EXPO CULTIVO DE RAICES.pdf

7/18/2019 EXPO CULTIVO DE RAICES.pdf

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UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRION FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE AGRONOMIAOXAPAMPA

TEMA “CULTIVO IN VITRO DE RAICES”

CURSO: BIOTECNOLOGIA AGRICOLA

CICLO: X

OXAPAMPA- 2013



INTRODUCCION

Las raíces sintetizan, acumulan y secretan una gran

variedad de compuestos. Se conoce que la actividadbiosintética de las raíces también se mantiene en cultivos

in vitro.

El cultivo en vitro de las raíces para la producción de

metabolitos secundario ha adquirido gran interés en losúltimos años. Esto se debe al redescubrimiento de las

raíces no solo por sus funciones tradicionales como

soporte mecánico y captación de agua y sales, sino

también como fuente importante de producto químicos

que luego son traslocados al resto de la planta. Desde laantigüedad, los extractos vegetales de raíces fueron

ampliamente usados en medicina popular como colorante,

alimentos, etc.



CULTIVO IN VITRO DE RAÍCES

El uso de raíces como una fuente deexplante para propagación in vitro es

limitado a un pequeño número de

especies.

La regeneración de yemas en cultivo deraíces ha sido observada, principalmente

en especies que, normalmente, presentan

esa capacidad en condiciones naturales.



ETAPAS

Fase 0:

Preparación de la planta madre

Para poder establecer el cultivo en

condiciones de asepsia, se deben

obtener explantes con un nivel

nutricional y un grado de desarrollo

adecuado.



Fase 1:Desinfección del material vegetal Una vez elegida la planta madre, se extraerán

los fragmentos a partir de los cuales se

obtendrán los explantes.

Antes de extraer los explantes se hará una

desinfección de los fragmentos de plantamadre para eliminar los contaminantes

externos.

Los contaminantes más comunes son los

hongos y las bacterias que habitan en formanatural en el ambiente. Una vez desinfectado

el material vegetal, se debe mantener en

condiciones de asepsia.



Fase 2:

Introducción del material in vitro Luego de la desinfección superficial, la

raíz, se ponen en medio de cultivo estéril.

En un período de una semana o quince

días, comienza el proceso de germinación o

regeneración de nuevos tejidos vegetales,

iniciando el ciclo de cultivo in vitro.



Fase 3:

Multiplicación de los brotes

Durante esta fase se espera que los explantes que

sobrevivieron la FASE 1 y 2 originen yemas.

La única función de esta etapa es incrementar y

mantener las cepas o material: los centros

meristemáticos se inducen y desarrollan en

yemas y/o brotes.



Fase 4:

Elección de un medio de enraizamiento de losexplantos

Para enraizar los explantes se utilizanprincipalmente plantines individuales de un tamaño

aproximado de 2 centímetros. Los brotes o yemas

obtenidos durante la fase de multiplicación se

transfieren a un medio.

Algunas especies de plantas no necesitan pasar por

esta etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de

cultivo donde desarrollan yemas nuevas,

por lo tanto el proceso de

multiplicación y enraizamiento

transcurren en forma simultánea.



Fase 5:

Aclimatación de los explantos enraizados

Los explantes recién enraizados son muy sensibles a

los cambios ambientales, de manera que el éxito o el

fracaso de todo el proceso de pende de la aclimatación.

Los plantines enraizados, deben ser aclimatados a las

condiciones de humedad del invernadero disminuyendo

progresivamente la humedad relativa e incrementando

progresivamente la intensidad de luz. Estos plantinesse plantarán en contenedores (almacigueras) cubiertos

por un plástico, para mantener la humedad relativa

elevada.



Condiciones ambientales en los cuartos

de cultivo.

Temperatura 18 – 28 ºC, (23 ºC), temperatura

nocturna 1 ó 2 ºC menor.

Luz – Fotoperiodo: oscuridad primeros días en

cultivo de meristemos 14 a 16 h.

Espectro de luz = luz blanca fluorescente.

Humedad relativa: No de fácil control



La planta Jacob ina spic ig era

Metodología. Se separaron las raíces de plantas

adultas de J.spicigera y se lavaron con agua y

detergente por 1 día; se desinfectaron con hipoclorito

de sodio al 20%-Tween 20 al 0.1 %, etanol al 70% y 10

ml/L de Plant Preservative Mixture (PPM). Las raícesse cultivaron en medio MS conteniendo 1, 2 o 3 mg/L

de ácido indolacético (AIA), ácido indolbutírico (AIB),

ácido naftalenacético (ANA) o ácido 2,4

diclorofenoxiacético (2,4-D). Se probaron medios con el

doble de la concentración de vitaminas, mayorcontenido de sacarosa (40 g/L) o KNO3 (2.5 g/L).

Adicionalmente las raíces se cultivaron en medio

WPM (Woody Plant Media) adicionado con 2 mg/L de

las auxinas antes mencionadas.



Cultivo de raíz de zanahoria

Nobecourt en 1937: obtuvo cultivo de callos a partir de

la raíz de la zanahoria ( Daucus carota) en un medio de

cultivo con auxinas.



Procedimiento

Semillas obtenidas de árboles que crecen en laFacultad de Cs. Agrarias (UNNE) fuerondesinfectadas en etanol al 70% (durante 2 min.) + 2gotas de Tween (durante 15 min.) y finalmente,fueron lavadas con agua destilada estéril. Las

semillas fueron asépticamente puestas a germinar enfrascos de vidrio. Las raíces de plantas de 15 díasfueron desinfectadas en etanol 70% (20 segundos) yenjuagadas 4 veces con agua destilada estéril.



La raíces secundarias (2 cm. de longitud) fueron

cultivadas en tubos de vidrio de 11 cc., conteniendo 3

ml del medio MS (Murashige & Skoog, 1962) diluido 4

veces (3% sacarosa) y suplementado con diferentesconcentraciones y combinaciones entre benciladenina

(BAP), hemisulfato de adenina (SA), cinetina (CIN) y

thidiazuron (TDZ). El pH de los medios fue ajustado a

5,8, antes del agregado de 0,7 % de agar. Los cultivos fueron incubados en oscuridad o luz a 27

± 2oC, con un fotoperiodo de 14 h.



CULTIVO DE RAÍCES TRANSFORMADAS

Los cultivos in vitro de raíces aplicados al estudio

y producción de metabolitos secundarios se

comenzaron a utilizar hace 40 años; estos

sistemas generalmente obtenidos a través de unbalance hormonal en el medio de cultivo, además

las raíces presentan un crecimiento lento. Este

inconveniente pudo ser solucionado por medio del

cultivo de raíces transformadas, obtenidas a

través de la infección con cepas patogénicas de Agrobacterium rhizogenes (raíces en cabelleras).



ESTABLECIMIENTO DE CULTIVOS DE RAÍCES TRANSFORMADAS

Se inocularon plántulas que tenían entre dos y

tres semanas de edad con cultivos de 48h de A.

rhizogenes. Estas plántulas fueron mantenidas

en medio MSRT. Aproximadamente entre latercera y cuarta semana de realizada la infección,

aparecieron ápices radicales en los sitios de

inoculación. Estos ápices radicales fueron

transferidos a medio MSRT líquido en presenciade 1g/l de ampicilina con el fin de eliminar las

bacterias.



CONCLUSIONES

El cultivo in vitro de raíces es una técnica que se

realiza en pocos cultivos ya que es lenta su

regeneración.

Las etapas que se sigue en el cultivo de raíces es

la misma para cualquier explante.

En cuanto al medio de cultivo los reguladores decrecimiento son según el objetivo de la

investigación.

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