Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios. Escalante Guzmán, Rocío Miluska.

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8. ANEXOS

8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO

CALDO ACETATO MINERAL

Fosfato ácido di sódico dodecahidratado.

Fosfato diácido monopotásico

Sulfato de Magnesio heptahidratado

Cloruro de Amonio

Acetato de Sodio

Bicloruro de Calcio dihidratado

Solución de elementos traza

Carbonato de Sodio al 0.05%

Agua destilada

pH final

Esterilización a 121 ºC por 15 min.

2.25 g

0.345 g

0.05 g

0.25 g

0.000125 g

0.00025 g

0.75 mL

0.11 mL

250 mL

7.0

MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM)

Sulfato amoníaco

Base

Aminoácidos.

Vitaminas y sustancias nutritivas

Tampón fosfato

Agar

pH final

Esterilización a 121 ºC por 15 min.

2 g

82.8 mg

250 mg

35.9 g

0.04 M pH= 7.1 1000 mL

1.5 g

7.0-7.2

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CETRIMIDE AGAR

Peptona de gelatina

Cloruro de Magnesio

Sulfato potásico

N-cetil-N,N,N,-trimetilamoniobromuro(Cetrimide)

Agar-agar

Glicerina

Petróleo al 1 %

20 g

1.4 g

10 g

0.3 g

13 g

10 mL

Esterilización a 121 ºC por 15 min.

AGAR KING-B

Peptona de carne

Glicerol

Fosfato diácido de Potasio

Sulfato de Magnesio

Agar

Agua destilada

pH final

4 g

2 g

0.3 g

0.3 g

3 g

200 mL

7.0

Esterilización a 121 ºC por 15 min.

MEDIO MINERAL

Cloruro de Sodio

Cloruro de Potasio

Fosfato diácido de Potasio

Sulfato de Magnesio heptahidratado

Fosfato ácido di sódico

Nitrato de Amonio

Agua destilada

Petróleo crudo

pH final

24 g

0,7 g

2,0 g

1,0 g

3,0 g

1,0 g

1000

mL

10 mL

7.0

Esterilización a 121ºC por 15 minutos.

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MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN Fosfato ácido di potásico

Fosfato diácido de Potasio

Sulfato de Magnesio

Sulfato diamónico

Etanol

Agua destilada.

pH final

Esterilización a 121ºC por 15 minutos.

Extracto de levaduras al 3%.

18 g

6 g

0.02 g

4 g

20 mL

1000 mL

7.0

MEDIO PALLERONI

Fosfato ácido di sódico

Fosfato diácido de Potasio

Cloruro de Sodio

Cloruro de Amonio.

Sulfato de Magnesio heptahidratado

Citrato amónico férrico

Cloruro de Calcio

Agua destilada

pH final

9.37 g

8.976 g

1.7 g

0.2 g

0.1 g

0.01 g

0.001 g

200 mL

6.8

Esterilización a 121 ºC por 15 min., excepto el Citrato amónico férrico y Cloruro de Calcio el cual se

esteriliza por filtración y se adiciona en condiciones estériles a partir de una solución concentrada.

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8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC

CUADRO Nº 01

Nº Tiempo de retención (TR)

Componentes Peso molecular (PM)

Fórmula %

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34

1.33 1.55 2.07 2.69 3.17 3.87 4.28 4.43 5.09 7.74 8.28 10.76 15.83 16.86 17.79 19.64 22.34 24.88 24.88 25.90 27.30 29.60 31.80 33.91 35.94 37.87 39.73 41.51 43.23 44.89 46.47 48.08 49.97 52.22

n-pentano n-hexano n-heptano 2 metil pentano 3 metil hexano 1,1,2trimetil ciclohexano 1-hexeno 2 metil hexano 2 etil hexano 2 metil decano 4 metil decano n-nonano 2 metil undecano 3,5 dimetil octano 2 metil undecano dodecano n-tridecano n-tetradecano tetradecano 2 metil tridecano n-pentadecano pentadecano n-hexadecano n-heptadecano n-octadecano octadecano n-eicosano n-heneicosano n-dodocosano n-pentacosano n-octacosano n-nonacosano n-triacontano n-dotriacontano

76 86 100 72 100 126 84 86 114 114 156 128 170 142 170 170 184 198 198 198 212 212 226 240 254 254 282 296 310 352 394 408 422 450

