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“Determinación serológica de la
Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) en el Municipio de Moctezuma
Sonora”
Tesis
que para obtener el título de Médico Veterinario Zootecnista
Presenta
Luis Fernando Valenzuela Molina
Ciudad, Obregón Sonora; Enero de 2012
i
DEDICATORIAS
Para mis padres, Yolanda Molina y Fernando Valenzuela, por haberme apoyado a
culminar una etapa más de mi vida que sin ustedes todo hubiera sido más difícil, y
por que la vida me ha premiado con unos padres como ustedes.
Para mi abuela, Irma Jiménez, (mama Irma) por todo el apoyo y cariño incondicional
que me ha brindado siempre, por todos sus consejos y regaños que me fueron de
mucha ayuda para reflexionar y esforzarme cada día más para concluir mis estudios.
Para mis tíos, José Manuel Félix y María Antonia Valenzuela, que me dieron la
oportunidad y la confianza de contar con ustedes, ya que en la vida se nos dan
pocas oportunidades como esta que no desaproveche y de lo cual me siento muy
agradecido, dios los bendiga y los cuide siempre.
Para mis hermanas, Melissa y Perla por haberme apoyado y creído en mí siempre.
Para mi novia, Denia Isabel que siempre estuviste al pendiente de que terminara mis
estudios aconsejándome y ayudándome en lo que pudieras en todos los momentos
fuertes y felices por eso y por muchas cosas más te amo mi niña hermosa.
Para mis dos grandes amigos que se nos adelantaron en esta lucha René Castell y
Adrian Covarrubias sin lugar a dudas ustedes siempre han sido y seguirán siendo
unas grandes personas que llevare en mi corazón, no solo como un recuerdo de
nuestra amistad sino como esa fuerza que te impulsa a salir adelante y ser mejor
cada día, que dios los tenga en la gloria.
ii
AGRADECIMINTOS
A los productores del municipio de Moctezuma Sonora, por su apoyo en la
realización de este trabajo.
Mi asesor de tesis MVZ. José María Aceves Gutiérrez.
A los revisores MC. Pedro Alán López Castro, MC Fernando Rivera Acuña.
MC Jorge Robles Mascareño, MC Pablo Luna Nevarez
MVZ. Inés Enríquez Ramos.
MC. Carlos M. Aguilar Trejo.
iii
INDICE
DEDICATORIA i
AGRADESIMIENTOS ii
INDICE DE FIGURAS v
RESUMEN vi
I. INTRODUCCIÓN 1
1.1 Antecedentes 2
1.2 Planteamiento del problema 2
1.3 Objetivo 3
1.4 Justificación 3
1.5 Limitaciones del estudio 3
II. FUNDAMENTACION TEORICA 4
2.1 Definición 4
2.2 Etiología 4
2.3 Epidemiología 4
2.4 Sinónimos 6
2.5 Patogenia 6
2.6 Forma respiratoria 7
2.7 Signos forma respiratoria 8
2.8 Enfermedad ligera 8
2.9 Enfermedad sub aguda 8
2.10 Enfermedad aguda 8
2.11 Epizootiología 9
iv
2.12 Hallazgos a la necropsia 10
2.13 Tratamiento 10
2.14 Vacunas y plan de vacunación 10
2.15 Diagnostico 11
2.16 Técnica de ELISA 12
III. METODO Y MATERIALES 14
3.1 Localización del área de estudio 14
3.2 Método 14
3.3 Variables a analizar 16
3.4 Método estadístico 16
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 18
V. CONCLUCIONES 22
VI. BIBLIOGRAFIAS 23
v
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Seroprevalencia a IBR de los animales muestreados 18
Figura 2. Nivel de inmunidad en los animales muestreados basado en la revisión
según la escala del InmunoComb. 21
vi
RESUMEN
Luis Fernando Valenzuela Molina. Presencia serológica de anticuerpos contra la
Rinotraqueítis infecciosa Bovina en bovinos explotados extensivamente en el
municipio de Moctezuma, Sonora, Asesor: MVZ José Ma. Aceves Gutiérrez.
El objetivo de la presente investigación fue evidenciar los anticuerpos presentes para
la enfermedad de Rinotraqueítis Infecciosa Bovina, por medio de la técnica de
ELISA. El estudio se realizó en bovinos explotados extensivamente en el municipio
de Moctezuma, Sonora. Siendo una región en donde se ignoraba el estatus sanitario
de los animales a (IBR).
