatopatías, los niveles de urea son imprevisibles.
Principio de testTest cinético con ureasa y glutamato deshidrogenasa.
La urea es hidrolizada por la ureasa a amonio y carbonato.
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La velocidad con que la concentración de NADH disminuye es directamente
proporcional a la concentración de urea en la muestra y se mide fotométricamente.
Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las
muestras.
Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.
Suero Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico. No emplear la
heparina de amonio.
Orina
La proliferación bacteriana en la muestra y la alta concentración atmosférica del
amoníaco, así como la contaminación por iones de amonio pueden causar
resultados falsos elevados.
Estabilidad en suero/plasma: 7 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
1 año a (-15)-(-25) °C
Estabilidad en orina:6 2 días a 15-25 °C
7 días a 2-8 °C
1 mes a (-15) - (-25) °C
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.
CalibraciónCalibradores S1: H2O
S2: C.f.a.s.
Modo de calibración Lineal
Frecuencia de calibración calibración a 2 puntos
- en el analizador, tras 4 semanas
- tras cambiar de lote de reactivos
- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.
Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a SRM 909b.
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CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la
concentración de analito de cada muestra.
Factores d conversión:
mmol/L de urea x 6.006 = mg/dL de urea
mmol/L de urea x 0.06006 = g/L de urea
mmol/L de nitrógeno ureico × 2.801 = mg/dL de nitrógeno ureico
mmol/L de nitrógeno ureico x 0.02801 = g/L de nitrógeno ureico
mg/dL de urea × 0.467 = mg/dL de nitrógeno ureico
Al emplear orina de 24 horas como muestra, multiplicar el resultado por el volumen
de 24 horas para obtener valores en g o mmol/24 horas.
Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de
urea de 8.3 mmol/L (49.8 mg/dL de urea y 23.2 mg/dL de nitrógeno ureico).
Suero/plasma
Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración de
la bilirrubina conjugada y no conjugada: aprox. 60 mg/dL o 1026 μmol/L).
Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de
hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1.000 mg/dL.
Los iones de amonio pueden causar resultados erróneamente elevados.
Orina
Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso
extendido en concentraciones terapéuticas.
Límites e intervalosIntervalo de mediciónSuero/plasma
0.5-40 mmol/L (3.0-240 mg/dL de urea, 1.4-112 mg/dL de nitrógeno ureico)
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Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:3. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 3.
Orina
1-2000 mmol/L (6-12000 mg/dL de urea, 2.8-5600 mg/dL de nitrógeno ureico)
Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de
repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de
repetición del ciclo es de 1:1.8. Los resultados de las muestras diluidas por la
función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 1.8.
Determinar las muestras con concentraciones inferiores al límite técnico de 40
mmol/L (240 mg/dL de urea y 112 mg/dL de nitrógeno ureico) a través de la
función de repetición del ciclo. Las muestras se miden sin diluir.
Valores teóricosUrea:
Suero/plasma
Adultos 2.76-8.07 mmol/L (16.6-48.5 mg/dL)
Orina
Orina de 24 horas < 580 mmol/24 h (< 35 g/24 h)
1ra orina de la mañana 150-500 mmol/L (0.9-3.0 g/dL)
Nitrógeno ureico (BUN):
Suero/plasma
Adultos (18-60 años) 6-20 mg/dL
Adultos (60-90 años) 8-23 mg/dL
Lactantes (< 1 año) 4-19 mg/dL
Lactantes/niños 5-18 mg/dL
Orina
Orina de 24 horas: 800-1666 mg/dL (12-20 g/24 h)
a) Basado en una excreción media de orina de 1.2 a 1.5 L/24 h.
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Osmorlaridad sérica
El intercambio de solutos y agua entre el ultrafiltrado y el plasma se lleva a cabo
por medio de complejos mecanismos de transporte en las diferentes porciones de
la nefrona y dependiendo del exceso o déficit de alguno de éstos en la sangre o en
el líquido intersticial, se producirá su mayor o menor eliminación renal, logrando
así una concentración normal para mantener una homeostasis permanente. La
concentración plasmática de los electrólitos depende de la cantidad que se
administre por vía oral (en la dieta) o por vía parenteral (intravenosa) y del ingreso
neto del agua. Como la ingesta no se realiza a un ritmo constante a largo del día,
se producen permanentemente cambios en dichas concentraciones que son
manejados de una manera muy precisa por parte del riñón. Los líquidos que
ingresan al organismo pueden ser hipo, iso o hiperosmolares con respecto al
plasma.
La administración intravenosa (compartimiento plasmático) de altos volúmenes de
líquido, modifica de manera importante el volumen de los demás compartimientos,
sin embargo, dichos cambios se presentan de manera diferente dependiendo de la
osmolaridad del fluido inyectado.
Los cambios de osmolaridad se manejan de forma distinta de acuerdo a la
composición del líquido administrado, pero incluyen en general modificación del
balance de sodio, glucosa y agua (ADH). El balance entre los compartimientos,
particularmente en el plasmático influye además en la función cardiovascular, y
ésta a su vez es importante para mantener un aporte de oxígeno adecuado al
riñón. Compartimentos Corporales. En el cuerpo humano los fluidos se encuentran
distribuidos en dos compartimentos: El compartimiento extracelular (LEC) y el
intracelular (LIC). Aproximadamente un tercio del agua corporal total se halla en el
LEC y dos tercios en el LIC; y el agua corporal total constituye entre el 50-60% del
peso corporal total de un individuo adulto. Los iones constituyen el 95% de los
solutos suspendidos en los fluidos orgánicos, la suma de las concentraciones de
cationes equivalen a la de los aniones en cada compartimiento y así el fluido de
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cada uno de los espacios es eléctricamente neutral y químicamente isosmolar. El
principal catión del líquido extracelular es el Na+ y el principal anión el Cl-. El
bicarbonato (HCO3-) es un anión predominante y también se encuentran otros en
cantidades menores como urea, proteínas y glucosa. Estos aniones y cationes
determinan la osmolaridad del plasma (Su valor normal es 290 +/- 10 mosmol/l),
que se calcula teniendo en cuenta la concentración de estos y otras sustancias en
sangre como la glucosa y el BUN (nitrógeno ureico en sangre). El Na+ es el
principal determinante de este valor es situaciones fisiológicas. La fórmula para
hallar la osmolaridad plasmática es:
La osmolaridad plasmática oscila normalmente entre 280 y 290 mOsm/l; cuando
se calcula mediante la fórmula anterior, las cifras son normalmente 6-8 mOsm/l
más bajas.
Química de Líquidos Estériles
Líquido Cefalorraquídeo LCR
Es un líquido claro, incoloro, formado dentro de las cavidades o ventriculares del
cerebro, por los plexos coroideos y el plasma sanguíneo. Se forman
aproximadamente 500 cc de líquido cefalorraquídeo cada día, aunque solo hay de
120 a 150 ml en el sistema en cualquier momento. El LCR es reemplazado
completamente unas 3 veces al día. Su función es amortiguar la masa cefálica y
absorber las fuerzas que se transmiten a través de la bóveda craneana hacia el
cerebro. También ayuda a regular la presión intracraneal, la cual puede cambiar
con el flujo sanguíneo, el transporte de nutrientes y el nivel de productos de
desecho. Se considera además que este líquido influye en otros mecanismos de
control como las concentraciones de glucosa en el hipotálamo, las sensaciones de
hambre y el comportamiento en el comer. La mayor parte de los componentes del
LCR existen en mayor o menor concentración que en el plasma, sin embargo las
2 Na+ + K+ + Glicemia (mg/dl)/18 + BUN (mg/dl)/2.8
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enfermedades pueden hacer que algunos elementos que normalmente son
retenidos por la barrera hematoencefálica, penetren al líquido, tales como los
leucocitos y eritrocitos, que pueden entrar a través de los vasos sanguíneos. El
LCR se obtiene por punción lumbar. Esta se realiza cuando hay sospecha de una
meningitis, cuando se requiere valorar la presión del líquido o para introducir
anestésicos, fármacos o medios de contraste radiográficos.
A nivel químico se realizan al LCR pruebas como:
Glicemia
La concentración varía con los niveles de glucosa en sangre. En el LCR suele ser
de 60 a 70% de la concentración total en sangre. Esta medición es de ayuda para
estimar algún impedimento en el transporte de glucosa del plasma al LCR y un
uso elevado de glucosa por el S.N.C, leucocitos o microorganismos. Puede estar
disminuida en casos de infecciones piógenas, micóticas, tuberculosis, linfomas
con extensión meníngea, leucemia con extensión meníngea, meningoencefalitis e
hipoglicemia. Casi todos los organismos superiores e inferiores consumen
glucosa, y en casi todos los casos en que se presenta la glucosa disminuida, se
puede deber a una actividad bacteriana. En la mayoría de los casos el aumento es
debido a una diabetes. Las concentraciones de la glucosa en el LCR suelen ser
normales en el caso de algunas clases de infecciones virales cerebrales y
meníngeas, así como en la meningitis aséptica.
Cloruros
Cualquier situación que aumente la cantidad de cloruros en el plasma afectará
también el cloro en el LCR. La medición de cloro en LCR es útil en el diagnóstico
de la meningitis tuberculosa, en la cual se verá disminuido. La administración de
cloruros invalida los resultados de la prueba. Los valores de la prueba no son
válidos si como consecuencia de un golpe traumático, la sangre se mezcla con la
muestra.
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Proteínas totales
El LCR contiene muy pocas proteínas, ya que las proteínas en el suero sanguíneo
están en forma de grandes moléculas que no atraviesan la barrera
hematoencefálica. No obstante, la proporción de albúmina/globulinas, es superior
en el LCR ya que la molécula de albúmina es significativamente menor y puede
atravesar con más facilidad la barrera. En las infecciones se da un incremento en
la permeabilidad de la barrera hematoencefálica. Los aumentos moderados o
notorios en las concentraciones de proteínas totales y alteraciones en la
proporción de albúmina/globulina, son originados por el aumento en la
permeabilidad de la barrera, así como por las obstrucciones en la circulación de
los sistemas de conducción de LCR, aumento en la síntesis de proteínas en el
S.N.C por degeneración tisular y los tumores cerebrales. Se pueden encontrar
aumentadas en meningitis purulenta, tuberculosa o aséptica, en sífilis y
neurosífilis, abscesos cerebrales, hemorragia y hematomas subaracnoideos,
poliomielitis, síndrome de Guillan-Barré. Se pueden encontrar disminuidas por
aumento de la presión intracraneal o hipertiroidismo.
