Post on 26-Jan-2016
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Iván PalomoFacultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
II Congreso Científico de Estudiantes de Tecnología Médica del Sur
Universidad de la Frontera
PLAQUETAS Y
ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS
Octubre, 2005
Figuras blanco-negro: libro Hematología: Fisiopatología y Diagnóstico, 2005
Plaquetas
Megacariopoyesis
Remoción fisiológica de plaquetas desde la circulación
Marcadores de envejecimiento:
Serotonina
Densidad
Médula ósea
Trombopoyesis
Megacariocitos
Sangre
Hemostasia
(8-10 días)
Bazo, Hígado, MO
Remoción
Macrófagos?
PAIgG en plaquetas humanas separadas en gradiente de densidad (n:18)
PBD vs PAD p<0.01
1200
1000
800
600
400
200
PBD PDI PAD
Mo
lécu
las
IgG
/ Pla
que
ta
(Jóvenes) (Envejecidas)
Expresión de PS, GPIV y P-Selectina en plaquetas humanas de diferente densidad
Recuento de plaquetas y exposición de PS
Inyección de estradiol en perros (n:7)
Recto Plaquetas
Exposición de PS*
*, citometría de flujo
Recto plaquetas y potencial de mb mitocondrial
Inyección de estradiol en perros (n:13)
RectoPlaquetas
DIOC, MFIψm
Remoción fisiológica de plaquetasmecanismo inmune y no inmune
IgG
FS
FcR
MacrófagoScavenger R
P selectinaFvW, fibronectina VitronectinaTrombospondinaFV, HMWK Fibrinógeno, FXIProteína S, PAI-IPF4PDGF, TGF
ADPATPSerotoninaCalcio
Estructura plaquetaria
Función plaquetaria
Ac Antifosfolípidos
• Grupo heterogéneo de anticuerpos
• IgG, IgM, IgA
Ac Antifosfolípidos
• ELISA de fase sólida (aCL)
• Anticoagulante Lúpico (AL)
• Trombosis (venosa y arterial)
• Abortos espontáneos a repetición
• Trombocitopenia
CLASIFICACIÓN DEL SAF
• Primario
• SecundarioEnf.Auntoinmunes LES
Lupus probable Otras mesenquimopatías
Neoplasias Tumores sólidos Neoplasias hematológicas
Inducido por drogasAsociado a infección
• Variantes del SAFSAF catastróficoAsociado a otros Sínd.microangiopáticosSíndrome de hipoprotrombinemia
• SAF seronegativo
Antígenos
• Beta-2 Glicoproteína I (2GPI)
• Protrombina (PT)
• Proteínas del Sistema Proteína C • PC, PS, Trombomodulina
• Anexina-V
• Kininógeno de alto peso molecular
• Fosfolípidos aniónicos: FS, CL
Patrón de PM 2GPI kDa
200
97
68
50
43
29
≈60aa
≈60aa
≈60aa
≈60aa
≈80aa
2GPI
12 Lis, 1 Arg, 1 His
326 aa
Glicoproteína5 dominios
Ac antiβ2GPI
Ac antiβ2GPI - β2GPI: Baja afinidad en solución Ausencia de CI séricos en SAF
****
Epítopos
*
β2GPI – Superficie FL: Baja afinidad
Aumenta con Ac antiβ2GPI
Protrombina• 72 kDa
• 579 aa
Dominios Gla
Complejo Protrombinaa
Complejo protrombinasa
Ac anti-Protrombina (aPT)
Acción anticoagulante: Interfire acción C. Protrombinasa
Fragmento 1.2 A B
s-s
Epítopos
• Aumentan unión PT a superficie FL, sin interferir C. Protrombinasa.
• Inhiben acción de Antitrombina.
• Interferen acción de la Plasmina.
2GPI
Ac anti-2GPI (dominio I)
Complejos Ac antiβ2GPI – β2GPI
Ac anti-2GPI (dominio II)
Reversible
Irreversible
Similar en Ac antiPT - PT
Ac aFL en pacientes con LES
145(5): 336-340
Ac aFL en pacientes con trombosis* y controles
Palomo I, Pereira J, Alarcón M, Vasquez M, Pinochet C, Velez MT, Sandoval J, Icaza G, Pierangeli S. Prevalence and isotype distribution of antiphospholipid antibodies in unselected Chilean patients with venous and arterial thrombosis. Clin Rheumatol. 23(2):129-33, 2004.
aCL 57 25.2 4 4.2 4.8 0.01 (1.4-16.1)
aPT 31 13 .7 3 3.2 8.9 0.004 (2.1-38.5)
Pacientes (n=226) Controles (n=95) n % n % OR** p*
anti-2GPI 14 6.2 2 2.1 3.2 0.2
(0.5-19.5)
*, Trombosis Venosa o Arterial **, ajustado por edad y sexo
Continua
Prevalencia y Distribución Isotípica de Anticuerpos aCL, anti-2GPI y aPT en Pacientes con Trombosis* (n=226) (cont.)
