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Laboratorio # 3Tinción Gram, simple, negativa, cápsula, catalasa y oxidasa Identificación de cocos
Vilmarie Figueroa NievesVictor TorresTania N. Pérez Del Río
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Tinción Gram y Tinción Simple
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Materiales:◦ Un cultivo de 24
horas de cualquier bacteria
◦ Azul de metilo◦ Cristal violeta◦ Carbol fuchsin
◦ Mechero◦ “Loop” de
inoculación ◦ Bandeja de
tinción ◦ Microscopio◦ Papel de lente◦ Porta objeto
Tinción Simple
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Conceptos Básicos de Tinción
• Visualización de los microorganismos se
dificulta por:― Tamaño
― Transparencia
― Decoloración
Conceptos Básicos de Tinción
• Químicamente la tinción es un compuesto
orgánico:
Benceno
Compuesto orgánico sin color
Cromóforo
Auxocrómo
Imparte color al Benceno
Grupo químico que permite la ionización al grupo
cromógeno
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Conceptos Básicos de Tinción
Técnicas de tinción
Tinción Simple Tinción Gram
Morfología: cocos, bacilos y espirilos.
Arreglo: cadenas, agrupaciones, pares y tétradas.
Grupos: gram+ y gram-Visualización: flagelados,
cápsulados, esporas y núcleos.
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Conceptos Básicos de Tinción
1.Coloque una o dos gotas de el agua en el centro de la laminilla.
• Fijación de las bacterias
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Conceptos Básicos de Tinción
2.Con un movimiento circular, riega la suspensión en la laminilla aproximadamente del tamaño de 10¢.
• Fijación de las bacterias
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Conceptos Básicos de Tinción
3.Transfiere una pequeña cantidad del inóculo bacterial del cultivo a la gota de agua. Riega el mismo de forma circular aproximadamente del tamaño de 5¢.
• Fijación de las bacterias
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Conceptos Básicos de Tinción
4.Dejar que se seque el frotis. Aguantando la laminilla por un extremó, rápidamente pásala por el mechero de dos a tres veces.
• Fijación de las bacterias
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Tinción Simple
Procedimiento:◦Preparar el frotis de la bacteria.
◦Poner una laminilla en la bandeja de tinción e inundar el frotis con los indicadores de tinción.
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Tinción Simple
• Se utiliza un sólo reactivo colorante:― Carbón fuchsin: 15 a 30 segundos
― Cristal Violeta: 20 a 60 segundos
― Metíl Azul: 1 a 2 minutos
Bacillus cereus Staphylococcus aureusEcherichia coli
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Tinción Simple
• ResultadosMetil Azul Cristal Violeta Carbón
Fuchsin
Dibujo
Organismo
Morfología
celular:
-Forma
-Arreglo
Color
____________
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____________
________________________
____________
____________
________________________
____________
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Tinción Simple
• Resultados
Cilíndrico
Esférico
Espiral
Helicoidal
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Tinción Gram
La mas importante tinción utilizada en bacteriología es la tinción Gram, nombrado por el Dr. Christian Gram. Este divide las células bacterianas en dos grandes grupos, Gram positivo (+) y Gram negativo (–), el cual es un gran instrumento para la clasificación y diferenciación de los microorganismos.
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Tinción Gram
Objetivos:◦ Demostrar las bases químicas y teóricas
para diferencial el procedimiento de tinciones.
◦ Demostrar las bases químicas de una tinción.
◦ Diferenciar entre dos principales grupos de bacterias: Gram + y Gram -
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Tinción Gram
Principios:
Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:
Gram Negativas
Gram Positivas
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Principios:
Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:
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Principios:
• Peptidoglucano:• Copolímero formado por
secuencias de:
• N-acetil-glucosamina
• Acido N-
acetilmurámico
• Por enlaces β-1,4
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Bacillus anthracis
Bacterias Gram Positivas
Principios:
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Bacterias Gram Negativas
Observaciones
Escherichia coli
Tinción Gram
• Se utiliza un sólo reactivo colorante:1) Cristal Violeta: 1 minuto
2) Iodo: 1 minuto
3) Alcohol: 10 a 15 segundos
4) Safranina: 45 segundos
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2
3
4567
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Tinción Gram
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Tinción Gram
• ResultadosE. Coli B. Cereus S. aureus
Dibujo
Organismo
Morfología
celular:
-Forma
-Arreglo
Color
____________
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____________
____________
________________________
____________
____________
________________________
____________
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Bacterias Gram Negativas
Observaciones
Proteus vulgaris
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Serratia marcescens
GRAM -
Bacterias Gram Positivas
Observaciones
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Micrococcus luteus
GRAM +
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Spirillum
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Spirillum