Caracterización y valor pronóstico de la expresión de c-Myb y B-Myb en

Leucemia Mieloblástica Aguda

Laboratorio de Biología Molecular

Hospital La Fe

Pertenecen a una familia de factores de trascripción

A-Myb Gónadas

B-Myb Ubicuo

c-Myb C.Hematoyéticas

B-Myb y c-Myb

B-Myb Progenitor Ancestral

RegulaciónTrans-activaciónUnión-DNA

B-Myb progenitor ancestral

c-Myb y A-Myb se originaron por duplicación durante la evolución

B-Myb y c-Myb

Cromosoma 6

c-Myb 6q23B-Myb 20q13

Cromosoma 20

Ratones homocigotos

A-Myb inactivado

ViablesViables

C-Myb inactivado

Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis

(anemia severa)

Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis

(anemia severa)

B-Myb inactivado

Muerte etapa temprana in

utero

Muerte etapa temprana in

utero

Myb en Ratones

B-Myb y c-Myb

“Correcta expresión”

Necesaria para función celular

Gen SupresorOncogen

B-Myb

Diferenciaciónterminal

Proliferación

c-Myb

Desregulación¿Desarrollo tumoral?

Objetivos

1.-Cuantificación expresión de B-Myb y c-Myb

2.-Asociación expresión de B-Myb y c-Myb -

factores clínico-biológicos

3.- Valor pronóstico de B-Myb y c-Myb

En Pacientes con LMA:

197 Leucemias Mieloblásticas Agudas

Pacientes I

Sexo (n,%)Hombre 114 (58%)Mujer 83 (42%)

Edad (mediana, rango) 57(17-91)

Leucocitos(mediana, rango) 8*103/L (1-342)

Blastos(mediana, rango) 40% (1-100)

197 Leucemias Mieloblásticas Agudas

Pacientes II

Citogenética Favorable 30Intermedio 92Desfavorable 27No disponible 48

FAB (n)M0 15M1 32M2 37M3 24M4 32M5 17M6 8M7 3Sin clasificar 29

Cuantificación Relativa de la expresión de B-Myb y c- Myb

Calibrador: Niveles CD34+

Muestras: Pacientes LMA

Cuantificación Relativa (δδCt= δCtmuestra- δCtcalibrador )

Métodos

B-Myb

Gus

TaqMan Expression Assay para B-Myb y c-Myb

mRNA obtenido de MO cDNA

Resultados

Expresión respecto CD34+

c-Myb 0,26 (0,01-4,27)

B-Myb 2,46 (0,08-39,79)

P=0,001

LMA DXCD34

c-M

yb (

2e

xp d

elta

Ct)

10

5

0

B-Mybc- Myb

LMA DXCD34

B-M

yb

(2

exp

de

lta

Ct)

2

1

1

0

FAB

m7m6m5m4m3m2m1m0

c-M

yb (

2 e

xp d

elta

de

lta C

t)

2

1

1

0

Resultados

c-Myb -Factores clinico-biológicosp

edad (años) >60<60

Sexo ns

Leucocitos>50000/uL<50000/uL

FAB <0,001

Riesgo Citogenético

FavorableIntermedioDesfavorable

Expresión c-Myb

ns

ns

nsNiveles de c-Myb reducidos :

mieloproliferación con aumento de trombopoyesis

The Embo journal 2009

pedad (años)

>60<60

Sexo ns

Leucocitos>50000/uL<50000/uL

FAB 0,05

Riesgo Citogenético

FavorableIntermedioDesfavorable 0,048

Expresión B-Myb

ns

ns

desfavorableintermediofavorable

B-M

yb

(2

exp

de

lta

de

lta

Ct)

12

8

4

0

FAB

m7m6m5m4m3m2m1m0

B-M

yb

(2

exp

de

lta

de

lta

Ct)

20

15

10

5

0

Resultados

B-Myb- Factores clinico-biológicos

Niveles de B-Myb elevados:

•Asociación de con otros tumores: Neuroblastoma, mama, próstata•Malignidad

Cancer Research 1999, Eur J cancer 2005

Resultados

Valor Pronóstico de las LMA no M3

MuerteResistenciaRC

%

100

80

60

40

20

0

2117

58

Expresión de c-Myb p=0,855

Expresión de B-Myb p=0,109

Resultados

Valor Pronóstico de las LMA no M3

DÍAS

2000150010005000

SL

E

1,0

,9

,8

,7

,6

,5

,4

,3

,2

,1

> Mediana (n=36)

≤ Mediana (n=44)

B-Myb

DÍAS

2000150010005000

SL

E

1,0

,9

,8

,7

,6

,5

,4

,3

> Mediana (n=41)

≤ Mediana (n=39)

c-Myb

Resultados

Valor Pronóstico de las LMA no M3

ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%

Expresión B-Myb 0,039 2,33 (1,04-5,22)

Edad (≤ 60 años) 0,02 3,47 (1,57-7,77)

ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%

Expresión B-Myb 0,043 3,24 (1,04-10,13)

MECANISMOS MODIFICADORES DE LA ACTIVIDAD DE B-Myb

1. miRNA

miRNA

miRNA

miRNA

n=80Expresión

Western

16 15b

miRNAs-cMYB

0,76

1,08

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1,40

0 1 2 3

30a 30b 30c 30d 30e 29a 29b 29c

miRNAs-bMYB

0,11

0,280,14

0,65

0,04

0,34

1,32

0,37

-0,200,000,200,400,600,801,001,201,401,60

0 2 4 6 8 10

MIMICS & INHIBITORS

2. POLIMORFISMO S427G

• PCR Tiempo Real con sondas hibridación

POLIMORFISMO S427G

•Puesta a punto con sondas hibridación

•Grupo control n=46 analizados

Wild type

n=35

Homocigotosn=2

Heterocigotosn=2

HRM región codificante

3. VARIACIONES GENÉTICAS

•14 exones

•Puesta a punto exones: 2, 3, 4, 5, 6, 9,12,14

Mutado

n=35

4. ALTERACIONES GENÓMICAS

•2 pacientes con trisomia en el cromosoma 6 (+6)

EXP: 0.04 y 0.24

c-Myb:

FISH

B-Myb:

n=7 •1 paciente con trisomia en el cromosoma 20 (+20) •3 pacientes con monosomía en el 20 (-20)

EXP: 6.45 EXP: 0.96, 8.31 y 2.03

ALTERACIONES GENÓMICAS

b-MYB

RP11-69I10RP11-354E16

RP11-464F7RP11-822E15*

FISHDeleciones

Traslocaciones