Los valores de referencia se encuentran en las técnicas de glucosa y proteínas
urinarias/LCR.
Lactato
En la meningitis bacteriana, se observa un aumento de los niveles de lactato en el
líquido cefalorraquídeo (LCR). Asimismo se observan niveles elevados de LCR en
la hipocapnia, el hidrocefalo, los abscesos cerebrales, la isquemia cerebral y
cualquier condición clínica asociada a una oxigenación reducida del cerebro y/o
una presión intracraneal incrementada.
Valores de referencia: LCR: 1.1-6.7 mmol/L (10-60 mg/dL) Neonatos
1.1-4.4 mmol/L (10-40 mg/dL) de 3-10 días
1.1-2.8 mmol/L (10-25 mg/dL) > 10 días de edad
1.1-2.4 mmol/L (10-22 mg/dL) Adultos
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Líquido Sinovial (Articular)
Es uno de los principales componentes de las articulaciones. Este se halla en el
interior de las cápsulas articulares presentes entre las extremidades móviles y su
función principal es proveer protección a las superficies óseas que tiene movilidad.
El valor diagnóstico de este líquido, radica en la diferenciación entre enfermedad
inducida por aposición de cristales y artritis infecciosa. La concentración de
inmunoglobulinas y proteínas totales corresponde a 1/4 parte de la concentración
en suero; los valores de electrolitos, glucosa y ácido úrico son iguales que en el
suero.
Glucosa
Es indicador valioso para el caso de las infecciones bacterianas, ya que existe una
diferencia de hasta 60 mg/dl menos que el valor hallado de glucosa en suero; por
lo tanto los niveles muy bajos de glucosa son sugestivos de infección bacteriana.
Ácido úrico
Se evalúa con relación a los niveles de ácido úrico en suero y la observación
microscópica de la formación de cristales de dicho ácido.
Proteínas totales
En el líquido sinovial el valor es ligeramente menor que en el suero; en estados
patológicos se puede hallar elevado, correspondiendo en este caso a procesos
inflamatorios y/o bacterianos.
Líquidos de Cavidades Serosas
Los líquidos de cavidades serosas derivan del plasma y se encuentran en las
cavidades pleural, pericárdica y peritoneal.
Los procesos de formación de éstos líquidos son dinámicos y están controlados
por la permeabilidad de los capilares en la membrana parietal, la presión
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hidrostática en estos capilares, la presión oncótica (o coloide osmótica) producida
por las proteínas plasmáticas dentro de los capilares y la absorción de líquidos por
el sistema linfático. La presión hidrostática de la sangre fuerza al plasma a
ultrafiltrarse hacia las cavidades, mientras que las proteínas ejercen una presión
inversa a esta filtración. La permeabilidad del endotelio capilar regula la velocidad
de formación del ultrafiltrado y de su composición proteica. Si se incrementa la
permeabilidad endotelial provoca un desplazamiento de las proteínas sanguíneas
hacia las cavidades. Estos fluidos vasculares ricos en proteínas aumentarán la
acumulación de líquido en las cavidades. Esta acumulación de líquido en las
cavidades se denomina derrame e indica un proceso patológico.
Transudados y Exudados
Clásicamente, según su contenido proteico, los líquidos serosos se diferencian
en transudados y exudados. Esta distinción es fundamental para su clasificación
etiopatogénica y para la selección de las magnitudes bioquímicas cuyo estudio
aportará una mayor eficacia diagnóstica.
Los transudados son líquidos no inflamatorios que se originan por alteración de
factores sistémicos que afectan a la formación o reabsorción del líquido (presión
hidrostática o coloidosmótica). Frecuentemente están asociados con insuficiencia
cardíaca congestiva, cirrosis hepática y síndrome nefrótico, los dos últimos se
asocian con hipoproteinemia.
Los derrames de líquido en la cavidad pleural, pueden formarse como un
ultrafiltrado del plasma. Se puede clasificar como transudado (formado por
factores mecánicos que influyen en la formación y reabsorción de líquidos. Ej:
disminución de albúmina o aumento de la presión venosa), o exudado (derrame
provocado por una lesión de los recubrimientos del mesotelio. Ej: Tuberculosis,
infecciones bacterianas, Lupus Eritematoso Sistémico).
Los exudados son líquidos inflamatorios cuya formación depende de un
aumento de la permeabilidad capilar debido a alteraciones que implican
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directamente a estructuras de la superficie de determinadas cavidades corporales
(mesotelio, vasos linfáticos y capilares). Algunas infecciones pueden producir
exudados, así como también, neoplasias, desordenes sistémicos, traumatismos o
condiciones inflamatorias. Los exudados requieren un mayor número de pruebas
de laboratorio que los transudados, tales como estudios microbiológicos o estudios
citológicos.
La diferencia entre transudados y exudados se basa en niveles arbitrarios de
decisión clínica que ha sido determinada empíricamente. Uno de los criterios
ampliamente utilizados es el criterio de Light, publicado en el año 1972, el cual
considera los niveles proteicos en el líquido pleural versus los niveles de proteínas
en suero, al igual que los niveles de lactato deshidrogena (LDH) pleural versus
LDH plasmática. Esto se describe mas adelante, en la sección de exámenes
químicos de los líquidos serosos.
Las pruebas útiles para la clasificación de transudados y exudados son las
mediciones simultáneas de proteína total (PT) y lactato deshidrogenasa (LDH),
tanto en el suero como en el líquido seroso. A partir de estas mediciones se
establecen cocientes de concentración de proteína y LDH:
Estos cocientes proporcionan medios confiables para distinguir entre
transudados y exudados. Si el cociente PT es < 0,5 y el cociente LDH es < 0,6, el
líquido se clasifica como un transudado. En contraste, los exudados son aquellos
líquidos con un cociente PT > 0,5 y un cociente LDH > 0,6.
En transudados el nivel de LDH es < 2/3 del nivel de LDH sérica y en exudados el
nivel de LDH es > 2/3 de los niveles de LDH sérica.
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Gradiente de albúmina plasmática-albúmina de líquido ascítico (GASA)
Cuando el líquido peritoneal excede de 25 mL y además aumenta
progresivamente se denomina ascitis. La relación entre la concentración de
albúmina en suero y la de albúmina en líquido ascítico proporciona una mejor
clasificación diagnóstica de la ascitis que la concentración de proteínas, por lo que
algunos expertos reemplazan los términos transudados y exudados en la
descripción de la ascitis, por el de gradiente de albúmina elevado y gradiente de
albúmina disminuido.
El gradiente de albúmina se obtiene sustrayendo la concentración de albúmina en
líquido ascítico a la concentración de albúmina en suero. Para lo anterior, las
muestras de suero y líquido ascítico deben obtenerse simultáneamente.
La utilidad del gradiente de albúmina se basa en el concepto de equilibrio
oncótico-hidrostático. La diferencia entre albúmina sérica y en líquido ascítico es
muy grande en pacientes con hipertensión portal. Si esta diferencia es mayor o
igual a 1,1 g/dL, sugiere la presencia de hipertensión portal, como se puede
encontrar en cirrosis hepática, metástasis hepáticas y síndrome nefrótico,
enfermedad pancreática y otras. El gradiente de albúmina nos permite clasificar,
con una eficacia del 95%, la ascitis como asociada o no a hipertensión portal. Los
laboratorios deben informar el primer decimal.
Glucosa
La medición simultanea de glucosa sérica y en el líquido seroso tiene un valor
limitado. Si en el líquido seroso la glucosa es inferior a 60 mg/dL o la diferencia
entre glucosa sérica y glucosa del líquido seroso es superior a 30 mg/dL, se
identifica un proceso exudativo. Solo tienen relevancia clínica los niveles bajos de
glucosa ante la sospecha diagnóstica de artritis reumatoide.
Amilasa
La medición simultanea de amilasa en suero y líquido seroso es clínicamente de
utilidad para líquido pleural y peritoneal, siendo un examen de rutina en muchos
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laboratorios. Un valor de amilasa en el líquido que excede el valor normal a nivel
sérico, o es superior 1,5 a 3 veces, se considera como anormalmente aumentado.
Estos niveles elevados de amilasa en los líquidos se presentan en derrames
provocados por pancreatitis, ruptura esofágica, perforación gastroduodenal y
neoplasias.
Triglicéridos
El nivel de los triglicéridos en líquidos serosos es de utilidad especialmente
cuando estos son de aspecto lechoso o quiloso. Cuando los niveles de triglicéridos
exceden los 110 mg/dL indican un derrame quiloso, mientras que si estos son
inferiores a 60 mg/dL lo descartan. Si los niveles de triglicéridos están entre 60 y
110 mg/dL, se puede efectuar adicionalmente una electroforesis de lipoproteínas.
La presencia de quilomicrones identifica al derrame como quiloso, mientras que su
ausencia la identifica como pseudoquiloso. El contenido de colesterol del derrame
quiloso y pseudoquiloso es de utilidad clínica. La efusión quilosa se asocia con
obstrucción o daño al sistema linfático. Neoplasias (por ejemplo linfoma), traumas,
tuberculosis y procedimientos quirúrgicos a menudo provocan derrames quilosos;
mientras que los pseudoquilosos se presentan más a menudo en inflamaciones
crónicas como ocurre en artritis reumatoide.
