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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUÍMICA

ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL EXTRACTO ETANÓLICO

DEL FRUTO VALLEA STIPULARIS L. f. “chuillur” EN

RATONES

Tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico

Presentado por:

Br. María Elena, Ortiz Chaparro.

Asesora:

Dra. Juana Elvira, Chávez Flores.

Lima - Perú

2016

DEDICATORIA

Al finalizar mi carrera profesional he logrado uno de mis objetivos en mi vida y quiero

darles las gracias de manera especial a las personas que me apoyaron, superando todos

los obstáculos para lograrlo, con todo respeto y amor dedico este triunfo.

En principio a Dios, por darme la oportunidad de ser parte de este mundo, darme salud y

fuerza para enfrentar diversas dificultades y lograr mis metas satisfactoriamente.

A mi asesora y amiga. Dra. Juana Elvira, Chávez Flores, quien me brindó su apoyo,

confianza y conocimiento durante mi etapa universitaria y el desarrollo de mi tesis. Pero

sobre todo por la motivación durante la carrera universitaria.

Con todo mi amor y cariño a mis padres (Eleodoro y Anastasia), las personas más

importantes de mi vida, que me han brindado todo: la confianza, apoyo, paciencia y amor

incondicional pero sobre todo por enseñarme valores únicos y necesarios para

desenvolverme en mi vida profesional y personal.

A mis hermanos (Alcira, Beatriz y Christian) por estar siempre presente a la expectativa

de mis logros profesionales y personales, ya que estos cinco años me dedicaron palabras

de motivación e inspiración para poder superar cada día más y así poder culminar mi

meta.

A mis sobrinos (Diego y Ariana) que con sus travesuras y ocurrencias me alegran la

vida.

AGRADECIMIENTO

A los miembros de mi jurado. Dr. Enrique león Soria, Mg. Bertha Jurado Teixeira y

Mg. Luis Miguel Félix Veliz por brindarme sus conocimientos y apoyo en el desarrollo

de esta investigación.

A la Dra. Juana Elvira Chávez Flores un especial agradecimiento por la orientación,

apoyo y sobre todo por el tiempo que dedicó al desarrollo de esta investigación y a

todas sus enseñanzas que nos impartió dentro y fuera de las aulas de estudio.

Al Ing. Carlos Albornoz e Ing. Pedro Sáenz, por su apoyo y guía en los análisis

estadísticos que permitieron la realización del presente trabajo.

A mi familia que considero que son personas admirables, esto no hubiera sido posible

sin el apoyo que me otorgaron y el cariño que me inspiraron de forma incondicional,

entendiendo mis ausencias, mis buenos y malos ratos pero sobre todo por el apoyo

moral durante mi etapa universitaria.

A mi Alma Mater la Universidad Privada Norbert Wiener, la Carrera de Farmacia y

Bioquímica por ser el templo del saber que me permitió ser parte de la misma y

adquirir conocimientos nuevos y por su intermedio a todos mis maestros/as que me

impartieron sus conocimientos durante la carrera universitaria.

ÍNDICE GENERAL

Pág.

