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7/23/2019 Practica 1 - Fotometria
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ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
UNIVERSIDADNACIONALFEDERICO
Curso : Bioquímica y Nutrición
Pro!sor : C!sar "artín!# Va$%i&ia
A$umno : So'$in A$m!i%a( An)!$ Ramiro
*+,-
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Universidad Nacional
Federico Villarreal
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
PRACTICA DE LABORATORIO Nº
CURSO ! Bio"#$%ica & N#'rici(n
DOCENTE ! Pro)* Cesar Mar'$ne+ Valdivia
ALMUNO ! SOPLIN ALMEIDA, AN-EL RAMIRO
LIMA – PERÚ
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CUES.IONARIO
,/ 01u2 !s $a Fotom!tría3
La Fotometría (también conocida como Espectrofotometría) es uno de los
procesos o técnicas que se realizan en los laboratorios de bioquímica,
resultando de gran utilidad para el hallazgo de la concentración de una
sustancia problema, teniendo en cuenta la propiedad de las sustancias y los
cuerpos para poder absorber luz, dependiendo de su concentración (cantidad de
soluto en una solución) Es decir, mide la intensidad de la luz
!ara este "n, se usa un aparato denominado Espectrofotómetro, el cual permite
hallar la luz absorbida (radiación) por una determinada muestra de la cual se
desconoce su concentraciónLa fotometría se basa en el principio del espectro #isible de la luz $e debe tener
en cuenta que todas las sustancias absorben luz (energía radiante), sin
embargo muchas #eces no podemos obser#arla !or ello se debe tener en
cuenta el denominado “espectro visible de la luz”
$e denomina espectro #isible de la luz al rango de longitud de onda promedio
entre 4++ y 5++ nm 6-7+ 8 5*+ nm9, que representa los límites que el o%o
humano puede percibir, por ello se habla de &luz #isible' Entendiéndose la &luz'
como un fenómeno electromagnético a%o este principio acta el
espectrofotómetro
*omo antes había mencionado, las sustancias absorben una determinada
cantidad de luz (la cual ser+ epresada en nanómetros) que muchas #eces
acaba a la sensibilidad del o%o humano Longitudes menores a 400 nm son
denominadas en el rango de UL.RAVIOLE.A y longitudes de onda mayores a
700 nm se catalogan como INFRARROA Estos rangos fuera de la luz #isibleson detectados por el espectrofotómetro
*/ 0Cu;$ !s !$ un%am!nto %! $a Fotom!tría3
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El fundamento de la Fotometría considera lo antes mencionado- las sustancias
absorben una determinada cantidad de luz en proporción a su concentración
!ara ello se tiene conceptos de LUZ INCIDENTE, LUZ TRANSMITIDA,
AS!RANCIA, TRANSMITANCIA, entre otros
.odo esto se resume en la <L!y %! Lam=!rt 8 B!!r>/ /ntes es importante
indicar que la luz incidente( es la luz que enfocada por un lado de la muestrainicialmente (la luz que &entra')
La <L!y %! Lam=!rt ? B!!r', es un medio matem+tico que epresa como la
materia (soluto en una solución) absorbe la luz Esta ley indica que la luz que
atra#iesa una muestra, se #e disminuida (en comparación con la luz incidente)
debido a algunos fenómenos-
0 *antidad de materia (soluto) que absorbió luz durante el trayecto de la
misma a tra#és de la muestra- *12*E2.3/*412 5E L/ 67E$.3/8 5istancia que debe atra#esar el haz de luz a tra#és de la muestra-
L1294.75 5EL .71
: La probabilidad de que la luz (fotones) sea absorbida por esa muestra, loque se entiende por /$13/2*4/ (*oe"ciente de etinción o de
absorti#idad)
Esta ley es consecuencia de dos leyes-
- Ley de Lambert: implica la relación entre la /$13/2*4/ de la muestra y
la longitud del medio que debe atra#esar la luz-
5onde
/ ; /bsorbancia
< ; *oe"ciente molar de etinción
d ; 5istancia en cm
- Ley de Beer: implica la relación entre la /$13/2*4/ de la muestra y la
*12*E2.3/*412 de la misma, de la siguiente manera-
5onde
/ ; /bsorbancia
< ; *oe"ciente molar de etinción
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c ; *oncentración molar
3esumiendo, la Ley de Lambert = eer quedaría epresada de la siguiente
manera-
> de modo pr+ctico puede gra"carse de la siguiente manera-
-/ 0Cu;$ !s $a uti$i%a% 'r;ctica %! $a Fotom!tría3
*omo había mencionado al inicio, la fotometría es una pr+ctica muy usada en
bioquímica *omo busca relacionar o hallar la concentración de una muestra en
relación con la luz absorbida, lle#ado al campo clínico nos permitir+ determinar
la concentración de algunos indicadores biológicos
5onde
4? ; Luz incidente
40 ; Luz transmitida
< ; *oe"ciente molar de etinción
c ; *oncentración molar
l ; Longitud o distancia recorrida
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Es decir, es usada para analizar muestras biológicas $e debe tener en cuenta
que eiste una longitud de onda especí"ca para cada sustancia /lgunos
e%emplos-
- Test "e glucosa pre prandial (ayuno) y post prandial (luego de probar
alimento)- para apoyo en el diagnóstico de 5iabetes o hiperglicemias por
e%emplo- An#$%s%s "e m&estra "e orina' por e%emplo para detectar cocaína o sus
metabolitos en orina o para el an+lisis mismo de la muestra- I"ent%(cac%ón "e aminoácidos' por e%emplo, los amino+cidos .ri'tóano y
.irosina absorben longitudes de onda de 8@? nm- I"ent%(cac%ón "e ácidos nucleicos' los +cidos nucleicos y las bases que lo
constituyen tienen una absorción m+ima de 8A? nm Los +cidos nucleicos
parcialmente degradados, absorben mayor longitud de onda Entonces esta
sería una forma de #eri"car la integridad del 52/- Determ%nac%ón "e Urea, Creatinina, Acido úrico)- Determ%nac%ón "e colesterol - Determ%nac%ón "e Bilirrubinas
- Determ%nac%ón "e emoglobina' "e *ran &t%$%"a" para e$ "%a*nóst%co "eanem%a)