Aspectos Básicos sobre Citometría de Flujo

8/17/2019 Aspectos Básicos sobre Citometría de Flujo

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Jorge Monserrat Sanz

Fundamentos y aplicaciones analíticas

y separativas

de la inmunofluorescenciay la citometría de flujo

Asignatura de Inmunología

Universidad de Alcalá

Unidad mixta

CSIC/UAH




Objetivos

• 1. Entender la citometría de flujo como herramienta de estudio de laheterogeneidad celular en el campo del sistema inmune.

• 2. Conocer los fundamentos de la citometría de flujo.

• 3. Conocer la aplicaciones tanto clínicas como en investigación que serealizan mediante la citometría de flujo.

• 4. Puesta a punto, familiarización y conceptos prácticos de un citometro deflujo.

• 5. Obtención de células mononucleares procedentes de sangre periférica.

• 6. Realización de un staining directo(marcaje) de estas células mononuclea

mediante el uso de anticuerpos monoclonales específicos.




• 7. Adquisición en un citometro de flujo.

• 8. Estudio de la viabilidad mediante el uso de sondas intercalantes

del ADN.• 9. Análisis de diferentes tipos de imágenes de citometría de flujo:

Comprender las etapas en el proceso de la informaciComprender las etapas en el proceso de la informacióón obtenida porn obtenida por

citometr citometr ííaa

• 10. Resolución de diferentes problemas clínicos reales.

• 11. Estudio de los porcentajes, calculo de cifras absolutas einterpretación de intensidades medias de florescencia de célulaslinfocitarias obtenidas de distintos casos patológicos reales.

• 12. Interpretación de los resultados obtenidos.

Objetivos




¿Qué debe ser el alumno al terminar el curso?

• Que después del curso el alumno sea:

1. Conocedor de los fundamentos y consciente de las aplicaciones de lacitometría de flujo.2. Eficiente preparando muestras para citometría y diseñando experimentos de

citometría analítica y separativa.3. Usuario competente y autosuficiente del citómetro de flujo analizador capa

puesta a punto, adquisición y capaz de diagnosticar y solucionar situacione problemáticas (compensación, flujo)

4. Analizador crítico conocedor de las posibilidades de los software de análisiexportación de datos.




Prácticas de Inmunología Clínica• Primer día: Seminarios Interactivos:

1. Fundamentos en Inmunofluorescencia y Citometría de flujo.2. Aplicaciones de la citometría de flujo.

3. Citómica: Aplicaciones clínicas

• Segundo y tercer día:1. Dos actividades simultáneas (2 horas):

- Realización de una separación célular de células mononucleares de sangre periférica.- Contaje de las células.2. Citómetro de flujo: Fundamentos y utilización de un citómetro de flujo (2 horas).3. Marcaje de superficie e intracelular de linfocitos de sangre periférica (2 horas):

a. Marcaje de superficie. b. Viabilidad (7add).c. Anexina V.

• Cuarto día (4 horas): – Análisis de imágenes de citometría de flujo. Problemas.


http://slidepdf.com/reader/full/aspectos-basicos-sobre-citometria-de-flujo 6/64Jorge Monserrat Sanz

Relevancia

1. Estudio directo de las patologías mediante esta tecnología:

Conocimiento y búsqueda de información de carácter pronóstico

2. Interpretación de vuestra fuente de lectura: la bibliografíade toda la comunidad científica biomédica



Heterogeneidad celular en el sistema inmune

CD19CD19

CD3CD3

CD56CD56

CD4CD4 CD8CD8

CD2CD2

CD45

CD14

CD45RACD45RA CD45RACD45RA CD45RACD45ROCD45RO CD45ROCD45RO

CD

NNMonoMonoBBNKNKT4T4 T8T8



Criterios de caracterizaciCriterios de caracterizacióón de los tipos celularen de los tipos celulare

•• CelularesCelulares – – MorfologMorfologí í a al microscopio.a al microscopio.

•• MolecularesMoleculares – – GenotGenotí í picopico. (Genoma) Recombinaciones som. (Genoma) Recombinaciones somááticasticas

– – FenotFenotí í pico (pico (ProteomaProteoma)) RNARNA expresado,expresado, prote proteíínas.nas.

– – CitomaCitoma: An: Anáálisis estadlisis estadíísticostico multimulti--celular.celular.

