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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA
SECCION DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACION
Alteraciones en la Farmacocintica de la Fenacetinainducida por Lesin Medular
QUE PARA OBTENER EL GRADO DEDOCTOR EN CIENCIAS
PRESENTA
M en F. Leticia Cruz Antonio
DIRECTOR DE TESIS
Dr. Gilberto Castaeda Hernndez
Dr. Francisco Javier Flores Murrieta
2006
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El trabajo experimental de esta tesis se desarrollo en el
laboratorio de Farmacocintica del Centro de
Investigacin Proyecto Camina A.C., bajo la direccin del
Dr. Gilberto Castaeda Hernndez y del Dr. Francisco
Javier Flores Murrieta .
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Dedicatorias
A mis padres: amigos, maestros y motividadores
incansables a que logre da a da lo que me proponga,
siguiendo su ejemplo de amor, rectitud, fortaleza y
entusiasmo.
A mi hermana, hermanos, cuadas, sobrinas y
sobrinos:por su amor y apoyo incondicional.
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Agradecimientos
A Dios, por hacerse presente en cada instante de
mi vida.
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Agradecimientos
Con especial admiracin y respeto al Dr Gilberto Castaeda
Hernndez, quien adems de siempre brindarme su incondicional
apoyo, confianza, enseanzas y amistad, es y ser el ejemplo a
seguir para continuar creciendo profesionalmente y alcanzar la
excelencia en cada meta propuesta.
A los miembros de la comisin revisora de esta tesis por sus
comentarios y sugerencias que enriquecieron la culminacin de
este trabajo. Dr. Francisco J. Flores Murrieta, Dr. Guillermo
Ceballos Reyes, Dr. Jorge Eduardo Herrera Abarca, Dra. Patricia
Garca Lpez y Dr. Castillo Henkel.
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Agradecimientos
A mis compaeros y amigos del laboratorio 34 de la seccin externa de
Farmacologa del CINVESTAV, en especial a la QFB. Lourdes
Gonzlez, por la amistad brindada.
A todo el personal de Proyecto Camina, con especial afecto al Dr. Gabriel
Guzar Sahagn y la MVZ. Angelina Cruz M., por su apoyo y
enseanzas.
A la Universidad Nacional Autnoma de Mxico, por la beca otorgada a
travs del Programada de Apoyos para la Superacin del Personal
Acadmico de la UNAM (PASPA).
A mis amigas y compaeras de aventuras acadmicas: Irma, Cire, Tila,
Francis, Ll y Angelita.
A mi entraable maestro y amigo Dr. Andrs Navarrete Castro.
A todas aquellas personas que de una u otra forma estuvieron presentes
apoyando y enriqueciendo este trabajo.
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Resultados de esta investigacin se presentaron y estn publicados en:
45th Annual Meeting of the Western Pharmacology Society. Mazatln, Sin.
Mxico. Alteration of phenacetin pharmacokineticas after experimental spinal
cord injury. L. Cruz,G. Castaeda-Hernndez, F.J. Flores-Murrieta,
P.Garca-Lpez& G. Guzar Sahagn.
46th Annual Meeting of the Western Pharmacology Society. Lake Tahoe,
Nevada, USA. Effect of experimental spinal cord injury on Phenacetin
Pharmacocokinetics and metabolism after i.v. and oral Administration. L.
Cruz , F.J. Flores-Murrieta, G, Castaeda-Hernndez& G. Guzar-Sahagn.
XXXVI Congreso Nacional de Ciencias Farmacuticas. Cancn, Quintana,
Roo, Mxico. Desarrollo y validacin de un mtodo por CLAR para la
determinacin de Fenacetina y acetaminofn en sangre de rata: Una
aplicacin para estudios farmacocinticos. Cruz-Antonio Leticia, Castaeda-
Hernndez Gilberto, Flores-Murrieta Francisco Javier, Garca-LpezPatricia,
Guzar-Sahagn Gabriel.
Alteration of phenacetin pharmacokinetics after experimental spinal cord
injury. (2003). L. Cruz, G. Castaeda-Hernndez, F.J. Flores-Murrieta,
P.Garca-Lpez & G. Guzar Sahagn. Proccedings of the Western
Pharmacology Society. 46: 198.
Understanding Drug Disposition Alterations Induced by Spinal Cord Injury:
Role of Injury Level and Route of Administration for Agents Submitted to
Extensive Liver Metabolism. (2006). Leticia Cruz-Antonio, Francisco Javier
Flores-Murrieta, Patricia Garca-Lpez, Gabriel Guzar-Sahagn, and Gilberto
Castaeda-Hernndez. Journal of Neurotrauma. 23(1):75-85.
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NDICE
Pgina
ABSTRACT.................................................................................................. 13
RESUMEN................................................................................................... 141 FUNDAMENTO...................................................................................... 16
1.1. Farmacocintica............................................................................... 16
1.1.1. Factores que afectan las etapas de la Farmacocintica........ 20
1.1.1.1. Absorcin..................................................................... 20
1.1.1.2. Distribucin................................................................... 21
1.1.1.3. Biotransformacin........................................................ 22
1.1.1.4. Eliminacin................................................................... 25
1.2. Lesin Traumtica de Mdula Espinal............................................. 26
1.2.1. Incidencia de la lesin traumtica de mdula
espinal.......................................................................................26
1.2.2. Aspectos fisiopatolgicos del trauma medular....................... 28
1.2.3. Alteraciones metablicas y sistmicas secundarias a la
Lesin Traumtica de la Mdula Espinal...................................
311.2.4. Cambios Farmacocinticos atribuidos a una Lesin
Traumtica de Mdula Espinal..................................................
341.2.4.1. En estudios Clnicos..................................................... 34
1.2.4.2. En estudios con modelos experimentales.................... 36
1.3. Importancia y descripcin de modelos experimentales de lesin
medular............................................................................................
371.4. Fenacetina........................................................................................ 40
1.5. Validacin......................................................................................... 41
1.5.1. Selectividad......................................................................... 42
1.5.2. Intervalo lineal y Funcin respuesta....................................... 42
1.5.3. Exactitud y Precisin.............................................................. 43
1.5.4. Lmite de cuantificacin.......................................................... 44
1.5.5. Lmite de deteccin................................................................ 44
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1.5.6. Estabilidad de la muestra....................................................... 44
2 JUSTIFICACIN..................................................................................... 46
3 HIPTESIS............................................................................................. 49
4 OBJETIVOS............................................................................................ 50
4. 1 Objetivo general.............................................................................. 50
4.1.1. Objetivos particulares............................................................. 50
5 MATERIALES Y MTODOS.................................................................. 51
5.1. Metodologa Analtica por Cromatografa Lquida de Alta
Resolucin para la Cuantificacin de Fenacetina y Acetaminofn
en sangre de rata..........................................................................
53
5.1.1. Condiciones cromatogrficas.................................................. 53
5.1.2 Procedimiento general para el anlisis de muestras para lavalidacin................................................................................
535.1.3 Muestras blanco para la validacin.......................................... 54
5.1.4. Muestras de tratamientos........................................................ 54
5.2. Validacin del mtodo analtico........................................................ 54
5.2.1. Selectividad............................................................................. 54
5.2.2. Intervalo Lineal y Funcin Respuesta..................................... 54
5.2.3. Exactitud y Precisin.............................................................. 55
5.2.4. Lmite de cuantificacin.......................................................... 55
5.2.5. Limite de deteccin................................................................. 56
5.2.6. Estabilidad de la muestra....................................................... 56
5.3. Condiciones Generales para los Estudios farmacocinticos....... 56
5.3.1. Animales de experimentacin................................................ 56
5.3.2. Anestesia................................................................................ 56
5.3.3. Laminectoma......................................................................... 57
5.3.4. Lesin medular a nivel T1 y T8.............................................. 57
5.3.5. Cuidados post-operatorios..................................................... 58
5.3.6. Administracin del frmaco..................................................... 58
5.3.7. Toma de muestras.................................................................. 58
5.3.8. Anlisis de las muestras.......................................................... 59
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5.4. Efecto del nivel de la lesin medular experimental a nivel T1 y
T8 sobre la farmacocintica de la fenacetina en una
administracin intravenosa y oral................................................
59
5.5. El efecto de los cambios farmacocinticos de la fenacetina en
una lesin traumtica de mdula espinal en fase de choque
medular experimental sobre la biodisponibilidad de la
fenacetina....................................................................................60
5.6. Influencia de una lesin traumtica de mdula espinal en fase
de choque medular experimental en la cintica del principal
metabolito (acetaminofn) de la fenacetina.................................
60
5.7 Clculos farmacocinticos............................................................ 60
5.8 Anlisis estadstico....................................................................... 616 RESULTADOS....................................................................................... 63
7 ANLISIS DE RESULTADOS................................................................ 94
8 CONCLUSIONES................................................................................... 110
9 PERSPECTIVAS DEL TRABAJO........................................................... 111
10 ANEXO................................................................................................ 112
11 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS....................................................... 127
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ABSTRACT
It has been previously reported that acute spinal cord injury (SCI)
produces hemodynamic alterations, including a significant reduction in liver
blood flow which is more pronounced after a high than after a low lesion. Todetermine if these changes have an impact in the pharmacokinetics of high
extraction drugs (i.e. which clearance mainly depends on liver blood flow) we
studied the pharmacokinetics of a model compound, phenacetin, and of its
main metabolite, acetaminophen, in rats 24 h after a high (T1) or a low (T8)
SCI, as well as in sham-lesioned controls. SCI induced significant alterations
in the pharmacokinetics and metabolism of phenacetin. After iv administration
to animals with SCI, reductions in drug clearance and distribution leaded to
an increase in drug blood concentrations which was more pronounced after
the high than after the low injury, as expected from the reported data on SCI-
induced hemodynamic changes. After oral administration, phenacetin blood
levels were similar in sham-lesioned and T1-injured animals, but decreased
by injury at T8. This is likely due to a reduction in drug absorption which
compensates the changes in distribution and elimination induced by injury at
T1, whereas it prevails in T8-lesioned animals. Acetaminophen blood
concentrations after iv phenacetin administration were reduced by SCI likely
by the reduction in biotransformation, but this reduction was less important
than expected as it was compensated by an impairment in the elimination of
the metabolite. After oral phenacetin administration, acetaminophen blood
levels were similar in T1-injured and control rats probably due to a
compensation between alterations in the absorption, first pass effect,
distribution and elimination of the parent compound as well as in the
distribution and elimination of the metabolite. After SCI at T8, the reduction indrug absorption prevails in a manner that acetaminophen blood levels are
reduced. Results demonstrate that SCI significantly alters the
pharmacokinetics of high extraction drugs. The outcome of such alterations
depend on the level of SCI and on the route of drug administration.