Con un total de 141 animales muestreados, sin importar raza, sexo y edad, se obtuvo
la muestra sanguínea por punción de la vena caudal en animales no vacunados.
Los resultados obtenidos fueron de 81 animales positivos equivalente a un 57% a la
prueba de ELISA.
Esto hace notar la importancia de la realización de estudios serológicos y de
monitoreo en los bovinos de este municipio.
Se concluye que si no se cuénta con animales vacunados en esta región es muy
probable que sean infectados. La presencia de anticuerpos para (IBR) manifiesta
vii
que los animales muestreados de el municipio de Moctezuma, Sonora pueden estar
enfermos manifestando o no signos, lo que puede ser una causa de problemas
productivos y reproductivos en los animales, ó bien pone de manifiesto que los
animales estuvieron enfermos y presentan la infección latente.
1
I. INTRODUCCIÓN
Los bovinos son los principales animales de granja para la producción de carne y
leche para consumo humano, pero a pesar de su importancia para la alimentación
humana, los sistemas de producción bovina son descuidados por la poca
atención al bienestar animal.
En México existe ganado con enfermedades que interfieren en la producción y se
hace énfasis en las enfermedades infecciosas del aparato respiratorio que
afectan a las vías altas es decir las que se encuentran por encima de la glotis y
comprenden a las fosas nasales, senos de la cara, nasofaringe y tráquea. Estas
enfermedades logran desarrollarse y extenderse debido a la influencia de otros
agentes tanto patógenos como factores ambientales que lo favorecen.
Las enfermedades infecciosas del aparato respiratorio son muy variadas. Bajo
distintos términos colectivos como Síndrome Respiratorio Bovino y complejo
respiratorio bovino se reúnen enfermedades del tracto respiratorio que no
dependen de un solo curso patológico típico o cuadro sintomático característico
de un microorganismo, sino de la interacción de varios.
Uno de los agentes etiológicos más importantes de estas infecciones es el
herpesvirus tipo 1 que provoca la enfermedad de Rinotraqueítis Infecciosa Bovina
(IBR), la cual tiene tres manifestaciones: la forma respiratoria de la enfermedad
es de presentación súbita. Las pérdidas por mortalidad son bajas generalmente,
pero presenta una alta morbilidad. No es rara la observación de conjuntivitis en
las epizootias de la (IBR). (Marchant, 1980). Puede presentarse también la forma
genital o/y forma encefálica.
2
1.1 Antecedentes
Los primeros datos referentes a la IBR corresponden a un caso ocurrido en
ganado lechero de California, EUA en 1954. (Correa, 1988). El virus de la IBR fue
descrito por primera vez por Madin, Cork, y Mc Kercher en 1956. La enfermedad
se había observado antes por otros investigadores en Colorado y California.
(Marchant, 1980). Se ha postulado que el virus de IBR fue introducido en el
oriente de Estados Unidos desde Europa, y en esta región permaneció en hatos
de ganado vacuno como infección del aparato genital. Ahora bien, cuando llegó al
occidente de los Estados Unidos, donde existían gran número de reses reunidas
en los pastizales, el virus se adaptó a las vías respiratorias y produjo la
enfermedad. (Mohanty, 1983).
En México, la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina fue diagnosticada por primera vez
en 1971 y a la fecha se á aislado el virus a partir de bovinos con signos
sospechosos de hatos de diferentes partes de la República Mexicana (Correa,
1988).
1.2. Planteamiento del problema
En estudios anteriores se encontró la presencia de anticuerpos contra el virus de
Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) en algunas comunidades vecinas al
municipio de Moctezuma, Sonora, y actualmente se han estado presentando
casos con signos clínicos característicos a (IBR) lo cual ha provocado que baje la
producción del ganado en este municipio, despertando un interés por parte de los
productores a realizar este tipo de estudio.
3
1.3. Objetivo
Determinar la presencia de anticuerpos del virus de la Rinotraqueítis Infecciosa
Bovina por medio de la prueba de inmunoensayo; Para conocer el grado de
diseminación de la enfermedad en el municipio de Moctezuma, Sonora, ya que en
muestreos anteriores de algunos municipios como son, la Colorada, Suaqui
Grande, Ures y villa Pesqueira, Sonora se han encontrado altos números de
reactores positivos.