Cualquier isotipo 57 25.2 14 6.2 31 13.7
IgG 23 10.2 5 2.2 12 5.3
IgM 27 11.9 4 1.8 19 8.4
aCL anti-2GPI aPT n % n % n %
IgA 22 9.7 7 3.1 3 1.3
*, Trombosis Venosa o Arterial
Palomo I, Pereira J, Alarcón A, Vásquez M, Pinochet C, Poblete F, Mendez E, Sandoval J, Vidal R, Pierangeli S. Val/Leu247
and Trp/Ser316 polymorphisms in β2 glycoprotein Ι and their association with thrombosis in unselected Chilean patients. (enviado)
Patients(n:149)
Control group (n:160) Odds Ratio p
Polymorphism n % n %
Val/Leu247 133 89.3 117
73.1 3.1 (1.6 – 6.0) 0.0003
Trp/Ser316 15 10.1 6 3.8 2.9 (1.1 – 8.6) 0.027
Prevalence of Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms of β2GPI among patients with thrombosis and controls.
Mecanismos protrombogénicos de los Ac aFL
Inhibición de anticoagulantes naturales Sistema PC, AT, IVE Anexina V
• Monocitos Aumento expresión de FT en monocitos circ.
• Plaquetas
Activación celular• Células endoteliales Up regulation de Moléculas de Adhesión Activación celular Aumento expresión FT Aumento unión de Protrombina
Inhibición del Sistema Fibrinolítico
CE
CE
Ac aFL
APCPSPC
PS
Plaqueta
Plaqueta
Plaqueta
Plaqueta
PT
PT
TM
AT
T
T
T
TF
Anexina A5
β2GPI
TFPI
tPA PAI-1
Plasmina
Plg
Xa
VIIa
Va
Xa
X
EPCR
Mecanismos protrombóticos de los Ac aFL
Bárbara FuentesForastiero R, Martinuzzo ME. Antigen Specificity and Clinical Relevance of Antiphospholipid Syndrome. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1,
Ac Antifosfolípidosy
Plaquetas
Unión de Ac aFL a plaquetas
• Plaquetas con algún grado de activación o envejecidas
• Células apoptóticas unen β2GPI. Podrían generan epítopos que inducen respuesta del tipo autoinm.
• Ac aFL se unen a plaquetas en reposo (separ. por filtración en gel)
• Elución de Ac aFL desde plaquetas de pacientes con LES
• En presencia de β2GPI y PT, Ac aFL se unen a plaquetas activadas.
• Unión de Ac aFL IgG a plaquetas incub. con colágeno o cong-desc.
Interacción de los Ac aFL a las plaquetas
• Región Fab con antígenos específicos de plaquetas.
• Región Fc (de C. inmunes Ag-aFL) a FcγRII.
• Región Fab a β2GPI (dímero) unida a apo ER2.
• Aumento de la agregación plaquetaria (con concentraciones subagregantes de ADP, trombina o colágeno).
Efecto de los Ac aFL en las plaquetas
• Mayor expresión de CD63.
• Mayor liberación de P-selectina (CD62P).
• Aumento expr. GPIIb-IIIa c/ bajas dosis de TRAP y aFL.
• Aumento de micropartículas plaquetarias.
• Aumento de síntesis in vitro de TXA2
Efecto de los Ac aFL en las plaquetas (cont)
F(ab’)2 de Ac aFL aumentan:
• Fosforilación de la p38MAPK
• Fosforilación de fosfolipasa A2
• TXB2
ApoR2 ApoE2
TXA2R
P2Y1P2Y12
I
II
III
IV V
I
II
III
IV V
Dímero
β2GPI
Anti-β2GPI
PP
Ac aFL y Plaquetas
CD62P
CD63
GPIIb-IIIa
ADP
TXA2
MAPp38 Kinasa
Activación