ANLISIS TOXICOLGICO

ANLISIS TOXICOLGICOAguayo Palafox Jos Emanuel

DefinicinEs el conjunto de tcnicas y procesos analticos encaminados a poner de manifiesto la presencia de una sustancia considerada txica en una muestra.Conjunto de procesos analticos que tienen por objeto de el aislamiento, identificacin y determinacin cuantitativa de los txicos, tanto en el vivo como en el cadver, con el fin de permitir el diagnostico de intoxicacin y el esclarecimiento de los hechos.

Importancia del anlisis toxicolgicoEn el rea clnica:

Diagnstico y pronstico de una intoxicacin.Evolucin del tratamiento.Informacin expedidaAntecedentes sumarialesDatos anatomopatolgicos resultantes de autopsiaSintomatologa de la intoxicacinDiagnostico clnicoTratamiento insaturadoHallazgos en el lugar en que se hallo a la victimaDeclaraciones de familiares, compaeros o vecinosAlgn diagnostico provisional del toxico responsable

La peticin debe ser lo ms especifica posible.

FASES DE UN ANLISIS QUMICO TOXICOLGICO GENERAL:

Son las siguientes:Separacin o extraccin del txico de la muestra problema.Fraccionamiento del extracto.Purificacin de los extractos obtenidos.Deteccin de la sustancia xenobitica.Identificacin del txico.Determinacin o valoracin cuantitativa.

Metodologa del toxiclogoTest generales: Sensibles No necesariamente especficosDetectan gran nmero de sustanciasLos resultados negativos son de gran valor ya que permiten centrar la atencin en unos cuantos y descartar la presencia de determinado grupo de sustancias.Mtodos cuantitativos fiables:Una vez que se sospecha la presencia de una sustancia por los test anteriores, su presencia debe confirmarse y cuantificarse por lo menos mediante 2 tcnicas analticas independientes; se debe evitar interferencias y conocer la precisin y exactitud del mtodo.Tiempo de anlisisIntervalo entre la llegada la muestra al laboratorio y el momento en que se puede ofrecer el resultado analtico.Proceso ADMEContribuye a la toxicidad del compuesto, por lo tanto puede tener consecuencias analticas importantes.Importante la biotransformacin ya que la mayora de los txicos sufren profundos cambios metablicos en el organismo y en consecuencia parecen en orina o en diversos fluidos biolgicos.Por lo tanto el conocimiento de la metabolizacin de y de los factores que la afectan es de gran inters para su deteccin en los fluidos biolgicos y desarrollo de un mtodo especifico.

Finalidad analtica del metabolismoMuestras Deben recogerse teniendo en cuenta las condiciones particulares de cada caso y las referentes a la distribucin y metabolismo.Contenido gstrico Aspirado gstrico, liquido del lavado gstrico (primeros 500ml) y el vomito.

En este tipo de muestras se encuentra al txico sin metabolizar.

SangreMuestra especialmente para el anlisis cuantitativo.

Los txicos orgnicos bsicos se [ ]

Los txicos cidos y neutros [ ]

Gases y sustancias voltiles, siempre que se conserve en recipientes cerrados hermticamente.

SangreObtener la muestra de sangre que fluya libremente, sin presionar ningn tejido. No se recomienda en la autopsia de cavidades abiertas. La sangre total y el plasma son las muestras representativas.El envi de la sangre total debe tener adicionado un anticoagulante adecuado. En las muestras de sangre post mortem estn a menudo hemolizadas y putrefactas.

OrinaEs la muestra idnea para realizar una gran variedad de ensayos preliminares en el anlisis de txicos.

El toxico en este fluido puede llegar a ser 100 veces mayor que en la sangre, adems, de estar exenta de protenas, por lo que las interferencias son mnimas.OrinaDesventaja es que el toxico se elimina en su totalidad como metabolitos, por lo que se requiere el anlisis de otro fluido o tejido.

En drogas de abuso, puede obtenerse fcilmente y en cantidad suficiente, y generalmente contiene concentraciones detectables de txicos.

OrinaSi la muerte se produce rpidamente, como en el caso de la inyeccin de un analgsico narctico o por inhalacin de acido cianhdrico, la deteccin del toxico o sus metabolitos en orina ser imposible.

Humor vtreoEs de fcil accesibilidadVolumen suficiente (casi 2 ml en c/ojo)No contiene demasiadas protenasEsta protegido de la circulacin general Posee pocas enzimas Es mas resistentes a la contaminacin bacteriana.Utilizado en el anlisis de alcohol.

