Diagnóstico General de las Enfermedades Infecciosas

¿Qué debe esperar un clínico del laboratorio de Microbiología?

• Información para una decisión clínica.• Normas de recogida y transporte de

muestras.• Identificación de microorganismos.• Sensibilidad a los antimicrobianos.• Control de antibioterapia.• Procesamiento y respuesta rápida.• Información actualizada.

Diagnóstico Microbiológico

• Confirmar o excluir un diagnóstico clínico– Falso positivo: ITU– Falso negativo: Meningitis

• Relevancia: Actividades a ejercer en el paciente en función del resultado– Clínica: • Tratamiento antimicrobiano precoz y

adecuado• Gravedad del proceso

– Epidemiologica: • Declaración obligatoria• Quimioprofilaxis

Diagnóstico Microbiológico: Fases

1. Recogida de muestras clínicas (Prácticas):• Importancia.• Normas generales.

2. Transporte de muestras clínicas (Prácticas):• Viales.• Condiciones de transporte.• Medios de transporte.

3. Diagnóstico:• Directo.• Indirecto.

• Directo. Implica la demostración del agente o componentes en los fluidos orgánicos.

• Indirecto. Implica la demostración de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema inmune (RI adquirida celular o humoral).

Diagnóstico Directo/Indirecto

Diagnóstico Directo

1. Visualización de microorganismos.2. Cultivo.3. Identificación y antibiograma.4. Detección de antígenos microbianos.5. Técnicas moleculares.

Diagnóstico Directo 1. Visualización de microorganismos

1. Examen Directo– Examen en fresco.– Microscopía de campo oscuro.– Microscopía electrónica.

2. Tinciones:– Gram.– Ziehl: micobacterias.– Tinciones fluorescentes.– Giemsa: parásitos.

Microscopía ópticaExamen en Fresco

Hifas

Microscopía de campo oscuro. Treponema pallidum

Microscopía ElectrónicaHerpes simplex

Tinción de Gram

Streptococcus mitis

Uretritis gonocócica

Tinción de GramBacillus anthracis

Tinción de Ziehl NeelsenB.A.A.R

Tinciones fluorescentesAuramina rodamina (MTB)

Tinción de GiemsaFilarias

Diagnóstico Directo2. Cultivo

1. Medios artificiales Tipos. Condiciones de incubación.

2. Cultivos celulares: Efecto citopático.

3. Huevos embrionados.4. Animales de experimentación.

Medios de CultivoMedios sólidos

Jarra para bacterias anaerobias

Cultivos CelularesHerpes Simplex

Diagnóstico Directo3. Identificación y antibiograma

Diagnóstico Directo4. Detección de antígenos

Aglutinación con partículas de látex

(Ag capsular de Cryptococcus neoformans)

Legionella pneumophilaPneumocystis jiroveci

Diagnóstico Directo4. Detección de antígenos

Inmunofluorescencia directa (IFD)

Diagnóstico Directo4. Detección de antígenos

Inmunocromatografía

Otros ejemplos: Ag de Legionella y S.pneumoniae en orina, toxinas de Clostridium difficile en muestras de heces

D. Directo. 5. Técnicas moleculares

1. Análisis de material genético microbiano– Técnicas de hibridación (sondas de ADN).

(Identificación)– Técnicas de amplificación (PCR). (Diagnóstico e

identificación)– Técnicas de tipado epidemiológico molecular

(PFGE, RFLP,...). (Identificación)

2. Análisis de proteínas microbianas:– MALDI-TOF (identificación)

Diagnóstico Directo5. Técnicas moleculares

PCR

Diagnóstico Indirecto

- Fijación del complemento.- Inmuno blot y Western blot

1. Detección de RI específica humoral (Anticuerpos):- Aglutinación- ELISA- IFI

2. Detección de RI específica celular:– Mantoux– IGRAs

Fundamento. D.indirecto

-IgM-Baja avidez

-IgG-Alta avidez

Fundamento. D. indirecto

Suero sin anticuerpos

Suero con anticuerpos

Antígeno libre

Antígeno se une a los anticuerpos

Complemento libre

Complemento se une al complejo Ag/Ac

Sistema indicador: hematíes/ hemolisina

Sistema indicador: hematíes/ hemolisina

Los hematíes intactos se depositan en el fondo del pocillo (punto rojo)

Los hematíes se lisan (ausencia de punto)

Reactivo No reactivo