Evaluación antimicótica de heterociclos de 5 miembros con Boro y Diagnóstico de dermatomicosis en perros

RESUMEN

RESUMEN 1 En el presente trabajo se sintetizaron una serie de diez y ocho moléculas de la serie de las 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas, las cuales se obtuvieron por reacciones entre un �-aminoácido y ácido difenilborínico, empleando condiciones de reacción alcalinas. La identificación de las moléculas objetivo se realizo por medio de técnicas espectroscópicas comunes en el ámbito químico: espectrometría de masas empleando la técnica de ionización por impacto electrónico y experimentos de alta resolución para establecer peso y composición elemental de los productos. Por otro lado, se hizo un estudio in vitro de las 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas para determinar la actividad antimicótica en hongos oportunistas levaduriformes como Candida, Cryptococcus y hongos filamentosos como Aspergillus, encontrándose que los productos que presentaron efectos fungicida sobre algunas especies de los géneros antes mencionados. Con los datos generados de la actividad antimicótica, se determinó que la 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-ona obtenida de glicina, presento las mejores expectativas como antimicotico de manera significativa, con respecto al grupo control y al resto de las moléculas evaluadas. Finalmente, se efectuó la observación, mediante microscopía electrónica de transmisión, del daño causado por la 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-ona obtenida de glicina sobre el moho oportunista Aspergillus níger. The observed results show that the fungis were oversensitive to glycine derivative more than treonine derivative and the lesser oversensitive compound was the histidine derivative. RESUMEN 2 Para este estudio se utilizaron 50 muestras clínicas de perros que presentaron algunos de los signos característicos de una dermatomicosis. A las muestras se les realizó el examen directo con KOH al 20% observándose algunas estructuras fúngicas que determinara que la infección era causada por un hongo, de esta prueba se obtuvo que un 20% del total de las muestras tenían artroconidios y/o hifas en el interior de las escamas y/o pelos. El primo aislamiento de los hongos se realizó en PDA, SDA, y Agar Micobiótico (con cicloheximida). La identificación se realizó mediante morfología colonial y microscópica, esta última utilizando la técnica de Microcultivo en medio PDA, SDA o Micobiótico. En base a estos datos se efectuó un análisis del examen en fresco y al crecimiento obteniendo, donde un 20% correspondió al examen en fresco positivo al igual que el crecimiento indicándonos que la infección es producida por un hongo; un 10% correspondió al examen en fresco positivo pero no se observó crecimiento, posiblemente el hongo no se encontró en su fase parasitaria por que no se encontraba como tal, o que la muestra clínica tomada no tenía el hongo. En cuanto al examen en fresco negativo y el crecimiento positivo observado en un 38% de las muestras, es probable que el hongo se encuentre como contaminante. Por último el 32%

donde tanto el examen en fresco como el crecimiento fue negativo, posiblemente indique que la infección en la piel de los perros no fue causada por hongos, sino por otro microorganismo tal como parásitos, bacterias, etc. La identificación de los hongos mostró un 58% correspondía a hongos, de éstos se encontraron tres dermatofitos: Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes y Trichophyton rubrum; hongos dermateaceos (Alternaria spp,Aureobasidium spp, Cladosporium spp. Helmintosporium spp,); y hongos halinos (Acremonium spp, Aspergillus spp, Chrysosporium spp, Paelomyces spp Geotrichum spp, Penicillium spp, Scopulariopsis spp, Sepedonium spp), también se encontraron bacterias con un 10% del total de las muestras y el resto, 32% donde no se encontró ningún crecimiento. Por lo que se concluye que la mayoría de las dermatomicosis en los perros analizados son causadas por dermatofitos, así como por hongos saprobios. Aunque los hongos saprobios pueden no ser la causa de la infección pero si pueden ser parte de ella, participando de alguna manera, ya que como se mencionó en la literatura estos hongos se han ido adaptando a superficies queratinofílicas y puede desencadenar cierta patologías en la piel u otros órganos cuando los perros se encuentran con ciertos factores predisponentes para adquirir la enfermedad.

