UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELAFACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE BIOANÁLISISHOSPTIAL GENERAL “Dr. JOSÉ IGNACIO BALDÓ“

Diagnóstico Micológico

Profa. Yotsabeth Saúl G.

Caracas - 2016

Clasificación de las Micosis según la OMS

• Dermatofitosis• Pitiriasis versicolor• Pilonodosis• Candidiasis cutáneas o mucosas.

Superficiales

• Esporotricosis• Cromoblastomicosis• Micetomas

Subcutáneas

• Histoplasmosis• Paracoccidioidomicosis• Coccidioidomicosis

Profundas

• Candidiasis sistémicas• Criptococcosis• Aspergilosis• Mucormicosis• Neumocistosis

Oportunistas

Micosis Superficiales

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 1. Dermatofitosis o Tineas (Tiñas)

Tinea capitis no inflamatoria

Tinea faciei

Tinea corporisM. canis, T. rubrum

T. cruris por:

T. rubrum, E. floccosumTinea pedis interdigital.

T. rubrum, T. mentagrophytes, T. interdigitale

Subungueal, distal y lateral Blanca superficial Distrófica total

Agentes T. rubrum, E. floccosum, T. mentagrophytes

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 1. Dermatofitosis o Tineas (Tiñas) Onicomicosis

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 1. Dermatofitosis o tiñas

• Recolección de la muestra: piel, pelos o uñas. Raspado, depilación, cepillo, onicotomía.

• Examen directo: KOH 10% - 40%. Se observan hifas hialinas, de 3 a 15 µm de diámetro, septadas y ramificadas, con o sin artroconidias. *Diagnóstico de la enfermedad. • Cultivo: Lactritmel, Sabouraud. Micosel/ T. Amb./ 7-15 días. Visualización de las características macroscópicas en placa o en tubo. Visualización de las características microscópicas: cultivo en lámina. Identificación del agente causal.

Identificación de hongos dermatofitos. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 12-1 - 12-11.

Recolección de la Muestra:

pelos, piel ,uñas.

Hifas hialinas septadas.

Identificación de especie

Cultivos:

(placas/tubos)

Microcultivos

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 1. Dermatofitosis o tiñas

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 2. Pitiriasis versicolor

• Recolección de la muestra: Escamas obtenidas por raspado con bisturí o la técnica de la cinta adhesiva.

• Examen directo: Azul de metileno 0,05% Se observan blastoconidias de Malassezia sp, de 3-8 µm de diámetro, de paredes gruesas y refringentes, aisladas o dispuestas en acúmulos e hifas cortas y gruesas, poco ramificadas de 2,5 a 4 µm de diámetro. *Diagnóstico de la enfermedad.

• Cultivo: Medios de cultivo enriquecidos con lípidos. Ej: Sabouraud + aceite de oliva.

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 2. Pitiriasis versicolor

Toma de muestra:

método de la cinta adhesiva

Examen directo con Azul de metileno 0,05%:

Levaduras e hifas cortas gruesas de Malassezia spp.

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 2. Pitiriasis versicolor

Candidosis en el área del pañal Onicomicosis por Candida

Candidosis de la cavidad oral: Muguet Vaginitis por Cándida

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales 3. Candidiasis cutánea y de mucosas

• Recolección de la muestra: Escamas, detrito subungueal, fragmentos de uñas, exudado de mucosas, secreciones, flujo vaginal.

• Examen directo: KOH al 10% Se observan blastoconidias ovaladas o redondeadas de diferentes formas y tamaños (dependiendo de la especie).

• Aislamiento e identificación: Agar Sabouraud con o sin antibióticos sin cicloheximida.

Características macroscópicas de crecimiento en agar cromogénico. Bilis-agar: Clamidosporas (+) C. albicans/C.dubliniensis Filamentización en suero: C. albicans (+)/ Candida no-albicans ( -) Pruebas de asimilación y fermentación de azúcares.

Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 11-1 – 11-20.

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales3. Candidiasis cutánea y de mucosas

Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 11-1 – 11-20.

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales3. Candidiasis cutánea y de mucosas

Micosis Subcutáneas

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas1. Cromoblastomicosis

• Recolección de la Muestra: Escamocostras

• Examen directo: KOH 10% - 40%. Se observan cuerpos escleróticos o células de Medlar en grupos de dos o más, esféricos u ovalados, miden de 4 a 8 µm de diámetro, de color café amarillento y en ocasiones se observan divisiones o filamentos. *Diagnóstico de la enfermedad. • Cultivo: Agar Sabouraud, Lactritmel / Tº Amb / 15-21 días. Visualización de las características macroscópicas en placa o en tubo. Visualización de las características microscópicas: cultivo en lámina. Identificación del agente causal.

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas1. Cromoblastomicosis

Recolección de la Muestra: escamocostras

.