HgadoLos niveles de toxico son en general superiores a los de la sangre.

nico tejido donde se encuentra la sustancia toxica en concentracin adecuada para su identificacin y cuantificacin.

Hgadotil en cuerpos exhumados o en un avanzado estado de descomposicin.

Extraer antes la vescula biliar para evitar la contaminacin.

Debe mantenerse a temperaturas bajas.

Cerebrotil cuando se trata de muerte por inhalacin de disolventes (tolueno, cloroformo, etc.)debido a las altas concentraciones que alcanzan en el tejido cerebral, y adems, son retenidas tras la muerte.

Resistente a la putrefaccin

RinEs el tejido de eleccin en intoxicaciones por metales y otros txicos que se acumulan especficamente en l.

BilisUtilizado para sustancias que se eliminan por va biliar.

til en la sobredosis de opiceos, ya que contiene altas concentraciones de los glucurnidos de dichos compuestos.Pelo

De gran utilidad para el anlisis de txicos minerales.

Deteccin de drogas de abuso, especialmente en consumidores crnicos.

Puede demostrar el consumo de drogas varios meses despus de iniciarlo.Ser vivoCadverSangreEstomago y su contenidoOrinaSangreContenido estomacalOrinaCerebroHgadoVescula biliarPulmnCabello, Uas y huesoEnvasado y conservacinLas muestras liquidas deben recogerse en tubos o envases de vidrio o plstico, con tapn o cierre de polietra-fluoroetileno (PTFE).

Las muestras solidas disponerse en recipientes de plstico provistos de boca ancha.

Envasado y conservacin Los recipientes deben de estar correctamente etiquetados.

En caso de alguna circunstancia especial (SIDA, hepatitis), debe de indicarse en el etiquetado, el cual debe de tenerse en cuenta para la manipulacin de la muestra.

Envasado y conservacin Las muestras no deben de contener conservantes.

En caso de ser necesario, utilizar los conservantes ideales como la azida sdica (0.1%) o el fluoruro sdico (1%); si se requiere anticoagulante el mas recomendado es el oxalato potsico (0.5%).

AlmacenamientoDurante el almacenamiento de las muestras de sangre o hgado, son muchos los txicos que pueden descomponerse a 4 C.

Entre ellos benzodiazepinas (clonazepam, nitrazepam, triazolam), cocaina, isoniacida, lisergida, metadona, metilfenidato, morfina, paracetamol, procaina.

Factores que afectan descomposicin qumicaLUZSustancias toxicas fotolbiles como los alcaloides del cornezuelo del centeno y las Fenotiazinas.

Factores que afectan descomposicin qumicaLUZ

Las muestras de orina y las soluciones acuosas de txicos fotolbiles son muy sensibles a la luz, siendo recomendable recubrir con papel aluminio los envases e incluso los recipientes utilizados durante el anlisis.

Factores que afectan descomposicin qumicaOXIDACION

Para compuestos fcilmente oxidables (catecolaminas, tiobarbituricos), los envases deben de estar llenos y perfectamente cerrados para excluir el oxigeno atmosfrico.

Factores que afectan descomposicin qumicaSe puede adicionar antioxidantes como acido ascrbico o metabisulfito sdico (1%) para eliminar el oxigeno de la solucin.

Los compuestos fenlicos (paracetamol, morfina) se oxidan fcilmente a 4 C y aquellos que contienen azufre tambin son oxidados in vitro en medio alcalino.

Factores que afectan descomposicin qumica

El tiopental puede oxidarse rpidamente a temperatura ambiente, tanto en soluciones acuosas como en orgnicas.

La presencia de iones metlicos en los procesos oxidativos actan como catalizadores.

Efecto que puede disminuirse adicionando una protena, como la seroalbmina bovina.

Factores que afectan descomposicin qumicaHIDRLISIS

En los txicos como steres (anestsicos locales, diacetilmorfina o herona) durante su almacenamiento a temperatura ambiente e incluso a bajas temperaturas pueden ser fcilmente hidrolizados por las esterasas presentes en la sangre y tejidos.Factores que afectan descomposicin qumicaEl pH alcalino durante la extraccin puede promover la hidrlisis de algunos compuestos.

La actividad esterica se puede contrarrestar con la adicin de fluoruro sdico (1%).

La hidrlisis de los esteres se pueden reducir llevando el pH de la muestra por debajo de 4.