INTRODUCCIÓN

EVALUACIÓN ANTIMICÓTICA DE HETEROCICLOS DE 5 MIEMBROS CON BORO Entre los problemas principales para los tratamientos antimicóticos, están por un lado, el número limitado de moléculas conocidas para tal efecto y por otro lado, cada vez se reportan con mayor frecuencia micosis refractarias a las terapias específicas con fallos terapéuticos en los cuales se presenta desenlace fatal, en la mayoría de los casos. La búsqueda de compuestos orgánicos con actividad antifúngica, que muestren selectividad farmacológica, efectividad alta, bajo costo, escasos efectos secundarios y baja o nula resistencia, ha conducido a los químicos a diseñar un sinnúmero de estructuras novedosas. Uno de los grupos químicos promisorios son los heterociclos generados a partir de aminoácidos, los cuales han mostrado tener actividad biológica. Además, en los últimos 50 años, se ha observado un interés creciente por las aplicaciones biológicas del boro. Las moléculas que presentan en su estructura los enlaces boro-nitrógeno han mostrado actividad biológica interesante vg. insecticida, fungicida, herbicida y antineoplásica entre otras. Por lo anterior, se considera importante sintetizar una serie de 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas, a partir de la reacción entre los correspondientes �-aminoácidos y ácido difenilborínico y probar su actividad antifúngica sobre levaduras y hongos filamentosos oportunistas. Es importante mencionar que en la naturaleza se desconoce

el enlace boro-nitrógeno, hecho que permite considerar, que el desarrollo de resistencia a estas moléculas sería nulo.

DERMATOMICOSIS EN ANIMALES Las dermatomicosis son enfermedades producidas por diferentes grupos de hongos los cuales tienen una gran afinidad por estructuras corporales que poseen queratina como: pelo, plumas, uñas y la piel; dichas enfermedades afectan perros, gatos, otros animales y al hombre. Entre los hongos que causan estas infecciones se encuentran principalmente los dermatofitos que incluye las especies; Microsporum canis, Microsporum gypseum y Trichophyton mentagrophytes; también incluye levaduras como Candida albicans, Malassezia pachydermatis, etc, y por último también se han visto involucrados hongos saprobios como agentes causales de infecciones de la piel. Para que la enfermedad se manifieste se requiere: 1) la predisposición individual, defensas inmunológicas y factores ambientales que se relacionan con el hábitat de los hongos y, 2) el contacto con el agente infeccioso que produce la enfermedad. Los signos clínicos que principalmente se encuentran son: alopecia, descamación, prurito, etc. Las dermatofitosis o comúnmente llamadas tiñas son enfermedades de tipo parasitario producidas por un grupo de hongos denominados dermatofitos, los cuales producen micosis superficiales afectando la piel y sus anexos como son: pelos y uñas. Los dermatofitos son muy similares, se relacionan tan íntimamente que causan una variedad muy amplia de cuadros clínicos, una sola especie puede participar en varios cuadros clínicos (polimorfismo lesional), cada uno con patología característica. Los agentes etiológicos se encuentran entre los miembros de los géneros Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton (Rippon, 1990). Dentro de los hongos patógenos existen especies zoofílicas que son muy selectivas en cuanto al hospedero y otras, por el contrario, pueden infectar a una amplia gama de animales. Generalmente, las infecciones son agudas y severas, cuando el hospedero es diferente al natural, en respuesta a un mecanismo de adaptación. Mientras que las especies de dermatofitos antropofílicas, (infectan al ser humano y rara vez a los animales), estas infecciones se caracterizan por ser crónicas y moderadas. Finalmente, los dermatofitos geofílicos, tienen su hábitat natural en el suelo, y comúnmente tienen poco poder infectivo. Este trabajo se encuentra enfocado a aquellos hongos causantes de enfermedades dermatológicas en animales; especialmente el perro por ser el animal de compañía que tiene más convivencia con el hombre. Para esto se considerarán las enfermedades micóticas que presenten estos animales y puedan ser transmitidas al hombre. La infección en el animal puede pasar inadvertida o con signos ligeros, sin embargo, en los individuos las lesiones pueden ser severas e incluso diseminarse en determinadas partes del cuerpo. En la tabla 2 se muestran ejemplos de algunas de las enfermedades que pueden causar los dermatofitos en humanos.