1.4. Justificación
En el Estado de Sonora la ganadería ha sido una de las actividades pecuarias
más importantes ya que el ganado bovino tiene gran capacidad para adaptarse a
terrenos áridos y semiáridos comunes en esta región, lo cual implica una
actividad de bajo costo comparada con otros animales. Con la finalidad de
mejorar los hatos se han introducido animales de alta calidad genética al Estado
de Sonora trayendo como consecuencia la introducción de nuevos agentes
patógenos que interfieren en la salud de los animales disminuyendo la
productividad de esta actividad pecuaria. Con esta investigación se pretende
determinar el porcentaje de seroprevalencia de (IBR) para poder actuar
concienzudamente implementando medidas de prevención de enfermedades,
diseñando y evaluando programas de manejo y vacunación.
1.5. Limitaciones del estudio
La principal limitación del presente estudio es la distancia que hay entre cada
rancho lo cual dificulta el traslado., el costo de los kit de ELISA para correr las
pruebas, al igual que la falta de manejo de los animales.
4
II. FUNDAMENTACIÓN TEORICA
2.1 Definición
La Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) es una enfermedad infecciosa
ocasionada por un virus herpes que se puede presentar en una forma aguda o
también latente. (Correa, 1988). Se ha observado que el herpesvirus puede
afectar a varios sistemas orgánicos. (Blowey, 1992).
2.2 Etiología
Virus de DNA en su acido nucléico, clasificado como Herpes Tipo I. (Instituto
Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria 2002).
Pertenece como Vericellovirus a la subfamilia Alphaherpesviridae, dentro de la
familia Herpesviridae (Brunner, 2002).
2.3 Epidemiología
Las especies susceptibles que en condiciones de campo y experimentales se
pueden infectar es el ganado bovino, pero los borregos, caballos, cuyos, ratones,
perros y gatos son refractarios (Correa, 1988). Y aunque rara vez se puede
presentar, el padecimiento puede afectar de forma natural a los cerdos, tanto en
la modalidad respiratoria como en la genital. Con base a estudios serológicos, el
virus tiene amplia distribución en la fauna africana, sobre todo en el búfalo. Son
susceptibles los bovinos de todas las razas y edades en la infección
experimental, pero la enfermedad natural se observa, principalmente, en animales
de mas de 6 meses de edad, quizá por hallarse mas expuestos a la infección
(Blood, 1992).
5
El ganado recién nacido falto de anticuerpos maternales se afecta más
severamente que el ganado viejo (Blood, 1992).
El virus de la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina ha sido aislado del semen 12
meses después de su almacenamiento (Blood, 1992). Se estima que el
aislamiento del virus en el semen es más bien de origen prepucial que testicular.
Los toros pueden transmitir el virus sin manifestar el signo alguno de la infección
(Mohanthy, 1983). El período de incubación en lotes de engorde es de 10- 20
días (Blood, 1992).
La morbilidad oscila entre el 20 y 100% (Bruner, 2002). Y la tasa de mortalidad en
el ganado de carne se debe invariablemente a la traqueítis bacteriana secundaria
y a la bronconeumonía y puede alcanzar una cifra del 10 % (Blood, 1992). O bien
con una infección vírica concomitante con el virus de la diarrea vírica bovina
(VDVB) o con el virus respiratorio sincitial bovino (Rebhun, 1999).
No se registran variaciones estacionales en la incidencia, salvo una mayor
ocurrencia en bovinos en lotes de engorde en los meses de otoño e invierno,
cuando se encuentran mayor número de animales susceptibles (Blood, 1992)
La infección por HVB1 está distribuida entre el ganado de todos los continentes
causando una variedad de enfermedades y pérdidas económicas significativas
(Kaashoek et al, 1996)
6
2.4 Sinónimos
Vulvovaginitis postulosa infecciosa, Balanopostitis pustulosa infecciosa, exantema
coital y Rinotraqueítis infecciosa bovina. (Fenner, 1992). También llamada Nariz
roja, IBR (Blowey, 1992).
