Aplicacciones tecnológicas de las

Bacterias del Ácido Láctico

PLANO DA APRESENTAÇÃO

Bactérias LácticasUtilização tradicionalNovas utilizações das BLL. lactis

Clonagem e ExpressãoSistemas de expressãoSistemas de endereçamento

USINA CELULAR

Fisiologia

BioquímicaMicrobiologia

Tecnología del ADN recombinante

Genética

INTEGRACIÓN

Nuevas utilización de BAL

Producción de proteínas heterologas de interes biotecnológico

ENZIMASENZIMAS-TecnológicaTecnológica- TerapueticaTerapuetica

(Probióticos GM)(Probióticos GM)

ANTÍGENOSANTÍGENOS- Veículos vacunales- Veículos vacunales

((vacunas oralesvacunas orales))

USINA

• Bacteria ampliamente utilizada en la industria

alimentaría

• De fácil manipulación dentro de las LAB

• Sólo la proteína USP45 es secretada en cantidades

suficientes para observarse mediante tinción de

Coomassie blue

• Información genética disponible

Orden de la membrana Capítulo VILactococcus lactis Expresión de capa S de L. brevisLactococcus lactis: BAL MODELO

MOTIVOS DE DIRECCIONAMIENTO PROTÉICO

Sistema NICE de direccionamiento protéico (Le Loir et al., 2001)

Membrana

Citoplasma

Parede celular

Medio extra-celularNuc

cwaM6

PnisA

nucspUsp45

Membrana

Citoplasma

Parede celular

Medio extra-celularNuc

spUsp45 nuc

PnisA

Membrana

Citoplasma

Parede celular

Medio extra-celular

Nuc

nuc

PnisA

pCYT:Nuc

pSEC:Nuc

pANC:Nuc

MOTIVOS DE ENDEREÇAMENTO PROTÉICO

Proteína secretada Proteína anclada

precursorSP

sobrenadante

parede celular

membrana

citoplasma

LPXT

Ancla

CWA

Expresión direccionada

Secretada

Citoplasmática

Anclada

Sistema de expresión NICE

Cmr PxylT rbsusp45 Slp T

spusp45Membrana

Citoplasma

Pared celular

Medio extra-celularNuc

• Cmr : Resistencia a Cloranfenicol

•PXyl T: Promotor de la Xilosa permeasa

•rbs usp45: Sitio de Unión al Ribosoma del gen usp45

•SP usp45: Péptido señal de la proteína USP45

Sistema de expresión XIES

BAL como vehículos vacunales

L. LactisL. Lactis

• Se encuentra en números productos lácteos fermentados

• Hay una lisis parcial en el intestino

• No coloniza el epitelio intestinal

• Tiempo de transito es discreto

• Efecto se produce en un tiempo limitado

1. Expresión de antígenos en forma citoplasmática

Al ocurrir la lisis parcial en el intestino los antígenos son liberados

BAL como vehículos vacunales

2. Expresión de antígenos en forma secretada

Los antígenos interactúan directamente formando parte de la partícula completa o de los

fragmentos luego de la lisis parcial

BAL como vehículos vacunales

1. Expresión de antígenos en forma secretada

BAL como vehículos vacunales

Los antígenos se van liberando para interactuar conel sistema inmune en todo el proceso

BAL como vehículos vacunales

Antígeno en forma secretada

BAL como vehículos vacunales

Antígeno en forma secretada