Post on 25-Oct-2015
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
1. El color y los colorantes HEMATOLOGICOS
2. El color y las estructuras celulares
3. Problemas TECNICOS en las tinciones
4.
Casos de morfología
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿Qué es un COLOR?
Es la longitud de onda del espectro de LUZ VISIBLE que absorbe y refleja un
cuerpo
Espectro de la luz visible:
380 nm........Violeta
780 nm..........Rojo
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Un cuerpo es BLANCO cuando “refleja” todas las longitudes de onda
Un cuerpo NEGRO “absorbe” todas las longitudes de onda
Un cuerpo ROJO “absorbe” todas las longitudes de onda menos las rojas
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILO NEUTROFILO
¿Qué es un COLORANTE?
Un colorante es una sustancia con capacidad de transmitir
un color a un sustrato
Debe penetrar e interactuar con las estructuras
moleculares de las células
HEMATIES PLAQUETAS 5
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Las estructuras celulares que vamos a teñir deben ser tratadas previamente, mediante la FIJACION
La FIJACION es un proceso físico- químico que inmoviliza determinadas estructuras celulares, y que permite que puedan ser posteriormente coloreadas sin ser arrastradas en el proceso
EOSINOFILOS 6
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Durante la FIJACION se producen varios fenómenos:
Se “coagulan” las proteínas celulares conservando su arquitectura
Pueden perderse algunas sustancias no esenciales para la interpretación citomorfológica; los alcoholes disuelven las grasas
Las extensiones sanguíneas se pueden fijar con calor seco, alcoholes, formaldehído, acetona, etc. El mejor fijador para morfología es el metanol (alcohol metílico)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS ¿QUE PRETENDEMOS CON LAS TINCIONES?
1. Identificar las células
2. Identificar sus estructuras internas
Densidad de la cromatina
Presencia de nucléolos
Citoplasma: Características
Granulación
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CELULA PLASMATICA (LINFOCITO B): A LA IZQUIERDA IMAGEN AL MICROSCOPIO ELECTRONICO Y A LA DERECHA UN ESQUEMA DE LA MISMA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
MITOCONDRIAS
NUCLEO
APARATO DE GOLGI
RETICULO ENDOPLASMICO CON RIBOSOMAS
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
NUCLEO
CONTIENE ADN Y PROTEINAS ESPECIFICAS
SU MAYOR O MENOR DENSIDAD, EQUIVALENTE A MAS O MENOS MADUREZ, SE TRADUCE POR UNA COLORACIÓN +/– INTENSA
LA PRESENCIA DE NUCLEOLOS (ACUMULACION DE ARN PROPIA DE CELULAS INMADURAS) SE VE COMO UNA ZONA CLARA RODEADA DE UN HALO MAS INTENSO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
RETICULO ENDOPLASMICO RUGOSO
ES EL LUGAR DONDE SE SINTETIZAN LAS PROTEINAS DE LAS CELULAS
ES MUY RICO EN ARN (RIBOSOMAS) CUYO CARACTER ACIDO ATRAE A LOS COLORANTES BASICOS
A VECES MUESTRA DILATACIONES QUE AL MICROSCOPIO PARECEN PEQUEÑAS VACUOLAS
SU PRODUCCION SE ENVIA AL APARATO DE GOLGI, Y DE ESTE AL EXTERIOR
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ESTRUCTURAS GRANULARES
MITOCONDRIAS
LISOSOMAS
CENTRIOLOS
GRANULOS DE GLUCOGENO
VACUOLAS
OTRAS
SE OBSERVAN CON EL MICROSCOPIO OPTICO COMO GRANULOS, MAS O MENOS GRANDES, QUE ADQUIEREN DISTINTA COLORACION SEGUN SU CONTENIDO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿QUÉ “COLOR” TRANSMITE UN COLORANTE?
NEUTROFILO
1. El suyo propio
2. Un color distinto: metacromasia
BASOFILO
3. Más de un color: alocromasia
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿COMO “TRANSMITE” EL COLOR?