Cuerpos escleróticos.

Identificación de especie

Cultivos:(placas/tubos)

Microcultivos

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas1. Cromoblastomicosis

Forma cutánea fija Complejo cutáneo linfático

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas2. Esporotricosis 2.1 Esporotricosis cutánea

2.2. Esporotricosis extracutánea

• Recolección de la muestra: raspado, pus, biopsia, esputo.

• Examen directo KOH 10% No es práctico, en general resulta negativo. Se observan levaduras o cuerpos asteroides.

• Cultivo: Agar sabouraud, Micosel / 25 y 37ºC / 5-7 días. Forma filamentosa y levaduriforme

• Inmunodiagnóstico: Esporotriquina, pruebas serológicas.

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas2. Esporotricosis

Examen directo de la muestra clínica

Cultivo de la muestra clínicaIdentificación del agente causal

Cultivo en tubo, T.Amb Cultivo en lámina

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas2. Esporotricosis

Triada del micetoma:• Aumento de volumen y deformidad del miembro afectado.• Presencia de fístulas.• Emisión de granos “ Formación in vivo de colonias de los agentes

causales”.

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas 3. Micetoma

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Los granos son microcolonias compactas que constituyen una adaptación parasitaria del hongo o bacteria.

MICETOMA

Granos: Negros, Claros, Rojos

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas 3. Micetoma

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas 3. Micetoma

• Recolección de la muestra: obtención de granos

• Examen directo: KOH 10% Se observan las características de los granos: tamaño, color, forma, presencia de clavas.• Biopsia H&E: verificar presencia de granos.

• Cultivo: Temp. Amb. / días - semanas Medios especiales para hongos (eumicetomas): Agar Sabouraud o lactrimel + cloranfenicol Medios especiales para bacterias (actinomicetomas): AS, BHI, L-J. • Examenes complementarios: radiología

Micosis Profundas o Sistémicas

HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis:

• Recolección de la muestra: esputo, lavado broncoalveolar, médula ósea, sangre, biopsias, exudados de lesiones mucosas y cutáneas, material de ganglios linfáticos, LCR y otros líquidos corporales.

• Examen directo: Extendidos coloreados con Giemsa o Wright. Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metnamina). Calcofluor. Se observan blastoconidias intracelulares, ovaladas de 2-3 µm, generalmente con una sola gema.

• Cultivo: 25 y 37 °C / entre 1 y 5 semanas. Agar sangre, Sabouraud o extracto de levadura

• Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Examen directo Médula Ósea:Levaduras intracelulares

Coloración,Giemsa

Cultivo 25ºCMicelio y macroconidias

Coloración, azul de lactofenol

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas2. Paracoccidioidomicosis

DIAGNÓSTICO

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas2. Paracoccidioidomicosis• Recolección de la muestra: esputo, lavado broncoalveolar, médula ósea, sangre,

biopsias, exudados de lesiones mucosas y cutáneas, material de ganglios linfáticos, LCR y otros líquidos corporales.

• Examen directo: En fresco, entre lamina y laminilla KOH al 10% con o sin tinta, Negro de clorazol, Calcofluor. Coloraciones histológicas (PAS, HE, plata-metenamina). Se observan blastoconidias de diferentes tamaños, entre 3-40 µm de diámetro, redondeadas, de pared gruesa y refringente. Característicamente se observan células multigemantes, también es posible ver cadenas de blastoconidias o células con gemación única o solitarias.

• Cultivo 25 y 37 °C / 15-21 días. Agar Sabouraud adicionado o no de antibióticos y cicloheximida. • Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

Cultivo:

Temp. Amb.

37 ºC

Examen directo:Levaduras multigemantes

Estudio Histopatológico

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas2. Paracoccidioidomicosis

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas3. Coccidioidomicosis

• Recolección de la muestra: esputo, lavado broncoalveolar, médula ósea, sangre, biopsias, exudados de lesiones mucosas y cutáneas, material de ganglios linfáticos, LCR y otros líquidos corporales.

• Examen directo: En fresco entre lamina y laminilla. KOH al 10-20%, con o sin tinta. Coloraciones histológicas (PAS, HE, Plata-metenamina). Calcofluor Se observan esférulasy endosporas de 10 a 80 µm, con pared doble y refráctil de 2 a 5 µm. • Cultivo 25 °C / 15-21 días. Agar Sabouraud adicionado o no de antibióticos y cicloheximida. • Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

COCCIDIOIDOMICOSIS: DIAGNÓSTICO

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas3. Coccidioidomicosis

Coccidiodes spp. Examen directo

Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas3. Coccidioidomicosis

Figura 39. Artroconidias de Coccidioides immitis de un cultivo en forma micelial (preparación con azul de Lactofenol). Fragmentación del micelio (M) en esporas (artroconidias) rectangulares. Preparación con Azul de Lactofenol, 1200 X. tomado de: Restrepo M., A. Rev. Acad. Colomb. Cienc. 2006; 30 (116):367-386.