MATERIALES Y MÉTODOS EVALUACIÓN ANTIMICÓTICA DE HETEROCICLOS DE 5 MIEMBROS CON BORO Esta información se anotará en ingles, ya que al ser parte de una tesis de doctorado de la M en C. Martha Beatriz Vilchis Argueta, sus reportes los hace en inglés. EXPERIMENTAL Chemical and materials. A kit of 18 �-amino acids and 2-aminoethyldiphenylborinate was obtained from Sigma Aldrich (Steinheim Germany). Analitycal-grade ethanol, hexane and ethyl acetate were supplied from Aldrich Chemical (Milwaukee USA). Synthesis of compounds 1-18. The 2,2-diphenyl-1,3,2-oxazaborolidin-5-ones were prepared according to a literature protocol via appropriate �-amino acid. 0.5g (6.6 mmol) of glycine was dissolved in 3 ml of H2O, the pH was adjusted to 7.5-8 with 2 mL of 5% NaOH. A solution of diphenylborinic acid was prepared from 1.59 g of 2-aminoethyldiphenylborinate (6.6 mmol), as described in the literature. The solutions were mixed together and refluxed for 4 h. The solvent was evaporated slowly and the product was filtered and washed with cold water, and then washed with n-hexane, yielding 1.49 g of 1 (6.26 mmol), a 94 % yield. The characterization of 1,3,2-oxazaborolidin-ones 1-18 were deduced from the corresponding 1H-, 13C NMR spectra data using a JEOL GSX-270 instrument in DMSO-d6 using TMS as a internal reference at 300 and 75 MHz respectively; The 11B-NMR spectra were performed with a spectrometer JEOL FX90Q in DMSO-d6 using BF3.OEt2 as an external reference. The IR spectra were measured on a MSERIES spectrophotometer using KBr. The melting points were determined with a Electrothermal 9300. Mass Spectrometry. The EIMS, LS and HRMS measurements were made using JMS-SX102-A and JMS-AX505-HA mass spectrometers (JEOL, Peabody, MA, USA). EIMS was performed with a source temperature of 230 oC, ionization energy of 70 eV. Polyethylene glycols 400, 800 and 1000 were used as internal mass reference in the HRMS measurements. The scan range of this mass measurements was set so as to include two standard peaks that encompassed the sample peak of interest. The mass resolution and scan speed used were 10 000 (10% valley) and 120 s/decade, respectively. The accurate mass was calculated as the mean of the values measured in 5-10 scans, determined from the mass centroids of the ion peaks of interest. Theoretical elemental compositions were calculated within a mass windows of ± 10 ppm from the measured accurated mass, using the program installed in the data system; the elemental composition with the theoretical mass that best fitted the measured value, and that also mase chemical sense, was assigned to the ion.

