Post on 26-Jul-2022
Técnicas diagnósticas en el estudio de los linfomas
Sergio SerranoUAB, IMIM, Hospital del Mar
Criterios de clasificación
• Morfológicos
• Inmunofenotípicos
• Genéticos
• Clínicos
Genética
Morfología Histología
Técnicas de diagnóstico
FISH
PCR
Inmunohistoquímica
Citometría de flujoInmunofenotipo
Fijación
Morfolgía
Inmunohistoquímica
FISH
PCR
Técnicas de diagnóstico
Control de calidad del ADN
400 bp300 bp200 bp100 bp
600 bp
fresco parafina
• Fijación
• Inclusión
• Corte
• Tinción
Morfología
• Análisis de la arquitectura: patrones
• Análisis citológico
Morfología
• Identificación del problema
• Diseño de los estudios subsiguientes:
Inmunohistoquímicos
Moleculares
Citogenéticos (FISH)
Morfología
Genética
Morfología Histología
Técnicas de diagnóstico
FISH
PCR
Inmunohistoquímica
Citometría de flujoInmunofenotipo
Ag
CD79a
CD20
CD23
bcl-2
bcl-6
CD10
Ag
Burkitt
CBMV CPNH CB CC
Ag
CD79a
CD20
CD23
bcl-2
bcl-6
CD10
Burkitt
• Fijación
• Recuperación antigénica
• Reacción antígeno-anticuerpo
• Detección de la reacción
Inmunohistoquímica
• Fijación
• Recuperación antigénica
• Reacción antígeno-anticuerpo
• Detección de la reacción
Inmunohistoquímica
BCL2 enz
BCL2 mw 15’ BCL2 aut 6’
• Fijación
• Recuperación antigénica
• Reacción antígeno-anticuerpo
• Detección de la reacción
MorfologíaInmunohistoquímica
AB-Pc D1
Dextrano-Pc D1
CSAc D1
• Selección de un panel de ac. primarios
• Evaluación de los controles int. y ext.
• Identificación de las células tumorales
• Interpretación del resultado
MorfologíaInmunohistoquímica
- Niño de 2 años
- Tumoracion intranasal
- Sospecha de linfoma T/NK de tipo nasal
- Se solicita realización de CD56
CD56
Desmina
• Selección de un panel de ac. primarios
• Evaluación de los controles int. y ext.
• Identificación de las células tumorales
• Interpretación del resultado
MorfologíaInmunohistoquímica
Porta con control
Control externo + + - -
Control interno + - + -
MorfologíaInmunohistoquímica
“ Bajo condiciones inapropiadas cualquier anticuerpo puede dar resultados aparentemente positivos en cualquier tejido”
MorfologíaInmunohistoquímica
- Niño de 9 años
- Sin antecedentes patológicos
- Dolor abdominal
- Masa abdominal
- Tumoración gástrica
MPXCD20
• Selección de un panel de ac. primarios
• Evaluación de los controles int. y ext.
• Identificación de las células tumorales
• Interpretación del resultado
MorfologíaInmunohistoquímica
• Células tumorales
Se detecta: ……..
No se detecta: ……….
• Células acompañantes
Se detecta: ……
No se detecta: ……
- Varón de38 años
- Astenia anorexia y pérdida de peso
- No adenopatías
- Nódulos pulmonares bilaterales de 1 a 20 mm de Ø
- Sospecha de linfoma T pulmonar. Se remite muestra para estudio del reordenamiento del gen que codifica el TcR
CD20 CD3
CD79a
Genética
Morfología Histología
Técnicas de diagnóstico
FISH
PCR
Inmunohistoquímica
Citometría de flujoInmunofenotipo
Criterios de clasificación
• Morfológicos
• Inmunofenotípicos
• Genéticos
• Clínicos
Genética
Morfología Histología
Técnicas de diagnóstico
FISH
PCR
Inmunohistoquímica
Citometría de flujoInmunofenotipo
MorfologíaFISH
• Improntas o extendidos iicitológicos
• Secciones de tejido incluido iien parafina
MorfologíaFISH
Sondas
Detección de fusiones (“dual-color, dual-fusion”)
Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
MorfologíaFISH
Sondas
Detección de fusiones (“dual-fusion”)
Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
A
B
A
B
A
B
A
B
A
B
A
B
B
A
BCL-2IgHBCL-2IgH
A
B
B
A
X
X
A
B
B
A
A
A
B
B
A
BCL-2IgH
MorfologíaFISH: detección de fusiones
• Ventajas
Proporciona información sobre i los dos genes implicados en la iiiiiiiiiitranslocación
• Inconvenientes
Dificil de interpretar
MorfologíaFISH
Sondas
Detección de fusiones (“dual-fusion”)
Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
A
B
B
A
A
B
B
A
MorfologíaFISH: detección de roturas
• Ventajas
Facil de interpretar
• Inconvenientes
iiiiiiiSolo nos proporciona información iiiiiiisobre uno de los genes implicados iiiiiiien la translocación
Genética
Morfología Histología
Técnicas de diagnóstico
FISH
PCR
Inmunohistoquímica
Citometría de flujoInmunofenotipo
• Detección de translocaciones
• Detección de clonalidad
MorfologíaPCR
A
B
A
B
A
B
B
B
“Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo”
MorfologíaPCR
48%MBR+mcr
55%MBR+3´MBR
58%MBR
Regiones estudiadas
Falsosnegativos %
t (14;18) en Linfomas Foliculares
MBR+mcr+3´MBR 42%
MorfologíaPCR
MBR
mcr
3´MBR
MorfologíaPCR
• Detección de translocaciones
• Detección de clonalidad
MorfologíaPCR
T
B
Reordenamiento Ig
Reordenamiento TCR
Org linfoides secundarios
Hipermutación Ig ICambio isotipo
Ag
Sangre
NK
CD4
CD8
Org. linfoides primarios
pm
pm
T
B
Reordenamiento Ig
Reordenamiento TCR
Org linfoides secundarios
Hipermutación Ig ICambio isotipo
Ag
Sangre
NK
CD4
CD8
Org. linfoides primarios
“Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo”
MorfologíaPCR
18%FR1+FR2+FR3
18%FR1+FR3
21%FR2+FR3
30%FR1
33%FR2
52%FR3
Regiones del gen IgH estudiadas
Falsosnegativos %
Clonalidad en Linfomas FolicularesMorfologíaPCR
IgH FR1
IgH FR3
IgH FR2
Cadenas ligeras kappa
Cadenas ligeras lambda
MorfologíaPCR
FR1
FR2
FR3
T
B
Reordenamiento Ig
Reordenamiento TCR
Org linfoides secundarios
Hipermutación Ig ICambio isotipo
Ag
Sangre
NK
CD4
CD8
Org. linfoides primarios
TcR Gamma
TcR Beta
TcR Delta
MorfologíaPCR
“Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo”
MorfologíaPCR
“Los estudios de clonalidadno deben utilizarse para establecer el linaje de unlinfoma”
- Mujer de 68 años
- Desde hace 6 meses presenta en la mitad superior de la espalda un nódulo solitario de 2cm de Ø que no se halla ulcerado
- No se detectan otras lesiones ni adenopatías
CD20
IgH TcR
Recapitulación y diagnóstico
• Diagnóstico de una entidad reconocida por la OMS
• Linfoma de dificil clasificación
• Infiltración linfoide de significado incierto