Envejecimiento y muerte celular

CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012

Envejecimiento y muerte celular:

APOPTOSIS

Ana Salas Bustamante.

Unidad de Ensayos Biotecnológicos y Biomédicos - Citometría

Marta Alonso Guervós.Unidad de Microscopía Fotónica y Proceso de Imágenes

Servicios Científico-Técnicos


Apoptosis = muerte celular programada

Funciones de la apoptosis

1- Eliminación de tejidos dañados o infectados

2- Desarrollo

3- Regulación vida-muerte (Homeostasis)

4- Regulación del sistema inmunitario


FASES DEL CICLO CELULAR

Fase S(síntesis)

Fase G2

Mitosis

Fase G1 /G0

Células que abandonan el ciclo celular y entran en

apoptosis


(www.microbiologybytes.com )

Fases de la apoptosis

Célula normal Disminución del

tamaño de la célula

Condensación de la cromatina y

disminución tamaño de la célula

Lisis de

cuerpos apoptóticos

Colapso nuclear

Continua la disminución del citoplasma celular

Formación de

cuerpos apoptóticos


- Marcaje de un cultivo celular con IP y Anexina-V

- Cuantificación de apoptosis por citometría de flujo

- Visualización de apoptosis por microscopía óptica

Taller: Prueba para analizar apoptosis

Tinción con ioduro de propidio (IP) y anexina-V marcada con un fluorocromo (FITC)


Prueba para analizar apoptosisTinción con ioduro de propidio (IP) y anexina-V marcada con un fluorocromo (FITC)

Cuadrado 1. Célula normal viable: IP y anexina-V quedan fuera de la célula.

Cuadrado 2. Fase temprana de apoptosis: anexina-V se une a la membrana plasmática de la célula y el IP se quedan fuera .

Cuadrado 3. Fase tardía de apoptosis: anexina V se une a la membrana plasmática de la célula y el IP entra en la célula.

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Citometría de flujo. Método analítico basado en medir múltiples fluorescencias y dispersión de la luz (“light scatter”) de células o partículas microscópicas alineadas secuencialmente mediante una corriente líquida (flujo laminar) cuando son presentadas de una en una a gran velocidad (miles porsegundo) frente a un haz de luzláser de longitud de ondaadecuada.Sorting. Método de separacióncelular basado en la citometría de flujo en el que se consigue separarcélulas mediante la ruptura del flujolaminar en microgotas que portanlas células en su interior y queposteriormete son atraídaselectrostáticamente y recogidas en distintos recipientes.

Citometría de flujo


Apoptosis por citometría de flujo

Cuantificación de la población decélulas apoptóticas en función de lacantidad de fluorescencia deAnexina V-FITC e IP de la muestra.

N4 = población apoptótica

CAMPUS CIENTÍFICOS DE VERANO 2012Fluorescencia

Microscopio láser confocal


Apoptosis por microscopía láser confocal

Célula apoptótica.Mezcla de una imagen de transmisión (imagen gris) y una imagen de fluorescencia (señal verde)


Enfermedades asociadas a la apoptosis

* Con la inhibición de apoptosis:

- Cáncer

- Enfermedades virales

- Enfermedades autoinmunitarias

* Con el aumento de apoptosis:

- Sida

- Enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer, parkinson...)


(SPI. Universidad de Oviedo)

www.sct.uniovi.es

Tutoriales “Citometría de flujo” y "Microscopio Confocal"

Envejecimiento y muerte celular

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