Resumen

Summary

I. INTRODUCCIÓN 1

1.1. Planteamiento del problema 2

1.2. Formulación del problema 2

1.3. Justificación 3

1.4 Objetivos 4

1.4.1. Objetivo general 4

1.4.2. Objetivos específicos 4

1.5. Variables 4

1.5.1. Variable independiente 4

1.5.2. Variable dependiente 4

1.6. Hipótesis 4

II. MARCO TEÓRICO 5

2.1. Antecedentes de la investigación 5

2.1.1. Antecedentes internacionales 5

2.1.2. Antecedentes nacionales 6

2.2. Bases teóricas 8

2.2.1. Taxonomía de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 8

2.2.2. Características de la familia Elaeocarpaceae 8

2.2.2.1. Especies vegetales de la familia

Elaeocarpaceae 8

2.2.2.2. Propiedades de las especies vegetales

de la familia Elaeocarpaceae 9

2.2.2.3. Metabolitos primarios y secundarios de la

familia Elaeocarpaceae 9

2.2.3. Estudio botánico de la especie Vallea stipularis

L.f. “chuillur” 10

2.2.3.1. Nombre común de la especie Vallea stipularis


2.2.3.2. Observaciones para el reconocimiento de la

especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 10

2.2.4. Descripción botánica 11

2.2.5. Distribución de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 11

2.2.6. Usos populares y propiedades medicinales 12

2.3. Flavonoides 13

2.3.1. Clasificación de los flavonoides 14

2.3.2. Efectos farmacológicos de los flavonoides 16

2.4. Estudios de actividad analgésica 20

2.4.1. Analgesia 20

2.4.2. Dolor 20

2.4.3. Fisiología del dolor 20

2.4.4. Origen del dolor 22

2.4.5. Clasificación del dolor 23

2.5. Escala analgésica de la O.M.S. 24

2.6. Analgésicos 26

2.7.1. Analgésico menores (no opioides) 26

2.7.2. Analgésicos opiáceos 27

III. MATERIALES Y MÉTODOS 30

3.1. Tipo de investigación 30

3.2. Población y muestra 30

3.2.1. Población 30

3.2.2. Muestra 30

3.3. Criterios de inclusión y exclusión 30

3.3.1. Criterio de inclusión 30

3.3.2. Criterio de exclusión 31

3.4. Materiales, solventes y reactivos 31

3.5. Metodología de la preparación y evaluación de la actividad

analgésica 35

3.6 Lugar de ejecución 36

3.7. Estudio fitoquímico 36

3.7.1. Recolección del material botánico 36

3.7.2. Preparación del extracto etanólico del fruto de

Vallea stipularis L.f. “chuillur” 36

3.8. Ensayos preliminares 37

3.8.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis


3.8.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis


3.9. Procedimiento de la actividad analgésica en ratones 39

3.10. Estudio farmacológicos 40

3.10.1. Animales de experimentación 40

3.10.2. Preparación de las dosis del extracto etanólico


3.10.3. Preparación de los medicamentos Q.P. 40

3.10.4. Evaluación de la técnica del ácido acético 0,8 % 41

3.10.5. Análisis estadístico de la actividad analgésica 43

IV. RESULTADOS 44

4.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis


4.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis


4.3. Análisis estadístico SPSS versión 22,0 del extracto

etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 48

V. DISCUSIÓN 56

VI. CONCLUSIONES 59

VII. RECOMENDACIONES 60

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 61

IX. ANEXOS 68

ÍNDICE DE FIGURAS

Pág.

Figura 1. Estructura básica de los flavonoides 13

Figura 2. Estructura básica de los flavonoides “propiamente dichos” 15

Figura 3. Estructura básica de los compuestos relacionados a los

flavonoides 15

Figura 4. Estructuras químicas de los distintos tipos de Flavonoides 18

Figura 5. Escalera analgésica de la O.M.S. modificada 25

Figura 6. Formula química del paracetamol 27

Figura 7. Formula química de clorhidrato de tramadol 29

Figura 8. Preparación y evaluación de la actividad analgésica del

extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 35

Figura 9. Selección de los animales de experimentación 56 ratones

albinos especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB 39

Figura 10. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de


Figura 11. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de


Figura 12. Efecto analgésico del extracto etanólico del fruto de Vallea

stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales

inducidas por AcOH 0,8 % en ratones 54

Figura 13. Porcentaje de inhibición del extracto etanólico del fruto de

Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones

abdominales inducidas por AcOH 0,8 % en ratones 55

Figura 14. Separación del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” 70

Figura 15. Fruto maduro de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 70

Figura 16. Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 71

Figura 17. Observando los ensayos preliminares (prueba de solubilidad

y análisis fitoquímico) de la especie Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 71

Figura 18. Aclimatación del material biológico (ratones albinos de

especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB). 72

Figura 19. Preparación de los tratamientos y el grupo control

(AcOH 0,8 %) 72

Figura 20. Administración de los tratamientos por vía oral a los ratones

albinos de especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB 73

Figura 21. Observación y cuantificación de las contorsiones abdominales

de los ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa

Balb/C53/CNPB 73

Figura 22. Evaluación de las contorsiones abdominales de los grupos

experimentales 74

Figura 23. Observación de las contorsiones abdominales de los grupos

experimentales 74

ÍNDICE DE TABLAS

Pág.

