Validación de Métodos. Incertidumbre de las Mediciones - Celia ...
Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos ... · 01-06-2016 1 Experiencia en la...
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Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos para el
Laboratorio Clínico
TM Alan Oyarce F.Instituto de Salud Pública de Chile
CONFIRMACIÓN SEROLÓGICADE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS
DECRETO N°158 NOTIFICACIÓN DE ENFERMEDADES TRANSMISIBLES
DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA
ELISAINMUNOFLUORESCENCIA WESTERN BLOT
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++
+ +( - ) ( + )
PRUEBA CONFIRMACION
Personas libres de la condición en estudio
(falsos positivos del tamizaje)
Personas confirmadas de padecer el factor de riesgo
UNIVERSO
+( - ) ( + )
POBLACIONAPARENTEMENTE SANA
PRUEBA TAMIZAJE
PacientesEnfermos
VP
PacientesSanos
0.0 3.00.50.2 0.8
FP – Falso Positivo, FN – Falso Negativo, VN –Verdadero Negativo, VP – Verdadero Positivo,
Punto de corteDiagnóstico
Rango Indeterminado
FN FP
VN
N° individuos
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Diagnóstico inicial año 2010
• Sistema de gestión de calidad no implementado1
• Metodologías sin control interno adecuado2
• Procedimientos no estandarizados3
• Equipamiento en distinto estado de mantención 4
• Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia5
• Métodos no validados/verificados6
• Ausencia de CCE adecuado7
• Inexistencia de cartas control8
• Metodologías no acreditadas9
CLIENTES
CLIENTES
PROCESOS ESTRATÉGICOS Y DE MEJORAPROCESOS OPERATIVOS
Gestión de reclamos
Satisfacción del cliente
Políticas y objetivos
Asesoríajurídica
Revisión por la dirección
Gestión de indicadores
No conformidades
Auditorias internas
Acciones preventivas
Acciones correctivas
Etapa Post examenEtapa de examen
Gestión Clientes
Gestión Documental RRHH Compras Gestión
EquiposPlanta física Gestión
InformaciónSeguridad
Bioseguridad
PROCESOS DE APOYO
Etapa Pre examen
1. IMPLEMENTACIÓN DE UN SGC EN EL LABORATORIO
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Material de control interno de elaboración propia
2.- INCORPORACIÓN DE UN CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Incorporación de un material de control comercial
Limitada disponibilidad de material de control comercial en serología
3.- ESTANDARIZAR DOCUMENTOS
Que? Quién? Como? Donde? Cuando?
DISTRIBUCIÓN ELABORACIÓN DIFUSIÓN
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Calificación deEquipamiento
Proceso documentado por el cual se verifica la correcta instalación y operación de un equipo.
4.- GESTIÓN DEL EQUIPAMIENTO DEL LABORATORIO
Entrenamiento y evaluación de la competencia del
personal
5.- GESTIÓN DEL PERSONAL
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Adquisición de un Kit comercial
Fabricante: Diseña metodologíaConfirmación, mediantela aportación deevidencia objetiva, deque se han cumplido losrequisitos para unautilización o aplicaciónespecífica prevista.
Validación
Laboratorio: Implementa metodología
Confirmación, mediantela aportación deevidencia objetiva, deque se han cumplido losrequisitos especificados.
Verificación
7.- VALIDACIÓN/VERIFICACIÓN DE MÉTODO
NCh-ISO 15189:2013
NCh-ISO 15189:2013
ETAPAS EN LA VALIDACIÓN / VERIFICACIÓN DE MÉTODOS
A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar
B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
E.- Análisis estadístico de los datos
F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos
G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño.
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METODOS
CUANTITATIVOS CUALITATIVOS
PARAMETRO DE DESEMPEÑO
VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN
PRECISION
VERACIDAD
LINEALIDAD
INTEFERENCIAS
LIMITE INFERIOR
INTERVALOS REFERENCIA
PRECISION
VERACIDAD
LINEALIDAD
LIMITE INFERIOR
INTERVALOS REFERENCIA PRECISION
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar
B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
PRECISION
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
?
?
?
?
?
REQUISITO
?
?
?
?
?
FUENTE
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B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
Ref. Validación de métodosanalíticos no cuantitativos. RevistaMexicana de CienciasFarmacéuticas, vol. 41, núm. 2,abril-junio, 2010, pp. 15-24
Recommendations for theBioanalytical Method Validation ofLigand-binding Assays to SupportPharmacokinetic Assessments ofMacromolecules. PharmaceuticalResearch, Vol. 20, No. 11, November2003 (© 2003)
B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
PRECISIÓN INTRAENSAYO
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
20%
95%
5%
5%
95%
REQUISITO
Recommendations for the Bioanalytical Method Validation of Ligand-binding Assays to Support
Pharmacokinetic Assessments of Macromolecules. Pharmaceutical Research, Vol. 20, No. 11, November
2003 (© 2003)
Ref. Validación de métodos analíticos no cuantitativos.Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol. 41, núm. 2, abril-junio, 2010, pp. 15-24
FUENTE
PRECISION INTERMEDIA 20%
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• Existen guías claramente definidas para validar métodos cuantitativos
• Las guías CLSI no son la única alternativa
C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar
C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar
MÉTODOS CUALITATIVOS
PARAMETRO DE DESEMPEÑO
VERIFICACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
CLSI EP5
CLSI EP12
CLSI EP12
CLSI EP12
CLSI EP12
GUÍA GUÍA
CLSI EP15
CLSI EP12
CLSI EP12
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D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo.
