DeterminaciDeterminacin de n de Hemoglobina, Hematocrito, y Hemoglobina, Hematocrito, y Constantes Corpusculares Constantes Corpusculares

Lic. T.M. Justo T. Alegre Torres

DeterminaciDeterminacin de n de HemoglobinaHemoglobina

HemoglobinometrHemoglobinometraa

MMtodo recomendado por el ICSH: todo recomendado por el ICSH: MediciMedicin fotomn fotomtrica de trica de HiCNHiCN

Otros mOtros mtodos deben ser ajustados con todos deben ser ajustados con steste

- Requerida para la calibracin.

- Necesaria para asignar valores a materiales

control.

- Necesaria para evaluar instrumentos o

mtodos alternativos.

- Aplicable en el laboratorio de rutina para

diagnstico y monitoreo de enfermedades.

La determinaciLa determinacin de n de HbHb es:es:

Fundamento:

Hb(Fe+2) + K3Fe(CN)6 Hi(Fe+3) + K4Fe(CN)6

Hi(Fe+3) + CN- Hi(Fe+3)CN

Lectura a absorbancia a 540 nm.

MTODO DE CIANMETAHEMOGLOBINA

Tcnica:

Dilucin 1/ 200 / 200 -- 1/ 2511/ 251

20 20 LL de sangre en 5 ml de reactivode sangre en 5 ml de reactivo

METODOSMETODOS

MMtodo de Oxihemoglobina: todo de Oxihemoglobina: El compuesto lisa los GR liberando la El compuesto lisa los GR liberando la HbHb, el ox, el oxgeno geno convierte convierte HbHb en en oxiHboxiHb, la cual se puede medir por el , la cual se puede medir por el color mediante color mediante ptica o ptica o fotocolorfotocolormetrometro..

MMtodo de todo de LovibondLovibond. . 0.05 ml de sangre en 10ml de soluci0.05 ml de sangre en 10ml de solucin Diluyente n Diluyente (carbonato de sodio o de amoniaco) .(carbonato de sodio o de amoniaco) .Si se utiliza Si se utiliza espectofotespectofotmetrometro la densidad de la solucila densidad de la solucin n es medida a 540 es medida a 540 nmnm utilizando blanco de agua.utilizando blanco de agua.Si la mediciSi la medicin es n es ptica usar el comparador de ptica usar el comparador de LovibondLovibond..

H

MMtodos (secundarios) Haldane y todos (secundarios) Haldane y SahliSahli::

MMtodos todos pticos, la primera convierte el monpticos, la primera convierte el monxido de xido de carbono en carbono en carboxihemoglobinacarboxihemoglobina por accipor accin de una n de una solucisolucin de amonio la variacin de amonio la variacin de color es n de color es comparada con una tabla. comparada con una tabla.

El segundo mEl segundo mtodo convertirtodo convertir la la HbHb en hematina en hematina cida por accicida por accin del n del cido clorhcido clorhdrico produciendo drico produciendo variacivariacin de color en una tabla. n de color en una tabla.

HEMATOCRITOHEMATOCRITO

DeterminaciDeterminacin del Hematocriton del Hematocrito

MMtodo recomendado por todo recomendado por CLSI(H7CLSI(H7--A2):A2):

MicrohematocritoMicrohematocrito

Volumen ocupado por los glbulos rojos en relacin al volumen total de sangre en una muestra de sangre capilar o venosa.

DeterminaciDeterminacin del hematocriton del hematocrito

PCV: volumen ocupado por los glbulos rojos en relacin al volumen total de sangre en una muestra de sangre capilar o venosa.

La relacin es medida luego de una correcta centrifugacin y expresada en fraccin decimal

La mediciLa medicin del PCV por n del PCV por centrifugacicentrifugacin es:n es:

Requerida para procesos de calibracin.

Aplicable a la evaluacin de otros mtodos alternativos.

Aplicable en el laboratorio de rutina para propsitos diagnsticos y teraputicos.