Panel Cardíaco (Troponina I, Mioglobina)
La prueba de enzimas cardíacas Triage® Cardiac Panel es un
fluoroinmunoanálisis que se utiliza con el lector Triage Meter para la determinación
cuantitativa de creatina-cinasa MB (CK-MB), mioglobina y troponina I en muestras
de sangre entera y plasma recogidas con EDTA. La prueba se utiliza como ayuda
en el diagnóstico del infarto de miocardio (lesión).
Características En muchos casos, el diagnóstico del infarto agudo de miocardio (IAM) en
pacientes que presentan dolor torácico es difícil. Los tres criterios principales
indicados por la Organización Mundial de la Salud para diferenciar el dolor torácico
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asociado a IAM del dolor torácico debido a otras razones son: 1) anamnesis y
exploración física del paciente, 2) datos electrocardiográficos y 3) cambios en los
marcadores de proteínas séricas asociados al infarto de miocardio. Para
diagnosticar adecuadamente un IAM se deben cumplir al menos dos de estos
criterios.
A menudo, la exploración física no puede diferenciar el IAM de otras anomalías
cardíacas. El electrocardiograma es útil en el diagnóstico del IAM, pero está
limitado, porque sólo es concluyente en aproximadamente el 50% de los pacientes
con IAM. Por lo general, la formación de ondas Q y los cambios en el segmento
ST, elevación o depresión, son indicativos de IAM. No obstante, los resultados del
electrocardiograma deben considerarse junto con la anamnesis yla exploración
física del paciente. El electrocardiograma puede ser inicialmente normal aunque el
paciente tenga realmente un IAM.
Los marcadores de proteínas sanguíneas desempeñan un papel importante en el
diagnóstico diferencial del IAM cuando otros indicadores pueden ser negativos o
cuestionables. Los marcadores utilizados en el diagnóstico del infarto de miocardio
son: creatina-cinasa (CK), la isoenzima MB de la creatina-cinasa (CK-MB),
mioglobina y las proteínas estructurales delcomplejo troponina, es decir, troponina
T y troponina I.
Después de un IAM, la aparición de marcadores de proteínas en la sangrese
produce a consecuencia de la necrosis celular iniciada por un episodioisquémico.
Las proteínas presentes en concentraciones más altas y las mássolubles son las
que primero aparecen en la sangre, por ejemplo, la mioglobina.
Las proteínas estructurales y mitocondriales de los miocitos aparecen mástarde,
como por ejemplo la CK-MB y las proteínas del complejo troponina,incluida la
troponina I.La mioglobina es una hemoproteína citoplasmática soluble, con un
pesomolecular de aproximadamente 17 kDa, presente en las células
musculares.Considerando su tamaño relativamente pequeño, su alta
concentración celular ysu localización citoplasmática, la mioglobina se libera antes
que otros marcadorescardíacos después de una necrosis o una lesión celulares.
Las concentracionessanguíneas de mioglobina aumentan por encima del intervalo
168
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de referencia enlas dos primeras horas después de la lesión, y alcanzan el
máximo entre seis yocho horas después de la aparición de los síntomas. La
mioglobina vuelve aconcentraciones iniciales o normales entre 20 y 36 horas
después de la lesióntisular. La mioglobina está presente en todos los tipos de
células musculares.
Por lo tanto, su presencia en la sangre no se asocia necesariamente a
lesiónmiocárdica. Las concentraciones sanguíneas de mioglobina pueden
aumentar como resultado de distintas situaciones que producen lesión muscular.
Entre ellas están traumatismos, isquemia, cirugía, ejercicio y una serie de
enfermedades musculares degenerativas. Con respecto a esto, la mioglobina
tiene su mayor valor en la exclusión del infarto de miocardio en las primeras horas
después del dolor torácico. Debido al rápido aumento de las concentraciones
sanguíneas de mioglobina, seguido por un aclaramiento moderadamente
sostenido, la utilidad de la mioglobina está limitada a las 2-30 horas siguientes a la
lesión tisular. No obstante, la mioglobina es particularmente útil cuando se
conocen los antecedentes clínicos del paciente. La creatina-cinasa MB (CK-MB)
es una enzima citosólica de 82 kDa que está presente en altas concentraciones en
el miocardio. Esta isoenzima de la creatina-cinasa se utiliza frecuentemente en el
diagnóstico del infarto agudo de miocardio. Por lo general, las concentraciones de
CK-MB suben por encima de lo normal entre las cuatro y las ocho horas siguientes
al infarto agudo de miocardio, alcanzan concentraciones máximas entre las 12 y
las 24 horas y vuelven a sus valores normales en aproximadamente tres días. La
CK-MB, como la mioglobina, no se localiza específicamente en el músculo
cardíaco. Las concentraciones sanguíneas de CK-MB pueden aumentar como
resultado de lesiones musculares agudas o crónicas, incluido el ejercicio intenso y
los traumatismos. Aun así, la determinación de la concentración sanguínea de CK-
MB es muy fiable para el diagnóstico y tratamiento de los pacientes con IAM.
Las proteínas contráctiles de las miofibrillas se han hecho populares como
marcadores cardíacos específicos del infarto agudo de miocardio y de la lesión
miocárdica. Entre ellas están dos proteínas específicas del complejo regulador de
la contracción: la troponina I y la troponina T. La troponina I y la troponina T
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aisladas del músculo cardíaco tienen secuencias específicas de aminoácidos que
permiten el desarrollo de anticuerpos específicos antiproteínas cardíacas.
La secuencia de aminoácidos amino terminal del isotipo cardíaco de la troponina I
tiene 31 residuos aminoacídicos que no están presentes en ninguno de los dos
isotipos de la troponina I del músculo esquelético. Por lo tanto, los inmunoanálisis
específicos para la troponina I cardíaca se utilizan en la evaluación de pacientes
que se sospecha que han sufrido un IAM.
Las concentraciones sanguíneas de troponina I se elevan entre las 4 y las 8 horas
siguientes a un IAM, alcanzan su máximo entre las 12 y las 16 horas, y
permanecen elevadas de 5 a 9 días después de la lesión miocárdica. Las
concentraciones de troponina I cardíaca aumentan principalmente debido al infarto
de miocardio. Sin embargo, también pueden aumentar como resultado de
lesiones cardíacas menores, que incluyen: angina inestable, contusiones
cardíacas, trasplante de corazón, cirugía de derivación («bypass») aortocoronaria,
traumatismo físico del corazón, insuficiencia cardíaca congestiva y otras
afecciones que pueden lesionar el miocardio. Además, la troponina I cardíaca no
parece elevarse como resultado de lesiones del músculo esquelético. Debido al
aumento de la especificidad analítica y a la prolongada duración de su elevación,
la troponina I cardíaca se ha convertido en un importante marcador en el
diagnóstico y evaluación de los pacientes que se sospecha que han sufrido un
IAM. La cuantificación simultánea de las concentraciones de mioglobina, CK-MB y
troponina I cardíaca después de un IAM puede ser de gran ayuda para el médico
en el diagnóstico y tratamiento de los pacientes que se sospecha que han sufrido
un IAM. En la bibliografía científica también se ha descrito que las concentraciones
de troponina I ofrecen información de pronóstico relacionada con el riesgo de
futuras afecciones cardíacas y de mortalidad en pacientes con síndromes
coronarios agudos. Más recientemente, se ha demostrado que los análisis de
varios marcadores, entre ellos troponina I, CK-MB y mioglobina, ofrecen una mejor
estratificación del riesgo que los de un solo marcador.
Principios del procedimiento de la prueba
170
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El procedimiento de la prueba incluye la adición de varias gotas de una muestra
de sangre entera o plasma recogida con EDTA al orificio del dispositivo de prueba.
Después de depositar la muestra en el orificio del dispositivo de prueba, las
células de sangre entera se separan del plasma por medio de un filtro incorporado
en el dispositivo de prueba. La muestra reacciona con conjugados de anticuerpos
fluorescentes y pasa por el dispositivo de prueba por acción capilar. Los complejos
de cada conjugado de anticuerpos fluorescentes son capturados en zonas
determinadas, lo que produce análisis de unión específicos para cada analito.
El dispositivo de prueba se inserta en los lectores Triage Meter®. Los resultados
aparecen en la pantalla del lector y pueden imprimirse. Todos los resultados se
almacenan en la memoria del medidor, por lo que se podrán imprimir y visualizar
cuando sea necesario. Si está conectado, el medidor puede enviar los resultados
al sistema de información del hospital o el laboratorio.
Reactivos y materiales suministradosEl dispositivo de prueba contiene todos los reactivos necesarios para la
cuantificación simultánea de las proteínas CK-MB, mioglobina y troponina I en
muestras de plasma y sangre entera a las que se ha añadido ácido edético
(EDTA) como anticoagulante.
El dispositivo de prueba contiene:
• Anticuerpos monoclonales murinos contra la CK-MB, la mioglobina y la troponina
I.
• Anticuerpos policlonalesmurinos contra la CK-MB y la mioglobina.
• Anticuerpos policlonales de cabra contra la troponina I.
• Tinte fluorescente
• Fase sólida
• Estabilizadores
Advertencias y precauciones• Para uso diagnóstico in vitro.
• Para el uso por profesionales sanitarios.
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• No utilice el estuche después de la fecha de caducidad indicada en el exterior de
la caja.
• Mantenga el dispositivo de prueba en la bolsa sellada hasta que esté preparado
para utilizarla. Deséchela tras un solo uso.
• Obtendrá resultados óptimos si realiza la prueba a temperaturas comprendidas
entre los 20 y los 24 °C.
• La pipeta de transferencia debe utilizarse para una sola muestra. Deséchela tras
un solo uso.
• Al trabajar con muestras de pacientes, se deberán seguir técnicas de seguridad
de laboratorio adecuadas en todo momento, ya que las muestras son
potencialmente infecciosas.
Requisitos de almacenamiento y manipulación• Almacene los dispositivos de prueba en un refrigerador a entre 2 °C y 8 °C
• Una vez que se saca del refrigerador, el dispositivo de prueba sellado es estable
durante 14 días, siempre y cuando no se supere la fecha de caducidad indicada
en la bolsa.
