LABORATORIO XII

GENERO ESTAFILOCOCOS

OBJETIVO

Desarrollar los conceptos bsicos para la identificacin y clasificacin de

Staphylococcus coagulas positiva y Staphylococcus coagulasa negativa.

MARCO TEORICO

Las bacterias Gram positivas, a excepcin de las enterobacterias, son los

microorganismos aislados con mayor frecuencia a partir de muestras clnicas

humanas en el laboratorio de microbiologa. Estas bacterias estn ampliamente

distribuidas en la naturaleza y pueden ser recuperadas a partir del ambiente o

como habitantes comensales de la piel, las mucosas, y otros sitios del cuerpo de

los seres humanos y los animales. Estos cocos Gram positivos producen una gran

variedad de enfermedades que incluye foliculitis, furnculos, abscesos, faringitis,

endocarditis, erisipela, etc. por lo tanto, su recuperacin a partir de muestras

clnicas siempre debe correlacionarse con el cuadro clnico del paciente antes de

que pueda establecerse su papel en la etiologa de un proceso infeccioso.

El gnero de estafilococos consta de ms de 25 especies y varias subespecies.

Son todos aerobios facultativos, de ellas solo 12 se encuentran normalmente

colonizando al hombre, entre estas ltimas las tres de importancia clnica son: S.

epidermides, S. saprophyticus y S. aureus.

FUNDAMENTO

Hacer un diagnstico diferencial del grupo de cocos que nos permita clasificar el

gnero y especie de la familia Micrococaceae. Ya que la aparicin de las

colonias en un medio de cultivo primario de agar sangre nos puede permite la

clasificacin inicial de gnero pero no de especie.

La principal caracterstica que diferencia a S. aureus de los dems estafilococos

es la produccin de la enzima coagulasa (coagulasa positivo), las dems

especies no producen esta enzima (coagulasa negativo), a veces en los

laboratorios se agrupan bajo esta denominacin (coagulasa positiva o coagulasa

negativa) sin designar la especie. Ciertas caractersticas bioqumicas, de

resistencia a antibiticos y de posesin de antgenos nos permiten separar las

tres especies de estafilococos ms importantes clnicamente.

MATERIALES Y MTODO

Mtodo

Realizar el esquema de identificacin del gnero Staphylococcus, con las cepas

entregada por las docentes.

Realizar antibiograma e identificacin mediante in sistema comercial API Staph

Materiales

Agar Mueller Hinton con sangre, catalasa (perxido de hidrgeno al 30 %),

coagulasa, novobiocina, Dnasa, manitol con NaCl 5%, HCl 1 N (8,28 %), guantes,

bata, portaobjetos, asas bacteriolgicas, mecheros, escala de Mac Farland,

sensidiscos, estufa a 37 grados centgrados con y sin atmsfera de CO2.

PROCEDIMIENTO

A partir de cepas conocidas los estudiantes realizarn las pruebas para la

identificacin del gnero de Staphylococcus.

Se har extendido de la colonia para la coloracin de Gram.

Se realizar en placa la prueba de catalasa y de coagulasa.

Se sembrar en los diferentes medios para el metabolismo bacteriano

Estos medios para el metabolismo bacteriano se incubaran a 37 grados

centgrados por 24 horas.

En agar Mueller Hinton con sangre se realizarn las pruebas para la sensibilidad

de antibiticos.

A continuacin se mencionan algunas pruebas para identificacin y diferenciacin

de algunos microorganismos:

Mtodos para la diferenciacin de micrococos y estafilococos:

1. Sensibilidad a la bacitracina

Identificacin de Staphylococcus aureus:

Prueba de la coagulasa en portaobjetos

Prueba de la coagulasa en tubo

Procedimientos alternativos para la prueba de la coagulasa:

Aglutinacin del ltex

Hemaglutinacin pasiva

Pruebas confirmadoras adicionales:

Prueba de la desoxirribonucleasa ( DNAsa )

Prueba de la endonucleasa termoestable

Fermentacin de manitol

Identificacin de estafilococos coagulasa negativos

Mtodos de identificacin convencionales

Prueba de disco de bacitracina o furazolidona

Oxidasa modificada

Sensibilidad a la polimixina B

Prueba ornitina descarboxilasa (ODC)

Produccion de ureasa

Sensibilidad a la novobiocina para la identificacin de Staphylococcus

saprophyticus

INTERPRETACIN Y CORRELACIN

Se leer las pruebas metablicas y se analizaran en el esquema para la

identificacin de especie del gnero Staphylococcus, que debe coincidir con las

cepas ya clasificadas por parte del docente.

Se informa el reporte al clnico del Gram a partir de la muestra clnica, reporte del

germen aislado y su resistencia bacteriana.

BIBLIOGRAFA

Koneman, Diagnstico microbiolgico, Panamericana, Pg. 528 545

Piedad Snchez, Manual de procedimiento en microbiologa clnica, Pg.: 41 43

Jos ngel Garca, Microbiologa mdica, Mosby, pg: 179 - 190

T. Stuart Walker, Microbiologa, McGraw-Hill interamericana. Jos ngel Garca

Rodrguez, Microbiologa Mdica, Mosby

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