Extraccin de proteinas Aspirar el medio y poner las placas en hielo. Lavar con PBS frio y rascar las celulas con 1 ml de PBS. Centrifugar a 10.000 r.p.m. 5 min., aspirar el sobrenadante y resuspender con el RIPA buffer + inhibidores, 100 ul por pellet arox. Poner en la noria a 4C durante 30 min. Trancurrido este tiempo se centrifuga a 14.000G 5 min. a 4C y recoger el sobrenadante y desechar el pellet. RIPA BUFFER Para la extraccin de las proteinas utilizaremos el RIPA buffer (SIGMA R0275-500ML) 4C, al que aadiremos inhibidores de las fosfatasas y de las proteasas y PMSF. Inhibidor de fosfatasas 1:100 (SIGMA P5726-5ML) Inhibidor de Proteasas 1:25 (ROCHE 05892970001) PMSF 100mM para que quede 1:100 (0.0174 g de PMSF en 1ml de etanol absoluto)