-- AntAntí í genos de diferenciacigenos de diferenciacióón linfocitarian linfocitariaLos antLos antíígenos de superficie pueden ser utilizados comogenos de superficie pueden ser utilizados como marcadomarcado

especespecí í ficosficos de lde lííneas, tipos y subtipos celulares.neas, tipos y subtipos celulares.



Para estudiar la heterogeneidad celularPara estudiar la heterogeneidad celular

son necesarias tson necesarias téécnicas:cnicas:•• 1. Con resoluci1. Con resolucióón a nivel de cn a nivel de céélula individuallula individual

•• 2. Que caractericen la c2. Que caractericen la céélula en funcilula en funcióón de varn de var

caracter caracter íísticas (par sticas (par áámetros).metros). X, Y, Z...X, Y, Z...

•• 3. Capaces de realizar medidas en n3. Capaces de realizar medidas en núúmeros representativmeros representativ

de cde céélulas.lulas. 100 c100 céélulas errorlulas error ±± 10%,10%, 10.000 error10.000 error ±± 1%1%•• 4. Capaces de almacenar, procesar, representar, analiza4. Capaces de almacenar, procesar, representar, analiza

reducir toda esa informacireducir toda esa informacióón sobre cn sobre céélulas individuales lulas individuales conclusionesconclusiones úútiles acerca de las poblaciones celulares.tiles acerca de las poblaciones celulares.


http://slidepdf.com/reader/full/aspectos-basicos-sobre-citometria-de-flujo 10/64Jorge Monserrat Sanz0 256 512 768 1024

4C5144001FSC-Height ->

GranulocitosGranulocitosCD15+CD15+

MonocitMonocitCD14+CD14+

LinfocitoLinfocito

CD3+CD3+Τ2α

2α

Τ1γ

1γ

CDCDCDCD

CD56+CD56+

CD19+CD19+CDCDCDCD

MorfologMorfologí í a y anta y antí í genos de diferenciacigenos de diferenciacióón en el ann en el anáálisis lisis dla heterogeneidad celularla heterogeneidad celular



Fases de laFases de la citometríacitometría::1. Pre-citometría:

1. Anticuerpos monoclonales y sondas:1. Estudio a nivel tisular

2. Estudio a nivel celular

2. Técnicas de separación celular

3. Técnicas en Inmunofluorescencia

2. Citómetria(Alternativas: Microscopia de fluorescencia, Confocal, Genética Molecular…

3. Análisis cuantitativo

4. Análisis biológico.



Anticuerpos como herramientas en

investigación• Ventaja

• Capacidad de reconocimiento muy específica

• Detección muy sensible picomolar

• Inconveniente

• Son invisibles – Conjugación con moléculas “reporter”

• Radioisótopos: RIA, Rosalyn Yalow 1977

• Enzimas: ELISA, inmunohistoquímica

• Moléculas fluorescentes: inmunofluorescencia, citometría flujo, LSC.



Técnicas de separación celular

• Gradientes de densidad:

Medios de densidad constante

Gradientes continuos o discontinuos• Elutriación centrifuga

• Sorting: - Magnético

- Sorter

-- Células en tejidos:Células en tejidos:

-- Células en disolución::

1. Inmunohistoquímica2. Procesamiento mécanico3. Separación por mallas y filtros



Técnica de separación medianteTécnica de separación medianteFicollFicoll--HypaqueHypaque



DirectoDirecto IndirectoIndirecto BiotinadoBiotinado11

22

11

22

11 bb

bb

bbbb bb

b b

bbbb

bb

bb bb

bb

Tipos de marcajes inmunofluorescente



Microscopia de fluorescenciaMicroscopia de fluorescencia



FUNDAMENTOS DE LA

CITOMETRÍA DE FLUJO



¿Qué es la citometría de flujo?

FSC

90º90º 2- 4º

Columna

de muestra

MeetingMeeting pointpointLáserLáser

D e t e

c t o r e s d

e l u z

D e t e

c t o r e s d

e l u z

AmplificaciónAmplificacióndigitalizacióndigitalización RepresentaciónRepresentaciónyy AnalisisAnalisis

FlujoFlujo



VENTAJAS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJOVENTAJAS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO

-- Medidas multiparamétricas (x, y, z) en grandes números deMedidas multiparamétricas (x, y, z) en grandes números decélulas individuales (miles).células individuales (miles).