2.5 Patogénia
El virus ataca primero las mucosas de la cabeza, luego la tráquea y pulmones, no
siendo raro que después de una fase de viremia, ocasione inflamación del
Sistema Nervioso Central, y abortos en las vacas gestantes. La inflamación
edematosa de las mucosas, que mas tarde pueden transformarse en necrosis,
especialmente después del asiento bacteriano secundario, motiva una secreción
al principio seroso o mucosa y luego mucopurulenta (flujo nasal, lagrimal,
salivación abundante). Los exudados fibrinosos provocan la aparición de
revestimientos pseudomembranosos en las mucosas nasal, laringe y tráquea. En
los pulmones se instaura una bronconeumonía catarral que pueden ser
supurativa si participan, además, bacterias. Que posiblemente obedecen a la
actuación de un virus de acompañamiento. (Schulz, 1993).
Después de la infección por vía respiratoria, el virus se replica en los linfonodulos
linfáticos regionales; de ahí por vía sanguínea, se localiza en el tracto respiratorio
alto, produciendo la enfermedad respiratoria (Instituto Nicaragüense de
Investigación Agropecuaria 2002), (INTA).
La conjuntivitis en el proceso respiratorio se produce mediante aerosoles (Fenerr,
1992). Siendo la propagación desde las cavidades nasales hacia los tejidos
oculares, probablemente, a través de los conductos lagrimales (Blood, 1992).
7
La encefalitis parece ser el resultado de la difusión neural directa a partir de la
cavidad nasal, faringe y tonsilas a través de las ramas maxilar y mandibular del
nervio trigémino y ganglio trigémino (Fenerr, 1992; Blood, 1992).
La invasión sistémica por el virus va seguida de la localización de este en varios
tejidos diferentes. El virus puede ser transportados por leucocitos periféricos
hacia la placenta, y se transfiere al feto causando aborto (Blood, 1992).
El proceso genital puede ser el resultado del coito o de la inseminación artificial
aunque e algunos brotes especialmente en vacas lecheras puede no estar
relacionado con el coito (Fenerr, 1992).
2.6 Forma respiratoria
La enfermedad respiratoria, es usualmente vista en ganado mayor de 6 meses
pero puede ocurrir en animales jóvenes (Blowey, 2004).
En el ganado lechero, pueden detenerse los signos clínicos y el animal se cura
por completo en 10 a 14 días. En animales de engorde, la enfermedad suele ser
más larga, el periodo febril más largo, las secreción nasal mas profusa y
purulenta, puede haber una enfermedad prolongada hasta 4 meses (Blood,
1992).
8
2.7 Signos forma respiratoria
Se manifiesta por fiebre, flujo óculo-nasal, inapetencia, aumento de la frecuencia
respiratoria y tos. Fiebre de 40.56 °C a 42.22°C, respiración rápida de 40 a 80
resp/min. (Brunner, 2002; Rebhun, 1999).
Los pulmones son normales a la auscultación, la incapacidad respiratoria se
manifiesta durante el ejercicio (Blood, 1992).
2.8 Enfermedad ligera
En esta solo se presenta conjuntivitis, enrojecimiento delgado en la línea de los
ojos párpados con descarga usualmente limpia y acuosa. A menudo ocurre
cuando la tención de la enfermedad es suave o el grado de infección es bajo o el
animal es resistente (Blowey, 2004).
2.9 Enfermedad subaguda.
Es común en ganado adulto y a menudo es de corta duración. Existe un aumento
marcado de la temperatura (40 °C) que dura un día o dos. A menudo existe una
marcada caída en la producción de leche, lagrimeo y descarga nasal. En los
animales habrá ptialismo y una corta expresiva tos, se presenta taquipnea, los
animales se recuperan de 10 a 14 días (Blowey, 2004).
2.10 Enfermedad aguda
Los signos son similares a la forma subaguda pero la temperatura tiende a ser
mayor (40- 41 °C). Los signos se presentan particularmente en ganado de 6
meses a 2 años. Los signos respiratorios son comúnmente tos y desórdenes
9
respiratorios. La descarga de los ojos y nariz tiende a volverse profusa, las cuales
consisten en tejido muerto (costras) (Blowey, 2004).
Durante la infección aguda o en las 4 u 8 semanas siguientes puede haber
aborto. Aunque puede existir mortalidad de los fetos en cualquier fase de la
gestación, la mayoría de los abortos aparecen en el tercer trimestre de la preñez
(Rebhun, 1999).