• No extraiga el dispositivo de prueba de la bolsa hasta que esté preparado para
utilizarlo
• Antes de utilizar dispositivos de prueba refrigerados (2 °C a 8 °C), deje que
alcancen la temperatura ambiente en sus bolsas individuales. Esto llevará un
mínimo de 15 minutos. Si se saca del refrigerador un kit que contenga más de un
dispositivo de prueba, espere a que el kit y los dispositivos de prueba alcancen la
temperatura ambiente antes de usarlos.
Esto llevará un mínimo de 1 hora.
Obtención y preparación de muestras• Para realizar análisis con este producto se requieren muestras de sangre total o
plasma venosos recogidas con (EDTA) comoanticoagulante. No se han evaluado
otros tipos de muestras, métodos deextracción o anticoagulantes.
• Analice las muestras de sangre en el dispositivo de prueba inmediatamente o en
las 4 horas posteriores a su obtención. Si no pudiera completarse el análisis antes
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de 4 horas, el plasma debe separarse y almacenarse a -20 °C hasta que pueda
analizarse.
• Transporte las muestras a temperatura ambiente o refrigerada y evite las
temperaturas extremas.
• Si piensa que una muestra está hemolizada, deberá obtener otra muestra para la
prueba.
Procedimiento de la prueba
Notas referentes al procedimiento
El plasma congelado y las muestras refrigeradas de plasma o sangre entera
deben alcanzar la temperatura ambiente antes de la realización de la prueba.
Mezcle bien las muestras de los pacientes.
Mezcle las muestras de sangre entera invirtiendo suavemente el tubo varias
veces antes de realizar el análisis.
Si fuera posible, mezcle las muestras de plasma agitando el tubo antes de
realizar el análisis.
Realización del control de calidad del sistema Triage®: dispositivo de CC
Utilice el dispositivo de CC para verificar el funcionamiento correcto del lector.
Realice el procedimiento cada día que se lleven a cabo pruebas de pacientes.
1. La primera vez que utilice un dispositivo de CC en el lector, deberá instalar el
CODE CHIP™ del dispositivo de CC. Los datos del CODE CHIP del dispositivo de CC se almacenan en la memoria del lector. No es necesario volver a instalar el CODE CHIP del dispositivo de CC después de la instalación inicial.
a) En la pantalla principal, seleccione <Ins. nuevoCode Chip>y pulse Enter.
b) Coloque el Code Chip del dispositivo de CC en la esquina frontal inferior
izquierda del lector. Siga las instrucciones que aparecen en la pantalla.
c) Retire el Code Chip del dispositivo de CC del lector cuando se haya completado
la transferencia de datos.
2. En la pantalla principal, seleccione <Ejecutar test>y pulse Enter.
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|
3. Si hay un ID de usuario activado, introduzca su número de ID de usuario y
pulse Enter.
4. Seleccione <Dispositivo de CC>y pulse Enter.
5. Introduzca el dispositivo de CC y pulse Enter.
6. Aparecerá o se imprimirá un resultado de OK o Fallo cuando se complete el
análisis. Todos los parámetros deben ajustarse a los límites establecidos antes
de la realización de la prueba del paciente.
7. Retire el dispositivo de CC del lector y colóquelo en su caja negra especial. NO DESECHE EL DISPOSITIVO DE CC.
Calibración del lote usando el chip del reactivo
Al abrir un lote nuevo de dispositivos de prueba, debe transferirse la información
sobre calibración y caducidad de ese lote de tarjetas al lector antes del análisis del
paciente. Para transferir dicha información al lector, utilice el CODE CHIP del
reactivo suministrado con el nuevo lote de dispositivos de prueba.
Hágalo una vez con cada nuevo lote de dispositivos de prueba.
1. En la pantalla principal, seleccione <Ins. nuevoCode Chip>. Pulse Enter.
2. Inserte el CODE CHIP del reactivo en la esquina frontal inferior izquierda del
lector y siga las indicaciones que aparecen en pantalla.
3. Retire el módulo del chip del reactivo del lector cuando haya completado la
transferencia.
Análisis de las muestras de los pacientes
PASO 1 Añadir la muestra del paciente
1. Abra la bolsa y rotule el dispositivo de prueba con el número de identificación
del paciente.
2. Con la pipeta de transferencia, apriete por completo la perilla de mayor
tamaño (superior) e introduzca la punta en la muestra del paciente.
3. Suelte el bulbo lentamente. El cilindro de la pipeta de transferencia deberá
llenarse por completo y parte del líquido deberá entrar en la perilla de menor
tamaño (inferior).
174
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4. Coloque la punta de la pipeta de transferencia en el puerto de muestreo del
dispositivo de prueba y apriete por completo la perilla de mayor tamaño. La
totalidad del contenido líquido del cilindro de la pipeta de transferencia debería
entrar en el puerto de muestreo. No deberá dispensarse la muestra del bulbo
menor (inferior).
5. Retire la punta de la pipeta de transferencia del puerto de muestreo y, a
continuación, suelte la perilla de mayor tamaño (superior).
6. Deseche la pipeta de transferencia.
PASO 2 Realización de la prueba
1. En la pantalla principal, seleccione <Run Test>(Realizar prueba) y pulse
Intro.
2. Seleccione <Muestra del paciente>y pulse Enter.
3. Introduzca el número de identificación del paciente y pulse Enter.
4. Para confirmar que ha introducido el número correctamente, seleccione
<Confirmar ID del paciente>y pulse Enter. Si no ha introducido el número
correctamente, seleccione <Corregir ID del paciente>, pulse Entery repita el
paso anterior.
5. Introduzca el dispositivo de prueba en el lector y pulse Enter. Los resultados
se mostrarán cuando el análisis haya finalizado.
Nota: el dispositivo de prueba debería introducirse en el medidor en un plazo de
30 minutos a partir del momento en el que se añadió la muestra del paciente. Un
retraso de más de 30 minutos podría producir resultados incorrectos y que éstos
aparezcan sombreados en negro en la copia impresa.
PASO 3 Lea los resultados
1. Los resultados pueden imprimirse pulsando el botón Print.
2. Deseche el dispositivo de prueba después de que el lector lo expulse.
3. Un resultado sombreado en negro indica que éste fue incorrecto y que debe
repetirse la prueba.
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Resultados
El medidor Triage® mide la muestra del paciente de forma automática. Los
resultados se visualizan en la pantalla. El usuario tiene la opción de imprimir los
resultados.
Para obtener información adicional, consulte el manual del usuario del lector
Triage Meter.
Estandarización
La prueba de enzimas cardíacas Triage® Cardiac Panel se ha estandarizado
utilizando preparaciones proteínicas purificadas de CK-MB, mioglobina y troponina
I a partir de una concentración de analito presente en plasma anticoagulado con
ácido edético (EDTA).
Control de calidad
Consideraciones sobre el control de calidad
Cada dispositivo de prueba consiste en un kit para la determinación cuantitativa
con dos materiales de control de concentraciones diferentes que se procesan
automáticamente con cada muestra de paciente, solución de controles líquidos
externos o muestra para pruebas de aptitud. Si la comprobación automática de
estos controles incorporados muestra que los resultados de los valores de los
controles están dentro de los límites establecidos durante la fabricación, el lector
ofrecerá un resultado para la muestra que se esté analizando. Si la comprobación
automática de estos controles incorporados muestra que los resultados de los
valores de los controles no están dentro de los límites establecidos durante la
fabricación, no se ofrecerá ningún resultado analítico. En su lugar, el lector
mostrará una advertencia o un mensaje de error que aparece descrito en el
manual del usuario del lector Triage®.
Las prácticas correctas de laboratorio indican que los controles externos deben
analizarse con cada nuevo lote o remesa de material, o cada 30 días, y cuando así
lo requiera el control de calidad estándar de su laboratorio. Los controles deberían
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analizarse del mismo modo que las muestras de pacientes. Al analizar muestras
de pacientes o controles externos, si un analito falla por alguna razón (un fallo de
un control incorporado o un control externo fuera del intervalo), no se ofrecerán
resultados de pacientes.
Dispositivo de CC Triage®
Realice la prueba del dispositivo de CC cada día que se analicen muestras de
pacientes para comprobar el funcionamiento del instrumento. La prueba del
dispositivo de CC también puede realizarse al configurar el lector y siempre que lo
requieran los requisitos de control de calidad del laboratorio.
Analice el dispositivo de CC en los siguientes casos:
• Al instalar inicialmente el lector.
• Cada día que se hagan análisis de pacientes.
• Cuando se haya movido o transportado el lector.
• Cuando haya incertidumbre acerca del funcionamiento del lector.
Nota: Si el dispositivo de CC o los controles externos no funcionan como se
esperaba, revise las instrucciones anteriores para ver si la prueba se realizó
correctamente. Consulte el manual del usuario del lector Triage Meter para
obtener una descripción completa del sistema de control de calidad.
Limitaciones del procedimiento
Los resultados de la prueba no deben utilizarse como prueba absoluta de infarto
de miocardio y deben evaluarse en el contexto de todos los datos clínicos y de
laboratorio disponibles. En los casos en que los resultados del laboratorio no
coincidan con la evaluación clínica, deberán realizarse pruebas adicionales.
Los pacientes con lesiones del músculo esquelético pueden tener concentraciones
elevadas de CK-MB, mioglobina y troponina I. Los pacientes con fallo renal
pueden tener concentraciones elevadas de CK-MB y mioglobina.
Si no se consigue ver u obtener los resultados de la troponina I, la prueba no
podrá utilizarse como ayuda en el diagnóstico del infarto de miocardio (lesión).
