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Análisis Bacteriológico del Caño Martin Peña y las Lagunas del Estuario de San Juan

Estudiantes de Investigación:Inea E. GarcíaArisha CrespoIvangs M. RiveraConsejera y Profesora Catedrática: Mayra Rolón

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Fase I

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9/8/2010Introducción

•Estudio realizado en el Caño Martín Peña y las Lagunas del Estuario

•Ubicación del Caño: Conecta la Bahía de San Juan con la Laguna San José

Latitudes N 18°25'59.68"N

longitud W 66° 3'31.29"W

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9/8/2010Propósito

•Realizar análisis bacteriológicos en cuerpos de agua del estuario de la Bahía de San Juan

•Detectar grados de contaminación en los cuerpos de agua

Detección de coliformes

9/8/2010Historia del Caño Martín Peña

•El caño en el pasado:

1917-Tanques del ejército transitaban

1922- se rellenan con tierra partes del caño

1932- Huracán San Ciprián

9/8/2010Historia del Caño Martín Peña

•1940-1970- Primeras comunidades

•1980- en adelante- Proyecto Enlace Caño Martín Peña

•2000- USC se integra al monitoreo de la calidad del agua Caño Martín Peña

9/8/2010Trasfondo Histórico

•Dimensiones

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Comunidad en el pasado y actual

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9/8/2010Marco Teórico

•Calidad del agua

Satisfactoria para consumo humano debe estar libre de microbios

Coliformes :

(2 colonias/ml)

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Marco Teórico

•Indicadores de contaminación

Apariencia

Heces Fecales

Desechos

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9/8/2010¿Qué es un Coliforme?

•Bacterias bacilos Gram-negativas,

•Son indicadores de contaminación en aguas y alimentos.

•No son productoras de esporas

•Capaces de fermentar la lactosa,

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Monitoreo del Caño y las Lagunas por Jorge Bauzá

•Jorge Bauzá - científico ambiental del Estuario de la Bahía de San Juan.

•Analizó muestras en septiembre y octubre 2008 del Caño Martín Peña.

•En el Caño Martín Peña encontró 200,000colonias de bacterias/100ml de muestra.

•Analizó las lagunas del Estuario de San Juan.

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MetodologíaMétodos y Materiales

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9/8/2010Técnicas Utilizadas

•Determinación del Número Más Probable(MPN)

•Método de Filtración

•Diluciones en Serie

9/8/2010Determinación del Número Más

Probable(MPN)

•Basado en probabilidad estadística.

•Consiste de tres fases :

•Fase presuntiva

•Fase confirmatoria

•Fase Completa

9/8/2010I Fase Presuntiva (MPN)

• Presunción

Fermentación de azúcar lactosa

Inoculación de 15 tubos con Durhan para detención de gas.

• Se inoculan diferentes

volúmenes del agua (.1 ml,

9/8/2010I Fase Presuntiva (MPN)

•Observación de fermentación de lactosa

Cambio colorimétrico

Presencia de gas

9/8/2010II Fase Confirmatoria (MPN)

•Confirmación de coliformes en la muestra.

Fermentación de Lauril Sulfato

Producción de gas

•Incubación 18 a 24 hrs 35 -37°C

9/8/2010II Fase Confirmatoria (MPN)

•Observación de fermentación del Lauril Sulfato

Cambio colorimétrico

Presencia de Gas

9/8/2010Procedimiento del (MPN)

9/8/2010III Fase Completa(MPN)

•Se identifican los tubos fermentados con gas.

•Calcular el índice del NMP con tablas de referencias.

•Se estima el índice mas probable /100ml de

muestra.

9/8/2010Tabla MPN

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Otras Técnicas Bacteriológicas

•Método de Filtración

•Diluciones en Serie

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Método de Filtración 0.45 micras

•Técnica para aislar las bacterias presentes en la muestra.

•Consiste en la separación física de las bacterias por medio de membranas

•Facilita conteo de colonias .