2.11 Epizootiología
La IBR pese a tratarse de un mismo virus, no se presenta simultáneamente en la
enfermedad respiratoria y la erupción vesicular (presumiblemente se han
adaptado determinadas cepas de virus a los respectivos sistemas orgánicos). Si
bien el virus puede sobrevivir durante un tiempo relativamente largo fuera del
cuerpo animal, el contagio se verifica, por lo general, mediante el contacto entre
los animales. Los brotes nuevos de la enfermedad se atribuyen al ingreso de
nuevos animales infectados.
Superada la enfermedad, deja una prolongada inmunidad (para toda la vida), que
se trasmite al ternero mediante el calostro. La rara presentación de enzootias
obedece probablemente a que los terneros tienen tiempo para constituir una
inmunidad activa mientras se hallan bajo los efectos de los anticuerpos
calostrales. (Schulz, 1993).
2.12 Hallazgos a la necropsia
La necropsia de los casos mortales de IBR mostrara inflamación difusa,
ulceración, y membranas diftéricas a lo largo de todos los conductos nasales, en
10
la laringe y en la tráquea. La mucosa nasal inflamada, y a veces en otras zonas
de la nasofaringe o de la tráquea, serán visibles las características placas de
color blanco. Alguna que otra vez de encuentra ulceración de la mucosa oral. La
bronconeumonía bacteriana secundaria o las infecciones víricas superpuestas
pueden enmascarar algunas lesiones de IBR (Rebhun, 1995).
2.13 Tratamiento
Hay una divergencia considerable en cuanto a utilizar o no antibióticos (Blowey,
2004, Blood, 2004).Como todas las enfermedades de origen viral, no existe
tratamiento efectivo, se trata de contrarrestar el efecto secundario de las bacterias
contaminantes con terapia antibiótica(Instituto Nicaragüense de Investigación
Agropecuaria 2002), (INTA).
2.14 Vacunas y plan de vacunación
Las vacunas vivas pueden aplicarse a partir de las 2 semanas de edad y las
vacunas inactivadas a partir del tercer mes de vida. Si se vacuna con productos
inactivados a bovinos menores de tres meses de vida, ya que la inmunidad puede
verse afectada por existencia de anticuerpos maternos. La revacunación se
realiza por lo común con intervalos de medio a un año. (Brunner, 2002).
Existen dos tipos de vacunas elaboradas con virus vivo modificado disponible.
Una es de uso intramuscular, elaborada por lo general, con cultivos tisulares de
riñón bovino y la otra es una vacuna intranasal elaborada con tejido tisular de
conejo. También se dispone de vacunas intranasales de cultivos celulares de
bovino que contiene un mutante sensible a la temperatura (Blood, 1992).
Con base a trabajos experimentales las ventajas de una vacuna intranasal son:
que puede usarse en hembras gestantes y proporciona protección más rápida y
11
eficaz contra la forma respiratoria. La reacción casi no produce reacción
sistémica, y todos los animales en contacto en un brote pueden vacunarse con
seguridad (Blood, 1992).
Además de las vacunas convencionales como son las monovalentes o la
compuesta por varios antígenos asociados polivalentes, se utilizan vacunas
marcadoras (Marcadores deletéreos) (Brunner, 2002).
Las vacunas marcadoras son las que permiten la diferenciación serológica de
ganado infectado en una población vacunada (Obando, 1999).
2.15 Diagnóstico
Generalmente cuando existen los signos característicos y las placas
patognomónicas en la mucosa nasal, el diagnóstico de IBR se basa en el examen
físico. La confirmación de laboratorio es posible mediante la técnica de
anticuerpos fluorescentes durante la fase aguda de la enfermedad (las lesiones
más apropiadas son las de menos de 7 días). Los raspados de las lesiones de la
mucosa y de las placas de color blanco deben ser positivos en la mayoría de los
casos agudos. Además, durante este tiempo es posible el aislamiento del virus.
(Rebhun, 1995).
En ocasiones el diagnóstico morfológico no es suficiente para realizar el
diagnóstico definitivo, por lo tanto es necesario recurrir a pruebas adicionales
como el aislamiento del virus en células de riñón fetal bovino o en células de riñón
de hámster joven (B.H.K). los tejidos de preferencia para aislamiento son: cornete
nasal, hígado fetal, riñón fetal, mucosa vaginal lesionada, placenta, encéfalo
(forma juvenil) bazo y ganglios linfáticos (INTA, 2002).