Tabla 1. Información etnofarmacológica de Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 12

Tabla 2. Efecto farmacológico de algunos flavonoides 19

Tabla 3. Distribución aleatoria de animales de experimentación

(Ratones albinos de especie Mus musculus) 41

Tabla 4. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de


Tabla 5. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de


Tabla 6. Promedio y porcentaje de inhibición (%) de las contorsiones

abdominales del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis


Tabla 7. Prueba de normalidad (KS) de las contorsiones abdominales

de todos los grupos experimentales 49

Tabla 8. Prueba de homogeneidad de varianza de contorsiones

abdominales de todos los grupos experimentales 50

Tabla 9. Prueba de ANOVA de las contorsiones abdominales de todos

los grupos experimentales 51

Tabla 10. Prueba de T de Dunnett de las contorsiones abdominales de

todos los grupos experimentales 52

Tabla 11. Prueba de post hoc de HSD Tukey de contorsiones

abdominales de todos los grupos experimentales 53

ABREVIATURAS

Ac. Ácido

AAS Ácido acetilsalicílico

AcOH Ácido acético glacial

AAP Analgésicos con propiedades antipiréticas

AINE Antiinflamatorio no esteroideo

AT Ácido thuriférico

Bz Benceno

COX Ciclooxigenasa

cm Centímetro

°C Grado centígrado

Ct Contorsiones del grupo tratado

Cc Contorsiones del grupo control

CM Carboximetilcelulosa

DP Desoxipodofilotoxina

DPP Desoxipicropodofilina

Et2O Éter etílico

EP Éter de petróleo

EtOH Etanol

Et2O Éter etílico

EP Éter de petróleo

EtOAc Acetato de etilo

Ex-EtOH Extracto etanólico

EVA Escala visual analógica

EVD Escala verbal descriptiva

FS Fracción soluble

FNS Fracción no soluble

g Gramos

g/d Gramos por día

g/L Gramos por litro

Hex Hexano

h Hora(s)

IP Vía intraperitoneal

I.A.S.P. Asociación Internacional para el Estudio del Dolor

IM Vía intramuscular

IV Vía intravenoso

kg Kilogramo

L Litro(s)

LOX Lipoxigenasa

µ Micra(s)

mL Mililitro(s)

mg/d Miligramos por día

mg/kg Miligramo por kilogramo de peso

Me2CO Acetona

MeOH Metanol

m.s.n.m. Metros sobre el nivel del mar

ng Nanogramo

n-buOH N-butanol

NeuPSIG Grupo de interés especial del dolor neuropático

INS Instituto Nacional de Salud

OMS Organización Mundial de la Salud

OEA Organización de los Estados Americanos

Pg Prostaglandina

QP Químicamente puro

SNC Sistema Nervioso Central

Tx Tromboxanos

UNMSM Universidad Nacional Mayor de San Marcos

VO Vía oral

μ Mu

k Kappa

∂ Delta

% Porcentaje

RESUMEN

En la actualidad el auge de la utilización de plantas medicinales ha planteado

nuevos retos en la investigación, diversos pueblos indígenas del Perú han

utilizado desde tiempos inmemoriales las plantas medicinales; en esta

investigación se estudió la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”, que se

encuentra en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay, departamento de

Apurímac, a 3,100 m.s.n.m. y tiene propiedades para: escorbuto, cicatrizante,

gastritis, reumatismo, purgante drástico, antiinflamatorio y como analgésico. Se

empleó el método de contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8

% (Koster, et al.), se usó 56 ratones albinos de la especie Mus musculus y de

cepa Balb/C53/CNPB de ambos sexos, los ratones albinos fueron distribuidos

al azar en 7 grupos de 8 cada uno, los extractos etanólicos (50 mg/kg, 100

mg/kg y 200 mg/kg), el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de

tramadol Q.P. 40 mg/kg se administraron por vía oral, 30 minutos después de

haber administrado los tratamientos se administró por vía intraperitoneal ácido

acético 0,8 % a una dosis de 0,1 mL/10 g peso corporal, el grupo sin

tratamiento recibió solo agua destilada y el grupo control solo se le administró

ácido acético al 0,8 %; inmediatamente cada grupo de los ratones albinos

fueron observados por 20 minutos. Obteniendo como resultado que todos los

grupos lograron disminuir significativamente (p < 0,05), el número de

contorsiones abdominales al ser comparados con el grupo control, el efecto

máximo se alcanzó a la dosis de 200 mg/kg con un 70 % de inhibición.

Palabras clave: actividad analgésica, compuestos fenólicos, flavonoides,

extracto etanólico, Vallea stipularis L.f.

SUMMARY

Today the rise of the use of medicinal plants has posed new challenges in

research, various indigenous peoples of Perú have used medicinal plants since

time immemorial; in this research the species studied Vallea stipularis L.f.