Coloración = impregnación del sustrato
Reacción química = citoquímica
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
MECANISMO USUAL DE COLORACION
ATRACCION ELECTROSTATICA
+ -
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Coloración: Afinidad de carga eléctrica del colorante por el sustrato celular
Directa: Se produce una unión electro polar entre colorante y sustrato
Indirecta: El colorante necesita una “pieza de unión” intermedia, a la que se
denomina “mordiente”
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Los “mordientes” suelen ser metales: aluminio, molibdeno, cromo, vanadio, etc
Colorante Mordiente Sustrato
El conjunto colorante + mordiente se denomina “laca”
Ejemplo: Tanto la Hematoxilina como el Rojo Nuclear emplean el Aluminio como mordiente
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Coloración “progresiva”
Se añade al sustrato celular el colorante muy diluido (por ej. al 1%), y se deja durante tiempos diferentes en distintas muestras. Se observa la tinción de distintas estructuras de manera progresiva
Coloración “regresiva”
Partiendo del colorante muy concentrado, se enjuagan gradualmente las muestras (“diferenciación”) hasta lograr la mejor visualización de determinadas estructuras celulares
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
METACROMASIA
Fenómeno tintorial en el que un colorante determinado tiñe a un sustrato celular en un color diferente al propio
AZUL DE TOLUIDINA
Tiñe de color ROSA los gránulos de los basófilos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
METACROMASIA
Los gránulos de los BASOFILOS contienen mucopolisacáridos ácidos con grupos sulfatos [-] a menos de 5 Å unos de otros
Las moléculas de Azul de Toluidina (intensamente básicas +) se unen apretadamente configurando una tonalidad final rosada (fenómeno de basofilia)
BASOFILO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
GRUPO CROMOFORO: son grupos de átomos en resonancia (e- en vibración) que predisponen a la molécula a ser colorante
FRACCION CROMOGENA: constituyen la mayor parte de la molécula, a la que da color (“peso y densidad”)
GRUPO AUXOCROMO: portador de la carga eléctrica, positiva o negativa, que se une al sustrato
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ANILINA
O2N - - NH2+ / Cl-
cromóforo cromógeno auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Grupos cromóforos: -NO (nitroso)
-NO2 (nitro)
-N=N- (azo)
-C=S (tio)
Son grupos atómicos en resonancia (nubes de electrones en vibración), que confieren una “aptitud” colorante a la molécula. Aportan el color de base: morado en el caso de la anilina
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Fracción cromógena
Anillo bencénico
Cuanto mayor sea el peso de esta fracción mas intensa será la acción colorante
Pueden ser cíclicos (derivados de Benceno, Antraceno o Naftaleno) o Acíclicos (Etil, Metil,...)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Grupos auxócromos
Catiónicos (+): Amina primaria –NH2 Amina secundaria -NH- Derivados arílicos y alquílicos
Aniónicos (-): Carboxilo –COOH Sulfónico –SO3H
Oxidrilo –OH Fosfórico PO4H3
Nota: Actúan como lugar de “enganche” al sustrato celular. Para ser “activos” deben hallarse como sales solubles (sódicas, potásicas, cloruros, sulfatos, etc)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES BASICOS
Los AUXOCROMOS CATIONICOS o básicos (+) se salifican con los ácidos (-) del sustrato:
BASOFILO
BASOFILIA
afinidad del sustrato celular [-] por colorantes básicos [+]
BASOFILIA INTENSA MA DE EN EL CITOPLAS 27
UN PLASMOCITO
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES ACIDOS
Los AUXOCROMOS ANIONICOS o ácidos (-) se salifican con las sustancias básicas (+) contenidas en las estructuras celulares:
ACIDOFILIA
afinidad del sustrato celular [+] por colorantes ácidos [-]
EOSINOFILO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Sus moléculas contienen AUXOCROMOS CATIONICOS Y ANIONICOS, que les permite presentar acidofilia y basofilia según los sustratos celulares sobre los que se fija. Ejemplo:
Eosinato de azul de metileno
[+]/Cl- [-]/Na+
BASOFILIA - +
CELULA
ACIDOFILIA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Suelen emplearse diluidos en soluciones alcohólicas (metanol con frecuencia), en las que existe un equilibrio entre los iones [+] y [-]
NEUTROFILO
Ejemplo: El eosinato de azul de metileno tiñe los núcleos de las células reaccionando con los ácidos nucleicos (azul de metileno[+]) y con las nucleoproteínas (eosinato[-])
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Variando el pH del medio en el que interaccionan el colorante y los sustratos celulares, se puede modificar la afinidad y por tanto la coloración final
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Las proteínas celulares contiene grupos aminos y grupos ácidos:
Cualquier proteína a un pH inferior a su punto isoeléctrico (PI) se carga [+], con lo que tendrá mayor afinidad por los colorantes ácidos [aniónicos -].