12
El diagnostico incluye: serología solicitada por seroneutralización en cultivos
celulares o a la prueba de ELISA (INTA, 2002). Estas pruebas se procesan con
las muestras de sueros pares (sueros obtenidos de la fase aguda de la
enfermedad y sueros del animal convaleciente obtenidos de 14 a 21 días
después). Un incremento al cuádruple del título se considera positivo (Mohanty,
1983; Rebhun, 1999)
2.16 Técnica de ELISA
El acrónimo ELISA representa:
E= Encima
L= Linked (enlace)
I= Inmuno
S= Sorbente
A= Assay
Valora anticuerpos específicos según el antígeno que se emplee, produciéndose
una reacción antígeno- anticuerpo. Al final de la reacción se obtiene una solución
de color que se mide con un espectrofotómetro, cuya intensidad está en la
relación directa con la cantidad de anticuerpos (Ángel y Ángel, 2000).
En ELISA el anticuerpo (o antígeno) se fija a una superficie, ya sea en contenedor
de una placa de microtitulación o una partícula de plástico. El espécimen a
prueba se aplica y el material adherido se detecta y caracteriza a través de un
anticuerpo secundario marcado enzimáticamente. Estos ensayos son rápidos
13
sencillos y fáciles de adaptar a analizadores automáticos, pero requieren de
reactivos muy purificados (Parslow, Stites, Terr, imboden, 2002).
Existen distintas variedades de ELISA pero las más utilizadas y sensibles es el
análisis tipo Sándwich o indirecto.
Un anticuerpo marcado con encimas (mAb) dirigido contra un antígeno específico
se fija a placas de microtitulación. Los contenedores se incuban con diluciones
seriadas del espécimen del paciente para permitir la adherencia del antígeno al
anticuerpo de superficie, posteriormente se lavan los contenedores. El antígeno
adherido se detecta mediante un anticuerpo secundario marcado
enzimáticamente. Después de otro lavado, los contenedores se incuban con un
sustrato de encimas y se cuantifica la reacción enzimática (aparición del producto
de la reacción) (Parslow y cols 2002).
14
III. MÉTODO Y MATERIALES
3.1 Localización del área de estudio
El municipio de Moctezuma, Sonora está ubicado en el centro del Estado de
Sonora, su cabecera es la población de Moctezuma y se localiza en el paralelo
29° 47' de latitud norte y a los 109° 40' de longitud al oeste del meridiano de
Greenwich; a una altitud de 677 metros sobre el nivel del mar.
Cuenta con un clima seco, semicalido con una temperatura media máxima
anuales de 29.8 grados centigrados en los meses de junio y julio y una
temperatura minima anual de 12 grados en los meses de diciembre y enero, la
temperatura media anual es de 12.2 grados centigrados
Al este, norte y sur predomina el matorral subtropical, cuya especie es:
casahuate. Casi al centro y combinada con la misma vegetación anteriormente
descrita se localizan pequeñas porciones de suelo utilizadas para agricultura de
riego. Al oeste del municipio la vegetación se caracteriza por bosque de encino y
de pino.
www.e-local.gob.mx/work/templates/enciclo/sonora/.../26038a.htm
3.2 Método
El método se llevó a cavo muestreando a 141 bovinos de diferentes razas, sexo y
edad, extrayendo sangre de de la vena caudal utilizando jeringas de 5ml.
15
Después fue depositada en tubos de ensayo de 13 x 100 sin anticoagulante,
retirando la aguja de la jeringa al momento de vaciarla, esto para evitar
turbulencia y por consiguiente la hemólisis de la muestra, posteriormente se
refrigeraron para su traslado y fueron enviadas al laboratorio de Bacteriología
del departamento de Ciencias Agronómicas y Veterinaria del Instituto Tecnológico
de Sonora, Se centrifugaron las muestras para la extracción del suero y se
congelaron a una temperatura de 0°C para la realización de la prueba después
de la extracción del suero.
Una vez extraído el suero se tomó con la micropipeta 0.05 μl y se depositó en los
contenedores del Kit de ELISA, después de esto se procedió a realizar cada uno
de los pasos de la prueba, inmediatamente se realizó la lectura de los resultados.
