Manuel Oviedo MartnezHematologa372UABC

Consiste en una placa gruesa de cristal en forma de porta, cuya porcin central est dividida en tres bandas perpendiculares al eje longitudinal de la cmara. De ellas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 01 mm con respecto a la central, y en esta ltima hay grabado un retculo cuadrangular.

La banda central puede estar, a su vez, subdividida en dos semibandas idnticas y separadas por un surco paralelo al eje longitudinal de la banda. En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retculo idntico.

Lectura y ajuste de concentracin celular: Como se cuentan los linfocitos presentes en 4 cuadrados grandes del retculo, hay que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el nmero de leucocitos que hay en 1 cuadrado grande.

Como la longitud de cada uno de los lados de los cuadrados grandes es de 1 mm, y la longitud del espacio comprendido entre stos y el cubre es de 01mm; hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el nmero de linfocitos existentes, no en 01mm3 , sino en 1mm3 .

En definitiva, para su clculo puede emplearse la siguiente frmula:RL= L/4 x 10 x DRL= Recuento de linfocitos (nmero de linfocitos por mm3 de la suspensin celular). L = Linfocitos contados en 4 cuadrados grandes. D= Factor de dilucin.

Es una tcnica de anlisis celular multiparametricoEs una tecnologa (proceso) que permite la medida simultnea de mltiples caractersticas fsicas de una sola clula. Estas medidas son realizadas mientras las clulas (partculas) pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 clulas por segundo, a travs del aparato de medida en una corriente de fluido .

FluidosOpticaElectrnica

para introducir y restringir las clulas para anlisis

fuente de excitacinun sistema coleccin.

Para convertir las seales pticas en seales electrnicas proporcionales y digitalizarlas para anlisis computacional.

Identificar y enumerar subpoblaciones celulares nicas y definidas.Seleccionar y separar fsicamente subpoblaciones de clulas deseadasMedir capacidad funcional de subpoblaciones celulares definidas

Un fluorocromo es una molcula qumica que absorbe la luz a una determinada longitud de onda (ENERGIA ) energa de excitacin y emite a una longitud superior (MENOR ENERGIA)

Interacciona con la luz de excitacin procedente de el lser. Se utiliza unido a anticuerpos especficos (monoclonales ) para antgenos de la clula. La cantidad de fluorescencia con la cual una clula se tie es proporcional a la cantidad de sitios de unin.

Unin de sitios especficos con anticuerpos marcados con fluorocromos El fluorocromo absorbe energa del lser El fluorocromo libera energa absorbida por : Vibracin y disipacin del calor. Emisin de fotones a una mayor longitud de onda llamada fluorescencia (1,2,3).

El citmetro de flujo detecta como las clulas interactan con un rayo lser en trminos de cmo la clula : desva la luz incidente (parmetros FSC y SSC) emite fluorescencia (parmetros FL1. FL2. FL3)(1).

Fase pre-citometra: preparacin de los reactivos, preparacin de las clulas, diseo del protocolo y coloracin de las clulas con los reactivos fluorescentes.Fase de citometra de flujo : involucra el procesamiento de las clulas marcadas y la recoleccin de los datos para cada una de las medidas (parmetros) realizados en cada clula individual. Fase de anlisis: anlisis de los datos recolectados

La mezcla de clulas teidas con diferentes fluorocromos es forzada a pasar a travs de una aguja creando una delgada fila de lquido que contiene las clulas. A medida que cada clula pasa en frente del lser, desva el rayo incidente y las molculas teidas unidas a la clula van a ser excitadas y emiten luz fluorescente.

Tubos fotomultiplicadores detectan tanto la luz desviada y las emisiones fluorescentes, la informacin es digitalizada y procesada por el computador. Los resultados son presentados a manera de histogramas o "dot-plots"

Hematologa : tipificacion y conteo de clulas , reticulocitos y anlisis de medula sea . Farmacologa :estudios de cintica celular Inmunologa :subpoblaciones de linfocitos ,tipaje tisular Oncologa :Diagnostico y pronostico ,monitores de tratamientos Microbiologa :diagnostico bacteriano y virico ,estudios de sensibilidad a los antibiticos Gentica : Cariotipo y diagnostico de portador y diagnostico prenatal.

Anlisis de un nmero estadsticamente significativo de clulas ( 1000 a ms de 100.000 clulas). Mltiples marcajes de una sola clula. Anlisis de alto numero de partculas en corto tiempo (5.000 eventos /seg. ). Alta sensibilidad y objetividad. Medidas separadas de cada clula (no slo el promedio).Medidas cuantitativas : discriminacin de las clulas segn la cantidad de marcador. Mltiples parmetros : define subpoblaciones complejas. Miles de clulas por segundo .

Poca informacin morfolgica de la clula No proporciona informacin de la localizacin celular en un tejido Puede analizar solamente una cantidad limitada de material (10 millones de clulas / hora) Necesita suspensin de clulas individuales. Costos de la tecnologa Mtodo destructivo. Incapacidad de visualizar las clulas que se analizan.

Pipetas volumtricasPipetas de Ostwald-FolinPipetas graduadasMicropipetas

BulboTDVolumen Tiempo de almacenamientoTemperatura con gran exactitudno estn graduadas y slo permiten medir un volumen nico.

Tubo de vidrio delgadoPara pequeos volmenes de sangreSe calibran para soplar

Se calibran con aguaNo son muy exactasEs ms exacta la que est ms cercana

Se calibran con mercurioDebe enjuagrseles con el lquido de dilucin

Azul de Cresilo Brillante Solucin fisiolgica al 0.5% para tincin de reticulocitos, la substancia granulo filamentosa de stos se tie de azul negro. Presentacin por 100 ml. Reactivo de Turk Solucin de violeta de genciana cido actico, lista para su uso. Para conteo de leucocitos en Cmara de Neubauer. Thrombo - Count Solucin de oxalato de potasio con cloruro de mercurio, Para conteo directo de trombocitos. Presentacin por 50 ml. Reactivo de Hayems Solucin de cloruro de mercurio isotnica para conteo en eritrocitos en la cmara.

El cido actico contenido en la solucin de Trk hemoliza los eritrocitos y el colorante contenido tie los leucocitos.

Llenado de la pipetaAspirar sangre en una pipeta de leucocitos hasta la marca 1.0, seguidamenteaspirar solucin de Trk hasta la marca 11. La dilucin es 1:10.Tambin es posible una dilucin de 1: 20 (sangre hasta la marca 0.5 ysolucin de Trk hasta la marca 11).Mezclar cuidadosamente la sangre