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Método de Filtración 0.45 micras

•Observación y cuantificación

•Filtros de acetato de nitrocelulosa policarbonatos de 0.45 micras.

Se filtra el agua de la muestra.

Se remueve asépticamente la membrana

9/8/2010Método de Filtración 0.45 micras

•Identificación Taxonómica LF+

•Se coloca en un medio nutritivo selectivo para coliformes. (EMB)

Se incuba de 18 a 24 hrs en 35- 37°C

9/8/2010Método de Filtración 0.45 micras

• Observación y cuantificación de colonias en membrana

Texturas

Formas

Cantidad de colonias

Colores (purpuras o rosadas)

9/8/2010Identificación Taxonómica

•Prueba de enterotubos

•Identificación de bacterias aisladas LF+

9/8/2010Diluciones en serie

•Es un análisis cuantitativo para calcular #bacteria/ml de agua

•B0= (D)Dilución(C) Colonias contadas

•Se utiliza el método de verter en plato.

9/8/2010Diluciones en Serie

•Se emplea agar selectivo para coliformes como el EMB

•Se realizan diluciones desde 10–2 hasta 10–7

•Diferentes volúmenes son mezclados con agar derretidos en platos petri.

9/8/2010Diluciones en Serie

•Luego del período de incubación:

Observación de crecimiento de colonias desde 10–7 hasta 10–2

•Conteo colonial para el estimado de B0

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Diluciones en Serie

•Prueba de enterotubos

•Identificación taxonómica de bacterias aisladas

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•Resultados de pruebas Caño Martin Peña y Estuario de la Bahía de San Juan Fase I y II

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Resultados Fase I

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Resultados de Numero Mas Probable del Caño Martín Peña y Lagunas del

Estuario de San Juan•Prueba MPN resulta:

-Bacterias fermentaron lactosa

-Bacterias fermentaron lauril sulfato

-Cambios colorimétricos de rojo a amarillo (Lactosa)

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Resultados de Filtración del Caño Martín Peña

•Estación #1: Crecimiento bacterial en membrana

•Estación #2: Crecimiento bacterial

•Estación #3: Crecimiento bacterial

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Tabla de Filtración Caño Martín Peña

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Resultados de Filtración de las Lagunas del Estuario de San Juan

•Torrecilla: Crecimiento de colonias bacteriales

•Corozos: Crecimiento de colonias

•Canal Suarez: Crecimiento de colonias

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Tabla de Filtración de las Lagunas del Estuario de San Juan

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Diluciones en serie del Caño Martín Peña

•Estacion#1: (2)(10,000,000)= 20,000,000 bacterias/ml de H2O

•Estacion#2: (2)(100,000)= 200,000 bacterias/ml de H2O

•Estacion #3: (2)(100,00)=200,000 bacterias/ml de H2O

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Resultados del Caño Martín Peña

9/8/2010Comparación del Caño Martín Peña desde el

2000 al 2010

9/8/2010Diluciones en serie del Estuario de la

Bahía San Juan

•Torrecilla= (1)(10,000,000)= 10,000,000

•C. Suarez= (2)(10,000,000)= 20,000,000

•Corozos=(3)(10,000)= 30,000

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Resultados Estuario de la Bahía de San Juan

9/8/2010Comparación Estuario de la Bahía de

San Juan 2009 al 2010

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•Estación #1:

-Enterobacter cloacae

- E. coli

•Estación #2:

-Enterobacter aerogenes

-E. coli

Bacterias aisladas del Caño Martin Peña

9/8/2010Bacterias aisladas del Estuario

•E. coli

•Serratia marcencens

•Klebsiella pneumoniae

•Enterobacter cloacae

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Resultados Fase II

9/8/2010Número mas probable (MPN)

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Fermentación de Lauril Sulfato

9/8/2010Filtración de membrana del Caño

Martín Peña

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Filtración de membrana de la laguna Los Corozos