-- Aumento en la representatividad de las muestras estudiadas y Aumento en la representatividad de las muestras estudiadas y la precisión de las medidas.la precisión de las medidas.

-- A menor tiempo de dedicación mayor productividad.A menor tiempo de dedicación mayor productividad.

DESVENTAJASDESVENTAJAS

La citometría de flujo no aporta información sobre la distribuciLa citometría de flujo no aporta información sobre la distribuci

espacial de las células estudiadas.espacial de las células estudiadas.




CitómetroCitómetro dede flujoflujo




¿Cómo funciona un citómetro?

• Sistema de flujo

• Dispersión de la luz

• Fluorescencia

• Separación y detección de la luz

• Amplificación

• Corrección de errores: solapamiento espectral y formaci

de dobletes• Digitalización y almacenamiento de la información




SISTEMA DE ABSORCION DESISTEMA DE ABSORCION DE

MUESTRAMUESTRA

MUESTRAMUESTRA

AIREAIRE

FLUJOFLUJOMUESTRAMUESTRA

L i id tLuz incidente




Cámarade flujo

FSC

90º90º

Fluido envolvente

Columna

de muestra

Luz dispersada lateralmenteLuz dispersada lateralmentey luz fluorescente,y luz fluorescente,

α = 90= 90º

Luz incidenteLuz incidente

Luz dispersada hacia delante,Luz dispersada hacia delante,α==2- 4º




INFORMACIÓN QUE SE OBTIENE: LUZINFORMACIÓN QUE SE OBTIENE: LUZ

-- PROPIEDADES AL ATRAVESAR LA LUZ:PROPIEDADES AL ATRAVESAR LA LUZ:-- LUZ REFLEJADA O DIFRACTADALUZ REFLEJADA O DIFRACTADA

-- PROPIEDADES FLUORESCENTES:PROPIEDADES FLUORESCENTES:-- FLUOROCROMOS (FITC, PE, APC, TC…FLUOROCROMOS (FITC, PE, APC, TC…




Luz dispersada a 90 grados

Detector

Detector de 90º

Laser

DETECCION DE LUZ DISPERSADADETECCION DE LUZ DISPERSADA




DETECCION DE LUZ DISPERSADADETECCION DE LUZ DISPERSADAHACIA DELANTE (FORWARDHACIA DELANTE (FORWARD

SCATTERED LIGHT, FSC)SCATTERED LIGHT, FSC)

FSCFSC

SSCSSC

El detector de FSCEl detector de FSC

convierteconvierte

luzluz

dispersadadispersada

haciahacia

delantedelante en unen un pulso pulso dede voltajevoltaje proporcional proporcional alal tamañtamañde lade la célula/particulacélula/particula

DETECCION DE LUZ DISPERSADADETECCION DE LUZ DISPERSADA




DETECCION DE LUZ DISPERSADADETECCION DE LUZ DISPERSADALATERALMENTE (SIDE SCATTERED LIGHTLATERALMENTE (SIDE SCATTERED LIGHT

SSC)SSC)

FSCFSC

SSCSSC

El detector de SSCEl detector de SSC convierteconvierte lala luzluz dispersadadispersada lateralmlateralme

en unen un pulso pulso dede voltajevoltaje proporcional proporcional a la l contenidocontenido enenorgánulosorgánulos membranososmembranosos ((granularidadgranularidad))

M f lMorfologíí ta antíí d dif i igenos de diferenciacióó ln en el anááli ilisis d



Jorge Monserrat Sanz0 256 512 768 1024

4C5144001FSC-Height ->

GranulocitosGranulocitosCD15+CD15+

MonocMonocCD14+CD14+

LinfocitLinfocit

CD3+CD3+Τ2

2

Τ1

1

CDCDCDCDCD56+CD56+

CD19+CD19+CDCDCDCD

MorfologMorfologí í a y anta y antí í genos de diferenciacigenos de diferenciacióón en el ann en el anáálisis lisis dla heterogeneidad celularla heterogeneidad celular




Laser

Detectores de fluorescencia

F r e q

Fluorescencia

Detector

Detector de fluorescencia

(PMT3, PMT4 etc.)