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Características de rendimiento
Sensibilidad analítica
La sensibilidad analítica o concentración mínima detectable y distinguible de cero
para los tres analitos se determinó analizando un calibrador de valor cero 20 veces
para cada analito, utilizando 3 lotes de reactivos y 5 lectores en 3 días distintos. La
sensibilidad analítica de cada análisis de la prueba de enzimas cardíacas Triage®
Cardiac Panel se indica a continuación:
CK-MB: 1, 0 ng/ml
Mioglobina: 5 ng/ml
Troponina I: 0,05 ng/ml
Intervalos de medición
CK-MB: 1, 0 - 80 ng/ml
Mioglobina: 5 - 500 ng/ml
Troponina I: 0,05 - 30 ng/ml
Sustancias que interfieren
La hemoglobina (hasta 1.000 mg/dl), los lípidos (colesterol hasta 1.000mg/dl y
triglicéridos hasta 1.000 mg/dl) o la bilirrubina (hasta 20mg/dl) añadidos a plasma
recogido con ácido edético (EDTA) como anticoagulante que contenía los tres
analitos no interfirieron en la recuperación de éstos. Estas sustancias no
produjeron una respuesta positiva en una muestra que no contenía ninguno de los
analitos de interés.
El hematocrito se varió entre un 30 y un 60%, sin ningún efecto significativo sobre
la recuperación de CK-MB, mioglobina o troponina I. No obstante, deben evitarse
en lo posible muestras muy hemolizadas. Cuando una muestra parezca muy
hemolizada, debe obtenerse y analizarse otra muestra.
Reporte De Resultados
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Como en el Laboratorio Clínico del Hospital La María está protocolizada la prueba
CK-MB mediante otra técnica, sólo se reportan los resultados obtenidos para la
Troponina I y la Mioglobina.
Cobas b 121 (BEG). GASES ARTERIALES Y ELECTROLITOS
El sistema cobas b 121 (BGE) reúne las condiciones de brindar bajos costos y ser
un instrumento confiable para las determinaciones rápidas de gases en sangre y
electrolitos. El sistema cobas b 121 (BGE) sostiene a laboratorios clínicos que
enfrentan el desafío de la presión del incremento de sus costos para el cuidado de
la salud de sus pacientes. Altos niveles de automatización y bajos niveles de
mantenimiento significan muy poca intervención del operador. Esta combinación
con su modo económico, su mantenimiento libre alarga la vida de sus sensores y
sus botellones de desechos reusables ayudan a disminuir los costos del
laboratorio. Sistema confiable y efectivo en costos. Durante el desarrollo del
instrumento Roche se focalizó en reducir la complejidad y los costos para proveer
así una solución Premium para los laboratorios clínicos. Esto se logró utilizando la
plataforma, ya existente y ampliamente probada, cobas b 121 que simplifica y
reduce las determinaciones de los analitos necesarios para gases en sangre y
desórdenes del equilibrio ácido-base.
El sistema cobas b121 (BGE) entrega resultados de alta calidad en 50 segundos
incluyendo gases en sangre (pH, PCO2, PO2), electrolitos (Na+, K+, Ca++, Cl-) y
hematocrito (Hct), de estos parámetros son calculadas otras mediciones en forma
adicional como por ejemplo Base Excess (BE).
Gases Arteriales
Toma Y Manipulacion De La MuestraLa fase preanalítica es la que más contribuye a la inexactitud en la medición de los
gases sanguíneos. Para minimizar estos errores sería conveniente seguir las
siguientes recomendaciones:
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1. Dispositivos para la toma de la muestra:Los recipientes de referencia son las jeringas de vidrio o plástico. Las
determinaciones de los gases sanguíneos se deben realizar en sangre completa,
por lo que para impedir que la sangre extraída se coagule en la jeringa se utilizan
anticoagulantes para inactivar los mecanismos que ponen en marcha la
coagulación. La heparina de litio es el anticoagulante de elección, pero hay que
tener en cuenta que un exceso de heparina afecta a la determinación del pH,
pCO2, pO2 y a la hemoglobina.
2. Preparación de la muestra tras la obtención:Hay que evitar la formación de burbujas de aire en la jeringa. Las burbujas que se
mezclan con una muestra de sangre dará lugar a una equilibración de gases entre
el aire y la sangre, reduciéndose de forma importante la pCO2 de la muestra,
aumentando el pH, por lo que tras la extracción es conveniente expulsar las
burbujas. Seguidamente se cierra con un tapón y se agita para disolver la
heparina, evitando así la formación de coágulos.
6. ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE
Las muestras deberían analizarse lo antes posible, ya que la sangre consume
oxígeno y libera
CO2 a una velocidad que depende de la temperatura corporal. Por ello, si se ha de
almacenar una muestra más de 10 minutos, deberá enfriarse entre 0 ºC y 4 ºC no
más de 30 minutos para minimizar los efectos del metabolismo.
Actuación previa a la etapa analítica:Una vez que la muestra llega al laboratorio, debe colocarse en agua helada e
identificarse. A continuación, se procede a su inspección para descartar la
180
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existencia de coágulos o burbujas de aire, en cuyo caso debe ser rechazada. La
muestra debe ser homogénea, para ello es necesario mezclarla bien.
Las primeras gotas de sangre del cono de la jeringa suelen estar coaguladas, por
lo que deben rechazarse.
TIPO DE MUESTRASCuando se accede a un vaso para obtener una muestra donde determinar los
gases en sangre, hay que tener presente que pueden ocurrir tres tipos de
complicaciones: obstrucción vascular, hemorragia con formación de hematomas e
infección.
Las muestras sanguíneas pueden obtenerse por los siguientes procedimientos:
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3. Muestras de sangre capilar.Es especialmente útil en cuidados intensivos de neonatos y pediatría, debiéndose
emplear con precaución por el riesgo de cometer errores muy graves.
4. Muestras de sangre venosa.Para el análisis de gases en sangre no se recomienda las muestras de sangre
venosa priférica ya que no proporcionan ninguna información sobre el estado de
oxigenación y sólo a groso modo reflejan el estado ácido-base arterial. La
distribución del volumen minuto cardiaco total a los diversos sistemas orgánicos
depende de la resistencia arteriolar local y del tono vasomotor de los lechos
capilares respectivos. El sistema cardiovascular intenta mantener un flujo
sanguíneo adecuado hacia los sistemas orgánicos ajustando las resistencias
periféricas, es por ello que los diferentes órganos no reciben una irrigación
proporcional a sus demandas metabólicas, lo que se traduce en una variación de
los valores de oxígeno según el sistema orgánico del que proviene la sangre
venosa.
PRINCIPALES PARAMETROS IMPLICADOS EN EL EQUILIBRIO ACIDOBASE.
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VALORES DE REFERENCIA.
1. pH: es un parámetro indicador de la acidez o alcalinidad de una muestra de
sangre.
Por su relación con la pCO2, el pH se considera que tiene un componente
respiratorio, y por su relación con la concentración de bicarbonato plasmático y el
exceso de baseestándar se considera que tiene un componente metabólico,
pudiendo así distinguirse entre desequilibrios respiratorios y metabólicos.
Rango de referencia del pH en el adulto: 7.35-7.45.
2. pCO2: es la presión parcial de dióxido de carbono en la fase gaseosa en
equilibrio con la sangre. El dióxido de carbono difunde rápidamente a través de las
membranas celulares y puede considerarse igual a cero en el aire inspirado
normal. Por tanto su determinación es una medida directa de la idoneidad de la
ventilación alveolar en relación con el índice metabólico. Los valores altos y bajos
de pCO2 en sangre arterial indican hipercapnia e hipocapnia respectivamente.
Rango de referencia de pCO2 en adultos: varones: 35-48 mmHg; mujeres: 32-45
mmHg.
3. pO2: Es la presión parcial de extracción del oxígeno de la sangre arterial. Este
parámetro refleja los cambios producidos en la pO2 arterial, la concentración de
oxígeno y la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno sobre la capacidad de la
sangre arterial para suministrar oxigeno a los tejidos.
Rango de referencia de pO2 en el adulto: 83-108 mmHg.
4. HCO3-real: Es la concentración de bicarbonato en el plasma de la muestra. Se
calcula utilizando los valores de pH y pCO2 en la ecuación de Henderson-
Hasselbalch.
Encontramos valores elevados en la alcalosis metabólica y como mecanismo de
compensación en la acidosis respiratoria. Los niveles bajos se detectan en la
acidosis metabólica y como mecanismo compensatorio en la alcalosis respiratoria.
Rango de referencia en el adulto de la HCO3-real: 22-26 mmol/L.
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|
5. HCO3-estándar: es la concentración de carbonato de hidrógeno en el plasma
de sangre equilibrada con una mezcla de gases con una pCO2 de 40 mmHg y una
pO2 mayor o igual a 100 mmHg. Un bicarbonato estandar bajo indicaría una una
acidosis metabólica y si por el contrario fuera alto, sería indicativo de una alcalosis
metabólica.
Rango de referencia en el adulto del HCO3 estándar: 22-26 mmol/L
6. CTCO2: es la suma de las concentraciones de cada una de las formas en las
que se puede encontrar el dióxido de carbono.
7. Exceso/deficit de base: Es la concentración de base en sangre total valorable
con un ácido o una base fuerte hasta un pH de 7.4 a una pCO2 de 40 y a 37ºC. El
valor numérico del exceso (o déficit) de base representa la cantidad teórica de
ácido o base que habría que administrar para corregir una desviación de pH.
Rango de referencia: +2 / -2 mEq/L
8. SO2: es la saturación de oxígeno. Hace referencia al porcentaje de la
hemoglobina oxigenada en relación con la cantidad de hemoglobina capaz de
transportar oxígeno.
Rango de referencia de SO2 en el adulto: 95-99%.
9. FiO2: es la concentración de oxígeno inspirado fraccional. Representa la
concentración calculable de oxígeno que se administra al paciente. Se utiliza para
adecuar la oxigenoterapia en función de la clínica y del análisis de los gases
sanguíneos.
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Electrolitos
Se define como electrolito a toda sustancia con iones libres, capaz de transportar
la corriente eléctrica y que se encuentra en forma de sólido fundido o presente en
una disolución.