El kit utilizado para este diagnóstico es llamado InmunoComb el cual está
diseñado para determinar en sueros de bovinos títulos de anticuerpos para (IBR)
Está basado en el principio de examen inmunológico, es una tarjeta plástica en
forma de peine en donde antígenos de (IBR) están adjuntos.
Este kit trabaja bajo la versión más común de ELISA es el ensayo de Sandwich o
llamado también indirecto.
Este análisis utiliza 2 tipos distintos de anticuerpos que reaccionan con el
antígeno cuya concentración se requiere medir. Se fija una cantidad constante de
un anticuerpo en una serie de soportes sólidos repetidos tales como pocillos de
microtitulación de plástico. Se añade a estos pocillos la solución problema que
contiene el antígeno en una concentración desconocida o una serie de soluciones
patrón con concentraciones conocidas del antígeno y se deja que se unan. Se
elimina mediante lavado el antígeno no unido y se permite la unión del segundo
16
anticuerpo ligado a una enzima (Abul, 2002).La intensidad del color de la muestra
se compara con el control positivo incluido en la prueba para determinar el título.
El control positivo (c+) es calibrado para 200 unidades de ELISA. Las muestras
con idéntico o más alta intensidad de color que el control positivo son
consideradas positivas.
El valor de la Comboescale en rangos de color va del 0 al 10 siendo a partir del
numero 3 la intensidad de color adecuado para el control positivo.
Proporcionando los siguientes valores según unidades ELISA comparadas: arriba
de 200 unidades de ELISA a partir del número 3 al 4 se considera baja
inmunidad, de 4 al 4 es nivel de inmunidad medio y del número 5 en adelante con
800 unidades ELISA presenta una inmunidad alta, es decir que el animal posee
un alto titulo de anticuerpos para (IBR). Valores menores de 3 son considerados
negativos.
3.3 Variables a analizar
Número de reactores positivos y negativos a la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina.
3.4 Método estadístico
Se realizó un muestreo simple aleatorio utilizando la siguiente fórmula
(N) (p) (q
n= -------------------
(N-1) B2 ₊ p q
4
17
Donde:
N= Tamaño de la población
n= Tamaño de la muestra
p= Probabilidad de éxito
q= probabilidad de fracaso
B= Limite en el error
La información se analizó por medio de estadística, gráficas descriptivas,
generando números y frecuencias de los resultados obtenidos.
18
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se evaluaron las muestras de 141 bovinos para Rinotraqueítis Infecciosa Bovina del
municipio de Moctezuma Sonora. En donde 81 animales fueron positivos siendo
estos el 57% y 60 negativos con el 43%.
57%
43%
Porcentaje de animales positivos y negativos a IBR
81 positivos
60 negativos
Figura 1. Seroprevalencia a IBR en los animales muestreados.
Los resultados obtenidos en el presente trabajo coinciden con otros estudios
realizados en México en cuanto que hay animales positivos a IBR, el numero de
muestras es muy variable en los distintos estudios lo que se observa es gran parte
de estos presentes niveles de seropositividad arriba del 30%.
Blood en 1992, informó que la IBR se había identificado en Estados Unidos,
Australia, Inglaterra, Canadá, Nueva Zelanda, Sudáfrica, Zimbabue y Europa
19
Continental. Y la enfermedad ocurre por lo común en vacas productoras de leche. En
ganado productor de carne al norte de Australia, hasta un 96% de los toros y un 52%
de las vacas muestran evidencia serológica de infección, presumiblemente venérea,
pues la IBR respiratoria es poco común en bovinos en condiciones de ganadería
extensiva. Sin embargo esto es muy subjetivo, ya que el mismo Blood 1992 señala
que existe evidencia epidemiológica de que la virulencia o especificidad de
hospedador cambian debido a factores desconocidos esto apoya en cierto modo el
resultado arrojado en el presente estudio que fue de 81 animales positivos (57%) a
IBR.
Blood 1992, estipuló que la aparición repentina de los brotes de la IBR en los países
en que antes ocurría la enfermedad leve, quizá se deba a la importación de bovinos
infectados con una cepa más virulenta después de la mutación de una cepa
doméstica.
En 1994, se analizaron las muestras de 54 hatos mexicanos encontrando el 54.91%
de animales positivos a IBR (n=621). En el 2000 se evaluó 1179 para IBR,
provenientes de 120 ranchos del estado de Tamaulipas, Veracruz, Tabasco, Chiapas
y Yucatán, se obtuvo el 53.35% de animales positivos a IBR (n=1179). (Reyes JM;
Vásquez R y García JA, 2004).