Factores que afectan descomposicin qumicaTEMPERATURA

En general se recomienda almacenar las muestras a 4 C, siempre que vayan a ser analizadas en pocos das.

Si se van almacenar por mas tiempo, deben congelarse a -20 C, pero teniendo la precaucin de descongelarlas una sola vez antes de ser analizadas.Factores que afectan descomposicin qumicaDurante la congelacin-descongelacin puede producirse la reduccin de ciertos metabolitos (sulfxidos, N-xidos formados durante el metabolismo de las fenotiacinas), por lo tanto hay grandes diferencias de concentracin del toxico.

La liofilizacin es recomendable si las muestras van a guardarse mucho tiempo.

Descomposicin biolgicaLa putrefaccin causada por microorganismos puede ejercer efectos muy importantes en la conservacin de muestras.

Contaminacin Interferencias causadas por la putrefaccin

Contaminacin procedentes de los envases

Puede ser procedente de las impurezas en los disolventes utilizados en la extraccin.

Cadena de custodiaLa cadena de Custodia es el mecanismo que garantiza la autenticidad de los elementos probatorios recolectados y examinados. Esto significa que las pruebas correspondan al caso investigado sin que se d lugar a confusin, adulteracin, ni sustraccin alguna. La Cadena de Custodia debe velar por la seguridad, integridad y preservacin de dichos elementos.Est conformada por los funcionarios y personas bajo cuya responsabilidad se encuentren los elementos de prueba respectivos durante las diferentes etapas del proceso penal

Todo funcionario que reciba, traslade, genere, o analice muestras o elementos de prueba y documentos, forma parte de la Cadena de Custodia

Deben aplicarse a todo elemento probatorio, sea ste un cadver, un documento o cualquier otra evidencia fsica.

Toda evidencia fsica, (muestra o elemento probatorio) debe tener el Registro de Cadena de Custodia.

Por consiguiente, toda transferencia de custodia debe quedar consignada en las hojas del registro de Cadena de Custodia, indicando: fecha, hora, nombre y firma de quin recibe y de quin entrega.

Toda muestra (evidencia fsica) debe recibirse sellada y rotulada, en caso de existir no conformidad con este requerimiento, quin la recibe, debe dejar constancia escrita, en el oficio petitorio, e informar dicha anomala, inmediatamente al solicitante

ANLISIS GENERALExamen fsico de las muestrasColorPosible CausaIncoloroIngesta hdrica elevadaMarrn NegroNitrobenceno, fenolesAmarillo AnaranjadoFluorescena, fenolftalena, NitrofurantonaRojo vinoFenotiazinas, fenitona, fenolftalena, quinina, warfarina, anilinas.Azul o VerdeIndometacina, fenol, amitriptilinaNegroMetronidazol o levodopaOrinaContenido estomacal y residuos de la escena.

OlorCausa posibleAlmendras amargasCianuroLicores de frutasEtanol, esteresAjoArsnico, fsforoNaftalinaAlcanforPerasCloralPetrleoDestilados de gasolina (o vehculo en formulaciones de plaguicidas)FenolesDesinfectantes, fenolesTabaco rancioNicotinaLustre de ZapatosNitrobencenoDulceHidrocarburos, halogenados, cloroformoMtodos de ScreeningAlgunas drogas y txicos si se encuentran en concentraciones elevadas y en ausencia de compuestos que interfieren dan colores con reactivos apropiados.

Otros compuestos al presentar grupos funcionales similares pueden reaccionar y dar interferencia con los txicos y/o metabolitosLa descripcin del color suele ser muy subjetiva.

Se realizan satisfactoriamente en tubos de vidrio limpios, capsulas de porcelana o placas de toque y tiras reactivas.

Deteccin cualitativa de cido saliclico Extraccin sangunea o de orina, el acido saliclico da una coloracin azul-violeta con el ion frrico.

El reactivo de Trinder [HgCl2 y Fe(NO3 ) 3] produce un color purpura, aconsejable para su determinacin cuantitativaTest de Phenistix Es una tira reactiva impregnada del reactivo de Phenistix se basa en la reaccin del FeCl3. Matriz biolgica Orina.

Sustancia ColorAcido fenilpirvicoGris-verdeSalicilatosPurpura intensoFenotiazinasPurpura intensoP-Aminosalicilato (PAS)Purpura tirando a castaocido p-hidroxifenilpirvicoVerde, decolora en segundosLa bilirrubina en concentraciones altas puede dar color verde.