Antifungal Activity Microorganisms Hyphomycete Aspergillus niger ATCC 16409, and yeastlike fungi were used. Three Candida species, American Type Culture Collection (ATCC) reference strains; C. albicans ATCC 5609, C. parapsilosis ATCC 22019 (both Fluconazole-susceptible) and C. krusei ATCC 6258(Fluconazole-resistant) and Cryptococcus neoformas clinical isolate, it was collected from Instituto Nacional de Nutrición (INN), and it was identified at Medical Mycology Laboratory, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politecnico Nacional, Mexico, City. Candida strains were identified by API 20C AUX System (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France). Cryptococcus neoformans was identified by positive urea test, capsule production and fungus was streaked on Niger agar for the presence of laccases, and CGB (canavanine-glycine-bromothymol blue) agar plates for resistance to L-canavanine.culture. To ensure viability and purity the strains were growth onto potato dextrose agar (DIBICO; Mexico City, Mexico). All microorganisms were subcultured onto potato dextrose agar (DIBICO, Mexico City, Mexico) until their used. Antifungal agents. The stocks solutions of antifungal agents for ketoconazole (Keto) (Sigma), itraconazole (Itra) (European Pharmacopoeiae; Strasbourg, France) fluconazole (Fluco) (Chemical Iberica; Madrid, Spain), amphotericin B (AmB) (Sigma; St. Louis MO, USA) and Caspofungine (Cas) (Merck, Mexico) and were serially diluted in dimethyl sulfoxide at 100x and dilutions of antifungal drugs were prepared (AmB, Keto, and Itra, range 16-0.03 �g/mL, Fluco and the new compous derivates phenoxyacetic, range 128-0.25 �g/mL). range concentration was 0.06- 32 DFOX G, T, O and B were serially diluted 1:2 in ethanol (range ……. μg/mL?). Assays were performed 3 times with each strain, obtaining reproducible results. Disk diffusion test. All new synthesized compounds were assessment to fungal activity. This activity was performed to disk diffusion test, range concentration was 100 – 800 µg/ml. The strains used were moho Aspergillus niger ATCC 16409, and opportunistic yeaslike C. albicans ATCC 5609, C. parapsilosis ATCC 22019, C. krusei ATCC 6258 and Cryptococcus neoformans clinical isolate. The results showed strong antifungal activity in 2,2-Difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-ona (DPO) derivates with DPOGli, DPOHis and DPOTre against all fungi tested. IC50 determination In vitro activities of the oxazaborolydinones and an comparative antibiotic were determined by Disk Diffusion Method.* A 0.5 MacFarlan strandard-equivalent suspension or the mentioned microorganisms (prepared by M27-A protocol) was used. The blank paper disks (0.5mm diameter) previously sterilized were saturated with 10 µL of solution containing 31.5 mmol/mL of each oxazaborolydinones used, other disks were placed with Ketoconazol and other ones with only the solvent employed (acetone). The zones of complete inhibition were determined after 24-48 h of incubation for Aspergillus niger (room temperature) and for Candida albicans and Cryptococcus neoformans (35 oC).

DERMATOMICOSIS EN ANIMALES

TOMA DE MUESTRAS. Para la tiña de piel cabelluda de los perros se recolectaron los pelos cortos con ayuda de pinzas, se colocaron entre dos portaobjetos y se dividieron en dos partes para su observación y cultivo. Cuando no existieron pelos cortos se tomaron escamas y/o pus. PARA ESTE PASO UTILIZAMOS 50 MUESTRAS DIFERENTES DE PERROS CON ENFERMEDADES DERMATOLÓGICAS CUYO DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO HAYA SIDO DERMATOMICOSIS.

EXAMEN DIRECTO. Los pelos se colocaron con ayuda de una aguja de disección, entre porta y cubreobjetos con una gota de KOH al 20% como aclarante de la muestra para observar la forma parasitaria del hongo, la preparación se dejó reposar de 10 – 15 minutos. Las escamas provenientes del perro enfermo se colocaron entre porta y cubreobjetos con KOH al 20%, las grandes se fragmentaron y se dejaron en reposo durante 5 minutos.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO. En los pelos parasitados se observaron conidios y en ocasiones algunos filamentos, esta parasitación la podemos observar de dos tipos; Endotrix o Tricofítica, cuando las esporas se observan dentro del pelo y Ecto-endotrix (ectotrix) o Microsporica, cuando las esporas se observan fuera y dentro del pelo.

Las escamas se observaron como células de descamación parasitadas por filamentos largos, delgados o gruesos y en ocasiones artroconidios.