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RESUMEN
Previamente se ha reportado que una lesin traumtica de mdula
espinal (LTME) en etapa aguda provoca alteraciones hemodinmicas,
incluyendo una reduccin importante en el flujo sanguneo heptico el cual es
ms evidente a niveles altos de la lesin que en niveles bajos. Para
determinar si estos cambios tienen un impacto en la farmacocintica de
frmacos de alta extraccin (en los cuales su depuracin depende de flujo
sanguneo heptico), se estudio la farmacocintica de un frmaco usado
como modelo, la fenacetina y su principal metabolito, acetaminofn, en ratas
24 horas despus de una LTME alta (nivel torcico, T1) o baja (nivel torcico,
T8), as como tambin en un grupo control (sin LTME). Encontrndose que laLTME provoca alteraciones significativas en la farmacocintica y
metabolismo de la fenacetina.
Posterior a la administracin intravenosa a los animales con LTME, la
reduccin en depuracin y distribucin provocaron un incremento en las
concentraciones sanguneas del frmaco las cuales fueron mas evidentes en
los animales con lesin alta (T1) que con los de baja (T8), tal como se
esperaba a partir de los datos en cambios hemodinmicos promovidos por la
LTME. Despus de la administracin oral, los niveles sanguneos de
fenacetina fueron similares en los animales lesionados a nivel T1 y en el
grupo control, pero decrecieron con los animales lesionados a T8. Los
resultados a nivel T1 fueron probablemente debido a que si bien existi una
disminucin de la absorcin del frmaco, sta fue compensada por los
cambios en distribucin y eliminacin inducidas por la lesin a nivel T1, en
tanto a nivel T8 la disminucin en absorcin prevaleci. Las concentraciones
del acetaminofn despus de la administracin intravenosa de fenacetina
fueron disminuidas significativamente cuando la lesin medular esta
presente, factiblemente debido a la reduccin en la biotransformacin, pero
esta reduccin no fue evidenciada nivel dependiente como se esperaba,
posiblemente como consecuencia de la compensacin por un impedimento
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en la eliminacin del metabolito. Inmediatamente despus de la
administracin oral de fenacetina, los niveles sanguneos de acetaminofn
fueron similares en los grupo control y el lesionado en T1, debido a la
compensacin entre alteraciones en la absorcin, efecto de primer paso,
distribucin y eliminacin del metabolito; en tanto que en la LTME a nivel T8,
la reduccin en la absorcin del frmaco prevalece en forma tal que los
niveles sanguneos de acetaminofn fueron disminuidos. Estos resultados
demuestran que la LTME altera significativamente la farmacocintica de
frmacos de alta extraccin, donde tales alteraciones dependen del nivel
lesin y de la ruta de administracin del frmaco.
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Alteraciones en la Farmacocintica de la Fenacetina inducidapor Lesin Medular.
1. FUNDAMENTO
1.1 Farmacocintica.
El objetivo de la farmacoterapia es prevenir, curar o controlar diversas
anormalidades patolgicas. Para lograrlo se deben administrar dosis
adecuadas de frmacos, de tal forma que se alcancen niveles teraputicos
que no produzcan toxicidad. Se reconocen cuatro vas fundamentales de
movilizacin y modificacin de una sustancia en el organismo: absorcin,
distribucin, metabolismo y eliminacin, que controlan la velocidad del inicio
de accin de un agente, la intensidad de su accin y la duracin de su efecto.
La farmacocintica se refiere a los cambios cuantitativos totales de un
frmaco en el organismo y a su concentracin en el plasma, considera
tambin el tiempo tras su administracin por diferentes vas. Las
interacciones de los procesos mencionados anteriormente determinan el
perfil farmacocintico de un medicamento. La importancia de identificar la
farmacocintica de un agente no solo reside en la definicin de los factores
que modifican su concentracin y persistencia en el organismo, tambin en la
posibilidad de adecuar el uso de frmacos en condiciones especificas
(Endrenyi, 1989).
De un modo ideal, debera existir una relacin constante entre la dosis
administrada y la concentracin plasmtica y tisular, y entre la tisular y el
efecto teraputico o txico; sin embargo, no es as en primer lugar, existendiferencias entre unas personas y otras con relacin a los procesos de
absorcin, distribucin y eliminacin, lo que hace que una dosis determinada
origine efectos diversos en individuos distintos. En conjunto, gran parte de
las diferencias inter individuales en la respuesta a una dosis media o
estndar se debe a las diferencias en los procesos farmacocinticos, lo que
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repercute en los niveles plasmticos alcanzados. De aqu que la
determinacin del nivel plasmtico de los frmacos sea un procedimiento til
para detectar estas diferencias e individualizar untratamiento. No obstante,existen tambin factores que pueden alterar el significado de nivel
plasmtico, haciendo que un mismo nivel origine efectos distintos (Endrenyi,
1989; Nies y Spielberg, 1996).
Dado que la farmacocintica estudia los procesos y factores que
determinan la cantidad de frmaco presente en el sitio en que debe ejercer
su efecto biolgico en cada momento, a partir de la aplicacin del frmaco
sobre el organismo vivo, se requiere del anlisis de las concentraciones de
frmacos y sus metabolitos en los lquidos orgnicos. El movimiento de los
frmacos est sometido a leyes formulables por modelos matemticos,donde sus representaciones facilitan la descripcin del curso temporal de su
disposicin en el organismo y su conocimiento proporciona importante
informacin para valorar o predecir la accin teraputica o txica de un
frmaco (Endrenyi,1989; Arms y Trovis,1988).
Es posible seguir el avance de un frmaco en el organismo a travs de
un perfil plasmtico, el cual pude describir las variaciones sufridas por la
concentracin de un frmaco en el plasma, desde su administracin hasta su
desaparicin del organismo. Tras la administracin oral de un frmaco, la
concentracin plasmtica, alcanza un mximo y luego desciende (Figura
1.1). Esta variacin temporal se debe a la intervencin de los diversos
procesos farmacocinticos, que actan con intensidad diferente. As, al inicio
predomina la velocidad de absorcin sobre la distribucin y la eliminacin, y
cuando la intensidad de la eliminacin supera a la de absorcin, la curva
desciende (Seeman y Kalant, 1989). Parmetros tales como la
concentracin mxima (Cmax), el tiempo requerido para alcanzar esta
concentracin (tmax), el rea bajo la curva (ABC), y la vida media terminal
(t 1/2), son fcilmente obtenidos cuando el frmaco se administra por va oral
(p.o), mientras que parmetros tales como el volumen de distribucin (Vd) y
la depuracin (CL) slo pueden obtenerse cuando el frmaco se administra
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por va intravenosa (figura 1.2.) (Endrenyi, 1989). La magnitud de la
absorcin de un frmaco es referida al clculo matemtico del ABC, que
permite una estimacin de la biodisponibilidad. La velocidad de absorcin es
observada por la Cmax y el tiempo requerido para esta (tmax) puede ser
tambin empleado (Endrenyi y Yan, 1991), el tiempo de vida media de un
frmaco (t ) representa la estimacin de la duracin del efecto
farmacolgico y se define como el tiempo que se requiere para que la
concentracin del frmaco disminuya en un 50%. El Vd aparente indica la
distribucin de un frmaco en el organismo y la CL indica el volumen de
sangre que queda libre del frmaco por unidad de tiempo (Gibaldi,1991).
Figura 1.1. Curva de niveles plasmticos: evolucin que sigue la concentracin de
frmaco en el plasma despus de administrar una dosis extravascular. Cmax:
concentracin mxima. t max : tiempo en el que se alcanza la Cmaxy ABC:
rea bajo la curva (Adaptado de: Shargel y Yu, 1995).
ConcentracinPlasmtica
t max
ABC
C max
Tiem o
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Figura 1.2. Curva de niveles plasmticos: evolucin que sigue la concentracin de
frmaco en el plasma despus de administrar una dosis intravenosa. Cp:
concentracin a tiempo cero, ABC: rea bajo la curva, Vd: volumen de
distribucin y Cl: depuracin (Adaptado de: Shargel y Yu, 1995).
La interpretacin de los datos experimentales para describir el curso
temporal de las concentraciones de un frmaco, se realiza generalmente con
la ayuda de modelos basados en compartimentos. Estos modelos
usualmente se ajustan bien para la administracin intravenosa, en la que se
aprecian las fases de distribucin y eliminacin, dado que no hay absorcin.
Sin embargo, para las vas extravasculares, por lo general se prefiere el uso
de modelos no compartimntales, ya que el poder caracterizar
adecuadamente la fase de absorcin es difcil, sobre todo cuando se trata de
frmacos administrados por va oral y que se absorben muy rpido. Para estetipo de frmacos los parmetros farmacocinticos aceptados para indicar
biodisponibilidad son la Cmax y el ABC (Pabst y Jaeger, 1990).
ConcentracinPlasmtica
ABC
Cp
Vd = Dosis/C
CL = Dosis/ABC
Tiem o
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1.1.1. Factores que afectan las etapas de la Farmacocintica.