"chuillur" it located in the district of Tamburco province of Abancay, Department

of Apurimac, 3,100 m.s.n.m. and it has properties for: scurvy, healing, gastritis,

rheumatism, drastic purgative, anti-inflammatory and analgesic. the method of

contortions induced by acetic acid and 0,8 % was used (Koster, et al.), 56

albino mice of the species Mus musculus strain BALB/C53/CNPB of both sexes

was used, the albino mice were randomized into 7 groups of 8 each, the

ethanolic extracts (50 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg), paracetamol Q.P. 300

mg/kg and tramadol hydrochloride Q.P. 40 mg/kg were administered orally 30

minutes after treatments were administered intraperitoneally administered 0,8 %

acetic acid at a dose of 0,1 mL/10 g body weight, the untreated group received

only water distilled and control group was only administered 0,8 % acetic acid;

each group immediately albino mice were observed for 20 minutes. The result

being that all groups achieved significantly lower (p < 0.05), the number of

crunches when compared with the control group contortions, the maximum

effect was achieved at a dose of 200 mg/kg with 70 % inhibition

.

Keywords: analgesic activity, phenolic compounds, flavonoids, ethanol extract,

Vallea stipularis L.f.

1

I. INTRODUCCIÓN

Desde la antigüedad la medicina tradicional ha desempeñado un rol importante

aliviando las enfermedades y el dolor. Actualmente existe un gran interés por el

mejor conocimiento y uso de medicinas alternativas, existen investigaciones

científicas que avalan los beneficios de diversas plantas medicinales en

diversas afecciones crónicas o leves. El amplio uso de la medicina tradicional

se atribuye a su accesibilidad y asequibilidad, siendo muchas veces la única

fuente para la atención sanitaria de los pacientes de menores recursos 1.

Si bien la medicina moderna está bien desarrollada en la mayor parte del

mundo, grandes sectores de la población de los países en desarrollo todavía

dependen de los profesionales tradicionales, las plantas medicinales y los

medicamentos herbarios para su atención primaria. Es más, durante los últimos

decenios, el interés de la población en las terapias naturales ha aumentado

enormemente en los países industrializados, y se halla en expansión el uso de

plantas medicinales y medicamentos herbarios 2.

Toda planta es considerada planta medicinal, cuando es recolectado o

separado de la naturaleza, tiene una composición y unas propiedades tales,

que constituyen la forma bruta del medicamento o de los cuales se extraen

precursores hemisintéticos de moléculas bioactivas. En este contexto el

desarrollo de fármacos tradicionales mejorados se transforma en una

necesidad, mediante el estudio fitoquímico, farmacológico y toxicológico de

especies vegetales, capaces de producir en ciertos casos fármacos eficaces y

no tóxicos para las poblaciones 3.

A pesar del gran avance en la fitoquímica, todavía hay un vacío en el

conocimiento completo de la composición química de las plantas medicinales,

lo que es motivo para la búsqueda de nuevos compuestos químicos y su

relación con la actividad biológica, para ello el aislamiento e identificación de

los constituyentes vegetales en la actualidad se realiza con mayor exactitud en

el desarrollo de mejores y nuevas herramientas en química analítica 4.

2

1.1. Planteamiento del Problema

Las plantas constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de los

países en desarrollo. Aunque no existen datos precisos para evaluar la

extensión del uso global de plantas medicinales, la Organización Mundial

de la Salud (OMS) ha estimado que más del 80 % de la población mundial

utiliza, rutinariamente, la medicina tradicional para satisfacer sus

necesidades de atención primaria de salud y que gran parte de los

tratamientos tradicionales implica el uso de extractos de plantas o sus

principios activos 5.

La flora peruana comprende alrededor de 25.000 especies, que se

distribuyen en los distintos pisos ecológicos 6. Los pueblos indígenas, y

principalmente aquellos originarios del Perú, poseen un enorme bagaje de

conocimientos sobre plantas medicinales. Este conocimiento ha sido

transmitido a través de varias generaciones; es por ello que el estudio de

estas plantas se convierte en una necesidad orientada a salvaguardar y

proteger esos saberes tradicionales 7.

Se contempla también otro aspecto de actualidad, referido a la

biodiversidad, ya que la desaparición de las plantas medicinales ocasiona

pérdidas irreparables al patrimonio de la humanidad. Las plantas

medicinales, corren un serio riesgo de desaparición, muchas de ellas se

mantienen gracias a tradiciones milenarias, por sus propiedades

medicinales, pero la ruptura de las costumbres ancestrales, por los

movimientos migratorios hacia las urbes, amenaza su continuidad de uso 6.

1.2. Formulación del problema

¿Tendrá actividad analgésica el extracto etanólico del fruto Vallea stipularis

L.f. “chuillur” en ratones?