CULTIVOS. Se utilizaron medios rutinarios para el primo-aislamiento de los dermatofitos; como el Sabouraud dextrosa agar (SDA), papa dextrosa agar (PDA) y el agar Micobiótico este último tiene el antifúngico cicloheximida el cual no permite el crecimiento de hongos saprobios. Las colonias se desarrollaron en un tiempo promedio de 10 – 15 días, incubadas a temperaturas de 25 – 28ºC.

IDENTIFICACIÓN. Para este paso se utilizó la técnica de Microcultivo en el cual utilizamos las cepas del primo – aislamiento tomando una asada de la colonia e inoculando en los lados del agar cortado, cubriendo posteriormente con un cubreobjetos y dejar incubando de 1 a 2 semanas a temperatura de 28ºC en cámara húmeda (glicerol al 10%), cuando se observó crecimiento del hongo, se inactivó éste con formol al 10%, y los portaobjetos se colocaron en un cubreobjetos y una gota de azul de algodón para observar las estructuras fúngicas.

RESULTADOS

EVALUACIÓN ANTIMICÓTICA DE HETEROCICLOS DE 5 MIEMBROS CON BORO

Figure 1. Antifungal activity evaluated by Disk diffusion test

A B C25

50

100

200

solvente

100 200

800 400

solvente

800 400

solvente

200 100

B 800 400

solvente

200 100

C

Efecto antifúngico de compuestos derivados de 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas. A.-DFOBGli; B) DFOBTreo C) DFOBHis sobre Candida albicans. Las concentraciones probadas se encuentran expresadas en µg/mL.

Efecto antifúngico de compuestos derivados de 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas. A.-DFOBGli; B) DFOBTreo sobre Cryptococcus neoformans. Las concentraciones probadas se encuentran expresadas en µg/mL.

Table 1. Antifungal activity evaluated by Disk diffusion test Microorganismo Concentración

µg/mL DFOBGli φ mm

DFOBTreo φ mm

DFOBHis φ mm

100 9.5 7.5 0 200 12 9.5 8.5 400 24 18.5 14

Candida albicans ATCC 5609

800 25 18.5 17

100 8 8 200 13 9.5 400 12 12.5

C. parapsilosis ATCC 22019

800 18 16

100 8 0 0 200 13 0 0 400 14.5 0 8

C. krusei

ATCC 6258 800 14.5 8 10.5

100 0 0 0 200 10 0 0 400 18 18 15

Cryptococcus

neoformans var. neoformans 800 27 22 21

100 17 2.5 0 200 18 9 0 400 25 11.5 17

Aspergillus Níger

ATCC 16409 800 26 12 23

Table 2. Antifungal activity inhibition concentration 50% (IC50%) DFOXG

μg/mL DFOXT μg/mL

DFOXH μg/mL

DFOXO μg/mL

DFOXB μg/mL

Candida albicans 5609 100/50 50/100 100 50 ---/100 Candida krusei 6258 50/25 50/100 100 50 ---/12.5 Candida parapsilosis 22019 50/25 100/50 100 50 ---/12.5 Cryptococcus neoformans neoformans 25/25 100/50 25/50 50/25 400/12.5 Aspergillus níger 16409 50/50 100/100 100/100 100/50 200/100

MIF

DFOXG DFOXT DFOXH DFOXO DFOXB Candida albicans 5609 100 100 200 100 200 Candida krusei 6258 50 100 100 100 200 Candida parapsilosis 22019 50 50 100 100 200 Cryptococcus neoformans* 25 100 50 50 100 Aspergillus níger 16409 25 50 100 100 >800 *Aislado clínico. DFOX G corresponde al compuesto con glicina. T treonina, H histidina, O ornitina y B benjas (reactivo con el que se hizo reaccionar cada aminoácido).

The observed results by different techniques showed Aspergillus niger was oversensitive to glycine derivative more than treonine derivative and the lesser oversensitive compound was the histidine derivative.