1.1.1.1. Absorcin.
La absorcin puede describirse como la velocidad a la que un frmaco
deja su sitio de administracin y el grado o la medida en que lo hace
(Seeman y Kalant, 1989). Cuando las velocidades de absorcin, distribucin
y eliminacin cambian en forma proporcional a las variaciones de las dosis, la
concentracin plasmticas del frmaco varia en proporcin a la cantidad de
frmaco absorbido y se dice que el frmaco tiene una cintica de primer
orden, en estas circunstancias la concentracin plasmtica del frmaco
aumentar en forma proporcional cuando se aumente la cantidad de frmaco
absorbido o podr presentarse una disminucin de la concentracinplasmtica cuando se presente una disminucin en la absorcin del frmaco,
stas variaciones en la cantidad de frmaco absorbido se reflejan en la
intensidad del efecto farmacolgico, el cual puede aumentar o disminuir en
funcin de la cantidad de frmaco absorbido (Benet, 1996).
En la absorcin de frmacos influyen muchas variables adems de los
factores fisicoqumicos que modifican el transporte transmembrana. Este
fenmeno, independientemente del sitio en que ocurra, depende de la
solubilidad del frmaco y las circunstancias que privan en el propio sitio de
absorcin modifican la solubilidad de la sustancia, en particular la va
gastrointestinal (Gibaldi, 1991). La absorcin por la va gastrointestinal esta
regida por factores como son el rea superficial para la absorcin; el flujo
sanguneo en el sitio de sta, la motilidad, el pH, la presencia o no de
alimentos, el estado fisicoqumico del frmaco y su concentracin en dicho
sitio. La absorcin de casi todos los frmacos en la va gastrointestinal se
hace mediante procesos pasivos, por lo cual facilita la absorcin cuando el
frmaco esta en su forma no ionizada y ms lipoflica, as mismo cualquier
factor que acelere el vaciamiento gstrico, muy probablemente acelerar la
absorcin del frmaco, tanto la velocidad de vaciamiento gstrico y el trnsito
intestinal estn influenciados por el flujo sanguneo (Tietze y Laksmi, 1994),
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por lo que la circulacin en el sitio de absorcin tambin es un factor que
influye en el proceso de absorcin, donde una disminucin en el flujo
sanguneo, como la que se presenta en un estado de choque medular
modificar la absorcin de frmacos (Rowland y Tozer, 1989, Gibaldi,1991).
Los elementos anteriores, sea por separado o en combinacin,
pueden ejercer un efecto profundo en la eficacia clnica y en la toxicidad de
un frmaco determinado.
1.1.1.2. Distribucin.
Comprende los procesos de transporte del frmaco dentro del
compartimiento sanguneo y su posterior penetracin en los tejidos, diluido
en los lquidos intersticiales y celulares (Rowland y Tozer, 1989). Ladistribucin de un frmaco es generalmente referida como rpida y
reversible, contemplando un equilibrio dinmico (entre frmaco en torrente
sanguneo y frmaco en tejidos), donde cambios en la concentracin de
frmaco en el plasma son indicativos de cambios del frmaco en otros
tejidos, incluyendo los sitios del efecto farmacolgico (Gibaldi, 1991).
La distribucin de los frmacos del torrente sanguneo a los tejidos del
organismo ocurre a varias velocidades y en varias magnitudes. Algunos
factores que determinan la distribucin del frmaco incluyen la liberacin del
frmaco al tejido, la habilidad del frmaco para atravesar las membranas del
tejido, y la unin del frmaco tanto a protenas plasmticas como a
componentes tisulares (Rowland y Tozer, 1989). De tal forma, que los
patrones de distribucin del frmaco reflejan algunos factores fisiolgicos y
propiedades fisicoqumicas de las formas farmacuticas. Existe una fase
inicial de distribucin, que refleja la intervencin del gasto cardaco y el flujo
sanguneo regional, la velocidad con la cual la sangre entra y deja cualquier
tejido est por tanto directamente relacionada con el gasto cardaco, el cual
es un factor determinante en la distribucin, cuando del flujo sanguneo
disminuye sea por una insuficiencia cardiaca, un estado de choque o alguna
otra circunstancia, el cerebro y el miocardio reciben ms irrigacin sangunea
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que los rganos abdominales y en consecuencia los procesos de distribucin
y eliminacin del frmaco se ven modificados (Benet y Sheiner,1996; Deutsh
et al., 1991). Una segunda fase de distribucin puede distinguirse, la cual
tambin esta limitada por el flujo sanguneo e incluye una fraccin mucho
mayor de masa corporal que la primera fase (Benet y Sheiner, 1996), donde
la extensin de la distribucin del frmaco ser el grado en el cual ste se
distribuye ms all del suero o plasma, esta propiedad es representada por
el parmetro de volumen de distribucin que se define como el volumen
terico de los fluidos o tejidos corporales en los que un frmaco se disuelve o
se fija respectivamente. La velocidad con la cual un frmaco se distribuye en
varios tejidos puede influir sobre el tiempo que toma ste en alcanzar la
concentracin plasmtica teraputica (Rieschel, 1992). Es muy frecuenteque los frmacos puedan unirse a protenas plasmticas por lo que cualquier
factor que altere significativamente esta unin modificar su distribucin y
excrecin sobre todo en aquellos frmacos que se unen en ms de un 80 %
a las protenas del plasma, ya que esta unin limita la concentracin de
frmacos en los tejidos y en el sitio de accin debido a que slo la forma libre
esta en equilibrio a travs de las membranas (Endrenyi, 1989). Por otro lado,
los frmacos pueden acumularse en los tejidos en concentraciones ms
elevadas que lo esperado, en funcin del equilibrio de difusin, como
resultado de gradientes de pH, fijacin a constituyentes intracelulares o por
su afinidad por los lpidos (Benet y Sheiner, 1996).
1.1.1.3. Biotransformacin.
En trminos generales, las reacciones de biotransformacin generan
metabolitos inactivos ms polares, que se excretan fcilmente al exterior. Sin
embargo, en algunos casos se producen metabolitos con potente actividadbiolgica o con propiedades txicas (Benet y Sheiner, 1996). Los sistemas
enzimticos responsables de la biotransformacin de muchos frmacos estn
principalmente localizados en la fraccin microsomal de las clulas hepticas
(Kalant, 1989 y Gibaldi, 1991). Muchos tejidos en el organismo son capaces
de biotransformar a los frmacos (rin, pulmones, epitelio gastrointestinal,
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piel) y tienen tambin un papel importante en la cintica de algunos
frmacos (Kalant, 1989).
Las enzimas biotransformadoras de los frmacos, oxidan, reducen,
hidrolizan o conjugan compuestos. La reduccin, oxidacin y reacciones de
hidrlisis (Reacciones de Fase I o de biotransformacin) resultan en
metabolitos con grupos funcionales con caractersticas de mayor polaridad
que pueden ser conjugados con acetatos, sulfatos, glicina o cidos
glucornidos (Reacciones de Fase II o de biosntesis), conjugados que
suelen ser inactivos y se excretan con rapidez en orina y heces (Benet y
Sheiner, 1996; Gibaldi, 1991).
La eficiencia del sistema heptico para biotransformar los frmacos
depende de tres factores principales, flujo sanguneo heptico, el cualparticipa en el transporte del frmaco al rgano, el grado de unin a
protenas, expresado como la fraccin libre del frmaco en la sangre capaz
de entrar a los hepatocitos; y la actividad del sistema enzimtico, implicado
en la biotransformacin heptica del frmaco (Levy y Bauer, 1986).
La funcin heptica deficiente en sujetos con hepatitis, hepatopata
alcohlica, hgado adiposo, entre otros, puede culminar en alteraciones en la
biotransformacin. El grado de la disminucin de la actividad de
monooxigenasa del citocromo P450 y de la eliminacin por el hgado es
proporcional a la gravedad del dao heptico. La disminucin del flujo
sanguneo en el hgado, caracterstica de la insuficiencia cardiaca o el
bloqueo -adrenrgico, tambin afecta y disminuye la rapidez de
biotransformacin heptica (Benet y Sheiner, 1996). El metabolismo de
frmacos con una razn alta de extraccin por parte del hgado (donde los
valores de depuracin heptica y del flujo sanguneo de este rgano son
prcticamente equivalentes) est limitado por el aporte sanguneo a dicha
glndula (Rowland y Tozer, 1989). En estos casos, la disminucin del flujo de
sangre por el hgado hace que se reduzcan la biotransformacin y
eliminacin del frmaco original, y en consecuencia, prolonga su efecto
(Greenblatt, 1992). Esta accin no se presenta en frmacos que se extraen
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en forma deficiente por el hgado, debido a la alta unin a protenas
plasmticas de stos, por lo que la depuracin sistmica depender de su
fraccin libre y de la depuracin intrnseca. Cuando los cambios en flujo
sanguneo heptico no tienen efecto sobre la depuracin heptica de los
frmacos, se consideran frmacos no dependientes del flujo.
La relacin entre los conceptos de coeficiente de extraccin, flujo
sanguneo heptico y depuracin heptica, considerando el modelo de
perfusin, se establece al considerar al hgado como el rgano depurador,
donde el frmaco penetra a una concentracin arterial de Ca y su
concentracin venosa al salir es menor que Cv (Figura 3).
El flujo sanguneo a travs del rgano es Q (mL/min), durante un
minuto en estado estable involucra:Cantidad de frmaco que penetra al rgano = Q * Ca
Cantidad de frmaco que sale del rgano = Q * Cv
Cantidad de frmaco extrado por el rgano = Q * ( Ca Cv)
La fraccin del medicamento que el rgano extrae de la sangre es
(Ca Cv)/Ca, y se le conoce como el coeficiente de extraccin (E), el cual
denota la eficacia del proceso de eliminacin de un frmaco queda
establecido como:
E = (Ca Cv)/Ca.