Las orinas amoniacales aejas dan en ocasiones resultados falsos negativos.Prueba colorimtrica para cocanaMuestra: Orina, contenido estomacal, restos de la escena

Reactivo: p-Dimetilaminobenzaldehdo, Tiocianato de Cobalto.

Procedimiento: agregar 0,5 mL de reactivo a la muestra, calentar en B.M. durante 3 y observar

Resultados: p-Dimetilaminobenzaldehdo: rojoTiocianato de cobalto: azulPrueba de ZwikkerReactivo: Solucin A (2g de acetato de cobalto en 100mL de metanol). Solucin B (Preparar una solucin de isopropilamina al 5% en metanol).

Procedimiento: Mezclar un microtubo de vidrio de 0.5mL de Zwikker A y 0.5mL de Zwikker B junto con la muestra a analizar.

Detecta molculas con grupos lactamas como barbitricos y algunas benzodizepinas.SustanciasResultadoFenobarbital, BarbitalVioleta intensoNitrazepamAnaranjadoBromazepamRojo anaranjadoOxazepamRosa violceo vinoReaccin Dille-KoppanyiPrueba para indicar la presencia de barbitricos.

Reactivo: Reactivo A: 0.1g de acetato de cobalto tetrahidratado en 100mL de metanol absoluto + 2mL de cido actico glacial.Reactivo B: 5.0mL de isopropilamina con 25mL de metanol absoluto.Procedimiento: colocar 3 gotas de la fraccin correspondiente previamente solubilizada en metanol + 3 gotas del reactivo A y 3 gotas del reactivo B ( Dille- Koppanyi).

Resultado: una coloracin prpura- rojiza indica una prueba positiva.

Reaccin de Bratton Marshall Mtodo colorimtrico utilizado para la cuantificacin de sulfonamidas mediante el acoplamiento de diazonio con N- (1-naftil) etilendiamina para formar una solucin colorida.

Nitrito de sodio 0,1% + sulfamato de amonio 0,5% + clorhidrato de naftiletilendiamina 0,1% (mL)

Reaccin positiva: aparicin coloracin rosa violeta.Pruebas para alcaloidesReactivo de Mayer (tetraiodo mercuriato de potasio) da lugar a la formacin de un precipitado amarillento amorfo o cristalino

Reactivo de Draggendorf (yodo bismutato de potasio) forma precipitados de color rojo anaranjado y en general amorfos.

Reactivo de Bouchardt (triioduro) genera precipitados de color rojo pardo

Evaporacin de 2 - 3 gotas del extracto etanlico en vidrio de reloj. Se agrega luego 2 - 3 gotas de HCl 5% hasta solubilizar los residuos. A esta solucin se agrega una gota del reactivo correspondiente.

Prueba para las XantinasSe caracterizan a travs de la reaccin de murexida

Se evapora hasta la sequedad total una solucin de acido ntrico con la muestra, el residuo se trata con amoniaco.

Resultado: Coloracin rojo purpura, por la formacin de una sal de amonio del cido purprico, la murexida.ANLISIS QUMICO TOXICOLGICOFasesSeparacin o extraccin del txico de la muestra.

Deteccin e identificacin del txico.

Cuantificacin del txico.Mtodos de extraccinDependiendo de sus propiedades fisicoqumicas:

Txicos gaseosos Txicos voltiles Txicos inorgnicos Txicos orgnicos

Eleccin de un mtodo de extraccinTener en cuenta los siguientes factores:

1. Determinacin analtica que se precisa: puede que interese discriminar entre dosis letales, toxicas o teraputicas; detectar solo el toxico sin transformar o tambin sus metabolitos.

2. Tipo de muestra: en cuanto cantidad y calidad.

3. Posibilidades del laboratorio: de instrumental y de personal.

4. Naturaleza del txico: conocido o desconocido; uno solo o una mezcla compleja; un producto bien conocido en cuanto a su analtica, o un producto nuevo que necesite poner a punto un mtodo adecuado para su extraccin.

Cantidad de la muestraComo norma general estar en funcion de las concentraciones esperadas del txico:

1. Txicos cuya concentracin txica esperada sea aprox., de 1 mg/ml: analizar 50 ml de orina o sangre, o 50 g de tejido.2. Txicos cuya dosis txica esperada sea aprox., de 10 mg/ml: analizar 5 ml de orina o sangre, o 5 g de tejido.