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

VENTAJAS:

Tiempo de determinacin corto

Requiere de poca cantidad de sangre

Menor atrapamiento de plasma gracias a la mayor fuerza de centrifugacin

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

DESVENTAJAS:

Riesgos de infecciones:

- ruptura de los microcapilares con formacin de aerosoles

- contaminacin con sangre del exterior del capilar

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Muestra:

Aproximadamente 50 L de sangre venosa en EDTA (1,5 - 1,8 mg/ml) Sangre recolectada directamente en capilares con heparina (< 7 unidades por tubo capilar)

La sangre debe ser centrifugada dentro de las 6 hs de recolectada, almacenada a 22 44CC

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Tcnica:

1. Cargar los tubos, por duplicado, por capilaridad, 5,5 a 6,0 cm (long = 7,5 cm). Limpiar. 2. Sellar con selladores comerciales a tal fin, no con calor.

3. Centrifugar 5 minutos en centrifugas de: radio > de 8 cm, alcance velocidades de 10000 a 15000 g sin exceder en ese tiempo los 45C.

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Tcnica:4. Realizar duplicados que no deben diferir en ms de 0,015

5. Las lecturas deben realizarse dentro de los 10 minutos de la centrifugacin, el mtodo de lectura puede variar, pero verificar la reproducibilidad de las lecturas ( 0,0025)0,0025).6. Calcular el PCV como:

long de la columna de GR (mm)longitud de las clulas + el plasma (mm)

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Expresin de resultados:

Como fraccin decimal

Intervalo de referencia:HOMBRES MUJERES

RAZA INTERVALO RAZA INTERVALONEGRA 0,341 0,477 NEGRA 0,335 0,431

BLANCA 0,360 0,482 BLANCA 0,347- 0,447

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Causas de error:

En la toma de muestra:

xtasis prolongado del torniquete hemoconcentracinDilucin con lquido intersticial o formacin de cogulo

Hemlisis

Mezcla inadecuada del anticoagulante

En la tcnica:

Incorrecto sellado o llenado de los capilares

MediciMedicin del PCV por centrifugacin del PCV por centrifugacinn

Causas de error:

En la lectura:

Errores de paralaje o por inclusin de la capa de blancos y plaquetas como parte de la columna de glbulos rojos

MediciMedicin del PCV por automatizacin del PCV por automatizacinn

A partir del VCM y del recuento de GR:

PCV = VCM (fL) x N glbulos rojos (x1012/L)

HematocritoHematocrito

Calculado VCM x NCalculado VCM x Nmero de GRmero de GR

Medido como sumatoria de volMedido como sumatoria de volmenes en menes en una cantidad de muestra fija.una cantidad de muestra fija.

Plasma AtrapadoPlasma Atrapado: : El mito?El mito?

Hematocrito ManualHematocrito Manual-- Anteriormente se explicaba Anteriormente se explicaba la diferencia entre el hematocrito reportado por la diferencia entre el hematocrito reportado por un analizador y el hematocrito manual por un analizador y el hematocrito manual por medio del concepto de plasma atrapado en la medio del concepto de plasma atrapado en la columna capilar columna capilar

Pero se encontrPero se encontr que en realidad sque en realidad slo hay lo hay aproximadamenteaproximadamente 1%1% de plasma atrapado en la de plasma atrapado en la columna capilarcolumna capilar

Plasma AtrapadoPlasma Atrapado: : RealidadRealidad

El tipo de vidrio utilizado y el El tipo de vidrio utilizado y el didimetro del tubo utilizado en el metro del tubo utilizado en el hematocrito manual son hematocrito manual son suficientes para producir la suficientes para producir la cantidad de deshidratacicantidad de deshidratacin de las n de las cclulas en el fondo del tubo para lulas en el fondo del tubo para compensar el atrapamiento que compensar el atrapamiento que ocurre en la parte superiorocurre en la parte superior

CONSTANTES CORPUSCULARESCONSTANTES CORPUSCULARES

EL ERITROCITOEL ERITROCITO

GRACIASGRACIAS

Justo T. Alegre TorresJusto T. Alegre Torres

jusaleto@hotmail.comjusaleto@hotmail.com