DEFECTOS GENÉTICOSDEFECTOS GENÉTICOS

DE DEFICIENCIA DE CREATINADE DEFICIENCIA DE CREATINA

Becaria: Bioq. Adriana FochesatoBecaria: Bioq. Adriana Fochesato

Directora: Dra. Dora MartínezDirectora: Dra. Dora Martínez

Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas

(CEMECO(CEMECO))

Deficiencia de CreatinaDeficiencia de Creatina

Constituyen un grupo de enfermedades Constituyen un grupo de enfermedades provocadas por alteraciones en laprovocadas por alteraciones en la síntesissíntesis y en y en

el el transportetransporte de Creatina de Creatina

Glicina

1. Síntesis de creatina (Hígado, páncreas)

Arginina

Guanidinoacetato

GAMTS-adenosilmetionina

S-adenosilhomocisteína

Ornitina

Creatina CRTR

Creatina

2. Captación de creatina(cerebro, músculo)

3. Sistema creatina/creatina fosfato(cerebro, músculo)

Creatina/fosfatoCK

Creatinina

4. Creatinina urinaria

Conversión no-enzimática

Conversión no-enzimática

AGAT

ATP ADP

VIA METABOLICA DE CREATINA

Deficiencia en GAMT (dGAMT)Deficiencia en GAMT (dGAMT)

Deficiencia en transportador (dCRTR)Deficiencia en transportador (dCRTR)

Deficiencia en AGAT (dAGAT)Deficiencia en AGAT (dAGAT)

PATOLOGIAS HEREDITARIAS EN LA BIOSINTESIS DE LA CrPATOLOGIAS HEREDITARIAS EN LA BIOSINTESIS DE LA Cr

Glycina

1. Síntesis de creatina (Hígado, páncreas)

Arginina

Guanidinoacetato

GAMT

S-adenosilmetionina

S-adenosilhomocisteína

Ornitina

Creatina CRTR

Creatina

2. Captación de creatina(cerebro, músculo)

3. Sistema creatina/creatina fosfato(cerebro, músculo)

Creatina/fosfatoCK

Creatinina

4. Creatinina urinaria

Conversión no-enzimática

Conversión no-enzimática

AGAT

ATP ADP

DEFECTOS METABOLICOS DEFECTOS METABOLICOS EN LA DEFICIENCIA DE CREN LA DEFICIENCIA DE CR

d-AGAT d-GAMT d-CRTR

Tipo de herencia AR AR Ligada-X

Retraso del desarrollo + Retardo mental +

Conducta autista - +

Retraso en el lenguaje + +

Convulsiones + +

Hipotonía – + -

Signos piramidales y extra- - + - piramidales

Incremento circunferencia - - + cefálica

Características Clínicas de los DGDC

ESTUDIOS COMPLEMENTARIOSESTUDIOS COMPLEMENTARIOS

d-AGAT d-GAMT d-CRTRd-AGAT d-GAMT d-CRTR EspectroscopíaEspectroscopía de resonancia magnéticade resonancia magnética

HH11 “in vivo” ( ERM H “in vivo” ( ERM H1 1 ))

Cr/CrP AusenteAusente AusenteAusente AusenteAusente

GAA NormalNormal

RMN de cerebroRMN de cerebro (Globus pallidus) AnormalAnormal

EEGEEG

AnormalAnormal AnormalAnormal

AnormalAnormal AnormalAnormalAnormalAnormal

Contribuir desde la bioquímica al desarrollo de un Contribuir desde la bioquímica al desarrollo de un nuevo capítulo de la Genética Médicanuevo capítulo de la Genética Médica, relacionados a , relacionados a los severos defectos innatos de la biosíntesis y los severos defectos innatos de la biosíntesis y transporte de la Creatina, dentro de un contexto transporte de la Creatina, dentro de un contexto multidisciplinario de multidisciplinario de Investigación Clínica.Investigación Clínica.

OBJETIVOS GENERALESOBJETIVOS GENERALES

OBJETIVOS ESPECÍFICOSOBJETIVOS ESPECÍFICOS

Cumplimentar el algoritmo de los DGDC, a través de los siguientes objetivos:

1.1. Analizar el perfil bioquímico de los presuntos Analizar el perfil bioquímico de los presuntos sujetos involucrados.sujetos involucrados.

2.2. Confirmar el diagnóstico del probando e Confirmar el diagnóstico del probando e identificar portadores.identificar portadores.

3.3. Difundir a la comunidad médica y científica Difundir a la comunidad médica y científica los resultados obtenidos.los resultados obtenidos.

Determinación de GAA, Cr y Crn en orina

CompatibilidadCompatibilidadFenotípicaFenotípica

Determinar GAA en plasmaDeterminar GAA en plasma

ERM HERM H11

dAGATdAGATdGAMTdGAMT

Estudios Enzimáticos yEstudios Enzimáticos yMolecularesMoleculares

Determinar Cr en plasmaDeterminar Cr en plasmaERM HERM H11

dCRTRdCRTR

Estudios de captación de Cr y Estudios de captación de Cr y MolecularesMoleculares

GAA GAA GAA GAA NNCr/Cr/Crn Crn

GAA GAA NNCr/CrnCr/Crn NN

Investigar otras Investigar otras patologíaspatologías

Perfiles de los Perfiles de los DGDCDGDC

RESULTADOS

Se analizaron 93 muestras de orinaSe analizaron 93 muestras de orina

• Método Cualitativo Método Cualitativo SakaguchiSakaguchi: 3,09 % Positivo: 3,09 % Positivo

• Método Cuantitativo por Método Cuantitativo por Cromatografía Gaseosa/FID: Cromatografía Gaseosa/FID:

1 mmol/molCrn; 2 no detectable; valores de referencia: GAA:2 – 220; Cr: 6 – 1208; 3 Cr/Crn: 0.006 – 0.72 (Verhoeven et al.,2005).