9/8/2010Diluciones en serie del Caño Martin

Peña

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Diluciones en serie Caño Martín Peña

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Diluciones en serie de la laguna Los Corozos

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Diluciones en serie de la laguna los Corozos

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Enterotubos

•Caño Martín Peña (Bacterias aisladas)

- E.coli

- Enterobacter cloacae

- Klebsiella ozaenae

•Los Corozos

- E. coli

- Klebsiella ozaenae

- Klebsiella pneumoniae

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Conclusión

9/8/2010Conclusión

•El alto grado de contaminación se debe a múltiples factores. Entre ellos:

Falta de recogido de escombros con mayor regularidad.

Depósito continuo de escombros por los mismos residentes y comercios aledaños.

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Contaminación continua de basura.

Conexión con otros cuerpos de aguas contaminados.

(Lagunas del estuario)

Agua estancada en muchas áreas.

•Observamos fluctuaciones del grado de contaminación en algunos años .

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•Los participantes de este proyecto recomiendan lo siguiente:

Priorizar los esfuerzos del proyecto del dragado y limpieza del Caño y todo el estuario.

El gobierno debe ser más agresivo en los esfuerzos de recogido de escombro.

Se debe hacer mas sistemático en el proceso de muestreo.

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Referencias:

•Harley & Prescott 2006. Microbiology 6th Edition, WCB. Mc Graw Hill.

•Harley & Prescott 2006. Laboratory Exercises in Microbiology 6th Edition, WCB. Mc Graw Hill.

•Swewzyk, U. Swewzyk, R Manz, W. & Schleider, K. 2000. Microbiology safety of drinking water. Annu. Rev. Microbiol. 54: 81-127.

•Webb, Richard. (1996, March). Sediment and Water Quality of the San Juan Bay Estuary. Paper presented at 3rd Puerto Rican Conference of Sanitary Engineering and Environmental Sciences: Assimilative Capacity of the Environment, Fundamental Element for the Protection of Resources. USGS, San Juan, P.R

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Referencias:

•Direcciones electronicas:

•Rivera Z. (N.D). Comparación de coliformes y colífagos como indicadores microbiológicos de la calidad del agua en los embalses dos bocas y las curias en Puerto Rico. Recuperado en Mayo 4 de 2010. http://www.bvsde.paho.org/bvsAIDIS/REPDOM/rivera.pdf

•(N.A). (2009). Programa del estuario de la bahia de San Juan. Recuperado en Junio 6 de 2010. http://estuario.org

• (N.A.). (2006). Puerto DRNA, navega por el ambiente. Departamento de recursos naturales. Recuperado en Junio 6 de 2010. http://www.drna.gobierno.pr/

•Marrero –Ortiz, Roberto. (1998). Análisis Inmunológico para la Detección de Compuestos Orgánicos Tóxicos en aguas de la Laguna San José, Estuario de la Bahía de San Juan, PR. Recuperado Febrero 15 de 2010. http://www.bvsde.paho.org/bvsAIDIS/REPDOM/marrero.pdf

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Referencias:

•Martínez V. (N.D.) Estudio preeliminar del sistema estuarino del caño portugués del sector La Playa de ponce. Recuperado en Mayo 4 de 2010. http://www.aag.org/sustainable/milan2003/2085.pdf

•López, L. (2010). Once municipios en estado de emergencia. Vocero de Puerto Rico. Recuperado en Junio 6 de 2010.http://www.vocero.com/locales/6386-once-municipios-en-estado-de-emergencia.html

•Feliú M. (2007). Resurge el Caño Martín Peña. Ciencia PR. Recuperado en Junio 6 de 2010.http://www.cienciapr.org/news_view.php?id=215

•Chacón C. (2009). Enterobacterias. Bacteriología médica. Recibido en Junio 7 de 2010. http://www.netropica.org/PDFs%20b%20medica/Enterobacterias.pdf

9/8/2010Gracias

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