Cuando su valor se aproxima a 1, significa que el rgano depura con
rapidez y eficacia la mayor parte del frmaco; en cambio, si el coeficiente de
extraccin es pequeo, cercano a 0, indica que el proceso de eliminacin por
el rgano resulta lento e ineficaz. Al multiplicar el flujo sanguneo (Q) por la
fraccin (E) de frmaco extrado por el rgano, se obtendr el volumen de
sangre que ste usa para eliminar el medicamento por unidad de tiempo.
Esto ltimo constituye lo que se conoce como la depuracin del rgano.
Cl H= Q * E
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La depuracin heptica es casi igual al flujo sanguneo, si un frmaco es
extrado en forma eficaz (E = 1), y por tanto la depuracin heptica tambin
puede definirse como: Cl H = Q * ( Ca Cv) / Ca (Rowland y Tozer, 1989).
Figura 1.3. Modelo de depuracin de frmacos en rganos. Aplicado al hgado: Q =flujo sanguneo heptico total; Ca = concentracin de frmaco en sangre
mezclada de vena porta y arteria heptica; Cv = nivel de medicamento
venoso heptico (Adaptado de: Rowland y Tozer, 1989).
1.1.1.4. Eliminacin.
La eliminacin ocurre por excrecin y biotransformacin. Algunos
frmacos son excretados por va biliar. Otros, particularmente sustancias
voltiles, son excretados por los pulmones. Para muchos frmacos, sinembargo la excrecin ocurre predominantemente por los riones (Rowland y
Tozer, 1989).
Los rganos de excrecin, excluidos los pulmones, eliminan con
mayor eficiencia compuestos polares que sustancias de gran liposolubilidad.
Los riones son los rganos ms importantes para la eliminacin de los
frmacos y sus metabolitos. Las sustancias excretadas en heces son
principalmente frmacos que no se absorbieron por la va oral o metabolitosexcretados en la bilis, que no se reasorbieron en la va gastrointestinal.
La excrecin renal es la va ms importante de excrecin de frmacos,
siendo ste un fenmeno complejo que involucra uno o ms de los siguientes
procesos: filtracin glomerular, secrecin tubular activa y reabsorcin pasiva
Dependiendo de cual de stos procesos sea el dominante, la depuracin
Q CvCa
rganodepurador
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renal de un frmaco puede ser un componente importante o despreciable
para su eliminacin (Gibaldi, 1991). La filtracin glomerular est influida
directamente por el flujo sanguneo renal. El flujo renal en el humano adulto
es en promedio de 700-800 mL/min, de esta cantidad 120-130 mL/min se
filtran a travs del glomrulo (Gibaldi, 1991). Una reduccin del flujo renal se
refleja por tanto en una disminucin de la cantidad de filtrado glomerular
alterndose los procesos de secrecin y reabsorcin, circunstancias bajo las
cuales se hace necesario un ajuste de la dosis de frmacos, principalmente
de aquellos que presentan una ventana teraputica estrecha y que se
eliminan principalmente por rin (Bonate y Weir, 1998)
La excrecin de frmacos y sus metabolitos por la bilis sigue en
importancia a la excrecin urinaria. La fraccin eliminada por la bilis enrelacin con la eliminacin total es muy variable de un frmaco a otro, ya que
algunos se eliminan en gran parte por esta va mientras que otros no la
utilizan en absoluto. El proceso de excrecin biliar se relaciona
estrechamente con el proceso de biotransformacin, ya que la eficacia del
hgado como rgano de excrecin de conjugados de glucornido se ve
limitada enormemente por la hidrlisis enzimtica que stos experimentan
despus de que la bilis se mezcla con el contenido del yeyuno-leon, y que el
frmaco original se reabsorbe en el intestino. De esta manera, dichos
compuestos pueden someterse a un ciclaje biliar extenso, para ser
excretados finalmente por los riones (Benet y Sheiner, 1996).
1.2. Lesin Traumtica de Mdula Espinal.
1.2.1. Incidencia de la lesin traumtica de mdula espinal.
La sociedad debe prestar atencin a la poblacin en condiciones de
desventaja y, particularmente, a aquella que padece de discapacidad fsica o
metal. Poblacin con un problema de salud a largo plazo, que les impide
realizar con plenitud algunas actividades que llevaran a cabo en condiciones
normales. En Mxico, en el ao 2000, vivan 1.8 millones de personas con
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discapacidad, donde el 52.4 % son hombres y 47.4 % mujeres. La
discapacidad ms frecuente en esta poblacin en el pas es la discapacidad
motriz, cubriendo sta el 45.3 % del total (INEGI, 2000) y donde podemos
encontrar la poblacin con lesin traumtica de mdula espinal (LTME).
Pardini en 1988, seala que en la Ciudad de Mxico, la causa ms frecuente
de LTME., es por cadas (58%) seguida por accidentes automovilsticos
(17.9%) y por armas de fuego (14.3%).
La lesin en mdula espinal es un evento devastador que tiene
trascendencia funcional y efectos psicolgicos sobre la persona que la
padece e influye en diversas formas no solamente en el paciente, tambin en
los familiares y la sociedad. En muchos pases, la lesin traumtica de
mdula espinal ocurre en un promedio anual de 20 a 40 personas por milln(Kraus et al., 1975, Papadopoulos 1992, Singu et al., 1995).
Aproximadamente la mitad de pacientes con lesin medular son hombres
jvenes que pudieran estar en los primeros aos de su vida productiva. Los
costos iniciales de hospitalizacin son altos y subsecuentemente el cuidado
mdico es costoso tambin. Por ejemplo, el impacto del estimado econmico
de pacientes con lesin traumtica de mdula espinal en Estados Unidos,
excede de 4 billones de dlares por ao (Stripling, 1990, Bracken, 1991), por
lo que el desarrollo e investigacin de tratamientos especficos para
pacientes con este trauma podr brindar grandes beneficios, que aunado a la
asistencia mdica ptima y cuidadosa rehabilitacin tales pacientes pueden
recobrar la sensacin de control sobre sus vidas y maximizar su
independencia y calidad de vida. El dao sobre la mdula espinal afecta los
sistemas orgnicos por arriba y abajo del nivel del dao donde, los
procedimientos mdicos y rehabilitarorios varan de acuerdo a ste. La lesin
traumtica de mdula espinal produce alteraciones motoras y sensitivas,
incontinencia intestinal y vesical, as como complicaciones tales como
lceras y alteraciones urinarias, dependiendo del tipo y nivel de lesin. (Yu,
1998, Andreson, 1992 y Segal,1995).
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1.2.2. Aspectos fisiopatolgicos del trauma medular
Existe 4 tipos generales de lesin medular: 1) maceracin de la
mdula, en la cual la morfologa de la mdula es severamente deformada; 2)
la laceracin de la mdula (por arma de fuego o punzo cortante); 3) dao por
contusin, el cual induce una hematomielia que puede desarrollar
siringomielia y 4) dao slido de la mdula,en el cual no hay un foco central
de necrosis como en el dao por contusin (Bunge et al.,1993; Bunge et al.,
1997). De los cuatro tipos de lesin, el dao por contusin se presenta del
25 al 40% de los casos, siendo este tipo de lesin el comnmente usado
para la investigacin de lesin medular experimental en diseos con
animales (Basso, 1996).
Los efectos de una LTME dependen del tipo y nivel de lesin, de
forma general la LTME puede dividirse como completa e incompleta (parcial
o total). Una LTME completa significa que no hay funciones por debajo del
nivel de lesin, (no hay sensaciones ni movimiento), ambos lados del cuerpo
son igualmente afectados, en tanto una lesin incompleta refiere que alguna
funcionalidad por debajo del nivel de la lesin puede existir. Una persona con
una lesin incompleta puede ser capaz de mover un miembro de su cuerpo
ms que otro, puede ser capaz de sentir parte de su cuerpo y moverlo, opuede tener ms funcionalidad en una parte del cuerpo que en otra. El nivel
de lesin es determinado como el punto ms bajo, donde existe una
disminucin o ausencia de sensacin (nivel sensitivo) y movimiento (nivel
motor). Entre ms alta sea la lesin de la mdula espinal en la columna
vertebral, o ms cerca est del cerebro, mayor es la prdida de la funcin
(sensacin y movimiento). Dependiendo del nivel afectado se puede producir
una parapleja (afeccin de los miembros inferiores) localizndose la lesin
en el rea torcica, lumbar o sacra o una tetrapleja (prdida de las
funciones en miembros inferiores y superiores), cuando la lesin se localiza
en el rea cervical (Yu, 1998, Andreson, 1992 y Segal,1995).
Las fases que se presentan posterior a una LTME exhiben diferentes
alteraciones sistmicas y metablicas. Aparentemente, alteraciones iniciales
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pueden ser relacionadas a la prdida de la actividad refleja espinal por
debajo e inmediatamente arriba del nivel de lesin en el estado conocido
como choque medular (Atkinson y Atkinson, 1996), la disfuncin puede ser
asociada con cambios plsticos en la mdula espinal y otros tejidos (Guizar-
Sahagn et al., 1998). Al producirse una LTME, el dao no solo esta
confinado al sitio de lesin original, existe un perodo de latencia entre el
momento del traumatismo y el desarrollo de la mxima lesin
(aproximadamente de 3 das) lo que permite diferenciar los eventos de la
lesin llamados primarios y secundarios.