Por el contrario, si elevamos el pH por encima de su PI se pondrán de manifiesto sus cargas [-], aumentando su avidez por los colorantes básicos [catiónicos +].
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
HEMOGLOBINA: proteína eritrocitaria rica en grupos ácidos (-COO-) y amino (-NH2). La tinción de MGG proporciones varias coloraciones:
= Sepia (beige claro), a pH 7 - 7.2
= Rosa a rojo, a pH 6.4 – 6.8 (útil si policromasia)
= Gris-azulada, a pH 7.2 – 7.6
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pH 6.8
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
NEUTROFILO
Normalmente para teñir extensiones de
citologías sanguíneas se emplean colorantes “químicamente neutros”, con los que se obtiene una:
TINCION PANCROMATICA,
ó una TINCION PANOPTICA
LINFOCITO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
En 1.891, ROMANOVSKI empleó una solución acuosa de Azul de Metileno para teñir una muestra de sangre con Plasmodios, en la que habían aparecido colonias de hongos después de 3-4 meses.
Sorprendido, observó que los núcleos de los polimorfo nucleares adquirían un tono rojo púrpura, mientras el citoplasma permanecía más o menos azulado.
TINCION NORMAL CON AZUL DE
METILENO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUL DE METILENO CH3
N+ auxócromo CH3
cromógeno S N cromóforo
CH3
N+
CH3
auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUL
AZUL DE METILENO
-CH3
AZUR B
AZUL-VIOLETA
-CH3
AZUR A
VIOLETA-ROJO
-CH3
ROJO OSCURO
VIOLETA DE METILENO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
El azul de metileno y sus derivados aportan 3 colores principales:
Rojo
Azul
Violeta
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCION PANCROMATICA
Una SOLUCION UNICA, compuesta por varios colorantes y sus derivados químicos en solución aportan toda una gama de colores
NEUTROFILIA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANCROMATICAS
De los trabajos de ROMANOVSKI, y de otros autores como LEISHMAN, WRIGTH, GIEMSA, TRIBONDEAU, etc, derivan las actuales tinciones pancromáticas, basadas en diversas combinaciones de:
Azul de metileno y sus derivados (azures)
Eosina
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANCROMATICAS
COLORANTE DE WRIGHT: Resulta de la demetilación del Azul de Metileno (AM) en un medio muy alcalino (CO3HNa) y a 1 atmósfera de presión, obteniéndose sucesivamente una mezcla de:
Azul de Metileno
+ Azur B (I)
+ Azur A (II)
+ Violeta de Metileno 42
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS Empleo sucesivo de 2 o más soluciones colorantes.
En general son de mayor calidad cromática que las tinciones pancromáticas
Ejemplo: La Tinción de May-Grünwald-Giemsa
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
COLORACION DE MAY-GRÜNWALD-GIEMSA
(o panóptica de Pappenheim)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
GIEMSA: - Eosinato de Azur II (azur A)
- Azur II al 0.76% en glicerina y metanol
MAY-GRÜNWALD (*): Eosinato de AM al 0.2% en metanol
(*): Eosinato de Azul de Metileno (una molécula de Eosina unida a dos de Azul de Metileno) al 0.2-0.25% en metanol
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
MAY-GRÜNWALD
FIJACION: metanol
PRECOLORACION: AM + eosina
GIEMSA COLORACION FINAL NOTAS: La adición de pequeñas cantidades de GLICERINA a la solución de Giemsa aumenta la ionización del colorante y su disponibilidad, y por otra parte disminuye la formación de precipitados cuando la tinción es prolongada.
