7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

1/11

Introduccin

Para determinar las causas de las fallas o alteraciones inmunolgicas disponemos numerosas tcnicas de laboratorio. Tambin por medio de pruebas de biologa molecuse puede evaluar en mayor detalle el funcionamiento de una clula, de un sistema determinar anormalidades en un mecanismo especco.

Evaluacin de la inmunidad innata

Las respuestas a la quimiotais, la fagocitosis, la in!amacin, la funcin de los "#s, y sistema del complemento pueden ser anali$ados de forma independiente.

%valuacin de la quimiotais

La movili$acin de las clulas P&"s 'acia los focos de in!amacin es de grimportancia en la defensa del 'usped contra la infeccin puesto que tienen capacidad de ingerir y destruir partculas etra(as. %l movimiento puede sespont)neo en ausencia de estmulos o dirigido 'acia un gradiente de concentracide productos qumicos *factores quimiot)cticos+, originados en el foco in!amato*quimiotais+.

on el empleo de la c)mara de -oyden se mide la magnitud de migracin de P&"frente a un estmulo quimiotactico

Las c)maras aisladas por ltros son 'erramientas adecuadas para determinar c

eactitud el comportamiento de quimiotais.Las clulas mviles se colocan en la c)mara superior, mientras que con la sustancia ensayo disuelta se llena la primera c)mara inferior. %l tama(o de las clulas mvilque son investigadas determinan el tama(o del poro del ltro, y esto es esencial paelegir un di)metro que permite una transmigracin activa.

na de las patologas que afectan la quimiotais es el sndrome de 'dia/01igasdonde las gigantes vesculas intracelulares in'iben la normal migracin de las clulas

La quimiotais se encuentra aumentada en la psoriasis, artritis y disminuida en esclerosis m2ltiple

Prueba de la agarosa

3obre una capa de agarosa se perforan 4 oricios equidistantes uno del otro. %n central se deposita suspensin de clulas del paciente y en los laterales sustanciquimioatractantes y bu5er control. La distancia de migracin de clulas 'acia el poque contiene la sustancia quimioatractante es comparada con la distancia migracin de clulas 'aca con el bu5er control

6enta7as

EVALUACION DEL ESTADOINMUNOLOGICO

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

2/11

La medida de la quimiotais ba7o agarosa tambin ofrece varias venta7as comparacin con la c)mara de -oyden8 es m)s r)pida, f)cil de cuanticar, requiere dpeque(as cantidades de sangre y se utili$a equipo desec'able.

9dem)s est) libre de las irregularidades que se encuentran utili$ando niveles lquido desiguales en dos c)maras o las variaciones de serie de los ltros.

6entana cut)nea de :ebuc/

%s una prueba que permite establecer si la llegada de P&"s y &acrfagos ocurre cantidad y frecuencia adecuada.

%valuacin dela fagocitosis

%s necesario cuanticar el n2mero de P&"s y &acrfagos, as como su funcionalidad.

Las neutropenias pueden ser producidas por granulocitopenia severa congnita, neutropencclica, se produce una eosinolia en infecciones parasitarias

:ecuento de glbulos blancos y formula leucocitaria

Pueden orientar 'acia posibles deciencias, permite detectar agranulocitosleucopenias. La presencia de un adecuado n2mero de neutrlos no garanti$an qestos cumplan su funcin de defensa, eisten varias tcnicas para detectar el ndide fagocitosis.

;uimioluminiscencia

Fundamento:

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

3/11

%l mtodo se fundamenta en una reaccin de aglutinacin de una suspensin partculas de l)te poliestireno sensibili$adas con anticuerpos altamente puricados anti=protena =reactiva. La aglutinacin es visible a una concentracin de P: esuero igual o superior a > mg?L

La protena reactiva suele estar elevada en el lupus eritematoso y en la artitreumatoidea

Prueba de liberacin de la 'istamina

3e eval2an por las tcnicas de @sler y ampbell que mide la degranulacin baslos.

%sta prueba cuantica y anali$a cuanto se eleva la 'istamina ante el estmulo de alergeno

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

4/11

sedimento que est) formado principalmente por granulocitos y eritrocitos 'a migradotravs de la gradiente de densidad que es mayor al del coll 'ypaque, encima estarotra capa que sera el coll 'ypaque que es menos denso, y encima estara otra cana opalescente que seran las &3P, nalmente sobre esa capa estara las plaquety el plasma que con futuros lavados se estaran removiendo para tratar de obtensolo los linfocitos.

%n la diabetes mellitus tipo G los "/s se encuentran disminuidos

%valuacin del sistema del complemento 9ctividad 'emoltica total

La investigacin de la actividad del complemento es importante en el diagnsticotratamiento de enfermedades tales como l L%3 y la artritis reumatoide.

1asta el momento, el ensayo m)s utili$ado para el complemento total 'a sido basado en la 'emlisis mediada por complemento de 'emates sensibili$ados canticuerpos. %n este mtodo, se necesitan diluciones apropiadas del suero para medlas lisis de las clulas indicadoras.

1EH'ace referencia a la actividad del complemento que causa un EH de 'emolisen una suspensin de eritrocitos

Determinacin de la actividad emol!tica de la v!a cl"#ica del #i#tema dcom$lemento %C&'():La 'emolisis de eritrocitos de carnero mediada por anticuerpespeccos de la clase Ig& en presencia de complemento, fue utili$ada como la pruebde la actividad del complemento el suero 'umano.

%sta tcnica identica una reduccin de la funcin pero no identica qu componenespecco de la va cl)sica est) involucrado.