La lesin primaria puede definirse como la alteracin inmediata de la
mdula espinal que resulta del trauma o manipulacin mecnica inicial y
vara de acuerdo al tipo e intensidad del mismo, la lesin secundaria, que sepresenta despus de una LTME, se produce subsecuentemente como
consecuencia de los mltiples eventos auto-destructivos que se presentan,
que contribuyen a una mayor destruccin y pueden llevar de una lesin
originalmente incompleta a una lesin completa (Anderson, 1992; Tator y
Fehlings 1991 y Kliot y Lustgarten, 1990). Dichos eventos auto-destructivos
se deben a la induccin de mecanismos tales como la desregulacin inica
que se presenta en la lesin medular, donde la disminucin de tensin de
oxgeno y trifosfato de adenosina (ATP) da lugar a una rpida inactivacin
enzimtica de la membrana, produciendo una alteracin en la homeostasis
inica. Los iones sodio y calcio se incrementan a nivel intracelular mientras
que los iones potasio y magnesio disminuyen (Banik y Alhaney, 1985), esta
alteracin en el gradiente inico da lugar a la prdida de transmisin de los
impulsos nerviosos que finalmente da lugar a formacin de edema y necrosis
de tejidos (Anderson, 1992).
El exceso de calcio extracelular conduce a daos en la funcin
mitocondrial, activacin de proteasas, fosfolipasas y lipoperoxidacin, que
inciden sobre las membranas y los neurofilamentos causando trastornos que
frecuentemente llevan a la muerte neuronal (Banik y Alhaney, 1985 y
Anderson, 1992). La excitotoxicidad (intensa excitacin de las neuronas
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viables por receptores N-metil-D-aspartato) inducida por aminocidos tales
como el glutamato, el aspartato y el cido quinolnico es otra de las
alteraciones fisiolgicas secundarias derivadas de la LTME, el glutamato y el
aspartato en condiciones normales son aminocidos que se encuentran
almacenados en las neuronas para funcionar como neurotrasmisores, pero
como consecuencia de la destruccin inicial de neuronas despus de un
trauma, se liberan en grandes cantidades al espacio extracelular como
resultado de la lesin directa de la membrana celular que los contiene,
pudindose relacionar stas concentraciones con la intensidad de la lesin
segn refieren Faden y Simon (1988).
La inestabilidad hemodinmica presente despus de una LTME es
atribuida a las alteraciones en el flujo sanguneo, entre los mecanismosdescritos se encuentran la isquemia, (mecanismo ligado estrechamente con
la excitotoxicidad y la lipoperoxidacin), donde la accin directa del
traumatismo sobre los vasos sanguneos causa la hipotensin arterial
sistmica ocasionada por una disminucin de la actividad simptica y
predominio de la actividad parasimptica y la vasoconstriccin como
consecuencia de la activacin de la cascada del cido araquidnico,
produccin de radicales libres a nivel vascular e incremento de la
concentracin de calcio en las fibras musculares de vasos (Kilot y Lustgarten,
1990). En lesiones con intensidad suficiente para producir parapleja
permanente hay isquemia en la sustancia gris y blanca, que se extienden a
distancia proximal y distal del sitio de lesin, mientras que en lesiones de
menor intensidad, seguidas de recuperacin espontnea, solo se detecta la
isquemia en la sustancia gris.
No obstante otros mecanismos donde sustancias tales como
endotelinas, oxido ntrico u otras sustancias vasoactivas pueden estar
involucrados en los cambios hemodinmicos presentes en una LTME
(Guizar-Sahagn, et al., 2004).
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1.2.3. Alteraciones metablicas y sistmicas secundarias a la Lesin
Traumtica de la Mdula Espinal.
Aparte de la prdida de movimientos voluntarios y sensibilidad, la
LTME produce importantes alteraciones sistmicas y metablicas que
pueden estar involucradas no solamente en la amenaza de prdida de la
vida, tambin en el retraso de la rehabilitacin y en una inadecuada terapia
farmacolgica. Algunas alteraciones metablicas, estn relacionada a la
composicin corporal y al balance de lquidos y electrlitos, dichas
alteraciones han sido asociadas con la parlisis motora y la subsiguiente
atrofia muscular; sin embargo, la mayora de las alteraciones sistmicas y
metablicas son asociadas con disturbios en funciones reguladas por el
sistema nervioso autnomo (Guizar-Sahagn et al.,1998).Las alteraciones difieren entre la etapa aguda y crnica de la lesin,
aparentemente las alteraciones tempranas puede ser relacionadas con una
prdida en la actividad refleja de la mdula abajo e inmediatamente por
arriba del nivel del dao, esta etapa es conocida como choque espinal. En
estados tardos, la disfuncin puede estar asociada con cambios plsticos en
la mdula espinal y otros tejidos. El cambio metablico asociado con la
parlisis motora y la subsiguiente atrofia muscular esta relacionado con las
alteraciones en la composicin corporal y el balance electroltico (Cuadro
1.1). Rpidamente despus de un dao, exististe una prdida de peso
progresiva, con obligatorio balance negativo de nitrgeno, el cual no es
favorecido an cuando se administre una alimentacin rica en contenido
proteico y calrico (Guizar-Sahagn et al.,1998 y Cardus et al., 1984).
Las principales consecuencias sistmicas y metablicas resumidas en
el cuadro 1.2, asociadas a la interrupcin de los centros autnomos
espinales a partir del control central y que ocurren en muchos casos como
una consecuencia de lesiones severas arriba del flujo simptico a T6 y
raramente en aquellas lesiones por debajo de T10, incluyen: disfuncin
cardiovascular, gastrointestinal, renal, endocrina y del sistema inmune
(Guizar-Sahagn et al.,1998; DeVivo et al., 1993).
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Sistema alterado
Etapa temprana de lesin(durante el choque
espinal)
Etapa tarda de lesin(Estado crnico)
Composicin corporal
Progresiva prdida de peso
corporal, con obligatorio
balance negativo de
nitrgeno
Encorvamiento corporal e
incremento de la grasa
corporal
Balance de lquidos y
electrlitos
Incremento relativo del
lquido extracelular a
volumen de lquido
intracelular
Hiponatremia
Cuadro1.1. Principales cambios metablicos asociados con parlisis motora y atrofia
muscular despus de una lesin traumtica de mdula espinal (Adaptado de:
Guizar-Sahagn et al., 1998).
Dentro de las alteraciones cardiovasculares inmediatas sobresale la
bradicardia y la hipotensin, las cuales son atribuidas a un desbalance
autnomo agudo debido a la predominancia de la actividad parasimptica y a
la prdida del tono simptico. En estados tempranos de la lesin, persiste
generalmente la bradicardia, asociada con una inestabilidad de presin
sangunea caracterizada por la hipotensin postural e hipertensin episdica,la cual es conocido como disreflexia autnoma o hiperreflexia autnoma, un
sndrome que es iniciado por la estimulacin nociva por debajo del nivel del
dao. Esto resulta en una descarga simptica masiva de la mdula aislada,
manifestada por una hipertensin severa que pone en riesgo la vida del
paciente (Guizar-Sahagn et al.,1998, Karisson et al.,1998).
Pacientes con LTME en niveles altos, son generalmente hipotensos, la
baja presin sangunea que desarrollan durante la disreflexia autnoma,
representa cambios de presin de una magnitud que pueden producir
accidentes cardiovasculares y la muerte (Segal, 1995 y Guizar-Sahagn et
al.,1998).
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Sistema alterado
Alteraciones tempranas
durante la fase de choque
espinal
Alteraciones tardas
durante estado crnico
Cardiovascular BradicardiaHipotensin
BradicardiaHipotensin posturalDisreflexia autnoma
Gastrointestinal Baja motilidad gastrointestinal
Prolongado trnsito GIDificultad de evacuacin
Esofagitis y gastritis
Renal
Disminucin de Flujoplasmtico renal
Decremento de la depuracinrenal
Falla renal con patologasconcomitantes
Metablico yEndcrino
Niveles plasmticos bajos deHormona paratiroidea
Hormona TiroideaAlbmina y Vit. D
Niveles plasmticos altos de:Fsforo
ProlactinaHormona Antidiurtica Enzimas
hepticas
Niveles plasmticos bajos deHormona tiroidea
Noradrenalina
Desordenes en elmetabolismo de carbohidratos
y lpidos
InmuneInmunodepresin
Disminucin de clulas TAlteraciones en la funcin
fagocitaria
Niveles plasmticos altos deICAM, IL-6, IL2R
Cuadro 1.2 . Principales consecuencias de la desconexin de los centrosautnomos espinales despus de una LTME. (Adapatado de: Guzar-Sahagn et al., 1998).
La disfuncin del tracto gastrointestinal es uno de los mayores daos
que resultan de la LMTE. Durante el choque espinal, las principal alteracin
se relaciona a la baja motilidad, en estados crnicos cerca del 30% de
pacientes tienen problemas gastrointestinales significativos tales como unprolongado trnsito intestinal y lento vaciamiento gstrico que reducen su
calidad de vida, al estar presentes sntomas tales como molestias
abdominales, distensin abdominal, constipacin y dificultad para evacuar.
Presentndose tambin con gran incidencia sntomas derivados de la
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esofagitis y gastritis (aceda, dolor esofgico y disfagia intermitente). (Segal,
1995, Nino-Murcia y Friedland,1992 y Guizar-Sahagn et al.,1998).
En estados agudos de LTME se presentan pequeos cambios en la
funcin renal, la prevaleca de una inadecuada funcin renal catalogada de
moderada a severa se presenta en slo el 10 % de los pacientes y
frecuentemente esta asociada con patologas concomitantes entre las cuales
se incluyen el reflujo vesicouretral, clculos renales y pielonefritis recurrente
(Guizar-Sahagn et al.,1998).
1.2.4. Cambios Farmacocinticos atribuidos a una Lesin Traumtica de
Mdula Espinal.
1.2.4.1. En estudios Clnicos.
El uso seguro y efectivo de los medicamentos en personas con LTME
es predispuesto frecuentemente por criterios o estrategias teraputicas
derivadas de datos dispersos y fragmentarios o experiencias clnicas
limitadas, de forma tal que, pacientes con LTME y con un proceso de
enfermedad que puede ser modificado farmacolgicamente, presenta un
desafo teraputico formidable, que no ha sido delineado adecuadamente ni
visto sistemticamente (Segal y Brunnemann, 1989; Gilman et al., 1993;
Braddom y Rocco, 1991; Segal y Pathak, 2001).