Fluorescencia

FF

FLFL--11

FLFL--22




Imagen de Fluorescencia: Doble Marcaje CD16 PE y CD3Imagen de Fluorescencia: Doble Marcaje CD16 PE y CD3 PePer




Fluorescencia

• Proceso por el que una molécula absorbe luz, aumenta energía y vuelve al estado basal emitiendo un fotón.

• Parte de la energía se pierde en las transiciones entre distintos estados por tanto el fotón emitido tiene menenergía (mayor longitud de onda) que el que fue absorbid

t (t (μss))

E E

λ11<<λ22

λ 11λ

22

E t




Espectros

• Espectro de Absorción – Representación de la intensidad de absorción de luz de distinlas longitudes de onda por una sustancia.

• Espectro de Emisión – Representación de la intensidad de emisión de una sustan

excitada con luz de una determinada longitud de onda.

λ nm)

excitaciónexcitación medidamedidaIn

tensida

d

de

In

tensida

d

de

flu

oresce

ncia

fluore

scenci

a




FluoresceinaFluoresceina (FITC)(FITC)

400 nm 500 nm 600 nm 700 nm

R e l a t i v e I n t e n s i t y

Wavelength

ProteinasProteinas

ExcitaciónExcitación EmisiónEmisión300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm




EtidioEtidio

PEPE

Acido Acido ParináricoParinárico

Texas RedTexas Red

PEPE--TR Conj.TR Conj.

PIPI

FITCFITC

600 nm300 nm 500 nm 700 nm400 nm

457350 514 610 632488Laseres

comunes




FluorocromosFluorocromos




SondasSondas

P d ñ l




Proceso de señales

• 1. Separación de señales luminosas

• 2. Detección de señales luminosas

• 3. Amplificación de señales eléctricas

• 4. Corrección de errores

– Compensación de señales

– Discriminación de señales debidas a dobletes (proceso de pulsos).

•• 6. Transformaci6. Transformacióón de sen de seññales elales elééctricas analctricas analóógicas en digitalegicas en digitale

•• 7. Almacenamiento matricial (7. Almacenamiento matricial (listlist modemode) de la informac) de la informac

resultanteresultante

Optica en los citómetros de flujo




PMT

PMT

PMT

PMT

Filtros

Dicroicos

BandpassFiltros

Optica en los citómetros de flujo

Laser

1

2

3

4

Flujo Celular




DETECCIÓN DE FLUORESCENCIADETECCIÓN DE FLUORESCENCIATC

PerCPQR

Cy5APC

FL-1 FL-2 FL-3 FL-4DetectoresDetectores

FluorocromosFluorocromos




Amplificación de señales

• Lineal• (intervalos regulares)

• apropiada para: – Señales que oscilan en un

rango limitado (0-1.000)

– Con distribuciones con picos estrechos como elcontenido en DNA.

• Logarítmica• (intervalos crecientes)

– Cubre un rango más ampliode variación de la señal (0-10.000).

1001001010 200200

100100 2002001010 10001000

101011

100100 2002001010




EscalasEscalas

FSCFSC EjEj: Lineal: Lineal FLFL--11 EjEj: Logarítmica: Logarítmica

Compensación de señales medidamedida




Compensación de señales• Fundamento Superposición de

espectros de emisión. Parte dela señal de emitida por un

fluorocromo es leída por eldetector de otro color

• Concepto sustracción de una parte de la señal medida en uncolor a la señal medida en otrocolor

• FL-2 - %FL1

λ

excitaciónexcitación

Inten

sidadd

e

fluor

esc

enci

a

In

tensida

dd

e

fl

uoresc

encia

FLFL--11 FF

Discriminación de señales debidas a




Discriminación de señales debidas adobletes (proceso de pulsos)

• Señal analógica (V)• Altura de señal (H)• Anchura de señal (W)• Área de señal (A)

• En base a la información de áreay anchura se pueden detectar

dobletes (dos células que pasan juntas).

WW

AA

tt

VV

22 xWxW




DIGITALIZACION Y ALMACENAMIENTODIGITALIZACION Y ALMACENAMIENTO

DE INFORMACIÓNDE INFORMACIÓNNN

11

2233

44

55

6677

88

..

..

..1000010000

FSCFSC

22

2233

44

33

4422

22

..

..

..

SSCSSC

11

1122

22

11

2233

88

..

..

..

FLFL--11

11

1133

44

11

1122

11

..

..

..

