Introducción

El crecimiento microbiano se pude considerar como el aumento ordenado de todos los constituyentes químicos de un organismo, lo cual, para los organismos unicelulares, conduce a un aumento del número de individuos en la población.

Se puede considerar el crecimiento al nivel de individuos dentro de una población (ciclo celular) o el crecimiento de poblaciones celulares (ciclo de crecimiento). El crecimiento de las poblaciones celulares se puede subdividir en sistemas cerrados, como el cultivo intermitente y en sistemas abiertos, como el cultivo alimentado por lotes y el cultivo continuo.

Para determinar el número total de células de un cultivo, el método de elección es el recuento microscópico directo. Para células de levadura, puede emplearse un hemocitómetro. Es necesaria una ampliación de 100X a 400X para visualizar la cámara de recuento y las células en suspensión. Para células bacterianas se usa frecuentemente una cámara de Petroof-Hauser o una de Neubauer y una ampliación de 1000X a causa del pequeño tamaño de las bacterias. El recuento microscópico directo tiene la ventaja de que permite observar directamente la morfología de las células estudiadas. Las morfologías aberrantes o atípicas podrían indicar unas condiciones inapropiadas de crecimiento o la presencia de un genotipo o fenotipo alterados.

El método más usado para medir el crecimiento microbiano es secar volúmenes conocidos de cultivo celular lentamente hasta obtener un peso constante. Cuando se trata de células que sedimentan rápidamente, como las levaduras, esto usualmente implica centrifugación de muestras del cultivo en tubos de centrífuga pre-pesados. Para células bacterianas difíciles de concentrar por centrifugación, las muestras de cultivo se filtran a través de membranas hidrofílicas con un tamaño de poro de 0,2 m.

Otro método muy utilizado es la determinación de biomasa por densidad óptica. Se aprovecha la proporcionalidad de la densidad óptica a la masa celular, cuando no se tienen en el medio de fermentación otros sólidos en suspensión. Este método se basa en la Ley de Beer y Lamberty; en este caso, se asume que la absorción del rayo incidente es proporcional a la concentración de células presentes.

Objetivos

General

Desarrollar la habilidad para medición la biomasa microbiana que interviene en los bioprocesos.

Específicos

Aplicar la técnica de recuento en cámara de Neubauer y de medición de biomasa por densidad óptica.

Correlacionar los datos de Neubauer y densidad óptica con la biomasa del microorganismo en estudio.

Comparar con otros métodos utilizados para la medición de la biomasa microbiana.