2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida.
3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia
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Selección del Panel de desempeño
- Uso de paneles de desempeño comerciales.- Paneles conformados con muestras de tercera opinión (intercomparación o control de calidad externo).- Paneles de muestras confirmadas con método de referencia o por más de una metodología.
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
Calculo tamaño mínimo de muestras
Muestras positivas {S (1- S) C2} / X2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96)2/(0.1)2
Muestras Negativas {E (1- E) C2} / X2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96)2/(0.1)2
S= Sensibilidad E= EspecificidadC= Intervalo de confianza estimado (1.96 para un 95% de confianza)X= % error permitido (habitualmente 5-20%).
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
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E.- Análisis estadístico de los datos
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
• Cantidad de material control necesario: ideal 2 a 6.• El material de control debe ser lo más semejante a una muestra de rutina• Procesar cada material de control por duplicado, dos veces al día durante 20
días y de acuerdo a las recomendaciones del fabricante• Total de 80 determinaciones por nivel procesado.
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DIA20
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
SUEROS NEGATIVOS
SUEROS POSITIVOS
Cut offDEBIL
MEDIO
FUERTE
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
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E.- Análisis estadístico de los datos
Precisión en condiciones de repetibilidad
PrecisiónIntermedia
EP-5
F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos
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G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño.
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
% CV
VALIDACIÓN
Elaboración CCI
Entrenamiento personal
Gestión de Equipos
Implementac ión SGC
VERIFICACIÓN
CCE
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METODOS
CUANTITATIVOS CUALITATIVOS
PARAMETRO DE DESEMPEÑO
VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN
PRECISION
VERACIDAD
LINEALIDAD
INTEFERENCIAS
LIMITE INFERIOR
INTERVALOS REFERENCIA
PRECISION
VERACIDAD
LINEALIDAD
LIMITE INFERIOR
INTERVALOS REFERENCIA PRECISION
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar
B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
VERIFICACIÓN
?
?
?
REQUISITO
?
?
?
FUENTE
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B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
VERIFICACIÓN
99,3%
Sr 0,07 ; St 0,3
100%
REQUISITO
?
?
?
FUENTE
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C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar
MÉTODOS CUALITATIVOS
PARAMETRO DE DESEMPEÑO
VERIFICACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
TASA FALSOS POSITIVOS
TASA FALSOS NEGATIVOS
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
PRECISION
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
CLSI EP5
CLSI EP12
CLSI EP12
CLSI EP12
CLSI EP12
GUÍA GUÍA
CLSI EP15
CLSI EP12
CLSI EP12
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
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D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo.
2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida.
3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia
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D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
- Seleccionar materiales con valores en el rango de interés clínico o cercanos a las concentraciones usadas por el fabricante para establecer las especificaciones de precisión. - 2 niveles al menos (+ fuerte, + débil) que imiten la matriz de la muestra del paciente.- Analizar cada muestra tres veces al día durante 5 días siguiendo exactamente los pasos del inserto o del instructivo de trabajo.- Siempre incluir el control interno en cada corrida.
D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)
SUEROS NEGATIVOS
SUEROS POSITIVOS
Cut offDEBIL
FUERTE
DIA 1
R1
R2
R3 R3
DIA 2
R1
R2
DIA 3
R1
R2
R3
DIA 4
R1
R2
R3
DIA 5
R1
R2
R3
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F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos
G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño.
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0
10
20
30
40
50
60
%
VALIDACIÓN
Elaboración CCI
Entrenamiento personal
Gestión de Equipos
Implementación SGC
VERIFICACIÓN
CCE
VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN
VERIFICACIÓN
CCE
CCE CCECCE CCE
CCI comercial
Auditoria internaAuditoria interna
Auditoria interna Auditoria interna
Auditoria interna
ACREDITACION ISO 15189
Estado al año 2016
• Sistema de gestión de calidad no implementado1
• Metodologías sin control interno adecuado2
• Procedimientos no estandarizados3
• Equipamiento en distinto estado de mantención4
• Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia5
• Métodos no validados/verificados6
• Ausencia de CCE adecuado7
• Inexistencia de cartas control8
• Metodologías no acreditadas9