En el cuerpo humano, los electrolitos se encuentran disueltos en el plasma y sus
variaciones provocan movimiento de agua entre los compartimientos donde se
encuentran, concentrándose de manera diferente y manteniendo un equilibrio de
los fluidos en las células.
Cabe mencionar que los más importantes son aquellos con carga positiva como el:
sodio (Na+), potasio (K+), calcio (Ca++) y magnesio (Mg++); y los iones con carga
negativa como el:
Cloro (Cl-), bicarbonato (HCO3-) y fosfato (HPO4-).
El de mayor concentración en el líquido extracelular es el Na++, mientras que el
K+ es el electrolito de mayor concentración del líquido intracelular, junto con el
185
|
Mg+. De igual manera, se pueden identificar a la dextrosa, creatinina y urea que
son consideradas no electrolitos debido a que no pueden disociarse, formando
iones, como lo hacen las sustancias antes mencionadas.
De esta manera, cada compartimiento líquido tendrá su propia composición
electrolítica, que se encuentra medida en miliequivalentes (mEq) que indican el
número de cargas iónicas o uniones electrovalentes en la solución ionizada.
POTASIO
El potasio es uno de los principales iones del organismo alcanzando una
concentración de cerca a 3500 mEq y a diferencia del sodio, se localiza (98%),
mientras que su concentración plasmática alcanza a los 5 mEq/l.
La eliminación del K+por vía fecal es de 5 a 10 mEq/d, y por sudor se pierde al
menos 10 mEq/d.
La principal función del potasio es la generación del potencial de reposo de la
membrana celular, siendo particularmente importante en el proceso de
excitabilidad del tejido nervioso, corazón y músculos (liso y esquelético),
encontrándose en estos últimos, así como en el hígado el mayor reservorio de
este elemento.
CLORO
Es el principal anión del líquido extracelular y se encuentra casi siempre unido al
sodio en forma de cloruro de sodio (ClNa), lo que favorece al mantenimiento de la
presión osmótica de la sangre.
El cloro se excreta en pequeñas cantidades a partir de la transpiración insensible y
al igual que el Na+ se elimina en grandes cantidades en caso de sudoración
profusa. Este anión tiene poca reabsorción renal, misma que se encuentra
determinada por la reabsorción de sodio (Na+), controlada por la acción de la
aldosterona. De esta forma por cada cloruro de sodio reabsorbido, se reabsorbe
una molécula de bicarbonato, participando de esta forma en la neutralización de
pH sanguíneo y el mantenimiento del equilibrio ácido base.
186
|
El cloro regula también la producción de ácido clorhídrico en el estómago e
interviene en la contractilidad muscular, además de favorecer el transporte del
dióxido de carbono por los hematíes.
CALCIO IONIZADO
Este electrolito requiere una ingesta diaria de 500 a 1000 mg de calcio elemental,
eliminándose 100 a 200 mg por riñones, y 400 a 800mg/d por heces.El calcio (Ca+
+) es un ion importante para la formación del hueso, interviniendo de manera
activa en la coagulación sanguínea, reabsorción de la vitamina B12, transmisión
sináptica y excitabilidad de las membranas. Sus valores plasmáticos dependen de
la contracción muscular y se mantienen constantes, aun a expensas de extraer
Ca++de los huesos.
1. Marcadores Tumorales
El VEDALAB EASY READER
Es un medidor para la lectura de tarjetas de pruebas rápidas
inmunocromatográficas usando una cámara-CCD de alta resolución un software
integrado creado para el análisis de imágenes.
El EASY READER tiene un chip extraíble que contiene todo el software
necesario para la obtención de los resultados cuantitativos o semi - cuantitativos
de las líneas de prueba los valores de absorbancia. Dependiendo del parámetro
probado, los resultados pueden ser obtenidos a partir de muestras de sangre total,
plasma, suero u orina.
El medidor también tiene una impresora incorporada para mantener archivos de
toda la información relativa a cada paciente (nombre, fecha de nacimiento y
resultados) y para el usuario después de haber realizado el análisis.
Principio de la reacciónSi está presente en la muestra, el analito reacciona con el conjugado de color y
fluye para ser capturado por los reactivos de la cubierta de la membrana. La
187
|
intensidad de la banda de color que aparece en la zona de prueba es directamente
proporcional a la concentración del analito.
Principio del lectorEl VEDALAB EASY READER se basa en tecnología de inmunocromatografía
cuantitativa mediante la medición de la intensidad de la reacción en un casete de
prueba.
La cámara CCD de Easy reader puede medir la intensidad del color y determinar
la concentración de analitos en una muestra.
1. Coloque el instrumento en condiciones ambientales no corrosivas, en una
superficie plana y uniforme que está libre de polvo, el agua (o cualquier líquido)
y vibraciones fuertes .
2. Primero conecte el teclado para el lector
3. Conecte el lector a una fuente de alimentación
4. Pulse el interruptor en la parte posterior del lector para empezar a usarlo.
5. Pulse el botón " Inicio"
6. Seleccione el parámetro
7. Los datos de entrada del paciente necesarios para identificar la muestra a
través del teclado
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|
8. Realizar el procedimiento de ensayo como se indica en las descripciones de
las pruebas a continuación.
9. Seleccione el modo " inmediato " o " cuenta atrás "
10. Inserte la tarjeta de prueba en el medidor
GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA (hCG) La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona glicoproteica
producida en el embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después
de la concepción y más tarde por el sinciciotrofoblasto (parte de la placenta). Su
función es evitar la desintegración del cuerpo lúteo del ovario y, por ende,
mantener la producción de progesterona que es fundamental para el embarazo en
los seres humanos. La hCG puede tener funciones adicionales; por ejemplo, se
cree que afecta a la tolerancia inmunológica del embarazo. Las primeras pruebas
de embarazo, en general, se basan en la detección o medición de hCG. Debido a
que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un importante
marcador tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o un efecto de
la tumorigénesis.
HCG CHECK-1 es una prueba cuantitativa rápida para la detección de la HCG en
el suero, el plasma o la orina El método, patentado, se basa en la combinación
única de anticuerpos monoclonales marcados con oro coloidal y de anticuerpos
policlonales en la fase sólida para identificar la HCG en las muestras con gran
especificidad. Según la concentración en HCG, varias líneas aparecen en la zona
de lectura, permitiendo la medida cuantitativa del nivel de HCG en las muestras de
suero, plasma u orina, si la prueba se realiza con el lector rápido EASY
READER®.
III. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
1. Todos los componentes del kit deben conservarse a temperatura ambiente
(entre +4°C y +30°C) en sus empaques originales.
2. No congele el kit.
3. La prueba es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del
empaque.
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IV- PRECAUCIONES
1- Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso
profesional.
2- Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.
3- No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el
empaque.
4- No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.
TOMA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
a) Suero o plasma
1. Las muestras deben tomarse en condiciones de toma estándares (de
manera aséptica para procurar evitar cualquier hemólisis).
2. No es necesario centrifugar o una filtrar de suero.
3. Si la prueba se realiza dentro de 48 horas después de la toma, la muestra
debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y +8°C). 4. Si la prueba se
realiza a más de 48 horas después de la toma, la muestra debe congelarse.
Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente descongelada,
cuidadosamente mezclada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite
descongelar y recongelar las muestras. 5. En caso de turbidez, de viscosidad
alta o de presencia de partículas en la muestra de suero, hay que diluir con un
volumen igual (V/V) de solución fisiológica antes de realizar la prueba.
b) Orina 1. Para la detección óptima de un embarazo precoz, es preferible usar
una muestra de la primera orina de la mañana, porque contiene la
concentración más alta de HCG. Sin embargo, se pueden usar muestras de
orina tomadas en cualquier momento del día. 2. Tome la muestra de orina en
un recipiente limpio, seco y sin conservantes 3. Si la prueba no se realiza
inmediatamente, la muestra debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y
+8°C) o a una temperatura inferior a +25°C durante 24 horas máximo. En este
c aso, equilibre la muestra a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.
4. Si la prueba se realiza más de 48 horas después de la toma, la muestra
debe congelarse. Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente
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descongelada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite descongelar y
recongelar las muestras.
PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén
a temperatura ambiente antes de empezar la prueba.
2. Saque el casete de reactivo de su bolsa de protección rasgando a lo largo
de las muescas.
3. Indique en la prueba el nombre del paciente o un número de identificación.
4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero u orina) y manténgala
verticalmente. Deposite exactamente 4 gotas (150 µL, sin burbuja de aire) de
plasma, suero u orina en el pocillo de muestra.
5. Lea el resultado (en mUI/mL) después de 15 minutos, en lectura inmediata o
diferida.
VII- RENDIMIENTO
El intervalo de medida es de 5 hasta 500,000 UI/L
LÍMITACIONES DE LA PRUEBA
1. La orina de los hombres sanos y de las mujeres no embarazadas muestra
normalmente concentraciones indetectables de HCG con la prueba.
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2. A pesar de la variabilidad de las concentraciones de HCG en las mujeres sanas
al principio del embarazo, la prueba puede generalmente confirmar un embarazo
desde el primer día de amenorrea.
3. La HCG fue encontrada no sólo durante el embarazo, sino también en pacientes
sufriendo de una enfermedad trofoblástica gravídica y no gravídica. Como la HCG
de los tumores trofoblásticos es la misma que la observada durante el embarazo,
estas afecciones, como el coriocarcinoma y la mola hydatidiforma, deben
descartarse antes de realizar el diagnóstico de embarazo.
4. Un embarazo normal no se puede distinguir de un embarazo ectópico sólo
basándose en la concentración de HCG. De la misma manera, un aborto
espontáneo puede afectar la interpretación de los resultados de la prueba.
5. Un embarazo muy precoz, con una concentración extremamente baja de HCG,
puede resultar en un resultado negativo. En este caso, otra muestra debe tomarse
y analizarse al menos 48 horas más tarde.
6. Las concentraciones de HCG pueden detectarse durante varias semanas
después de un parto normal, un parto por cesárea, un aborto terapéutico.