DERMATOMICOSIS EN ANIMALES OBSERVACIÓN EN FRESCO DE MUESTRAS CLÍNICAS

A partir de 50 muestras clínicas diferentes de lesiones de perros, se realizó la técnica de observación en fresco con KOH al 20%, observando que no todas las muestras presentaban la fase parasitaria del hongo. En las muestras de escamas en la parte interna, se observaron filamentos delgados, como se muestra en las figuras 6-9 (flechas), en algunas ocasiones se entrecruzaban o atravesaban la escama, tal como se observa en la figura 3.

Figura 1. Lesión descamativa en la parte de la cara de un perro.

Figura 2. Lesión de alopecia, descamación y pus en la parte de dorsal de un perro.

Figura 3. Hifas septadas, hialinas dentro de una escama de piel de perro.

Tabla 1. Tabla 4: Relación entre el examen en fresco con KOH al 20% y tipo de crecimiento en los medios de cultivo de las muestras clínicas de los perros

NegativoArtroconidios 50PositivoEscama Normal25 NegativoArtroconidios 49PositivoEscama Normal24 NegativoHifas en Escama 48PositivoEscama Normal23 NegativoHifas en Escama 47PositivoEscama Normal22 NegativoHifas en Escama 46PositivoEscama Normal21 PositivoArtroconidios 45PositivoEscama Normal20 PositivoArtroconidios 44PositivoEscama Normal19 PositivoHifas en Escama 43PositivoEscama Normal18 PositivoHifas en Escama 42PositivoEscama Normal17 PositivoHifas en Escama 41BacteriasPelo Normal 16 PositivoHifas en Escama 40BacteriasPelo Normal 15 PositivoHifas en Escama 39BacteriasEscama Normal14 PositivoHifas en Escama 38BacteriasEscama Normal13 PositivoHifas en Escama 37BacteriasEscama Normal12 PositivoHifas en Escama 36BacteriasEscama Normal11 PositivoPelo Normal 35NegativoEscama Normal10 PositivoPelo Normal 34NegativoEscama Normal9 PositivoPelo Normal 33NegativoEscama Normal8 PositivoEscama Normal 32NegativoEscama Normal7 PositivoEscama Normal 31NegativoEscama Normal6 PositivoEscama Normal 30NegativoEscama Normal5 PositivoEscama Normal 29NegativoEscama Normal4 PositivoEscama Normal 28NegativoEscama Normal3 PositivoEscama Normal 27NegativoEscama Normal2 PositivoEscama Normal 26NegativoEscama Normal1

CRECIMIENTO KOH AL 20% MUESTRA CRECIMIENTOKOH AL 20%MUESTR

Grafica 1 Porcentaje de microorganismos aislados a partir de muestras clínicas de perros con dermatomicosis.

Tabla 2: Identificación de hongos a partir de aislados clínicos.

DERMATOFITOS No. de

aislados FULIGINOSOS No. de

aislados HIALINOS No. de

aislados

M. canis 1 Alternaria spp 12 Acremonium spp 2

T. mentagrophytes 2 Aureobasidium spp 1 Aspergillus spp 4

T. rubrum 1 Cladosporium spp 2 Chrysosporium spp 2

Dreckslera spp 2 Geotrichum spp 1

Paecilomyces spp 1

Penicillium spp 2

Scopulariopsis spp 3

Sepedonium spp 1

Porcentaje de microorganismos aislados

58%

10%

32%

Hongos Bacterias Sin crecimiento

Figura 4. Macroconidios de M. canis en forma de huso, con pared gruesa, superficie espiculada con más de 6 septos, microconidios piriformes.

Figura 5: Microconidios de T. rubrum en forma de

pera o lágrima, dispuestos en forma alternada sobre la hifa

Figura 7: Dictioconidios de Alternaria spp, en cadena multicelulares con forma de palillo de tambor, divididos por tabiques transversales y longitudinales.

Figura 6: Macroconidios de Dreckslera spp, multicelulares a lo largo de un conidióforo geniculado.