FLFL--22

11

2233

11

22

3311

22

..

..

..

FLFL--33

11

3333

44

11

1133

44

..

..

..

FLFL--44

22

2233

33

55

5511

22

..

..

..

TIEMPOTIEMPO

11

1111

11

22

2222

22

..

..

..

LosLos pulsos pulsos dede““VoltajeVoltaje””(se(seññalesales analanalóógicasgicas) son) son transformadastransformadas enen seseññalesales digitadigita

Las seLas seññales digitalesales digitales almacenanalmacenan en un soporte informen un soporte informáático en modo listadotico en modo listado(almacenamiento(almacenamiento multiparammultiparaméétricotrico).).




PROCESO DE INFORMACION

HistogramasHistogramasDiagramasDiagramas biparamétricbiparamétrico




Proceso de la información generada

• Representación de la información

• Selección de la información

• Reducción de la información

• De la célula a la población celular

RepresentaciRepresentacióónn monoparammonoparaméétricatrica de datosde datos




RepresentaciRepresentacióónn monoparammonoparaméétricatrica de datosde datosHistogramas.Histogramas. Se representa en cada valor de Se representa en cada valor de x

(intensidad de fluorescencia) el n(intensidad de fluorescencia) el núúmero demero de

ccéélulas que emiten esa intensidad.lulas que emiten esa intensidad.

M1




HistogramasHistogramas

SSCSSC

FSCFSC

FLFL--11

FLFL--22

FLFL--33

RepresentaciónRepresentación biparamétricabiparamétrica en 2Den 2D




RepresentaciónRepresentación biparamétricabiparamétrica en 2Den 2D

Diagrama de puntos / dot plo

+

+--

RepresentaciRepresentacióón simultn simultááneanea

de dos parde dos paráámetrosmetros XX ee YY..XX representa el valor de larepresenta el valor de la

seseññal de un par al de un par áámetrometro..

YY representa el valor de larepresenta el valor de la

seseññal del otro.al del otro.

++-

-FLFL--11

F L

F L

- - 2 2

RepresentaciRepresentacióón 3Dn 3D




RepresentaciRepresentacióón 3Dn 3D

CountourCountour plotplot // Diagramas de contornosX, Y mX, Y máás una tercera dimensis una tercera dimensióón.n.

Una superficie tridimensionalUna superficie tridimensionalLa altura representa el nLa altura representa el núúmero demero de

ccéélulas con una determinadalulas con una determinada

combinacicombinacióón de ambosn de ambos par par áámetros.metros.




Diagrama de dot plot density

SelecciSeleccióón de la informacin de la informacióónn




SelecciSeleccióón de subpoblacionesn de subpoblacionesdefinidas en diagramasdefinidas en diagramasmonoparammonoparaméétricostricos

SitSitúúan los valores lan los valores lí í mite superior emite superior einferior de un parinferior de un paráámetro quemetro quedefinen a las cdefinen a las céélulas de interlulas de interéés.s.

SelecciSeleccióón de la informacin de la informacióónnGatesGates (Puertas) / ventanas ((Puertas) / ventanas (windowswindows))

M1

M2

G tG t bibi éét it i




GatesGates biparambiparaméétricostricos..

Se pueden utilizar puertasSe pueden utilizar puertas

biparambiparaméétricastricas definidas en base a ladefinidas en base a lacombinacicombinacióón de los valores de dosn de los valores de dosparparáámetrosmetros

Se emplean para estudiar lasSe emplean para estudiar lascaractercaracterí í sticas de subpoblacionessticas de subpoblacionescelularescelulares

R1

R2

R3

R4

G tG t llóó i / P t li / P t lóó ii




GatesGates llóógicos / Puertas lgicos / Puertas lóógicasgicas

Pueden combinarse distintas puertas y emplearse simultPueden combinarse distintas puertas y emplearse simultááneamente coneamente cocriterio para seleccionar las ccriterio para seleccionar las céélulas de interlulas de interéés.s.

R1

R2

R3

R4

R5

R6

R7

LINFOCITOSLINFOCITOS

MONOCITOSMONOCITOS

GRANULOCITOSGRANULOCITOS

TAMAÑOTAMAÑO

C O M P L E J I D A D C E L U L A R

C O M P L E J I D A D C E L

U L A R

R5R5 andand RR

NK

T




¿Qué significa la realización de un “gate” electrónico¿Qué significa la realización de un “gate” electrónico

N

1

2

3

45

6

78

.