3. Txicos cuya dosis txica esperada sea mayor de 10 mg/ml: analizar 1 ml de orina o sangre, o 1 g de tejido.

Extraccin de txicos gaseososEste anlisis recae sobre la sangre que debe contener el gas y de la cual hay que extraerlo.

Se realiza recurriendo a las leyes fsicas, segn las cuales la solubilidad disminuye y aun se anula, elevando la temperatura o disminuyendo la presin.

Se utilizan dispositivos especiales para este tipo de operaciones, como la trompa de mercurio.Extraccin de txicos voltilesSe incluyen los txicos que se volatilizan por debajo de los 100 C, por lo cual son arrastrados por el vapor de agua cuando esta destilada.

1. Destilacina) Destilacin acida: txicos minerales ( Cl, Br, I, H2S, sulfuro de carbono, P) y txicos orgnicos (HCN, alcoholes, aldehidos, cetonas, cidos orgnicos, hidrocarburos aromticos).b) Destilacin bsica: anfetaminas, anilinas, alcaloides lquidos voltiles, algunos gases solubles en agua.

2. MicrodifusinEl dispositivo mas utilizado es la clula de Conway, que consiste en 2 placas de Petri concntricas, con una base comn.

Extraccin de txicos voltilesLa muestra se sita en el compartimento exterior y el absorbente o disolvente, segn los casos en el interior. Despus se cierra hermticamente con una tapadera de vidrio, sobre cuyo borde esmerilado se aplica una fina pelcula de silicona o grasa similar, para asegurar su perfecto cierre.Extraccin de txicos voltiles3. Tcnica de espacio de cabeza.La muestra se deposita en un vial cerrado con tapn perforable, en el que se deja en una cmara de aire. Se calienta a 60 C durante 30 min y se extrae con una jeringa para gases una muestra de la parte superior del frasco para inyectarla en un cromatgrafo de gases.

Extraccin de txicos minerales o inorgnicosLos txicos se encuentran en el organismo firmemente unidos a albumina, lpidos o glcidos.

La destruccin de la materia orgnica y la consiguiente liberacin del toxico se consiguen mediante el proceso de mineralizacin el cual existe en 2 modalidades.Extraccin de txicos minerales o inorgnicosVa seca: calcinacin

Va hmeda: tratamiento con oxidantes enrgicos (mezcla sulfo-nitro-perclrica).* Digestin por va hmeda en sistema cerrado bajo presin que utiliza la energa de las microondas.

Extraccin de txicos minerales o inorgnicosAlgunos metales como (As, Pb, Cu) se extraen formando un complejo el cual posteriormente se separan con un disolvente orgnico.

Aniones txicos, como permanganato, bromuro, yoduro, clorato, fosfato entre otros pueden analizarse directamente en filtrados de contenido gstrico o las distintas muestras mediante dilisis. Extraccin de txicos orgnicosSustancias toxicas que pueden separarse mediante extraccin con disolventes apropiados, en funcion de sus coeficientes de reparto entre dos lquidos no miscibles.

Txicos de origen vegetal: glucsidos, aceites esenciales y alcaloides.

Medicamentos.Extraccin de txicos orgnicosComo norma general se extraen con disolventes orgnicos

Con disolvente polar (etanol): utilizado en clsica tcnica de Stas-Otto.

Con disolvente apolar que puede ser:a) Extraccin directa: solo es aplicable a muestras biolgicas limpias, como la orina, y tambin en el caso de vsceras para la extraccin de txicos orgnicos de tipo cido.Extraccin de txicos orgnicosb) Extraccin con disolventes orgnicos, previa purificacin de la muestra:

Las muestras a analizar contienen gran numero de sustancias (protenas, lpidos).

Se hace por tratamiento con distintos agentes precipitantes de las protenas como:

Sulfato amnico (bsicos)Acido tngstico (cidos y neutros)Acido tricloroacticoAcido clorhdrico diluido (digestin acida)Digestin enzimtica.

Extraccin de txicos orgnicosLlevado a cabo la purificacin, se procede a realizar la extraccin con disolventes orgnicos como el ter etlico, cloroformo y diclorometano.

Fraccionamiento del extracto

cidos: dbiles (barbitricos) o fuertes (salicilatos), unos y otros extrables con disolventes orgnicos en medio acido.Bsicos: extrables con disolventes orgnicos en medio bsico (alcaloides, antidepresivos tricclicos).