Si además se añade una gota de ACETONA (x 20 cc de sol. de Giemsa) se mejora la penetrabilidad del colorante, hecho muy útil cuando existe una gran densidad celular 46
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
EL COLOR DE LAS ESTRUCTURAS CELULARES
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Para COMUNICAR lo que vemos al microscopio debemos reconocer determinadas CARACTERISITCAS de las células teñidas, e informar en términos concretos que definan situaciones de normalidad o de anormalidad.
Vamos a tratar a continuación sobre la TERMINOLOGIA que debemos usar para expresar nuestros resultados
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Componentes moleculares implicados en la química de las coloraciones
Acidos Nucleicos Ac. Fosfórico: anión principal
Nucleoproteínas Alcalinidad de HIS, ARG y LIS
Lípidos (fosfo-) Ácidos, básicos o neutros
Carbohidratos En su mayoría acídicos (+): alcalino, carácter básico, pH elevado (>7), catión
(-): carácter ácido, pH bajo (<7), anión 49
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR
Fijando con metanol y coloreando con AM/derivados y Eosina, se tiñen:
CROMATINA NUCLEAR
el ADN tiene avidez por el azul de metileno y sus derivados, adquiriendo una tonalidad violeta oscura-negruzca, más intensa cuanto más maduro es el núcleo y más compacto.
Las nucleoproteínas son ricas en histonas y protamina (+), por lo que tienen afinidad por la eosina, que aporta una tonalidad roja.
ERITROBLASTO
MADURO
ERITROBLASTO INMADURO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR
= HEMOGLOBINA de los hematíes: ya hemos visto que esta proteína tiene numerosas cargas eléctricas (+) y también (-). Esto da lugar a que pequeñas variaciones en el pH de la tinción modifica su basofilia/acidofilia
= GRANULOS NEUTROFILOS: toman las moléculas de eosinato de AM sin disociar, completas
= GRANULOS BASOFILOS: debido a su contenido ácido (heparina) poseen alta afinidad por el AM.
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR
POLIMORFONUCLEAR
= GRANULOS EOSINOFILOS: su contenido fuertemente básico atrae únicamente a colorantes ácidos, como la eosina
= VACUOLAS: cuando su contenido es graso puede ser disuelto por el alcohol usado como fijador, y aparecen como estructuras vacías
MONOCITO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
BASOFILIA
BASOFILIA GRANULAR
BASOFILIA DIFUSA
La GRANULACION del basófilo (-COO-) tiene afinidad por los colorantes alcalinos (+). Igual ocurre en la basofilia difusa de las células plasmática, ricas en ARN (-COO-)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILIA
ANILINA
O2N - - NH2+ / Cl-
cromóforo cromógeno auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILIA
AZUL DE METILENO CH3
N+ auxócromo CH3
cromógeno S N cromóforo
CH3
N
CH3
auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUROFILIA
A veces se comenta erróneamente que el Azul de Metileno produce metacromasia, y no es cierto.
Se trata en realidad del fenómeno de AZUROFILIA, coloración violeta-rojiza y no azul como sería de esperar, debida a la presencia de pequeñas cantidades de derivados trimetilados del A.M., denominados Azur I (o Azur B).
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
AZUROFILIA
La GRANULACION del mielocito neutrófilo es típicamente azurófila, igual que la de algunos linfocitos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ACIDOFILIA
EOSINA
cromógeno COO-/Na+
auxócromo
Br ACIDOFILIA
Na+/O-
auxócromo
O
Br Br cromóforo 58
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
ACIDOFILIA
La GRANULACION del eosinófilo (proteínas catiónicas [+]) tiene avidez por los colorantes ácidos [-](como la eosina)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
HIPOCROMIA
FALTA DE INTENSIDAD en la coloración: en la imagen la “hipocromia” típica de la falta de
Hb en la anemia ferropénica
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
HIPERCROMIA
REFUERZO DE LA TINCION: en la imagen el núcleo del eritroblasto es hipercromático
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
ANISOCROMIA
Distinta “intensidad” de la coloración en el mismo tipo de células
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TORMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
POLICROMASIA
Distinto color en el mismo tipo celular
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Redondeado Hendido Lobulado
Linfocito Linfocito hendido
Polimorfonuclear Neutrófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Arriñonado Irregular Bilobulado
Monocito Monocito Eosinófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Centrado Excéntrico
Eritroblasto Cél. Plasmática
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Cromatina laxa Cromatina de
densidad media
Cromatina densa
Blasto indiferenciado
Monocito (cromatina “peinada”)
Eritroblasto
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Un nucléolo Dos nucléolos
>2 nucléolos
Mononucleosis Infecciosa
Blasto maligno Blasto maligno
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O”
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
INTENSAMENTE BASOFILO
Es decir contiene sustancias con gran avidez por los colorantes básicos. Y concretamente las células con gran actividad de síntesis poseen una gran basofilia debido a la presencia en el citoplasma de ARN, que contiene abundantes grupos fosfóricos (PO3
-).
