Post on 19-Jul-2020
Taula Rodona: Sífilis 2013Les proves
Juliana Esperalba EsquerraServei de Microbiologia
Hospital Universitari Vall d’Hebron
Introducció: Treponema pallidum subsp. pallidum• Ordre Spirochaetales
• Família Spirochaetaceae
• Gènere Treponema
• T. pallidum subsp. pallidum
• Morfologia helicoidal amb flagel
• > 95% homologia entre espècies (morfologia i antigenèticament)
• Gram negatius (*)
• Paràsits obligats del home, únic reservori
Diagnòstic
Clínica
• Sífilis primària / secundària amb lesions• Cribatge / Seguiment posttractament• Neurosífilis• Sífilis congènita
Tècnica diagnòstica
• Diagnòstic directe / indirecte
Mostra• Local / sistèmica
Diagnòstic DIRECTE
TINCIONS I MICROSCOPIA
CAMP FOSC
CONTRAST FASES
GRAM
FLUORESCÈNCIA
TEIXITS
CULTIU BIOLOGIA MOLECULAR
PCR
SEQÜENCIACIÓ
Diagnòstic DIRECTE
TINCIONS I MICROSCOPIA
CAMP FOSC
GRAM
FLUORESCÈNCIA
TEIXITS
1. Sense tincions Microscopia de camp fosc:• Mostres locals de lesions• < 20 minuts des de la recollida de la mostra motilitat
(làbil: oxigen, calor, pH no fisiològic, desecació)
2. Tinció de Gram NO (diàmetre < 1 μm)
3. Tinció fluorescent Microscopia de fluorescènciaDFA‐TP (direct fluorescent antibody for T.
pallidum):• Mostres locals de lesions• Secades: no necessita visualització immediata• Pràcticament no s’utilitza
4. Tincions de teixitsDFAT‐TP (direct fluorescent antibody tissue for T.
pallidum)IHC (immunohistochemistry)
• Per mostres de teixits lesionats: cervell, gastrointestinals, placenta, cordó umbilical o pell.
• Diagnòstic de fases tardanes o sífilis congènita
Diagnòstic DIRECTE
BIOLOGIA MOLECULAR
PCR
SEQÜENCIACIÓ
PCR (polymerase chain reaction):
• Tècnica diagnòstica més nova• Mostres de LCR, genitals, líquid amniòtic i sang (poca
sensibilitat en fases avançades)• Ens permetria diferenciar espècies
HUVH:• PCR multiplex a temps real: RealCycler HSVT‐G v.2
(control intern i control positiu)• Dianes: T. pallidum supesp. pallidum i Haemophilus
ducrey
Diagnòstic INDIRECTE
TREPONÈMIQUES
EIA (enzyme immunoassay)
TPHA (Treponema pallidum haemagglutination)
FTA‐ABS (fluorescent treponemal antibody absorption)
Immunoblots
NO TREPONÈMIQUES
RPR (rapid plasma reagin)
VDRL (venereal disease research laboratory)
Diagnòstic INDIRECTE: TREPONÈMIQUES
Antígen de T. pallidum subsp. pallidum per detectar Ac específicsDetecció d’Ac IgM: útil en el diagnòstic de sífilis congènita.
No són útils pel seguiment del tractament o per diagnòstic de reinfeccions ja que són positius durant molts anys/al llarg de la vida.
Falsos positius
Immunoassaigs
ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)CLIA (chemiluminescence)
TPHA (Treponema pallidum haemagglutination) Hemaglutinació
FTA‐ABS (fluorescent treponemal antibody absorption) IFI
Immunoblots
Treponèmiques: Cribatge
Treponèmiques: TPHA i FTA‐ABS
Diagnòstic INDIRECTE: NO TREPONÈMIQUES
RPR / VDRL
• Antígen = cardiolipina + colesterol + lecitina• Detecten Ac IgG i IgM en resposta a cardiolipina o altres lípids segregats
per les cèl∙lules infectades o pels treponemes.• Reacció immunitària: aglutinació de les partícules lipídiques
VDRL necessita lupaRPR utilitza partícules de carbó que la fan visible
• Ràpid i senzill• Tècniques quantitatives Útil pel seguiment del tractament
• Baixa sensibilitat en fase primària o terciària• Falsos positius• Efecte prozona
Diagnòstic INDIRECTE: RPR
Algoritme HUVH
Sèrum
EIA
TPHA
RPR
FTA‐ABS
LCR
FTA‐ABS
VDRL*
Sèrum per congènita
EIA
(mare)
IgM (IFI)
(nounat)
PCR
Diagnòstic INDIRECTE
Diagnòstic INDIRECTE
Sensibilitat Especificitat
Fase Primària Secundària Latència Terciària
VDRL 78 100 95 71 98
RPR 86 100 98 73 98
FTA‐ABS 84 100 100 96 97
TPHA 88 100 100 94
EIA 92 100 99 100 99
WHO
En resum
Sífilis primària
Directe: lesions
Indirecte:
Precoç: no detecció
Ac
Sífilis secundària
Directe: lesions
Indirecte:
100% sensibilitat
Sífilis latent
(< 1 any)
Indirecte:
T i NT positives
NT van disminuint
Sífilis latent o terciària
(> 1 any)
Indirecte:
T positives
NT positives o negatives
Clínica
Neurosífilis
Directe: PCR
Indirecte:
T sèrum +
FTA‐ABS
VDRL
Congènita
Directe: PCR
Control embaraç
NT falses
IgG > 6m
IgM
Per finalitzar...
• Diagnòstic serològic: dos sèrums mínim
• Gran quantitat de tècniques per un diagnòstic
• Dificultat en la interpretació dels resultats
• Reinfeccions
• Valor de la IgM en sífilis aguda (no congènita)
Gràcies per la vostra atenció