Micosis Oportunistas

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas1. Candidiasis invasoras

• Recolección de la muestra: sangre, orina, secreciones vaginales, secreción respiratoria, LCR.

• Examen directo: KOH 10%, Si presenta pocas levaduras hay colonización, grandes cantidades de levaduras y presencia de hifas indica

parasitismo-enfermedad.

• Aislamiento e identificación: Agar Sabouraud con o sin antibióticos sin cicloheximida.

Características macroscópicas de crecimiento en agar cromogénico. Bilis-agar: Clamidosporas (+) C. albicans/C.dubliniensis Filamentización en suero: C. albicans (+)/ Candida no-albicans ( -) Pruebas de asimilación y fermentación de azúcares.

• Estudio inmunológico: Detección de antígenos en candidosis invasora. Candidina.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas1. Candidiasis invasoras

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas2. Criptococosis

Criptococosis, Diagnóstico

• Recolección de la muestra: LCR, esputo, lavado broncoalveolar, orina, biopsias, sangre, médula ósea, exudado de úlceras, material purulento, secreción prostática.

• Examen directo:Observación entre lámina y laminilla con KOH al 10-20%. . Tinta china o nigrosina. Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata metenamina, mucicarmina de Meyer, Azul de Alcián). Se observan blastoconidias provistas de una pared bien definida y una cápsula refringente, con o sin gemación, redondas u ovaladas de 4-6 µm de diámetro y hasta de 12-20 µm, dependiendo del tamaño de la cápsula

• Cultivo: 32 a 37° C/ 48 horas. Se realiza en Agar Sabouraud u otros medios de cultivo sin cicloheximida.

• Inmunodiagnóstico: Detección de antígeno capsular, técnica aglutinación de partículas de latex (LCR).

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas2. Criptococosis

Criptococosis, DiagnósticoDiagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas2. Criptococosis

Colonia cremosa y mucoide Blastoconidios encapsulados(Tinta china, 100X.)

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas3. Aspergilosis

Aspergilosis, diagnóstico:

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas3. Aspergilosis• Recolección de la muestra: escamas, detrito subungueal, esputos, lavado broncoalveolar, material purulento o necrótico, biopsias, hemocultivos (raramente positivos).

• Examen directo:En fresco, entre lámina y laminilla con KOH al 10-20% con tinta, Negro de clorazol E, Calcofluor, Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metenamina) Se observan hifas hialinas, septadas, con un diámetro de 3-6 µm, de pared lisa y gruesa, con ramificaciones dicotómicas en ángulo de 45º. Otitis y aspergiloma pulmonar y nasal, pueden encontrarse cabezas aspergilares. Aspergiloma en las cavidades pulmonares y de senos (paranasal, etmoidal y maxilar), se observan masas o bolas del hongo.

• Cultivo: 25° C/ 3-4 días. Sabouraud con y sin antibióticos, lactrimel o Czapek.

• Inmunodiagnóstico: ELISA para detectar el antígeno galactomanano.

Histopatología Examen directo KOH 10/. Esputo

Cultivo en placa Cultivo en lámina. A. fumigatus

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas3. Aspergilosis

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas4. Zigomicosis

Mucormicosis, diagnóstico

• Recolección de la muestra: biopsias (se debe obtener material abundante y de buena calidad), tejidos necróticos, secreciones, aspirado de senos nasales y paranasales, esputos, lavado broncoalveolar.

• Examen directo: En fresco, entre lámina y laminilla con KOH al 10-20% con tinta,

Negro de clorazol E, Calcofluor. Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metenamina). Se observan hifas anchas, aceptadas de 7-15 µm de diámetro, que se ramifican en ángulo de 90º.

• Cultivo: 37ºC / 12-48 horas. Agar Sabouraud sin cicloheximida.

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas4. Zigomicosis

Histopatología Cultivo en placa

Cultivo en lámina

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas4. Zigomicosis

AspergilosisDiagnóstico: cultivo en placa y lámina

• Recolección de la muestra: lavado broncoalveolar, cepillado bronquial, esputos inducidos, biopsias.

• Examen directo: Giemsa, Wright. Diff-Quik. Plata-metenamina, Azul de toluidina O, Calcofluor Se observan trofozoítos (ascosporas) y quistes (ascas) de P. jiroveci.

• Cultivo: Aun no se ha podido recuperar en cultivo.

• Otros métodos diagnósticos: Amplificación del ADN por PCR.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas5. Neumocistosis

Pneumocystis jirovecii

Quistes de Pneumocystis jiroveci en pulmón (flechas). Coloración histological Plata-metenamina. Disponible en: student.ccbcmd.edu/.../lab9/u1fig32d.html