Pacientes Grupo

I

Grupo

II

Grupo III

Grupo

IV

n= 93 81 4 1 7

GAA1 61.3 ± 45.7 N.D.2 268 74.2 ± 51.6

Cr 397.9 ± 386.4 0.71 ± 0.16 497 2145.0 ± 1671.3

Cr/Crn3 0.49 ± 0.47 0.19 ± 0.11 0.49 2.8 ± 4.1

Diagnóstico

Presuntivo

Improbable

DGDC

d-AGAT d-GAMT d-CRTR

RESULTADOS

FENOTIPO BIOQUIMICOFENOTIPO BIOQUIMICO

d-AGATd-AGAT d-GAMTd-GAMT d-CRTRd-CRTR

Cr/CrnCr/Crn

GAAGAA

CrCr

N

Metabolitos Metabolitos en orinaen orina

PERFILES CROMATOGRÁFICOS

6 8 10 12 14 16 18 20 22

5000

6000

7000

8000

9000

1.0e4

1.1e4

1.2e4

1.3e4

1.4e4

1.5e4

Sig. 1 in C:\HPCHEM\1\DATA\1D9M

AR2.D

Time (min.)

2

1

6 8 10 12 14 16 18 20 22

3000

4000

5000

6000

7000

8000

9000

1.0e4

1.1e4

1.2e4

1.3e4

Sig. 1 in C:\HPCHEM\1\DATA\1D5JUN5.D

Time (min.)

1

2

6 8 10 12 14 16 18 20 224000

5000

6000

7000

8000

9000

1.0e4

1.1e4

1.2e4

1.3e4

1.4e4

Sig. 1 in C:\HPCHEM\1\DATA\1D22SEP8.D

Time (min.)

1

2

6 8 10 12 14 16 18 20 224000

5000

6000

7000

8000

9000

1.0e4

1.1e4

1.2e4

1.3e4

1.4e4

Sig. 1 in C:\H

PCH

EM\1\D

ATA\1D

27DIC1.D

Time (min.)

1

2

6 8 10 12 14 16 18 20 22

4000

5000

6000

7000

8000

9000

1.0e4

1.1e4

1.2e4

1.3e4

Sig. 1 in C:\HPC

HEM

\1\DATA

\1D3A

GO

5.D

Time (min.)

1

2

Testigos

Referencias: 1: Creatina, 2: guanidinoacetato

Grupo I Perfil normal Grupo II Perfil d-AGAT

Grupo III Perfil d-GAMT Grupo IV Perfil d-CRTR

Confirmación del diagnóstico presuntivoConfirmación del diagnóstico presuntivo

Medir la actividad enzimática de AGAT, Medir la actividad enzimática de AGAT, GAMT y la funcionalidad del GAMT y la funcionalidad del transportador.transportador.

Realizar el análisis molecular para Realizar el análisis molecular para identificar el gen mutado.identificar el gen mutado.

La importancia de este proyecto estriba en la La importancia de este proyecto estriba en la disponibilidad de una disponibilidad de una terapia eficazterapia eficaz y de y de muy bajo muy bajo costocosto para las deficiencias de para las deficiencias de GAMTGAMT y y AGATAGAT, que de , que de no ser detectadas a tiempo conducen a una no ser detectadas a tiempo conducen a una discapacidad psico-motora-emocional invalidantediscapacidad psico-motora-emocional invalidante.. Resulta importante además, el desarrollo de un área Resulta importante además, el desarrollo de un área genética no explorada con anterioridad en nuestro genética no explorada con anterioridad en nuestro medio y de gran impacto asistencial y académico.medio y de gran impacto asistencial y académico.

DEFECTOS GENÉTICO DE DEFICIENCIA DE CREATINADEFECTOS GENÉTICO DE DEFICIENCIA DE CREATINA

Muchas

Gracias !

MUCHAS

GRACIAS !

INTERRELACIONES METABÓLICAS

Se analizaron en orina los metabolitos de pacientes Se analizaron en orina los metabolitos de pacientes nosológicamente definidos:nosológicamente definidos:

ACIDURIA METILMALÓNICA: 2 pacientes con Cr ACIDURIA METILMALÓNICA: 2 pacientes con Cr valor normal y GAA no detectable.valor normal y GAA no detectable.

ACIDURIA PROPIÓNICA: 1 paciente, Cr no ACIDURIA PROPIÓNICA: 1 paciente, Cr no detectable; GAA no detestabledetectable; GAA no detestable

DEFICIENCIA DE ORNITINA DEFICIENCIA DE ORNITINA TRANSCARBAMILASA (OCT): 1 paciente, Cr valor TRANSCARBAMILASA (OCT): 1 paciente, Cr valor normal; GAA valor normal.normal; GAA valor normal.