Determinacin de la actividad emol!tica de la v!a alterna del #i#tema dcom$lemento %A&'(): La lisis de eritrocitos de cone7o en presencia de complemen'umano se us para evaluar la actividad de la va alterna del sistema de complemenen el suero 'umano.

3e 'a desarrollado un mtodo sencillo que no requiere diluciones del suero, eritrocitos.

Auto*it C&'(:%s un inmunoensayo, en el que se utili$a tecnologa de los liposom*vescula esfrica con una membrana compuesta de una doble capa de fosfolpidopara la determinacin del complemento total 1EHen suero 'umano, se trata de u

tcnica 'omognea que puede ser completamente automati$ada.

+rinci$ioJ uando la muestra se me$cla con los liposomas y el sustrato, lanticuerpos presentes en el reactivo se combinan con el P presentes en el reactivo.

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

5/11

%l incremento de absorbancia es proporcional a la actividad total del complemen*1EH+ en la muestra.

,eaccin en-im"tica:

=fosfato K "9< =Dluconolactona=>=fosfato K "9

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

6/11

%studio de itoquinas%iste un 7uego de reactivos comerciales que permiten detectar y cuanticar cada ude las diferentes citosinas, como la itometra de !u7o

Inmunidad 'umoral

3e 'acen acudiendo a diferentes mtodos. nos cuantican inmunoglobulinas, otreval2an la reaccin 9g=9c, otras sirven para detectar concentraciones ba7as determinadas protenas.

&edicin de Inmunoglobulinas

%lectroforesis.=La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas seg2n la movilidde stas en un campo elctrico. La separacin puede reali$arse sobre la superc'idratada de un soporte slido *p. e7., electroforesis en papel o en acetato dcelulosa+, a travs de una matri$ porosa *electroforesis en gel+, o bien en disoluci*electroforesis libre+.

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

7/11

procedimiento que se basa en la dispersin de una radiacin que atraviesa lpartculas. 3u diagnostico es importante en alergias

Evaluacin de la# reaccione# Ant!1eno6 Anticuer$o

Las reacciones antgeno anticuerpo deenden al organismo de los efectticos o invasivos de antgenos, para entender lo que ocurre Nin vivoO importante ver y saber lo que ocurre N in vitroO

Los mtodos Nin vitroO permiten primero, buscar e identicar si 'ay o no anticuerpo y en segundo lugar cuanticarlo. %ntre estos mtodos tenemosJ

:eacciones de precipitacin

%n este caso el antgeno es una molcula soluble y al ponerse una solucin dmismo, en contacto con los anticuerpos que origin, se forman comple7os 9g=que al insolubili$arse en su mayor parte, dan una reaccin de precipitacin. %sto da en G etapas, la primera se desarrolla r)pidamente form)ndose los comple79g=9c, esta etapa est) in!uenciada muy poco por la T, la concentracin electrolitos y la agitacin. %n la segunda etapa los comple7os se agregan formanmicelas o redes que al alcan$ar determinado tama(o precipita. %sto se acelera caumento de la T y concentracin de electrolito *%sta es muc'o m)s lenta+

Inmunodifusion doble *ouc'terlony+

La inmunodifusin doble de @uc'terlony *Prueba cualitativa+ es un mtoinmunolgico sencillo y rutinariamente usado en el laboratorio clnico para deteccin de antgenos o anticuerpos en una muestra biolgica.

onsiste en colocar en una placa de Petri 9gar AE al cual se le reali$perforaciones en forma de pocillos. 3e coloca un etracto de clulas 'uman*cctel de 9gs 1umanos+ naturales en el pocillo del centro. %l suero del paciente

colocado en una de los pocillos eteriores y luego se de7a por BM 1oras para revelado

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

8/11

%ste mtodo fue utili$ado de manera sistem)tica en inmunologa clnic

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

9/11

contra las 'emaglutininas del microorganismo *in'ibicin de la 'emaglutinacin3uelen ser pruebas especcas de serotipo o subtipo y bastante sensibles

Las pruebas de 'emaglutinacin se utili$an con patgenos que poseen escapacidad, generalmente virus. %l e7emplo m)s cl)sico es el diagnstico de in!uen$a.

3e utili$a esta prueba para la deteccin de mononucleosis infecciosa y partcuvirales

Ci7acin del complemento

La 7acin del complemento se basa en la capacidad del complemento para unira los comple7os antgeno=anticuerpo. La prueba incluye la adicin de eritrocitsensibili$ados con una 'emolisina. 3i el suero posee anticuerpos especcos, se el complemento y no puede unirse a la 'emolisina para lisar los eritrocitos. 3trata de una prueba muy especca.

La reaccin antgena anticuerpo activa el complemento y lo consume, lo cupermite indagar si en un suero eiste determinado anticuerpo

na de las aplicaciones clnicas m)s importantes de la 7acin del complemenes la prueba de Rasserman empleada en el diagnstico de slis

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

10/11

3e utili$a para detectar marcadores tumorales

%nsayo inmunoen$imatico * %LI39+3e basan en evidenciar la :S antgeno anticuerpo a travs de la utili$acin una antigamaglobulina 'umana marcada con una en$ima y la utili$acin un sustrato que va a dar una reaccin de color.%l %LI39 indirecto es el mtodo de eleccin para detectar la presencia anticuerpos sricos contra el virus de la inmunodeciencia 'umana *6I1agente causante del sndrome de inmunodeciencia adquirida *3I

7/21/2019 Copia de Seguridad de Evaluacion Del Estado

11/11

s tras cada fase de replicaciny, a continuacin, de7ar que las 'ebras de 9