Neutros: extrables con disolventes orgnicos indistintamente en medio acido o bsico (carbamatos).

Obtenidas cada una de las fracciones se someten al anlisis correspondiente.

Extraccin de txicos orgnicosEn muestras complejas (vsceras) primero se realizara la precipitacin de protenas y enseguida el fraccionamiento del extracto.

Los txicos que se encuentren conjugados con acido glucurnico u otros componentes, puede ser necesario que despus de la extraccin, las muestras deban someterse a hidrlisis.

La hidrlisis puede ser qumica (tratamiento con acido clorhdrico en caliente), o enzimtica (-glucuronidasa), aumentando as la recuperacin de txicos como la morfina, Cannabis, fenotiazinas, etc.

Tcnicas

InstrumentalesEspectrofluoromtricasPresenta 2 ventajas especificidad y sensibilidad.

Se puede determinar fenotiacinas, benzodiacepinas, salicilatos, imipramina y derivados, opiceos, alucingenos, etc.Espectrofotometra infrarrojaVentaja: Se puede obtener en menos de 2 min y la muestra no es alterada ni destruida.

Desventaja: la muestra requiere gran pureza y se necesita cantidad de muestra algo elevada; no por la falta de sensibilidad, sino por la dificultad en la manipulacin de dicha muestra.

Espectrofotometra de absorcin atmicaMtodo analtico para determinar a concentracin de elementos metlicos en una matriz determinada.

Ventajas: sensibilidad y el requerimiento de una mnima cantidad de muestra.

Espectrofotometra de absorcin atmicaLa absorcin especifica a una longitud de onda, mediante la utilizacin de una determinada lmpara, para la identificacin de un elemento desconocido y la intensidad de la absorcin para la determinacin cuantitativa.

Espectrofotometra de masasLa informacin mas valiosa que constituye el espectro de masas es la determinacin del peso molecular.

La espectrofotometra de masas, sola o en combinacin con la cromatografa de gases (o la cromatografa liquida de alta resolucin), es con toda probabilidad el mtodo mas efectivo para la identificacin de txicos y sus metabolitos.

La especificidad y sensibilidad de esta tcnica permiten obtener un espectro completo, y en muchos casos, una identificacin precisa, con menos de 50 ng de material.

Tcnicas

CROMATOGRFICASCromatografa en columnaSu utilizacin en el anlisis toxicolgico se reduce a la extraccin y purificacin de los extractos.

Cromatografa en papelTcnica de separacin de una mezcla de solutos, basada en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los componentes a traves de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento.

No es muy aplicable.

Cromatografa en capa finaGran capacidad para separar sustancias procedentes de artefactos biolgicos que son extrados conjuntamente por los procedimientos de extraccin.

Permite la determinacin simultanea de varias muestras.

Barato, sencillo y requiere infraestructura mnima.

Se aplica como pre-tratamiento de la muestra; extraccin del analito.

Interpretacin difcil en presencia de varios txicos o metabolitos

Sin embargo es la base para el aislamiento e identificacin de mltiples sustancias luego de su extraccinCromatografa de gasesLa gran cantidad de fases estacionarias disponibles y la posibilidad de trabajar a distintas temperaturas permiten su aplicacin a la casi totalidad de las sustancias con que se puede encontrar el toxiclogo.

Su limitacin principal es exclusiva para las sustancias volatilizables.

CG- MasasEficacia de separacin elevada

Buena sensibilidad, especificidad y selectividad

Necesita baja cantidad de muestra

Solo es aplicable para compuestos voltiles a altas temperaturas, no inicos, baja polaridad y bajo peso molecular.Cromatografa de alta resolucinVentajas mayor precisin, mejor resolucin y menor tiempo de anlisis.

No destruye la muestra, lo que permite la deteccin por distintos sistemas.

Requiere mnima preparacin de la muestra y utiliza pequeas cantidades de stas.BibliografaManual de procedimientos analticos toxicolgicos para laboratorios de baja complejidad., Gabriela Fiorenza, Biancucci, Diana Gonzlez, Adriana Prez, Adriana Ridolfi y Anala Strobl., Argentina, 2007.Gisbert Calabuig medicina legal y toxicologa., Enrique Villanueva Caadas., 6 edicin, 2004., Ed. MASSON., Pgs. 778-811Manual de toxicologa Bsica., E. Mencas Rodrguez y L. M. Mayero Franco., Espaa, 2000., Diaz de Santos