Histoqumica

HistoqumicaTecnologa medicaUniversidad Mayor

CasoClnico

Carmen Daz Prez08 junio 2015

Introduccin

Se recibe el presente caso clnico:

En un proyecto de investigacin de estudiantes de la carrera de Odontologa se realizaron implantes de material en mandbulas de ratas las que posteriormente fueron sacrificadas para estudio histopatolgicoSe realiz la diseccin de la mandbulas seccionaron y luego fueron fijadas en formaldehido 4% por 5 das a T ambiente, posteriormente, se realiz una descalcificacin y luego cortes histolgicos que se tieron con HE para su anlisisLos cortes resultaron muy difciles de realizar y en ellos se encontraron mltiples artefactosSe envan 4 inclusiones de las muestras mencionadas, para investigar si los problemas de corte y artefactos se deben a un deficiente proceso de descalcificacin

Hiptesis

Probablemente por la informacin obtenida sobre la muestra y su proceso previo esta se encontrara muy dura para el corte, lo que dificultar o har imposible el poder obtener corte de estos, esto debido a que no se describe con que mtodo descalcificador fue tratada y al tratarse de una muestra de mandbula se sabe que esta comprende huesos y cartlagos entre otros, dos tejidos que pueden resultar en una dificultad al momento de cortar, es por esta informacin que se indujo que la muestra presentara una pobre descalcificacin haciendo necesaria realizar esta ,para as poder finalmente obtener cortes ptimos para diagnstico.

Objetivo

El objetivo de este informe de caso clnico es verificar la descalcificacin de las 4 muestras recibidas evaluando la posibilidad de realizar cortes de estas en el micrtomo, as como tambin emplear un mtodo descalcificador en caso de que esto no sea posible, finalmente se realizaran tincin de Hematoxilina-Eosina a todas las muestras para evaluar morfologa y calidad de descalcificacin, ya que si esta fuese muy prolongada o con reactivos muy fuertes podra haberse perdido la tincin nuclear, tambin se realizar a todas las muestras tincin de Alizarina roja con fin de evaluar la presencia de calcio presente en cada uno.

Resultados de corte obtenido de la muestra R2C6 sin descalcificar, teido con H-E, aumento 10x

Hueso compactoAdenomeros de glndulas

Endostio Osteocito en su laguna

Matriz seaGlndulas Musculo esqueltico

Corte obtenido de la muestra R2C6 sin descalcificar, teido con Alizarina roja, aumento 10xDepsito de calcio teido con alizarina rojaArtefacto de corte

Corte de pez, utilizado como control positivo para validacin de la tcnica de alizarina roja (este fue usado tambin como control de todas las dems lamina teidas con esta tcnica) aumento 40xDepsito de calcio en espina dorsal de pez, control +

Materiales y mtodos

Las tres muestras restantes R1C1,R4C3,R3C3,no fue posible obtener cortes completos de estas muestras, la muestras estaban incluidas incorrectamente factor que sumando lo anterior hizo ms dificultoso su corte , por lo que se procedi a desincluir estas muestras e incluirlas nuevamente de forma correcta .

Fotografa de las 4 muestras entregadas en sus correspondientes tacos, se puede apreciar que estas ya se encuentran bastantes desgastadas e incluidas incorrectamente

Fotografa de los 4 tacos en el tanque de tejido del centro de inclusin en proceso de desinculsin.

Una vez incluidas de forma correcta las muestras, esta se desgastaron en el micrtomo con el fin de dejar expuesta la superficie del tejido y aplicarles una solucin descalcificadora a esta, para lo cual se us 100ml de cido frmico al 8%, este se prepar usando 8 ml de cido frmico y 92ml de agua bidestilada,por un tiempo de 20 minutos y luego de esto se lav con agua corriente por 10 minutos para detener la reaccin.

Fotografa de los tacos en solucin de cido frmico 8%para descalcificacin

Luego de este proceso fue posible obtener cortes de los 3 tacos restantes de los que previo a la descalcificacin fue imposible, as como tambin obtener ms cortes del taco R2C6 el que fue el nico del que si se pudieron obtener cortes sin descalcificar, con el fin de comparar como se vera este posterior a este proceso con la tincin de H-E y alizarina roja.

ResultadosCorte de la inclusin R2C6 teida con alizarina post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Corte de la inclusin R4C3 teida con HE post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Hueso compacto Tejido adiposo

Corte de la inclusin R4C3 teida con alizarina roja post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Baja intensidad de color de tincin roja de la alizarina roja, bajo depsito de calcio Artefacto de corte

Corte de la inclusin R3C3 teida con HE post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Corte de la inclusin R3C3 teida con alizarina roja post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

. Corte de la inclusin R1C1 teida con HE post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Corte de la inclusin R1C1 teida con alizarina roja post descalcificacin con cido frmico 8%, aumento 10x

Depsito de calcio teido intensamente de rojo con alizarina roja

Conclusiones

La realizacin de este caso clnico permito evaluar la descalcificacin hecha previamente a las muestras recibidas, y se pudo llegar a la conclusin basados en los resultados tanto como lo es la imposibilidad de obtener cortes, como la visualizacin de depsitos de calcio gracias a la tcnica de alizarina roja, que la descalcificacin realizada a estas era incompleta razn por la cual no se pudo obtener cortes inmediatos de estos, sino que antes se debi someter a una descalcificacin en este caso con cido frmico 8% .

La alizarina roja demostr se ver un buen mtodo para poder cuantificar al menos visualmente la presencia de depsitos de calcio, ya que este colorante deja una tincin de fondo rojo ms plido lo que hace mucho ms fcil poder contrastar esa intensidad con alguna mayor que pueda corresponder a depsitos de calcio, este es uno de los motivos por lo que no se opt por usar el mtodo de Von Cosa