7. Ciertas muestras de suero conteniendo altas concentraciones de factor
reumatoide (RF), de anticuerpos heterofilos o de Forssman pueden resultar en
resultados positivos no específicos. Estas pacientes deben ser identificadas antes
de la prueba.
8. Como para cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe evaluar los
datos obtenidos con esta prueba simultáneamente con otros datos clínicos.
9. La presencia de hidroxietilcelulosa en la composición del lubricante de las
sondas urinarias puede resultar en un resultado falso-positivo con la prueba en
una concentración superior o igual a 0.1 %.
10. Este tipo de prueba sólo debe usarse con el lector de pruebas rápidas EASY
READER® de VEDALAB.
11. Si el tiempo de lectura (15 minutos) no es rigurosamente respetado, los
resultados obtenidos son falseados.
12. Este tipo de prueba no debe usarse para una lectura visual.
192
|
13. Como es el caso para cualquier método de diagnóstico o para cualquier
sistema automático, existe una variabilidad de los resultados obtenidos. Por
consiguiente, hay que tomar en cuenta un intervalo de confianza de +/-25% para
el valor obtenido y para la interpretación clínica del resultado.
Antígeno de Cáncer CA-125 El antígeno de cáncer CA 125 es un antígeno de superficie asociado con el cáncer
de epitelio ovárico. En suero, el CA-125 circula asociado con una glicoproteína de
gran peso molecular. Estudios publicados han in dicado que niveles séricos
elevados de CA-125 pueden ser detectados en individuos con carcinoma
indiferenciado de ovario, endometrio y células claras. Las concentraciónes
séricas de CA-125 son superiores a 35 IU/mL en el 60% de las mujeres con
cáncer de ovario. Por lo tanto gran parte de los estudios recomiendan este valor
como nivel de decisión. El CA 125 sérico se encuentra elevado en el 1% de la
mujeres sanas, 3% de las mujeres sanas con alteraciones benignas de ovario, 6%
de pacientes con condiciones no neoplásicas (incluído pero no limitado al primer
trimestre de la gestación, endometriosis, menstruación, fibrosis uterina, salpingitis
aguda, enfermedad hepática e inflamación peritoneal, de pericardio o pleura).
Determinaciones seriadas de CA 125 en suero, así como una evaluación pélvica
incrementa la especificidad del test. Las concentraciones séricas de CA 125
pueden ser útiles en el monitoreo del tratamiento y el pronóstico a la respuesta al
mismo y la progresión de la enfermedad. CA 125 es un marcador tumoral sérico
para el monitoreo de la respuesta a la quimioterapia, detectando la recurrencia y
es útil para distinguir las masas pélvicas malignas de las benignas. Una caída
rápida de valores séricos de CA 125 durante la quimioterapia predice un
pronóstico favorable.
Hasta la fecha, CA 125 es el marcador más sensible para el cáncer de epitelio
ovárico residual. CA 125 también puede estar elevado en pacientes con cáncer de
pulmón, cérvix, trompas de Falopio, útero y endometriosis.
El CA-125 –CHECK-1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de
antígeno de cáncer de ovario en suero, plasma o sangre total para ser usado
como prueba de detección- el método emplea una única combinación de
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conjugado monoclonal marcado con anticuerpos policlonales de fase sólida para
identificar CA 125 con un alto grado de especificidad.
Cuando la muestra fluye a través del dispositivo absorbente el conjugado de
anticuerpos marcado se une con el CA 125 contenido en la muestra. Este
complejo migra en la membrana y es ligado por los anticuerpos policlonales anti
CA 125 atrapados en la fase sólida en la zona de reacción (T). la intensidad del
color de la banda del test es proporcional a la concentración de CA 125 en la
muestra. la mezcla sigue fluyendo a través del dispositivo absorbente pasando la
zona reactiva (T), la zona de control (C). El conjugado no ligado se une a los
reactivos en la zona control (C), produciendo una banda de color rosa
demostrando que los reactivos funcionan correctamente.
III. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
1. Todos los componentes del kit deben conservarse a temperatura ambiente
(entre +4°C y +30°C) en sus empaques originales.
2. No congele el kit.
3. La prueba es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del
empaque.
IV- PRECAUCIONES
Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso
profesional.
Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.
No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el
empaque.
No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.
TOMA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Las muestras deben tomarse en condiciones de toma estándares (de
manera aséptica para evitar cualquier hemólisis).
2. No es necesario centrifugar o una filtrar de suero.
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3. Si la prueba se realiza dentro de 48 horas después de la toma, la muestra
debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y +8°C). 4. Si la prueba se
realiza a más de 48 horas después de la toma, la muestra debe congelarse.
Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente descongelada,
cuidadosamente mezclada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite
descongelar y recongelar las muestras. 5. En caso de turbidez, de viscosidad
alta o de presencia de partículas en la muestra de suero, hay que diluir con un
volumen igual (V/V) de solución fisiológica antes de realizar la prueba.
PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén
a temperatura ambiente antes de empezar la prueba.
2. Saque el casete de reactivo de su bolsa de protección rasgando a lo largo
de las muescas.
3. Indique en la prueba el nombre del paciente o un número de identificación.
4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero o sangre total) y manténgala
verticalmente. Deposite exactamente 1 gota (25 µL, sin burbuja de aire) de
plasma o suero o 2 gotas (50 µL) de sangre total en el pocillo de muestra y
espere a que la muestra sea totalmente absorbida antes de adicionar el
diluente.
5. agregue exactamente 4 gotas de diluente en el pocillo de muestra
6. lea los resultados (en U/mL) pasados 15 minutos usando el modo de lectura
inmediato o en conteo regresivo.
CARACTERISTICAS ANALÍTICAS
Linealidad
El rango de medida es 15-750 U/ml
Para muestras cuya concentración es superior a 750 U/ml, diluir con solución
salina y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por el factor de dilución.
Sensibilidad
195
|
El CA-125-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 10U/ml, caso en el cual los
resultados se reportan como < 15 U/ml. Niveles superiores a 35 U/ml son
considerados anormales.
LIMITACIONES DEL TEST
1. Como en cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe confirmar los
resultados obtenidos con este test, empleando otros métodos diagnósticos.
2. Para el caso de muestras de sangre total utilice sólo muestras recién
obtenidas (<4 horas). Si la muestra procede de punción dactilar debe ser
procesada inmediatamente.
3. En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C
Reactiva (PCR), el test puede presentar un falso positivo.
4. El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos
humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de
HAMA pueden inducir falsos positivos.
5. El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.
6. Si el test no es leído en exactamente 15 minutos los resultados pueden ser
erróneos.
ALFA FETO PROTEÍNA.La alfa fetoproteína (AFP) es una glicoproteína de cadena simple con un peso
molecular aproximado de 70.000 kDa. Es producida por el saco vitelino fetal y
estructuras proximales del hígado y tracto gastrointestinal. En el feto humano, AFP
es la principal proteína que alcanza altos niveles séricos alrededor de la semana
12 de gestación y luego desciende a niveles indetectables en el adulto sano no
gestante.
AFP como marcador tumoral no fue inmediatamente apreciado porque el ensayo
usado para la cuantificación no era lo suficientemente sensible para detectar las
concentraciones en nanogramos asociadas con enfermedad temprana. Cuando un
radioinmunoensayo más sensible estuvo disponible, la utilidad de AFP como
marcador tumoral fue en aumento.
196
|
Aumentos marcados se encuentran en tumores malignos en l infancia, tales como
hepatoblastomas y nefroblastomas y en carcinoma hepatocelular y ciertos tumores
testiculares en adultos. Menos comúnmente, tumores malignos de tracto
gastrointestinal y otros órganos con metástasis masiva en hígado son asociados
con concentraciones aumentadas de AFP en suero.
La AFP-CHECK -1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de AFP
humana en suero, plasma o sangre total. El método emplea un conjugado
monoclonal coloreado y una fase solida con anticuerpos policlonales para
identificar AFP en muestras con alto grado de especificidad.
Cuando la muestra fluye a través del dispositivo absorbente el conjugado de
anticuerpos marcado se une con la AFP contenido en la muestra. Este complejo
migra en la membrana y es ligado por los anticuerpos policlonales anti AFP
atrapados en la fase sólida en la zona de reacción (T). La intensidad del color de
la banda del test es proporcional a la concentración de AFP en la muestra. La
mezcla sigue fluyendo a través del dispositivo absorbente pasando la zona
reactiva (T), la zona de control (C). El conjugado no ligado se une a los reactivos
en la zona control (C), produciendo una banda de color rosa demostrando que los
reactivos funcionan correctamente.
III. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
1. Todos los componentes del kit deben conservarse a temperatura ambiente
(entre +4°C y +30°C) en sus empaques originales.
2. No congele el kit.
3. La prueba es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del
empaque.
IV- PRECAUCIONES
Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso
profesional.
Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.
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No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el
empaque.
No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.
TOMA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Las muestras deben tomarse en condiciones de toma estándares (de
manera aséptica para evitar cualquier hemólisis).
2. No es necesario centrifugar o una filtrar de suero.
3. Si la prueba se realiza dentro de 48 horas después de la toma, la muestra
debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y +8°C). 4. Si la prueba se
realiza a más de 48 horas después de la toma, la muestra debe congelarse.
Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente descongelada,
cuidadosamente mezclada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite
descongelar y recongelar las muestras. 5. En caso de turbidez, de viscosidad
alta o de presencia de partículas en la muestra de suero, hay que diluir con un
volumen igual (V/V) de solución fisiológica antes de realizar la prueba.
PROCEDIMIENTO DE PRUEBA1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén
a temperatura ambiente antes de empezar la prueba.
2. Saque el casete de reactivo de su bolsa de protección rasgando a lo largo
de las muescas.
3. Indique en la prueba el nombre del paciente o un número de identificación.
4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero o sangre total) y manténgala
verticalmente. Deposite exactamente 1 gota (25 µL, sin burbuja de aire) de
plasma o suero o 2 gotas (50 µL) de sangre total en el pocillo de muestra y
espere a que la muestra sea totalmente absorbida antes de adicionar el
diluente.
