Integrantes :

Brito Hernández José Bernardino

Perez Moreno Alejandro

Luna Avila Laura

Zendejas Lopez Emilio

Hipótesis:

Si analizamos la actividad enzimática (velocidad de catálisis) en función de laconcentración de sustrato (piruvato), entonces podremos conocer las constantescinéticas Km y Vmax para dicha enzima (LDH).

Si se adiciona un inhibidor a la reacción, este modificara la Km y Vmax en funcióndel tipo de inhibidor.

Objetivos:

Determinar la concentración de sustrato a la cual a la enzima alcanza su Vmax

Calcular los parámetros cinéticos de la reacción catalizada

Determinar el efecto de un inhibidor en la LDH analizando su efecto sobre losparámetros cinéticos.

Se realizo la curva de efecto de la concentración de sustrato de acuerdo a la tabla 3.3La dilución empleada para la enzima fue 1:200

Se realizo la curva de efecto de la concentración de sustrato de acuerdo a la tabla 3.3La dilución empleada para la enzima fue 1:200

1 / V max 9.88 min*mg*mmol-1

Km / (Vmax) 3.16 mM*min*mg*mmol-1

Vmax 0.10 mmol / (min*mg) Vmax 0.09 mmol / (min*mg)

Km 0.32 mM Km 0.27 mM

Efecto [S]

V0=(Vmax*[S])/ (Km + [S])

y = 3.1576x + 9.8795

1/V0=Km / (Vmax*[S]) +1 / V max

Linealizacion dobles reciprocos Regresion No lineal Michaelis-Menten

y=0.0935x / (0.2747 + x)

1 / V max 8.30 min*mg*mmol-1

Km / (Vmax) 12.92 mM*min*mg*mmol-1

Vmax 0.12 mmol / (min*mg) Vmax 0.12 mmol / (min*mg)

Km 1.56 mM Km 0.32 mM

V0=(Vmax*[S])/ (Km + [S])

Efecto inhibidorLinealizacion dobles reciprocos Regresion No lineal Michaelis-Menten

y = 12.916x + 8.2955

y=0.12x / (0.32 + x)1/V0=Km / (Vmax*[S]) +1 / V max

Vmax de reacción catalizada con LDH es 0.10 mmol / (min*mg)

Km de reacción catalizada con LDH es 0.32 mM

Vmax se mantiene prácticamente constante, en ausencia o presencia de inhibidor.

Km aumenta en presencia de inhibidor.

SI puede ser competitivo, ya que en este tipo de inhibición aumenta Km, sin afectar a Vmax

NO puede ser acompetivo, ya que en este tipo de inhibición baja Km yVmax, pero el cociente (pendiente) no se altera

NO puede ser mixto, ya que en este tipo de inhibición aumenta Km y disminuye Vmax

NO puede ser no-competitivo, ya que en este tipo de inhibición Km no se altera y Vmax disminuye

¿concentración de sustrato a la cual a la enzima alcanza su Vmax?

[S]= 26.20 mM

[S]=Km/((Vmax/V0)-(1 ))

[S]=0.32/((0.1012/.1000)-(1 ))

1/V0=Km / (Vmax*[S]) +1 / V max

[S]=Km/(((1/V0)-(1 / Vmax))(Vmax))

Cantidad de Enzima F3:

[enzima en F3]*Vol de F3/Factor de dilución

(28.28 𝑚𝑔/𝑚𝐿/ 300)∗(0.01 𝑚𝐿) = 9.43 𝑋10 −4𝑚𝑔