UNIVERSIDAD DEL SANTAFACULTAD DE CIENCIASEAP MEDICINA HUMANA

PRACTICA 4DEGRADACIN ENZIMATICA DE LA SACAROSA

I. INTRODUCCIN

Algunas de las enzimas son protenas sencillas, la mayora son protenas complejas, estos ltimos pueden descomponerse en una porcin proteica y otro elemento orgnico no proteico (grupo prosttico); en cada caso la reaccin catalizada enzimticamente depende de una combinacin transitoria entre la enzima y el sustrato, o el compuesto cuya reactividad es acelerada por la enzima. Esta combinacin transitoria se denomina COMPLEJO-ENZIMA-SUSTRATO (E-S). Hoy sabemos que hay al menos 22 tipos de enzimas son responsables de la transformacin de los alimentos que ingerimos en sustancias ms simples capaces de pasar al torrente sanguneo a fin de ser utilizadas. Enzimas capaces de acelerar las reacciones qumicas de la digestin ahorrando as una importante cantidad de energa y tiempo. La clula viva puede ser considerada termodinmicamente como un sistema abierto; la cual se perpeta y se replica a si misma por medio de reacciones orgnicas encadenadas por catalizadores que la misma clula produce. La totalidad de las reacciones encadenadas se denomina metabolismo, cualquier participante en una reaccin metablica, sustrato, intermediario o producto, se denomina metabolito. El metabolismo puede ser dividido en dos categoras: ANABOLISMO procesos concerniente con la biosntesis de molculas orgnicas complejas y CATABOLISMO, procesos concernientes a la degradacin de molculas orgnicas complejas, con la generacin simultnea de energa. Enzimas diferentes catalizan la hidrlisis y la sntesis del almidn y glucgeno; Alfa amilasa cataliza la hidrlisis de los enlaces alfa glucosdicos, produciendo glucosa, maltosa, maltotriosa y dextrina. B-amilasa cataliza la hidrlisis de los enlaces alfa 1 - 4 glucosdicos produciendo maltosa a partir del extremo no reductor. El alfa amilasa y Beta- amilasa no pueden hidrolizar los enlaces alfa 1 - 6 glucosdicos; es necesario del enzima amilo 1,6 glucosidasa presente en los animales, plantas y microorganismos. La hidrlisis de estos enlaces se puede seguir mediante el almidn o el glucgeno por la reaccin de iodo, o midiendo el producto formado mediante los azucares reductores, con los reactivos de Fehling y Benedict.Los disacridos los encontramos en muchas formas en los organismos vivos; entre ellos tenemos: sacarosa, lactosa, maltosa, etc. Los cuales se clasifican en: Azucares reductores como la maltosa (Glucosa + glucosa, procedente de la hidrlisis parcial del almidn y del glucgeno) y la lactosa (Galactosa + Glucosa) es el azcar de la leche; y no reductores como la sacarosa (Glucosa + Fructuosa) es el azcar de mesa procedente de la caa de azcar y remolacha. Los monosacridos son aldehdos o cetonas polihidroxilados, los monosacridos que tienen un grupo aldehdo se denomina aldosas y los que contienen un grupo cetnico - cetosas.. Las aldosas y cetosas en medio alcalino, son capaces de oxidarse a cidos aldnicos, con lo que pueden reducir determinados reactivos. Son muy comunes las reacciones de reduccin del Ion cprico (azul intenso en medio alcalino) a Ion cuproso (rojo ladrillo), insoluble. Las conocidas reacciones de FEHLING y de BENEDICT. En solucin alcalina y en caliente la glucosa reduce fcilmente al ion cprico a cuproso (xido cuproso), en un segundo paso el agregado de solucin fosfomolbdica es reducido por el ion cuproso con formacin de xidos inferior de molibdeno los cuales producen un color azul adecuado para las mediciones espectrofotomtricas.

CAPACIDAD: Comprueba la accin enzima de la sacarasa sobre la sacarosa, explicando mediante reacciones qumicas dicha accin e identificando los productos que se forman.

II. MATERIALES

Material biolgico Suspensin de levadura al 10%

Reactivos 200 ml de solucin de sacarosa 0.25 M 200 ml de Reactivo de Benedict 200 ml. de solucin Buffer Acetato 0,2M pH 4.8

Materiales 12 Tubos de Ensayo 16x15 4 Mecheros 4 Pinzas 4 Gradillas

Pipetas de 5 ml. 4 Pipeteadores Equipos Equipo de Bao Mara a 37C

III. PROCEDIMIENTO Armar el siguiente set de tubos.

IV. RESULTADOS:

TUBOCOLORACINPRODUCTO

INaranja ladrilloxido cuproso, glucosa y fructuosa

IIVerde AzuladoSolucin de Benedict, levadura al 10%, agua destilada y solucin buffer de acetato

IIIAzul claroSolucin buffer de acetato, sacarosa al 0.25 M, agua destilada y solucin Benedict

V. CUESTIONARIO 1. Represente la reaccin enzimtica de la degradacin de la sacarosa por accin de la sacarasa.

sacarasa

++ H2O

2. Mediante una reaccin qumica explique la aparicin de la coloracin rojo ladrillo El reactivo de Benedict se usa para reconocer azcares reductores que tienen el OH anmero libre. Puede reducir el Cu+2 (color azul) a Cu2O (naranja ladrillo)Cu+2 (Ion cprico) Cu+1 (Ion cuproso)

La reaccin de Benedict es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada.Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medioalcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin producida va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la cantidad de cobre reducido

3. Grafique la estructura qumica de los azucares reductores y no reductores

AZUCARES REDUCTORES: Los Azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo (grupofuncional) intacto, y que atravs del mismo pueden reaccionar conotras molculas. Por ejemplo la glucosa.Los azcares reductores provocan la alteracin de lasprotenas mediante la reaccin de glucosilacin no enzimtica tambin denominada reaccin de Maillard o glicacin.

GLUCOSA

AZUCARES NO REDUCTORES: Los azcares No Reductores son aquellos que se unen por enlaces glucosdicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2 monosacridos iguales o diferentes se unen forman un disacrido, los Disacridos por condensacin liberan una molcula de agua y son azcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH ) de una hexosa se combina con el grupo Aldehdo ( CHO ) de otra hexosa liberando 1 molcula de H20, por ejemplo: la Sacarosa ( glucosa + fructosa ) Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa), Trehalosa, etc.