PLASMOCITO
LINFOCITO “ACTIVAD 69
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
DE BASOFILIA MEDIA
Como ocurre en los linfocitos ligeramente activados o en los promielocitos
LINFOCITO T ACTIVADO (MONONUCLEOSIS I.)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
Bordes netos Bordes irregulares
Linfocito activado (mononucleosis inf.)
Linfocito
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DE LA GRANULACION
Eosinófila (ó acidófila)
Basófila Neutrófila (mixta)
Granulocito Eosinófilo
Granulocito Basófilo
Granulocito Neutrófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Vamos a revisar brevemente algunos defectos comunes en las tinciones de rutina que se realizan en los
laboratorios de Hematología
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Las extensiones de sangre para examen morfológico se deben de realizar inmediatamente después de la extracción de la muestra en EDTA.
Cuando pasan más de 2 o 3 horas, comienzan a aparecer fenómenos degenerativos en las células.
CELULA NO IDENTIFICABLE, CON EL NUCLEO EN DEGENERACION
(CARIOLISIS) 74
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
La solución de fijación precoloración se ha derramado, secándose en la zona dejada al descubierto
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Fijación defectuosa y depósitos de colorantes en torno a los hematíes
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Precipitados de colorante en “halo” entre las células
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Defecto en la fijación: es imposible distinguir la morfología de los eritrocitos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Extensión insuficientemente seca, y mal fijada por el alcohol
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Entre otros excesos se observa una sobre-tinción que impide reconocer las características de la cromatina de los núcleos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
La cantidad de solución fijadora- colorante es deficiente
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Solución de lavado con suciedad que dificulta la visión
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
T. PANCROMATICA DEFICIENTE: EXCESO DE COLORANTE QUE IMPIDE VER LA CROMATINA NUCLEAR Y SUCIEDAD
T. PANCROMATICA
CORRECTA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
LA GRANULACION ESPECIFICA DEL BASOFILO SE HA PERDIDO PARCIALMENTE. AL SER SU CONTENIDO SOLUBLE EN AGUA, UN EXCESO DE LAVADO LA HA ELIMINADO
LA GRANULACION SECUNDARIA DEL BASOFILO MUESTRA SU TIPICA COLORACION NEGRUZCA DEBIDO A LA AVIDEZ DE LA HEPARINA (ACIDO) POR EL AZUL DE METILENO (BASE)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
En las tinciones que usamos, ya hemos comentado que el color se logra por una atracción electrostática, estableciéndose enlaces químicos estables aunque no muy fuertes.
Por ello un lavado excesivo, combinado o no con una cantidad insuficiente de solución colorante, puede conducir a una decoloración más o menos intensa
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS TECNICOS
Limpieza de los portaobjetos
Eter / Alcohol [1:1]
pH del agua destilada: 7-7.2
Hervir o tamponar
Secado de las extensiones
Mínimo 2 horas; óptimo 24 h
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS TECNICOS
Sobrecarga de color: precipitados
Glicerina
Suciedad de fondo
Lavar con A.D.
Conservación
Cubrir con DPX
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CASOS DE MORFOLOGIA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Fig. 1: Linfocito
Coloración
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 2: Eosinófilo
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Fig. 3: Mielocito
Coloración
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 4: Neutr. Banda
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Fig. 5: Linfocito
Coloración
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 6: Basófilo Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 7: Neutr. Segmentado
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 8: Monocito Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Fig. 9: Blasto
Coloración
Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 10: Linfocito
Bordes
Gránulos
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