IMPACTO EVALUACIÓN ANTIMICÓTICA DE HETEROCICLOS DE 5 MIEMBROS CON BORO Actualmente se conocen un número limitado de compuestos empleados en la terapia como fungicidas, razón por la cual es recomendable el desarrollo de nuevos antifúngicos. Existe un interés creciente en la síntesis de moléculas orgánicas que incluyan en su estructura enlaces particularmente con el átomo de boro, esto debido a que moléculas que los contienen, han presentado actividad biológica interesante tales como: herbicidas, antimicóticos, bactericidas, entre otras. En año 2004, se reportó sobre la actividad antibacterial que mostró una serie de de oxazaborilidinas, al ser evaluadas sobre una cepa de Streptococcus mutans (ATCC 27351), obteniéndose valores de concentración mínima inhibitoria de interés. Un ejemplo lo constituye la síntesis de heterociclos conocidos como 2,2-difenil-1,3,2-oxazaborolidin-5-onas, obtenidas a partir de la reacción entre a-aminoácidos y ácido difenilborínico, las cuales por la posible estabilidad del enlace O-B-N, constituyen compuestos atractivos para pruebas biológicas. Recientemente, Benjamín Velasco, José Trujillo-Ferrara, René Miranda (Synlett 2007 vol.6 pag. 998), una nueva metodología para la síntesis de las moléculas antes mencionadas, empleando condiciones alcalinas de reacción, con lo cual se mejoran sustancialmente los rendimientos. Fue posible sintetizar nueve compuestos derivados de nueve aminoácidos interactuando con el boro. Se observó fuerte actividad antifúngica, especialmente en Aspergillus niger observándose actividad fungistatica y fungicida sobre este hongo. El efecto causado fue destrucción de todas los organelos del hongo, como se puede apreciar en las figuras correspondientes de microscopía electrónica de transición. En conclusion: Algunos de los compuestos derivados de boro sintetizados presentan fuerte actividad fungistatica y fungicida en hongos oportunistas, levaduras y mohos, y requieren de continuar estudiando sus características y tienen un fuerte potencial para considerarse como posibles moléculas de uso terapéutico contra micosis en humanos. DERMATOMICOSIS EN ANIMALES

En la identificación de los aislados procedentes de dermatomicosis en perros se encontraron dermatofitos, principales patógenos de la piel, entre los que se diferenciaron a Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes y Trichophyton rubrum, también se diferenciaron hongos dematiáceos algunos asociados a enfermedades de la piel de perros, en infecciones de órganos y en alergias como

es el caso de Alternaria spp, otros hongos dematiáceos encontrados fueron Aureobasidium spp, Cladosporium sp y Dreckslera spp y por último otro tipo de hongos identificados y que la mayoría se encuentran asociados a enfermedades de órganos cuando el inóculo es muy grande fueron los hialinos como son: Acremonium spp, Aspergillus spp, Chrysosporium spp, Paecylomyces spp Geotrichum spp, Penicillium spp, Scopulariopsis spp y Sepedonium spp. Tanto los hongos hialinos como dematiáceos han sido considerados como hongos saprobios porque se encuentran ampliamente distribuidos por todos el ambiente y hasta hace algunos años sólo se encontraban en el laboratorio como contaminantes, en estudios recientes de ha visto que estos hongos se han encontrado como agentes causantes de enfermedades por lo que es de vital importancia la identificación de los diferentes tipos de hongos ya que muchos de ellos son responsables de infecciones de animales y que por el estrecho contacto que puede existir con los humanos son una importante fuente de infección para ellos. También en los aislamientos se encontraron bacterias con un 10% del total de las muestras y el resto, 32% donde no se encontró ningún crecimiento indicándonos que las infecciones que tenían los animales eran causadas por agentes diferentes a hongos. Por todo lo anterior las dermatomicosis en los perros analizados son causadas tanto por dermatofitos, como por hongos saprobios aunque estos últimos pueden no ser la causa de la infección pero si pueden ser parte de ella, participando de alguna manera, ya que han ido adoptando características que les permiten adherirse a superficies queratinofílicas y en algunos casos desencadenar ciertas patologías en la piel u otros

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