5. agregue exactamente 4 gotas de diluente en el pocillo de muestra
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6. lea los resultados (en ng/mL) pasados 10 minutos usando el modo de lectura
inmediato o en conteo regresivo.
CARACTERISTICAS ANALÍTICASLinealidad
El rango de medida es 10-300 ng/ml
Para muestras cuya concentración es superior a 300 ng/ml, diluir con solución
salina y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por el factor de dilución.
Sensibilidad
El AFP-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 5U/ml, caso en el cual los
resultados se reportan como < 15 U/ml. Niveles superiores a 30 ng/ml en menores
de 1 año y de 40 ng/ml en adultos son considerados anormales.
LIMITACIONES DEL TEST
Como en cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe confirmar los
resultados obtenidos con este test, empleando otros métodos diagnósticos.
Para el caso de muestras de sangre total utilice sólo muestras recién
obtenidas (<4 horas). Si la muestra procede de punción dactilar debe ser
procesada inmediatamente.
En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C
Reactiva (PCR), el test puede presentar un falso positivo.
El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos
humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de
HAMA pueden inducir falsos positivos.
El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.
Si el test no es leído en exactamente 10 minutos los resultados pueden ser
erróneos.
ANTÍGENO CARCINOEMBRIONARIO CEAEl antígeno Carcinoembrionario al igual que la AFP es producido durante el
desarrollo fetal. Después del nacimiento, la producción de CEA se detiene y remite
199
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a valores indetectables en adultos sanos normales. Sin embargo antígenos onco-
fetales pueden aparecer debido a la des- represión de genes que son
normalmente expresados solo durante los primeros años de vida. Como antígenos
secretados CEA y AFP no contribuyen significativamente en la inmunidad contra
tumores, el papel de estos antígenos, llamados neoantígenos, en la
inmunovigilancia es cuestionable. Los niveles normales de CEA niveles en las
personas normales no fumadoras oscilan hasta 2,5 y 5,0 para el grupo de los
fumadores pero se elevan por encima de 10 ng/ml normalmente en variedad de
cáncer: pulmón, mama, colo- rectal. El seguimiento de estos pacientes es el
principal uso de estos neoantígenos tumorales. La presencia de CEA en la
circulación ha sido explotada estos diagnósticos y esquemas terapéuticos. La
medición de CEA no indica necesariamente desarrollo de cáncer ya que los
niveles de este antígeno también puede aumentar en algunas condiciones no
malignas, como en cirrosis crónica, enfisema pulmonar o tabaquismo crónico.
Cuando se contempla un procedimiento curativo (cirugía), los niveles
prequirúrgicos de CEA pueden hacer pronóstico significativo. Altos niveles de CEA
en vesicula biliar pueden indicar la presencia de metástasis hepática en pacientes
que fueron sometidos a cirugía curativa de carcinoma colorrectal. Además, se ha
hallado que niveles séricos de CEA son un valioso indicador pronóstico de cáncer
de mama avanzado.
CEA-CHECK-1 es un test cuantitativo rápido para la medición de CEA en suero,
plasma o sangre total. El método se basa en la unión entre anticuerpos
monoclonal anti-CEA fijados en el conjugado coloreado y el CEA presente en la
muestra. Cuando el CEA esta preente en la muetra, el complejo antígeno-
conjugado e une a los anticuerpos monoclonales que recubren la membrana del
test. Una muestra que contiene niveles elevados de CEA induce la formación de
una banda coloreada de rosa en la región del test (T) mientras que una muestra
negativa solo producirá la formación de la banda de control (C), que indica el
correcto funcionamiento de la prueba.
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III. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
1. Todos los componentes del kit deben conservarse a temperatura ambiente
(entre +4°C y +30°C) en sus empaques originales.
2. No congele el kit.
3. La prueba es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del
empaque.
IV- PRECAUCIONES
Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso
profesional.
Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.
No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el
empaque.
No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.
TOMA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Las muestras deben tomarse en condiciones de toma estándares (de
manera aséptica para evitar cualquier hemólisis).
2. No es necesario centrifugar o una filtrar de suero.
3. Si la prueba se realiza dentro de 48 horas después de la toma, la muestra
debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y +8°C). 4. Si la prueba se
realiza a más de 48 horas después de la toma, la muestra debe congelarse.
Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente descongelada,
cuidadosamente mezclada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite
descongelar y recongelar las muestras. 5. En caso de turbidez, de viscosidad
alta o de presencia de partículas en la muestra de suero, hay que diluir con un
volumen igual (V/V) de solución fisiológica antes de realizar la prueba.
PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén
a temperatura ambiente antes de empezar la prueba.
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2. Saque el casete de reactivo de su bolsa de protección rasgando a lo largo
de las muescas.
3. Indique en la prueba el nombre del paciente o un número de identificación.
4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero o sangre total) y manténgala
verticalmente. Deposite exactamente 1 gota (25 µL, sin burbuja de aire) de
plasma o suero o 2 gotas (50 µL) de sangre total en el pocillo de muestra y
espere a que la muestra sea totalmente absorbida antes de adicionar el
diluente.
5. agregue exactamente 4 gotas de diluente en el pocillo de muestra
6. lea los resultados (en U/mL) pasados 15 minutos usando el modo de lectura
inmediato o en conteo regresivo.
CARACTERISTICAS ANALÍTICAS
Linealidad
El rango de medida es 5-250 ng/ml
Para muestras cuya concentración es superior a 250 ng/ml, diluir con solución
salina y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por el factor de dilución.
Sensibilidad
El CEA-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 2 ng/ml, caso en el cual los
resultados se reportan como < 5 ng/ml. Niveles superiores a 5 ng/ml son
considerados anormales.
LIMITACIONES DEL TEST
1. Si bien el aumento en los niveles de CEA generalmente ocurre en ciertas
malignidades, estos también pueden aparecer en algunas condiciones no
malignas como la cirrosis crónica, el enfisema pulmonar y fumar en exceso.
2. Los resultados de CEA no deben ser interpretados como evidencia absoluta
de la presencia o ausencia de enfermedad malina pero puede ser usada en
conjunto con información procedente de otros procedimientos diagnósticos y
la evaluación clínica del paciente. CEA no es una prueba de detección de
cáncer oculto pero si una prueba de monitoreo para pacientes con varios tipos
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de malignidades o para evaluar la respuesta a la terapia y como potencial
indicador de la recurrencia y pronóstico.
3. Niveles inferiores a 5 ng/ml pueden ser obtenidos en muestras de pacientes
con carcinoma temprano.
4. Se pueden obtener resultados positivos en pacientes con tratamientos
antineoplásicos (la hepatotoxicidad producida por estos medicamentos puede
causar el incremento de niveles séricos de CEA). La radioterapia también
puede causar incrementos transitorios de CEA.
5. En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C
Reactiva (PCR), el test puede presentar un falso positivo.
6. El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos
humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de HAMA
pueden inducir falsos positivos.
7. El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.
8. Si el test no es leído en exactamente 15 minutos los resultados pueden ser
erróneos.
INMUNOGLOBULINA E TOTAL
La IgE es una inmunoglobulina normalmente encontrada en niveles mínimos
(nanogramos) en individuos sanos.
En pacientes alérgicos la IgE está presente tanto en el suero como fuertemente
unido a la superficie de los basófilos y mastocitos. La detección del nivel de IgE
total es de uso diagnóstico en caso de asma (para diferenciar alérgica de asma no
alérgica), rinitis y eczema.
Otras enfermedades en las que se encuentran niveles elevados de IgE en suero
incluyen infecciones parasitarias, aspergilosis broncopulmonar y algunas
dermatitis.
La IgE -CHECK - 1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de IgE en
muestras de sangre total, plasma o suero. El método emplea una combinación
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única de conjugado monoclonal coloreado y anticuerpos policlonales en fase
sólida para identificar IgE en las muestras de ensayo con un alto grado de
sensibilidad.
Como la muestra de prueba fluye a través del dispositivo absorbente, el conjugado
anticuerpo - colorante se une al anticuerpo anti IgE formando un complejo
antígeno-anticuerpo. Este complejo se une al anticuerpo anti IgE en la zona de
reacción (T) y produce una banda de color rosa. En ausencia de IgE, la mezcla
continúa fluyendo a través del dispositivo absorbente por la zona control y la zona
reactiva. El conjugado no unido se une a los reactivos en la zona de control (C), la
producción de una banda de color rosa, lo que demuestra que el reactivo está
funcionando correctamente.
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7. ANEXOS
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8. REFERENCIAS
http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/nguias/other/renalallNS.pdf
Ministerio de Salud, República de Chile, Instituto Nacional de Salud. Documentos
Técnicos para el Laboratorio Clínico: Recomendaciones para el análisis de
Líquidos biológicos Abril 01 de 2016. Santiago de Chile. [Internet] Disponible en:
http://www.ispch.cl/sites/default/files/Recomendaciones%20para%20el%20Analisis
%20Liquidos%20Biologicos.pdf Consultado: julio 01 de 2016
206
|
Ruíz, M. Ortíz, C. Sánchez, J. Peña, A. Transtornos del Equilibrio Acido base.
Málaga, España. [Internet] Disponible en:
http://www.medynet.com/usuarios/jraguilar/Manual%20de%20urgencias%20y
%20Emergencias/acidbase.pdf Consultado: julio 01 de 2016
Bustamante C. Gladys, Cuba Pardo Grover. Electrolitos. Rev. Act. Clin. Med
[revista en la Internet]. [citado 2016 Ago 07]. Disponible en:
http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2304-
37682013001200001&lng=es. Consultado: 15 Junio de 2016
Elaborado por Cargo Fecha
207
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Revisado por Cargo Fecha
Aprobado por Cargo Firma Fecha
9. Historial de versiones
Versión Fecha del Cambio Descripción
208
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