Los cambios innumerables en la fisiologa humana causada por la
LTME involucran casi todos los sistemas de rganos y la interrupcin del
sistema nervioso autnomo que se expresan como alteraciones
hemodinmicas y arritmias cardacas pueden influir en la disposicin de
frmacos, particularmente en lesiones torcicas altas y cervicales. Segal
(1993) y Hall (1992), han descrito variaciones en la composicin corporal,
cambios en compartimentos de fluidos corporales y alteraciones en
concentraciones de electrolitos, tanto en durante la fase crnica y aguda del
dao, el compromiso ventilatorio y el fracaso respiratorio son complicaciones
frecuentes de una LTME (Segal, 1993), ambos cambios obstructivos y
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restrictivos en la funcin pulmonar ocurren simultneamente con el trauma
agudo de la mdula espinal y reflejan alteraciones sbitas en la anatoma del
trax y desmodulacin del sistema nervioso autnomo.
Estas y otras alteraciones causadas por la LTME se han asociado con
cambios clnicamente significativos en la farmacocintica y la
farmacodinamia de frmacos, que pueden exponer a los pacientes a fallas
teraputicas e incluso a efectos txicos, sin embargo, los mecanismos que
expliquen las alteraciones en la absorcin, distribucin, metabolismo y
excrecin de los medicamentos en pacientes con una LTME en forma clara
no se conocen (Segal, 1995 y 1993).
Halstead y colaboradores (1985), reconocieron la necesidad de
estudiar la fisiopatologa del la LTME sobre las variables que influyen en laeficiencia de la absorcin gastrointestinal, encontrando que la absorcin
gastrointestinal del acetaminofn fue impedida significativamente en
pacientes con LTME implicndose la fisiopatologa de la lesin en la mdula
espinal como la presunta etiologa al cambio en los parmetros de absorcin
intestinal del acetaminofn, otros estudios reportados con teofilina (Segal et
al., 1985a y1986a), baclofn y dantroleno (Segal et al., 1987) infieren
situaciones similares. Estas observaciones son sumamente sugestivas de
una asociacin causal entre el deterioro en vaciamiento gstrico
caracterstico de una LTME y los cambios de importancia clnica potencial de
la eficacia de los frmacos administrados oralmente cuando la eficiencia de
absorcin depende de la motilidad gstrica y vaciamiento gstrico.
No obstante, que la administracin intramuscular en pacientes con
LTME ha sido considerada tan segura como una administracin intravenosa
donde se tiene una biodisponibilidad completa, esta aseveracin no ha sido
adecuadamente respaldada en pacientes con LTME (Segal et al., 1986b). La
administracin intramuscular de frmacos, considerada generalmente como
una va segura, efectiva y simple de administracin, puede no serlo, debido a
que la absorcin del frmaco administrado por esta va puede ser errtica o
incompleta en sujetos asociados con alteraciones fisiolgicas y variacin de
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flujo sanguneo muscular en el sitio de administracin (Deutsch et al., 1991),
alteraciones que son comunes en pacientes con LTME. En 1985 Segal y
colaboradores, reportan el caso de la gentamicina, la cual despus de su
administracin intramuscular en pacientes con LTME, su biodisponibilidad
fue caracterizada por concentraciones plasmticas ms bajas y un ndice de
absorcin ms lento que despus de la administracin intramuscular de la
misma en pacientes con un msculo inervado normalmente, debido a una
disminucin de flujo sanguneo que se presenta y que es caracterstico de un
msculo paralizado, dado que la velocidad a la cual un frmaco alcanza la
circulacin sistmica en este tipo de administracin es dependiente del flujo
sanguneo muscular (Segal 1995, Segal et al., 1986a). En pacientes con
LTME en estado crnico, la disposicin de la amikacina present un aumentodel volumen de distribucin el cual parece seguir un patrn similar al
observado con la gentamicina, donde la etiologa atribuible a este evento
puede ser el incremento del volumen de flujo extravascular secundario a la
erosin de la masa muscular con disfuncin del tono muscular y subsecuente
edema, condiciones que son comunes en pacientes con LTME) (Segal et al.,
1988b).
Alteraciones farmacocinticas de frmacos administrados por va
intravenosa tambin han sido reportados como es el caso del lorazepan
(frmaco con actividad ansioltica, anticonvulsinante e hipntico-sedativo
utilizado frecuentemente en pacientes con LTME), donde pacientes con
LTME presentaron una eliminacin disminuida, la cual fue atribuida a una
alteracin en el metabolismo heptico o a una alteracin enteroheptica
exagerada y errtica (Segal et al.,1991).
1.2.4.2. En estudios con modelos experimentales.
Los cambios farmacocinticos atribuidas a una LTME en clnica
tambin se han reportado en estudios empleando modelos experimentales,
Ibarra y colaboradores (1996), concluyen que la biodisponibilidad de la
Ciclosporina-A esta incrementada cuando se administra por va parenteral,
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pero es reducida cuando se da por va oral, probablemente debido a la
disminucin del flujo sanguneo heptico con la subsiguiente depuracin del
frmaco y una disminucin del vaciamiento gstrico, reportndose tambin
la reduccin en la biodisponibilidad oral del acetaminofn (Garca-Lpez et
al., 1995,1997) y aspirina (Fuentes-Lara et al., 1999). La reduccin en la
biodisponibilidad oral de frmacos aparentemente es ms evidente durante la
fase aguda de la LTME (Garca-Lpez et al., 1997, Ibarra et al., 1996) y
depende del nivel de lesin. (Garca-Lpez et al., 1999). Documentndose
adems que la vida de eliminacin de frmacos tales como la ciclosporina
(Ibarra et al.,1996), acetaminofn (Garca-Lpez et al.,1999) y diclofenaco
(Garca-Lpez y Salas, 1999) puede ser prolongada en la etapa aguda de la
LTME.
1.3. Importancia y descripcin de modelos experimentales de lesin
medular.
El extenso panorama de la fisiologa alterada por una LTME, hace
que las relaciones entre el efecto y la concentracin de un frmaco despus
de su administracin no sean explicadas fcilmente como en los modelos
que se observan en humanos con una mdula espinal intacta, aunado a que
la disposicin de resultados en clnica que se han realizado, son referidos
nicamente en pacientes con una LTME en la fase crnica (Halstead et al.,
1985; Segal y Brunnemann, 1989) y con una alta variabilidad interindividual,
presentndose diferencias en cuanto al nivel neurolgico de lesin, tipo y
duracin de la lesin. Los aspectos anteriores resaltan la importancia de
contar con modelos experimentales estandarizados y reproducibles de lesin
de mdula espinal en los cuales el estimulo traumtico pueda ser
cuantificable y correlacionado con el nivel de lesin, la intensidad y la
duracin de la LTME, de forma tal que se puedan realizar de forma
especfica y sistemtica estudios que ayuden a explicar los mecanismos
asociados a las alteraciones farmacocinticas que se presentan en una
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LTME y se contribuya a mejorar la farmacoterapia de esta subpoblacin de
pacientes.
En la mayora de las lesiones de mdula espinal en humanos, los
mecanismos primarios de la lesin son por compresin aguda o laceracin
de la mdula espinal debido al desplazamiento del hueso o disco dentro de la
mdula espinal durante la dislocacin-fractura de la espina (Tator y Fehlings,
1991). Algunos modelos experimentales han sido desarrollados para simular
el trauma por compresin aguda en la mdula (Tator, 1993), el primero de
stos fue la tcnica de contusin por cada de un objeto propuesta por Allen
en 1911, subsecuentemente otros modelos experimentales han sido tambin
propuestos para inducir la parapleja bajo condiciones controladas en
animales de laboratorio con el objetivo de reproducir condiciones de lesionestraumticas de mdula espinal humanas y lograr algunas mejoras
teraputicas. Existen tres modelos experimentales para inducir una LTME,
modelo por contusin, modelo de seccin por corte y modelo de lesin
laceracin (Das, 1989).
Modelo por contusin: esta tcnica cuyo objetivo es inducir la
contusin sobre una lesin traumtica del tipo compresin en forma
cuantitativa, es ampliamente usada y ha sido modificada en algunos casos
(Das, 1989; Tator y Fehlings, 1991), en este modelo el animal despus de
ser anestesiado, se expone quirrgicamente la mdula espinal al nivel
deseado, y se deja caer directamente sobre la mdula espinal a una altura
determinada un cilindro de peso conocido, con esta tcnica la fuerza del
impacto sobre la mdula espinal puede ser determinada y por tanto, la
intensidad y grado de la lesin puede ser cuantificado. La tcnica tiene la
ventaja de poder valorar el umbral del impacto para producir parapleja, y
puede ser establecido cuantitativamente, adems de mantener las meninges
integras, lo que ayuda a prevenir la penetracin de prdida de tejido
conectivo y lquido intersticial. La variabilidad de la naturaleza y la simetra
del impacto (dado que pueden presentarse lateralizacin izquierda o
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derecha) son dos de las limitaciones que se mencionan para esta tcnica
(Das, 1989).
Modelo de seccin por corte: las lesiones realizadas con un modelo de
seccin por corte pueden variar considerablemente en un plano transversal
resultando en hemisecciones, tales como secciones parciales unilaterales,
bilaterales o secciones completas bilaterales de la mdula espinal. Bajo
estas condiciones experimentales solamente la lesin bilateral completa
resulta en una parapleja. En esta tcnica la mdula espinal del animal es
expuesta quirrgicamente y bajo un microscopio quirrgico o de diseccin la
mdula es seccionada por una navaja quirrgica. Esta tcnica de lesin
ofrece la ventaja de visualizar la lesin directamente durante la ciruga, por lo
tanto puede definirse con relativa precisin anatmica, adems que ofrece lafacilidad de hacer transecciones de la mdula espinal variando el tipo y grado
de stas, tal como, la hemiseccin o seccin de un cuarto de la mdula
espinal con alto grado de precisin, pero las condiciones de la lesin que
promueven la penetracin de tejido conectivo y la infiltracin de sangre con
fluido intersticial dentro del sitio de la lesin a lo largo as como tambin la
condicin hemorrgica que pudiera presentarse al momento de la lesin se
presentan como desventajas para esta tcnica (Das 1989).
