Clase 6
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ANALISIS INSTRUMENTAL
Espectrometría
2014-2015
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Espectroscopia Ultravioleta visible (UV-Vis)
Electrones implicados
1. Electrones p, s y n en moléculas orgánicas 2. Electrones d y f en metales de transición 3. Electrones de transferencia de carga en complejos
metálicos
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Absorción: Ley de Lambert Beer
La ley de Lambert – Beer establece una relación entre la transmisión de la luz y la concentración de la sustancia
A: Absorbancia (adimensional) l : longitud de la celda (cm) C : concentración (M) E: coeficiente de absorción molar (M-1cm-1)
https://www.youtube.com/watch?v=ILeKva55dWY
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Componentes de un espectrofotómetro
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Cromatografía
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o mas compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie y similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
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Cromatografía en capa fina
La fase estacionaria es una placa de vidrio o aluminio recubierta con material adsorbente, el mas común la silica gel. La fase móvil puede ser: éter de petróleo, tolueno, diclorometano, acetato de etilo, ciclohexano,etc
https://www.youtube.com/watch?v=4IyGp6tqFqA
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H igh
erformance
L iquid
C hromatography
P
HPLC
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Fase Móvil – Fase Estacionacia
https://www.youtube.com/watch?v=WO0OsxaPYs8&list=UUAi08vpGsxeDRb20qu2EnRw&index=21
La afinidad con la fase móvil y la fase estacionaria varía con el soluto.
La separación ocurre debido a la diferencia en la velocidad de movimiento
Fuerte Débil
Fase
Movil
Fase
Estacionaria
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La separación esta
basada en la diferencia
de migracion entre la
fases movil y la fase
estacionaria.
Injector
Detector
Columna
Solventes
Pumps
Residuo
HPLC
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11
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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22
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
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Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
![Page 27: Clase 6](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022051821/5695d4ef1a28ab9b02a35b0c/html5/thumbnails/27.jpg)
Fase Móvil
Bomba
Inyector
Horno de la columna
Detector
HPLC
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Injección
to
tR
mAU
tiempo
tR
Cromatograma
to – tiempo muerto
tR- tiempo de retención
Area o altura
proporcional a la
cantidad de
analito
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Aplicaciones del HPLC
• Proteínas
• Péptidos
• Poliestirenos
• Barbituricos
• Corticoides
• Antidepresivos
• HC poliaromáticos • Iones inorgánicos
• Herbicidas
• Lípidos
• Antioxidantes
• Azucares
• Aminoácidos
• Vitaminas