Caso clínicoAutor: Kenneth Walker

El problema

Un grupo de investigadores están interesados enrealizar un estudio ultraestructural sobre elCampylobacter jejuni.

Considerando que hay escasa bibliografía alrespecto, están convencidos de que los resultadosserán un aporte importante.

Para realizar este estudio acuden a la UMA dondeusted es el tecnólogo médico jefe.

La muestra

Le envían un cultivo con las siguientescaracterísticas:

Antigüedad de 48 hrs.

Agar tipo Campy-Back

Con suplementos

Con 5% de sangre

Antecedentes

Bacterias del género Campylobacter son una de las causas más comunes de enfermedad diarreica.

La mayoría de los casos se presentan como aislados o eventos esporádicos, no como parte de brotes reconocidos.

La red de vigilancia FoodNet en USA, indica que cerca de 14 casos son diagnosticados cada año por cada 100.000 personas en el población.

La campilobacteriosis afecta a más de 1,3 millones de personas cada año.

Es mucho más frecuente en los meses de verano pues se favorece de las altas temperaturas.

El microorganismo es aislado de los niños y adultos jóvenes de sexo masculino con más frecuencia.

Aunque la infección no suele causar la muerte, se estima que 76 personas mueren cada año por esta infección.

Campylobacter jejuni

Bacilo con forma de espiral, flagelado, oxidasa (+) y Ureasa (-)

Puede causar enfermedades en los seres humanos y los animales.

La enfermedad humana es provocada en su mayoría por Campylobacter jejuni.

C. jejuni crece mejor a 37°C - 42°C, similar a la temperatura corporal aprox. de un ave.

Las aves son portadoras.

Estas bacterias son frágiles. No pueden tolerar la desecación.

Crecen sólo en lugares con menos oxígeno que el atmosférico (3% - 10% de oxígeno).

Materiales y métodos

De las placas de cultivo, se toman muestras de las colonias bacterianas.

La muestra se suspende y fija en una misma solución durante 2 horas a 4 ° C.

Esta solución se compone de glutaraldehídoal 2,5% en PBS.

Luego se realiza un lavado.

Se realiza una postfijación con solución al 1% de Tetróxido de Osmio.

Las muestras se deshidratan con una batería de etanoles progresivos de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, y 95% por 5 minutos y 100% durante 10 minutos. Todo a temperatura ambiente.

Impregnación en solución de Acetona con Resina EPON 812 en concentración creciente.

Inclusión en EPON 812 (Oukenn, Tokio, Japón).

Corte en Ultramicrotomo.

Preparación Solución original de Sato, 1968

Nitrato de plomo 1grAcetato de plomo 1grCitrato de plomo 1grCitrato de sodio 2grs

“Tinción” con acetato de uranilo al 2% o “Tinción” con acetato de Plomo

Para tinción negativa, las células bacterianas cultivadas se suspenden en agua.

Una gota de la suspensión se aplica a una grilla cubierta de colodión.

Adición de una gota de 1% de Acetato de Uranilo durante 30-60 s.

Reunión con investigadores

Resultados

Reunión con investigadores

TEM micrographs (negative‐stain images; d–f)

Campylobacter jejuni shapes and flagella. Rod-like shape and spiral shape.

Scale bars, 1 um.

Nacen los siguientes problemas:

• ¿Hay dos formas confirmadas para una misma bacteria?

• ¿Será que una es más móvil que otra debido a su forma?

• ¿Doble flagelo? ¿Será más rápida que otras bacterias flageladas?

TEM micrographs(thin‐section images)

unique structures in the flagellate polar regions (polar cup‐like structure) of Campylobacter jejuniof

(a, b) Motile spiral shape.

In (a) TEM micrographs:Polar cup‐like structure at higher magnification are shown in a panel in the right and middle lower corner. Arrow, polar hollow for a flagellum; black arrowhead, polar cup‐like structure; white arrowhead,inner membrane.

Numerals to the right of scale bars representum.

TEM micrographs showing funnel shapes in the flagellate polar regions of Campylobacter jejuni.

(a,b) Negative‐stain images by TEM. (c) Thin‐section image by TEM. Arrow, flagellum; black arrowhead, funnel shape; white arrowhead, membrane in (b) and ring structure in the extreme pole region in (d).

In (a) an electron micrograph at lower magnification is shown in an inset panel in the rightupper corner. (a, b)The inner tubular structure seems to extend from the inner membrane, developing into a funnel shape.

(a–c) The funnel shape opens onto the bacterial cell surface.

Numerals to the right of scale bars represent um.

Referencias

Unique features of the motility and structures in the flagellate polarregion of Campylobacter jejuni and other species: an electronmicroscopic study. Tatsuo Yamamoto 2012

Revista argentina de microbiología. versión On-line ISSN 1851-7617 Rev.argent. microbiol. v.40 n.3 Ciudad Autónoma de Buenos Aires jul./sep.2008

Microbiology: An Introduction (11th Edition) Gerard J. Tortora, Berdell R.Funke, Christine L. Case

Servicio General de Microscopía Analítica y de Alta Resolución enBiomedicina . Servicios Generales de Investigación. Vicerrectorado deInvestigación. Universidad del País Vasco UPV/EHU

Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Rd. Atlanta, GA30333, USA.http://www.cdc.gov/nczved/divisions/dfbmd/diseases/campylobacter/