C5H12 C6H14 C7H16 C6H14 C7H14 C9H28 C6H12 C7H16 C8H18 C11H24 C12H26 C9H20 C12H26 C10H22 C12H26 C12H26 C13H28 C14H30 C14H30 C14H30 C15H32 C15H32 C16H34 C17H36 C18H38 C18H38 C20H42 C21H44 C22H46 C25H52 C28H58 C29H60 C30H62 C32H66

0.49 0.77 0.57 0.64 1.82 2.18 2.14 2.05 7.58 9.52 0.38 13.17 5.95 9.39 2.55 8.56 7.86 5.09 3.48 3.90 3.93 1.37 1.22 0.96 0.85 0.77 0.71 0.55 0.43 0.37 0.20 0.20 0.20 0.10

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INTERPRETACIÓN: Saturados aciclicos

Saturados cíclico

Insaturados-olefínico

Aromáticos

95.77% (37.38% parafínico)

2.18

2.05

0.00

100.00

PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS

GRAVEDAD API A 60º F 19.0

DESTILACIÓN

Hasta 200 ºC

Residuo pesado

%DESTILADO

15

85

CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS

Columna:

T. Horno:

Injector:.

Vol.inj:

Split:

Gas arrastre:

Medianamente polar SUPELCO 608

80 ºC (8,5’); 45 ºC/min hasta 150 ºC (1’) 8 ºC/min hasta 280 ºC (12’)

80 ºC (0,2’); 50 ºC/min hasta 100 ºC (5’); 50 ºC/min hasta 300 ºC hasta el final de

corrida.

1,5 µl

[50:1]

Helio 20.8psi (1,73 mL/min)

NOTAS:

TR: Tiempo de retención, secuencia en que se separan los componentes en el cromatograma.

PM: Peso molecular

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Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

destilado de crudo.

Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

destilado de crudo.

g

Grafico N° 01:

Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo.

8.3 CARACTERISTICAS DEL SUELO DE CULTIVO.

CUADRO Nº 02

Conductividad (C.E)

Análisis Mecánico pH Carbonato de Calcio CaCO3

Materia Orgánica (M.O)

Fósforo P

Óxido dipotásico K2O

Cationes Cambiables

Cationes intercambiables (CIC)

Ca++ Mg++ K+ Na Ds/m P.S*

Arena %

Limo %

Arcilla %

Textura P.S % % ppm kg/ha

Cmol (+)/kg

1.03 69.45 22.3 8.28 Franco Arenoso

6.4 0.00 2.6 49.45 (0.005%)

585.60 (0.49%)

13.72 9.60 (0.038%)

3.20 (0.0077%)

0.46 (0.0017%)

0.17 (0.0004%)

P.S*: Pasta Saturada

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INTERPRETACIÓN: CONDUCTIVIDAD : Muy ligeramente salino: Ligeramente salino: Moderadamente salino: Fuertemente salino: Extremadamente salino: MATERIA ORGANICA (M.O) Bajo: Medio: Alto: CALCAREO TOTAL CaCO3%

Bajo: Medio: Alto: FÓSFORO P (ppm) Bajo: Medio: Alto: POTASIO K 2O (kg/ha) Bajo: Medio: Alto: REACCION DEL SUELO (pH) Fuertemente ácido: Moderadamente ácido: Ligeramente ácido: Neutro: Ligeramente alcalino: Moderadamente alcalino: EQUIVALENCIAS 1 mmhos/cm = 1 cmol (+) kg =

C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (dS/m) < 2 2-4 4-8 8-16 >16 < 2% 2-4% >4% < 1% 1-5% > 5% < 7% 7-14% >14 % < 300 300-600 > 600 5.1-5.5 5.6-6.0 6.1-6.5 6.6-7.3 7.4-7.8 7.9-8.4 1 dS/m 1 me/100g

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8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS

FOTO Nº 01

CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO CONSORCIO BACTERIANO NATIVO

CONTROL ABIÓTICO

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8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL PROGRAMA SPSS 9.0 WINDOWS.

Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.

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Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple

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Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.

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8.6 ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND

Tubo Cloruro de Bario (1%)

Ácido sulfúrico(1%)

Millones de m.o/mL

1 0.1 9.9 300 2 0.2 9.8 600 3 0.3 9.7 900 4 0.4 9.6 1200 5 0.5 9.5 1500 6 0.6 9.4 1800 7 0.7 9.3 2100 8 0.8 9.2 2400 9 0.9 9.1 2700 10 1.0 9.0 3000

Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)