En el modelo de lesinlaceracin, se induce la lesin traumtica de la
mdula espinal por combinacin de los dos modelos presentados
anteriormente. El dao provocado a una gran porcin de la mdula espinal
se extiende por dos segmentos y entonces se hace comparable al modelo de
contusin, en este modelo, la lesin se provoca por el empleo de una tijera
de iris o navaja para separar axones y tejido neural lo que simula modelo de
seccin por corte, el objetivo del empleo de este modelo es crear una lesin
de tipo laceracin con una prdida de tejido neural en la regin, esta
extirpacin del tejido neural entre los dos cortes representa la prdida de
tejido necrotizado, esta lesin provee una clara identificacin de lesiones
primarias directas e indirectas, presentes en condiciones patolgicas
secundarias y cambios degenerativos progresivos (Das 1989).
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1.4. Fenacetina.
La fenacetina es un compuesto con propiedades analgsicas y
antipirticas semejante a los salicilatos y cuyo metabolito activo es el
acetaminofn, tiene un mecanismo de accin especialmente perifrico para
la accin analgsica, central para la antipirtica, y tisular para laantiinflamatoria, donde como otros derivados del p-aminofenol, inhibe la
sntesis de prostaglandinas, sus efectos farmacolgicos estn dados por una
combinacin con el acetaminofn (su mayor metabolito). La fenacetina es
altamente liposoluble con una limitada solubilidad acuosa y su absorcin oral
depende de factores tales como el tamao de partcula (Prescott, 1989). Los
derivados del p-aminofenol siendo bases muy dbiles, se absorben poco en
el estmago y muy rpidamente en el intestino, donde una vez despus de
ser absorbida alcanza una concentracin plasmtica mxima a la hora o dos
horas despus de la ingestin (Insel, 1996). La fenacetina se considera un
frmaco de alta extraccin, debido a que su extraccin heptica es cerca del
80%, es decir se asume que el metabolismo de este frmaco depende del
flujo heptico (Gibaldi, 1991).
La fenacetina se transforma, especialmente en el hgado a travs de
las enzimas microsomales hepticas, a acetaminofn en gran proporcin de
un 60 a un 80% (Figura 1.3) y una pequea porcin a: p-fenetidina, 2-
hidroxifenetidina, 2y3-hidroxifenacetina y N-hidroxifenacetina; metabolitos,
que junto con el acetaminofn se excretan conjugados en la orina. Menos del
0.5 % de la dosis que se administra se recupera sin cambio en la orina
(Prescott, 1989).
NH-COO-CH3
O-C2H5
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Figura 1.4. Biotransformacin de fenacetina a su mayor metabolito activo:
acetaminofn.
1.5 Validacin.
La validacin de mtodos analticos para estudios de biodisponibilidad,
bioequivalencia y farmacocintica incluye todos los procedimientos
requeridos para demostrar que un mtodo analtico para la determinacin
cuantitativa de la concentracin de la sustancia de inters o serie de
sustancias de inters en una matriz biolgica particular es confiable para laaplicacin deseada a travs de la evaluacin de parmetros analticos.
Algunas de las tcnicas bioanalticas ms comnmente empleadas son:
a) Mtodos qumicos (cromatografa de gases o lquidos de alta resolucin y
varios procedimientos con espectrofotometra de masas directa o en
R1= S1O3HR2 = C5H9O6
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combinacin con otras tcnicas).
b) Mtodos biolgicos, basados stos en procedimientos de inmunoensayos
(ejemplo: Tcnica enzimtica de inmunoensayo multiplicativa, mtodos
microbiolgicos) (Shah et al.,1992).
Muchos de los principios, procedimientos y requerimientos son comunes
para todos los tipos de mtodos analticos (Shah et al.,1992; ICH 1997, NOM
177-SSA1-1998). Los parmetros esenciales para asegurar la aceptabilidad
del mtodo analtico son establecer: la estabilidad de la sustancia de inters
en la matriz bajo las condiciones en que se llevar a cabo el estudio, la
precisin, exactitud, especificidad y el intervalo lineal de la de funcin-
respuesta en que se esta trabajando. (Shah et al., 1992).
1.5.1. Selectividad.
Es la demostracin de que el mtodo tiene la habilidad de diferenciar
al compuesto de inters de metabolitos o compuestos endgenos de la
matriz biolgica y productos de degradacin conocidos.
Se evala al probar por lo menos seis fuentes independientes de la
misma matriz biolgica verificando que no se presente interferencia alguna al
analizarse con los metabolitos con la tcnica propuesta o bien analizando
muestras de sujetos que recibieron el frmaco de inters para comprobar
que no interferirn sus metabolitos o productos endgenos en el anlisis.
1.5.2. Intervalo lineal y Funcin respuesta.
El intervalo lineal de un mtodo analtico est definido por las
concentraciones del producto o productos de inters comprendidas entre los
niveles de concentracin superior e inferior en el que ser determinado el
producto de inters. Se determina por la evaluacin de muestras patrn en
el fluido a analizar, las cuales definen la curva de calibracin, la que ser
construida tpicamente por 6 a 8 puntos de calibracin (excluyendo blancos
e incluyendo la concentracin mnima cuantificable) y definir la funcin lineal
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que indicar la relacin concentracin-respuesta, la cual puede ser obtenida
directamente o por medio de una transformacin matemtica bien definida y
su ajuste deber ser estadsticamente probado.
Criterio de aceptacin
a. Coeficiente de determinacin (r2). Mayor a 0.98 para una recta generada
empleando el mtodo de mnimos cuadrados.
1.5.3. Exactitud y Precisin.
La exactitud es la concordancia entre un valor obtenido
experimentalmente y el valor de referencia, expresada en por ciento y est
referida como la desviacin que se tiene del valor terico.La precisin se define como la cercana de los resultados
experimentales de la valoracin del producto de inters determinados
repetidamente. La precisin es establecida como la precisin dentro de un
da (precisin intra-anlisis) y precisin entre das (precisin Inter- anlisis)
las cuales son expresadas comnmente como coeficientes de variacin (CV).
La determinacin de la exactitud y precisin puede llevarse a cabo por
el anlisis de un conjunto de replicas de muestras de la sustancia de inters
de concentracin conocidas en la matriz biolgica, considerando tres
concentraciones como mnimo, contempladas dentro del rango de la curva
patrn: una cerca del lmite de cuantificacin (LC), una cerca del centro y otra
cercana al lmite superior de cuantificacin. Se recomienda realizar los
anlisis mnimo por duplicado durante tres das para establecer la precisin
inter-anlisis y mnimo por quintuplicado en un da para establecer la
precisin intra-anlisis empleando las concentraciones antes mencionadas.
Criterio de aceptacin.
Para cada concentracin analizada el valor promedio deber estar
dentro del intervalo de 15 % del valor real, excepto para el valor de la
concentracin mnima cuantificable en el cual puede ser del 20% y un
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coeficiente de variacin (CV) menor al 15% y un CV menor al 20% en la
concentracin mnima cuantificable.
1.5.4. Lmite de cuantificacin.
Es la concentracin mas baja del intervalo lineal que puede ser
determinada con exactitud y precisin. Se determina analizando la
concentracin mnima a cuantificar, la cual debe de cumplir con el criterio de
tener un CV menor al 20%.
1.5.5. Lmite de deteccin.
Es la concentracin ms baja que puede ser detectada pero no
necesariamente cuantificada por el mtodo de anlisis. Normalmente seevala haciendo diluciones de la muestra y analizndola para determinar la
concentracin que produce una relacin seal-ruido de 2:1 o 3:1.
1.5.6. Estabilidad de la muestra.
Se debe asegurar la integridad de la sustancia de inters desde la
toma de la muestra hasta su anlisis final, por lo tanto, la estabilidad de la
muestra es la propiedad de una muestra preparada para su cuantificacin, de
conservar su integridad fisicoqumica y la concentracin de la sustancia de
inters, despus de almacenarse durante un tiempo determinado. Por lo
tanto la estabilidad de la sustancia de inters en la matriz biolgicas se debe
establecer comparando los resultados del anlisis inicial de tres muestras
como mnimo a la(s) temperatura(s) a la cual ser almacenada con los
obtenidos de las mismas muestras despus de permanecer por un tiempo
determinado bajo esas condiciones. Y posteriormente determinar la
influencia de los ciclos de congelamiento y deshielo (un mnimo de dos ciclos
a dos concentraciones por duplicado).
Criterio de aceptacin
La muestra es estable si la comparacin entre los grupos
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condicin/tiempo en las concentraciones determinadas en comparacin con
la concentracin inicial, no presentan diferencia significativa.
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2. JUSTIFICACIN
La lesin traumtica de mdula espinal causa severas alteraciones
sistmicas y metablicas que pueden poner en peligro la vida del paciente,
retrasan su rehabilitacin y pueden exponer a los pacientes a fallasteraputicas que influirn con la terapia farmacolgica, debido a que se
alteran funciones del sistema cardiovascular, gastrointestinal, renal,
endocrino e inmune (Guizar-Sahagn et al.,1998; Segal et al.,1995; Segal y
Brunnemann 1986).
