Coloraciones Tricrómicas

COLORACIONES TRICRÓMICAS

Seminario de Histoquímica Especial

DEFINICIÓNColoraciones Tricrómicas

Coloraciones Tricrómicas• Las técnicas tricrómicas se

crean por la necesidad de detectar colágeno y músculo.

• Implican el uso de 3 colorantes, uno generalmente nuclear y otros dos citoplasmáticos y/o extracelulares.

• Permiten como ventaja observar detalles que con las técnicas corrientes no se distinguen (granulaciones, etc.) y dan colores intensos con contrastes muy marcados.

Coloraciones Tricrómicas

• Se plantea que éstas tinciones actúan en base al tamaño molecular del colorante.

• En función de la porosidad de los tejidos que permite el pasaje de las moléculas del colorante tendremos mayor o menor penetración del mismo.

Coloraciones Tricrómicasson

Tinciones especiales que permiten visualizar

claramente las fibras de colágeno tipo I.

Las fibras de colágeno son componentes de los tejidos conectivos, caracterizados por poseer

diferentes tipos de fibras y células contenidas en una sustancia fundamental.

Sostén, transporte, protección y tejidos conectivos especializados en su función, como la sangre, el tejido óseo, cartílago y adiposo.

Tienen función de

Células: fibroblastos, fibrocitos, adipocitos, linfocitos, plasmocitos, etcMatriz extracelular:• fibras: colágenas, elásticas,• sustancia fundamental: agua, electrolitos, glucosaminoglicanos, proteoglucanos.

Coloraciones Tricrómicas El fundamento de estas tinciones depende de varios

factores.

1. Permeabilidad: el colágeno y los otros elementos acidófilos del tejido tienen distintos grados de permeabilidad al paso del colorante.

por ello los colorantes utilizados para las diferentes

tinciones tricrómicas se clasifican en:

Colorantes nucleares: laca de hematoxilina férrica

Colorantes citoplasmáticos: ácido pícrico, orange G, escarlata Biebrich.

Colorantes del conectivo: derivados del anillo trifenilmetano: fucsina ácida, azul de anilina, verde luz SF.

Coloraciones Tricrómicas 2. Afinidad: Debido a los grupos catiónicos presentes en las estructuras . por ello estas fibras tienen afinidad por los colorantes ácidos que están cargados negativamente.

3. Valor del pH a que se utiliza los colorantes: tienen mejor apetencia por las fibras colágenas.

4. Fenómenos de mordiente: estas sustancias actúan como un vínculo entre el tejido y el colorante acrecentando la unión específica entre ambos. Existen numerosos mordientes de distinta naturaleza, entre los más importante: Ácidos: fosfotúngstico, molíbdico, crómico, pícrico.

Tricrómica de Masson

• Coloración utilizada en el tejido conectivo, para identificar células (fibroblastos, adipocitos, condrocitos, etc.) o fibras (colágeno, reticulina, elastina) y en algunas coloraciones hematológicas seleccionadas.

Principio:

• Líquido de Bouin o formol al 10%.Fijación:

• Cortar secciones de parafina de 6 micrómetro de grosor.Microtomía:



1. Desparafinar e hidratar hasta el agua destilada de manera habitual.2. En material fijado en soluciones de formaldehído o alcohólicas se

recomienda hacer un mordentaje previo con líquido de Bouin durante 1 hora a 56-60 ºC o toda la noche a temperatura ambiente.

3. Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.

4. Teñir con hematoxilina férrica durante 10 minutos. Lavar en agua corriente durante 10 minutos.

5. Lavar en agua destilada.6. Teñir con la solución de escarlata-fucsina ácida durante 2-5

minutos.


7. Lavar en agua destilada.8. Tratar con la solución de ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico

durante 10-15 minutos si se va a colorear con la solución de azul de anilina, o en la solución acuosa de ácido fosfotúngstico al 5% durante 15 minutos si se desea teñir con verde luz.

9. Teñir con solución de azul de anilina 15 minutos o con solución de verde luz 5 minutos.

10. Lavar en agua destilada.11. Diferenciar en la solución de ácido acético al 1% durante 3-5

minutos.12. Deshidratar, aclarar y montar.


Resultados:• Fibras de colágeno = Azul.

Por tanto, el tejido conjuntivo se teñirá de dicho color.

• Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo.Se teñirán de rojo la queratina, los glóbulos

rojos y el tejido muscular.• Núcleo celular = Lila, marrón.

Tricrómica de MassonFijación: Líquido de Bouin

o Formol al 10%

Colorante nuclear: hematoxilina férrica.Colorante citoplasmático: Escarlata de Biebrich-fuscina ácida.Mordiente:Ácido fosfotúngsticoColoración de tejido conectivo:Light green / azul de anilina

Resultados:Núcleos

NegroCitoplasma, queratina, fibras musculares y hematíes

RojoColágeno y reticulina

Azul o verde.

Glomerulonefritis proliferativa endocapilar difusa aguda.


Necrosis Hepatica Submasiva

Corte histológico a bajo aumento de un sector de hígado que demuestra áreas con trabéculas hepáticas remanentes, una extensa zona en que se han perdido los hepatocitos (necrosis confluente) con colapso del retículo e intensa hiperemia. A partir de esta zona hay prolongaciones de tejido hepático necrótico y colapso del retículo (necrosis en puente.

Tricrómica de Mallory

Es una técnica para el estudio del tejido conjuntico.

Los cortes se tiñen con fucsina ácida,solución de azul-naranja G de anilina y ácido fosfotungstico.

Las fibras de colágeno aparecen en azul, la fibroglia, neuroglia y fibras musculares aparecen en rojo y las fibrillas de elastina en naranja



Es utilizada para el estudio del tejido conectivo, glándulas, hongos, piel, lengua, etc. Desarrollada por Frank B. Mallory está constituida por tres colorantes.

Fucsina ácida. Colorea de rojo a los núcleos.

Orange G Colorante ácido que se fija al tejido conectivo, citoplasma, músculo, eritrocitos. Tiñe de color rojo a amarillo.

Azul de anilina.

Colorante básico que en presencia del ácido fosfotúngstico tiñe la colágena de color azul.


• Resultados:

Eritrocitos – naranja.

Musculo – rojo.

Colágeno – azul.


SolucionesFucsina ácidaÁcido fosfomolibdico.Solución de MalloryAzul de anilinaOrange G

ResultadosNúcleos

RojoCitoplasma, hematíes, fibras musculares estriadas

Naranja – rojizoMúsculo liso

VioláceoTejido conectivo

Azul

Fijación en dicromato de potasio.Mordentaje previo en dicromato.

Tubos colectores de la médula renal


Tendón y músculo estriado esquelético

Se observa el tendón (tejido conectivo denso modelado) de color azul y el músculo estriado esquelético de color rojo oscuro. La coloración tricrómica de Mallory sirve para visualizar las fibras colágenas

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