.

.

10000

FSC

2

2

3

43

4

22

.

.

.

SSC

1

1

2

21

2

18

.

.

.

FL-1

1

1

3

41

1

21

.

.

.

FL-2

1

2

3

12

3

12

.

.

.

FL-3

1

3

3

41

1

34

.

.

.

FL-4

2

2

3

35

5

12

.

.

.

TIEMPO

12

3

45

6

78

.

.

.

Análisis de la informaciónAnálisis de la información




Estadisticasmonoparamétricas

M1

M2

Histogram Statistics

Marker Left, Right Events % Gated % Total Mean Geo Mean CV Median Pe

All 1, 9910 9917 100.00 99.17 1027.48 827.78 37.34 1113.97

M1 685, 9910 8725 87.98 87.25 1153.33 1139.97 16.01 1144.44M2 14, 685 1192 12.02 11.92 106.29 79.55 95.61 66.12

File: ap-24h.011 Log Data Units: Linear Values

Tube: Panel:

Acquisition Date: 26-Apr-99 Gate: G3

Gated Events: 9917 Total Events: 10000

X Parameter: FL3-H FL3-IP (Log)

Análisis de la información.Análisis de la información.

E t di ti bi ét i +++




Estadisticas biparamétricas

• Cuadrantes Combinación de dos

umbrales de positividad para dos

parámetros

• Número de células

• % de células

• MFI mean, geo mean

+--

+++-

Quadrant Statistics

File: FEN-A11R.007 Log Data Units: Linear Values

Sample ID: Patient ID:

Tube: tube #7 Panel: Bronquiris

Acquisition Date: 5-Jun-98 Gate: No Gate


X Parameter: FL1-H CD2 FITC (Log) Y Parameter: FL2-H CD16 PE (Log)

Quad Location: 15, 17

Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo M

UL 785 15.70 15.70 5.42 4.50 1553.17 1274

UR 877 17.54 17.54 62.04 52.73 1159.04 700LL 951 19.02 19.02 2.81 2.37 3.67

LR 2387 47.74 47.74 70.94 63.08 6.30

E dí i i




Estadística por regiones

• Selección libre de un conjunto

de combinaciones de valores

correspondientes a dos

parámetros.R1

R2 MicrobeadsMicrobeads

LinfocitosLinfocitos




Información generada de una muestra

marcada en triple color

Quadrant Statistics








Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean

UL 785 15.70 15.70 5.42 4.50 1553.17 1274.92

UR 877 17.54 17.54 62.04 52.73 1159.04 700.05

LL 951 19.02 19.02 2.81 2.37 3.67 3.17LR 2387 47.74 47.74 70.94 63.08 6.30 5.43

Quadrant Statistics








Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean

UL 785 15.70 15.70 5.42 4.50 1553.17 1274.92

UR 877 17.54 17.54 62.04 52.73 1159.04 700.05

LL 951 19.02 19.02 2.81 2.37 3.67 3.17LR 2387 47.74 47.74 70.94 63.08 6.30 5.43

Quadrant Statistics

File: FEN-A11R.007 Log Data Units: Linear ValuesSample ID: Patient ID:




X Parameter: FL1-H CD2 FITC (Log) Y Parameter: FL2-H CD16 PE (


Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y

UL 785 15.70 15.70 5.42 4.50 1553.17

UR 877 17.54 17.54 62.04 52.73 1159.04

LL 951 19.02 19.02 2.81 2.37 3.67

LR 2387 47.74 47.74 70.94 63.08 6.30

Del análisis de cada matriz (9x20.000) nos quedamos con 12Del análisis de cada matriz (9x20.000) nos quedamos con 12--2424 nímerosnímeros

Estadísticas/Reducción de la informació



Estadísticas/Reducción de la informació

• Análisis gráfico ofreceinformación numérica sobre las

poblaciones estudiadas.• Esta información numérica deuna muestra se representará en

una fila de una matriz de datos• Con la matriz de datos se

obtendrá información estadísticay representaciones gráficassobre poblaciones de individuos.

9x9x2000020000

c

élulas

c

élulas

parámetrosparámetros

casocaso variablesvariables

Aspectos Básicos sobre Citometría de Flujo

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