Diversas investigaciones acerca de los cambios en la disposicin cintica
de frmacos han sido reportados en pacientes con lesin traumtica espinal
en estado crnico, donde la etiologa de estos cambios es atribuida a
alteraciones en el proceso de absorcin en el tracto gastrointestinal y/o en
flujo sanguneo provocados por los cambios innumerables en la fisiologa
humana originada por la LTME que involucran casi todos los sistemas de
rganos y la interrupcin del sistema nervioso autnomo (Gilman et al.,1996;
Segal et al.,1994; Rajendran et al.,1992; Nino-Murcia y Friedland,1991; Segal
y Brunnemann, 1989; Segal et al.,1988a; Segal et al., 1988b; Segal et al.,
1986a; Segal etal.,1986b; Fealey et al., 1984). No existiendo referencias de
estudios clnicos de cambios farmacocinticos de frmacos en el estado
agudo de una LTME por la complejidad clnica para llevar a cabo dichos
estudios.
Sin embargo se reporta que, posterior a una LTME tanto en clnica como
en modelo experimental, la presencia de una fase conocida como choque
medular se desarrolla, caracterizada por la prdida de la respuesta sensorial
y motora ante cualquier estimulo (Atkinson y Atkinson, 1996; Bach y Illis;
1993), presentndose una baja en la actividad simptica y una hipotensinarterial sistmica (Atkinson y Atkinson;1996; Schimidt y Chan 1992),
condiciones que pueden provocar tambin cambios farmacocinticos.
Garca-Lpez et al., (1995), Ibarra et al., (1996) y Fuentes-Lara et
al.,(1999) refieren que una LTME en la etapa de choque medular (obtenida
por modelo experimental) modifica el grado de absorcin y eliminacin del
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acetaminofn, ciclosporina-A y salicilatos administrados por va oral. En tanto
que posterior a una administracin intramuscular de diclofenaco en la etapa
aguda de la LTME, no reportan cambio farmacocintico significativo (Garca-
Lpez y Salas,1999).
Los reportes anteriores evidencian que no solamente la va de
administracin del frmaco y el estadio de la lesin (fase aguda o crnica),
influyen sobre los cambios farmacocinticos que se presentan, tambin el
nivel de lesin puede influir en las alteraciones cinticas de los frmacos.
Garca-Lpez y colaboradores (1999), reportaron efectos contrastantes en
la farmacocintica de una administracin oral de acetaminofn en diferentes
niveles de LTME (T8 y T1), sugiriendo que si bien existe un impedimento del
vaciamiento gstrico producido por una LTME que altera el proceso deabsorcin tal como lo refieren tambin otros autores (Halstead et al.,1985;
Segal, Gondim et al., 1999 y 2000), la eliminacin del frmaco tambin
podra estar afectada cuando la lesin se presenta a nivel alto, dado que la
depuracin del frmaco fue significativamente disminuida, este reporte
asociado al estudio donde se refiere que la depuracin de la fenacetina, se
encuentra significativamente reducida en una lesin baja durante la etapa del
choque medular experimental despus de una administracin intravenosa
(Garca-Lpez,1999b), conllevan a sugerir que pueden existir posibles
cambios en la microcirculacin heptica durante la fase de choque medular,
que estaran involucrados en modificaciones farmacocinticas importantes en
una lesin traumtica de mdula espinal, dependiendo del nivel de lesin y
va de administracin del frmaco en la etapa aguda de la lesin. Partiendo
de este supuesto, se hace relevante proponer un estudio que establezca la
posible significativa alteracin de la microcirculacin heptica en una LTME
en la etapa de choque medular en las alteraciones farmacocinticas de los
frmacos dependiendo del nivel de lesin, va de administracin y su
impacto en su biodisponibilidad, para lo cual en este proyecto se propone
estudiar la farmacocintica de la fenacetina, un analgsico no empleado en
la actualidad en la clnica, pero que sin embargo por sus caractersticas de
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depuracin limitante por el flujo sanguneo heptico, alcanzar
concentraciones sanguneas rpidamente y ser biotransformado
extensamente en el hgado a acetaminofn, lo hace factible para su uso
como un marcador de flujo sanguneo heptico, de forma tal que puedan
asociarse las alteraciones farmacocinticas de este frmaco a cambios en la
microcirculacin heptica atribuible a la presencia de una LTME despus de
una administracin oral e intravenosa en dos diferentes niveles de lesin
durante la fase de choque medular y determinando as su impacto sobre la
biodisponibilidad de frmacos de alta extraccin heptica.
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3. HIPTESIS
Las alteraciones en tracto gastrointestinal y flujo sanguneo heptico
presentes en una lesin traumtica de mdula espinal en la etapa conocida
como choque medular, provocarn cambios farmacocinticos en los
procesos de absorcin y depuracin que se reflejarn en la biodisponibilidad
de la fenacetina impactando de forma diferente dependiendo del nivel de la
lesin y va de administracin del frmaco.
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4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo General
Determinar las alteraciones farmacocinticas y de biodisponibilidad de la
fenacetina, que se presentan en una lesin traumtica de mdula espinal en
la etapa de choque medular experimental.
4.1.1. Objetivos particulares.
2.1.1.1. Implementar y validar un mtodo analtico por cromatografa
lquida de alta resolucin para la cuantificacin simultnea de
fenacetina y acetaminofn en sangre de rata.
2.1.1.2. Determinar el efecto del nivel de la lesin medular (T1 y T8)
experimental sobre la farmacocintica de la fenacetina en una
administracin intravenosa y oral.
2.1.1.3. Evaluar el efecto de los cambios farmacocinticos de la
fenacetina sobre la biodisponibilidad de sta en una lesin
traumtica de mdula espinal en la fase de choque medular
experimental.
2.1.1.4. Determinar la influencia de una lesin traumtica de mdula
espinal en la fase de choque medular experimental en la
cintica del principal metabolito (acetaminofn) de la fenacetina.
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5. MATERIALES Y MTODOS
La metodologa a emplear en este estudio se presenta en forma
resumida en el siguiente diagrama de flujo, donde primeramente se llev a
cabo la validacin del mtodo analtico para la determinacin de fenacetina y
acetaminofn de forma simultnea por un mtodo analtico de cromatografa
lquida de alta resolucin y posteriormente se realiz la determinacin del
efecto de la lesin traumtica de mdula espinal en la fase de choque
medular (niveles T1 y T8) empleando un modelo experimental, sobre la
farmacocintica de la fenacetina administrada por va oral e intravenosa y la
de su principal metabolito (acetaminofn).
Validacin del mtodo
Selectividad
Estabilidad de la muestra
Intervalo lineal y Funcin-Respuesta
Exactitud y Precisin
Lmite de cuantificacin
Lmite de deteccin
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Influencia de LTME sobre la farmacocintica de la fenacetina
Administracin Oral Administracin Intravenosa
Tratamiento
Control
Tratamiento
A
Tratamiento
B
Tratamiento
Control
Tratamiento
A
Tratamiento
B
Laminectomia
Control
Lesin
Nivel T1
Lesin
Nivel T8
Laminectomia
Control
Lesin
Nivel T1
Lesin
Nivel T8
Administracin de Fenacetina a todos los tratamientos de una dosis nica del
frmaco
Toma de 100 l de sangre a 0,2.5,5,10,20,30,45,60,90,120,150 y 180 min.
Despus de la administracin del frmaco.
Anlisis de las muestras
Clculo de parmetros farmacocinticos
Anlisis estadstico.
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5.1 Metodologa Analtica por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin
para lacuantificacin de Fenacetina y Acetaminofn en sangre de
rata
5.1.1. Condiciones cromatogrficas.
Como fase estacionaria se empleo una columna de 15 cm de longitud
por 3.9 mm de dimetro empacada con grupos octadesil unidos a partculas
de silica 5 m de tamao partcula (columna Waters Symetry fase inversa
C18), usndose como fase mvil una mezcla de Fosfato de amonio 0.005M-
Acetonitrilo 70:30 (v/v) a un pH 7.5, (ajuste del pH con hidrxido de sodio 0.4
M), y llevndose la determinacin a una longitud de onda de 254 nm a unavelocidad de flujo de 1.2 mL/min en un cromatgrafo Waters.
5.1.2 Procedimiento general para el anlisis de muestras para la validacin.
1. En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100 L
de sangre total y 100 L la concentracin correspondiente de fenacetina,
acetaminofn y estndar interno, 2-acetamidofenol (concentracin 100
g/mL).
2. Se agit mecnicamente por 30 segundos y se agregaron 20 L de
NaOH 0.05 M. Para nuevamente agitar por 30 segundos.
3. A cada tubo se le adicion 1 mL de acetato de etilo y se agitaron
inmediatamente por 3 minutos en un agitador mecnico.
4. Los tubos fueron centrifugados por cinco minutos a 6000 rpm y la fase
orgnica fue separada en tubos de vidrio cnicos
5. La fase orgnica se evaporo bajo atmsfera de nitrgeno a 60 C.
6. El contenido de cada tubo fue suspendido en 50 L de fase mvil.
7. 20 l de la solucin anterior fue inyectado, al sistema cromatogrfico bajo
las condiciones sealadas anteriormente.
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5.1.3 Muestras blanco para la validacin.
En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100
L de la muestra de sangre total, 100 L del estndar interno, 2-
acetamidofenol (concentracin 100 g/mL) y fueron analizadas siguiendo los
pasos 2 al 7 del procedimiento descrito en el punto 5.1.2.
5.1.4. Muestras de tratamientos.
En tubos cnicos de polietileno de alta densidad se adicionaron 100
L de la muestra de sangre total colectadas durante los tratamientos
experimentales, se les agrego 100 L del estndar interno, 2-acetamidofenol
(concentracin 100 g/mL) y fueron analizadas siguiendo los pasos 2 al 7 del
procedimiento antes descrito.
5.2 Validacin del mtodo analtico.
5.2.1. Selectividad.
Se aplic el mtodo analtico previamente descrito a seis fuentes
independientes de la mism