En el 2001, Leal GAJ y col; evaluaron sueros de 87 animales productores de leche
pertenecientes de 7 establos del Distrito Federa, México; y obtuvieron 32.18%
positivas a IBR; esta cantidad de animales muestreados se asemeja al presente
20
Estudio solo que es en vacas lecheras y se tiene un porcentaje de positivas más bajo
comparado con el de este estudio, quizás sea por la característica de manejo en los
Animales ya que los sistemas de producción láctea presentan más avances y
mejoras en medidas profilácticas.
En 2002 Córdova IA y col; analizaron 180 sueros de bovinos con antecedentes de
aborto en el clima trópico húmedo, resultando el 13% positivas a IBR. En el 2003
Córdoba IA y col; valoraron 2664 muestras de bovinos lecheros con antecedentes de
aborto procedentes de 7 unidades de producción del centro de México, resultando
positivas un 27.49% para IBR. Los porcentajes de positividad de los trabajos antes
mencionados son aun más bajos y se observa que hace énfasis en que los
problemas presentados en estos animales eran de tipo reproductivo, es sumamente
importante realizar estudios en animales con problemas de aborto que el agente
etiológico de la IBR puede provocar aborto.
En 2004, Reyes JM et al, encuentran en muestreos provenientes de 14 establos de
la República Mexicana: Veracruz, Tabasco, Campeche, Chiapas, Aguascalientes,
Yucatán, Tamaulipas, Querétaro, Sinaloa, Chihuahua, Durango, Jalisco, Baja
California Norte y Michoacán, un 57.29% de positividad a IBR; en el estado de
Sonora a pesar de ser muy importante su actividad ganadera se conoce muy poco
acerca de valores de estudios serológicos a la IBR. Esto puede atribuirse a la escasa
investigación en el ganado de carne respecto a este padecimiento.
21
En 2006 Palomares C. encuentra en 85 muestras de bovinos no vacunados
explotados en sistemas extensivos, de los municipios de la Colorada, Suaqui
Grande, Ures, y Villa Pesqueira, Sonora el 84.7% de positividad a IBR.
43%
20%
18%
19%
NIVEL DE INMUNIDAD A IBR DE LOS ANIMALES MUESTREADOS
NEGATIVO BAJO MEDIO ALTO
Figura 2. Nivel de inmunidad en los animales muestreados basado en la
revisión según la escala del InmunoComb.
En la prueba diagnóstica el nivel inmunologico en los animales muestreados
arrojaron los siguientes datos:
Un 43% negativo equivalente a 60 animales y un 57% positivo equivalente a 81
animales, de los cuales 28 animales 20% tienen un nivel de positividad inmunológico
bajo, 26 animales 18% tienen un nivel de inmunidad medio y 27 animales 19% tiene
un nivel de inmunidad alta. (Véase figura 2)
22
V. CONCLUSIONES
De los 141 animales muestreados se encontraron 81 animales positivos (57%) a la
prueba de ELISA, con distinta reactividad. Con una baja inmunidad o baja
intensidad de color en la prueba son animales que pudieron estar en contacto con
el virus, por lo que pueden ser animales portadores y los de alta intensidad de color
pudieran ser animales recientemente infectados.
La Rinotraqueitis infecciosa no se caracteriza por una alta mortalidad, pero si se
presenta una morbilidad alta, que asociada con agentes secundarios puede causar
grandes estragos en la producción de ganado, desde problemas respiratorios como
neumonías hasta poder ocasionar una alta mortalidad.
Existe información sobre la presencia de la Rinotraqueitis Infecciosa bovina en
sistemas de producción intensiva, como son los establos lecheros, pero hace falta
crear conciencia acerca de la presencia de esta enfermedad en sistemas
extensivos, engordas de ganado y doble propósito etc.
Este trabajo puede ser un estudio inicial para aplicarse a otros municipios en el
estado de Sonora con el propósito de determinar la presencia de IBR en animales
no vacunados.
Además este estudio sirve para crear conciencia en los productores y diseñar un
programa de vacunación del ganado de esta zona, lo cual favorecerá la salud del
ganado y con ello notables beneficios en la producción.
23
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