2014 Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias_FACEN Biotecnología.pdf

Mus musculus como

modelo animal para

estudio de leucemiasSilvia Elena Snchez Mendoza

Estudiante de Doctorado

Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular

Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-Universidade de So Paulo

Clasificacin de las leucemias

Clasificacin de las lecucemias

Leucemia

Linaje CelularPorcentaje de

Blastos

LinfoideMieloide Crnica Aguda

http://www.cancer.gov/espanol/tipos/necesita-saber/leucemia/page3

Clasificacin de la OMG

Informacin

Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica

y gentica se conjugan com las

caractersticas clnicas del paciente para

definir el dignstico.

Clasificacin de la OMG

Desarrollo de modelos animales

transgnicos a partir de Mus musculus

Algunas definiciones

Animal transgnico

Todo animal que posee genoma de otra especie o de la misma especie por

medio de la tecnologia de ADN recombinante.

Inbred

Individuos de una espcie en particular que son casi idnticos desde el punto

de vista gentico. Apareamiento por 20 generaciones.

C57BL/6J 129/SvImJ BALB/cJ

Datos interesantes

Ratones y humanos comparten 95% de sus genes por lo cual los ratones son

modelos eficientes para el estudio de enfermedades humanas.

En 1929, Clarence Cook Little funda el Laboratorio Roscoe B. Jackson

Memorial en Bar Harbor, Maine.

Em 1933, ratones del Jackson Laboratory son vendidos por

primera vez a otras instituciones.

Tcnicas para produccin de animales

transgnicos

Inyeccin en proncleos.

Vectores virales.

Transferencia de DNA exgeno mediada por esperma durante la fertilizacin

(SMGT, sperm mediated gene transfer).

Inyeccin, en la cavidad de blastocistos, de clulas madre embrionarias

previamente modificadas genticamente mediante la tcnica de gene

targeting.

Transferencia nuclear.

Inyeccin en proncleos

Vectores virales

Sperm mediated gene transfer

Gene targeting

Gene targeting

http://ki.mit.edu/sbc/escell/services/details

129S1/SvIm

J

C57BL/6J

BALB/cJ

Gene targeting

http://www.addgene.org/13442/

Gene targeting: Knock-in

http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno

ck

Gene targeting: Knock-out


ck

Gene targeting: condiotional Knock-out


ck

Transferencia nuclear

Modelo doble knock-in de leucemia

mieloide aguda

Mutacin Mll PTD

Mll -> Mixed lineage leukemia

Es uma duplicacin parcial em tandem (Partial Tandem Duplication)

dentro del marco de lectura de los exones 5 a 11.

La insercin puede producirse antes del exon 11 o 12 12.

Nature Reviews Cancer 7, 823-833 (November 2007)

Mutacin Mll PTD

Presente em 4-7% de los pacientes com leucemia mieloide aguda y cariotipo

normal.

Considerada de mal pronstico.

El gen Mll codifica uma protena de unin al ADN.

En modelo in-vitro, regula la expresin de algunos genes HOX mediante

modificaciones de regiones cis regulatorias:

Acetilacin de histonas H3/H4.

Metilacin de lisina 4 en H3.

Mutacin Flt3 ITD

La mutacin es una duplicacin interna en tandem (3-400 pb) en el dominio

juxtamembrana del receptor Flt3.

http://asheducationbook.hematologylibrary.org/content/2006/1/178/F1.expansion

Ratn knock-in Mll PTD

15 clulas madre embrionarias fueron inyectadas en blastocistos de 3,5 das

de edad en hembras C57BL/6.

Ratn knock-in Flt3 ITD

Ratn doble knock-in Mll PTD y Flt3 ITD

Fmeas

C57BL/6J

Flt3 WT:ITD

Machos BALB/cJ

Flt3 WT:ITD

Mll WT:PTD

Mll WT:PTD Flt3 WT:ITD

Mutacin Mll PTD

Ratones con mutacin Mll PTD presentan:

Alteracin de los lmites normales de expresin de genes homeobox

(Hoxa9) durante la embriognesis.

Mutacin Mll PTD


Defectos del esqueleto axial.

Mutacin Mll PTD


Nmero aumentado de clulas hematopoyticas progenitoras.

BFU-E:

burst forming unit-erythroid

GEMM-CFU:

granulocyte, erythroid cell,

monocyte, and megakaryocyte

colony forming unit

GM-CFU:

granulocyte/macrophage

colony forming unit

Mutacin Mll PTD


Aumento de la expresin de genes Hoxa7, Hoxa9 e Hoxa10 en mdula

sea, bazo y sangre perifrica.

Mutacin Flt3 ITD

Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:

Una enfermedad mieloproliferativa parecida a Leucemia Mielomonoctica

Crnica.

Mac-1: monocitos y granulocitos. Gr-1: granulocitos.

Mutacin Flt3 ITD


Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin-

Sca1+ckit+).

GMP: granulocyte-

monocyte progenitors

MEP:

megakaryocyteerythroid

progenitors

CMP: Common myeloid

progenitor

Mutacin Flt3 ITD


Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras

(LSK Lin-Sca1+ckit+).

GMP: granulocyte-

monocyte progenitors

MEP:

megakaryocyteerythroid

progenitors

CMP: Common myeloid

progenitor

Mutacin Flt3 ITD


Aumento de proporcin de clulas LSK em fase S/G2/M.

Mutacin Flt3 ITD


Disminucin de la apoptosis en clulas LSK y clulas progenitoras.

Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT

Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT

1. DNA de camundongos de 4 semanas

de idade extrado da cauda para

genotipagem.

2. DNA extrado do MO antes do

sacrifcio (50-80 semanas de

idade).

3. Blastos AML de transplante

secundrio.

Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:ITD

Gracias por la atencin

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