3

1.3. Justificación

La población ha ido aumentando el uso de las plantas medicinales, bajo la

creencia que las plantas son inocuas por su naturaleza, pero mediante

estudios e investigaciones farmacológicas y toxicológicas, se determinó

que los principios activos presentes en una planta medicinal tienen

propiedades beneficiosas pero a altas concentraciones pueden ser

perjudiciales para el organismo vivo.

En la actualidad cientos de plantas son utilizadas y estudiadas en el campo

de la medicina; pero se requiere seleccionar, analizar, comparar y clasificar

los efectos terapéuticos, para agrupar las plantas con propiedades

similares y para conocer los principios activos responsables de curar y

aliviar las enfermedades.

La presente investigación pretende contribuir con el estudio de una planta

medicinal, ya que no se tiene conocimiento de que se hayan realizado

trabajos y publicaciones del fruto de la especie Vallea stipularis L.f.

conocida por nuestros pobladores con el nombre popular de “chuillur”,

perteneciente a la familia de Elaeocarpaceae, se encuentra en el distrito de

Tamburco, provincia de Abancay, departamento de Apurímac a 3,100

m.s.n.m. y tiene propiedades que le han sido atribuidas por los habitantes

de esa región, para: escorbuto, cicatrizante, gastritis, reumatismo, purgante

drástico, antiinflamatorio y como analgésico.

4

1.4. Objetivos:

1.4.1. Objetivo General.

Determinar la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur” en ratones.

1.4.2. Objetivos Específicos:

Realizar el análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur” por análisis cualitativo.

Comprobar la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur” en ratones.

1.5. Variables:

1.5.1. Variable Independiente.

Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

1.5.2. Variable Dependiente.

Actividad analgésica.

1.6. Hipótesis.

El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” presenta

actividad analgésica.

5

II. MARCO TEÓRICO

2.1. Antecedentes de la investigación.

2.1.1. Antecedentes Internacionales.

En el estudio titulado “Validación preclínica de actividad analgésica

periférica y central de la decocción de hojas frescas de Persea americana

Mill. (aguacate) y Musa x paradisiaca L. (plátano)” presentado por Garcia

A, et al. Cuba, 2014 8. Objetivo: determinar la actividad analgésica

periférica y central de las hojas de Persea americana Mill. (aguacate) y

Musa x paradisiaca L. (plátano). Métodos: se evaluó la actividad

analgésica periférica mediante el modelo de contorsiones inducidas por

ácido acético (writhing test) en ratones, a los 60 minutos de haber recibido

el tratamiento correspondiente, se inyectó por vía IP ácido acético 0,75 %

(0,1 mL/10 g), y la actividad analgésica central fue evaluada aplicando el

modelo de inducida por inmersión de la cola en agua caliente (tail flick) en

ratones, a los 60 minutos de haber recibido el tratamiento, se sumergió el

tercio distal de su cola en agua a 55 0C, inmediatamente fueron

observados por 15 minutos, con la dosis de 10 mg/kg de material

vegetal/kg en ambos estudios. Resultados: en la evaluación de la

actividad analgésica periférica, inhibieron de forma significativa la

respuesta dolorosa y en la evaluación de la actividad analgésica central

no tuvieron respuesta significativa. Conclusiones: se determinó que las

hojas de Persea americana Mill. (aguacate) y Musa x paradisiaca L.

(plátano) ambas especies medicinales presentan actividad analgésica

periférica y en cuanto a la actividad analgésica central no presentó

respuesta significativa.

En el estudio titulado “Actividad antiinflamatoria y analgésica de un

extracto orgánico del alga roja Galaxaura rugosa (J. Ellis & Solander) J.V.

Lamouroux” presentado por Duménigo A, et al. Cuba, 2014 9. Objetivo:

evaluar la actividad antiinflamatoria y analgésica del extracto en

diclorometano del alga roja Galaxaura rugosa. Métodos: la actividad

6

analgésica se evaluó mediante el método de contorsiones abdominales

inducidas por ácido acético 0,8 % (Koster, et al.) los ratones se

distribuyeron al azar en 6 grupos de 10 cada uno. El extracto en

diclorometano (3 mg/kg, 6 mg/kg, 12,5 mg/kg y 100 mg/kg.), Ácido

acetilsalicílico (AAS) 68 mg/kg y suero fisiológico 0,9 %. Transcurrido 1

hora en el caso que se les administró el AAS y 30 minutos en el caso que

se les administró extracto, se procedió a administrar ácido acético al 0,8

% por vía IP y se cuantificó el número de contorsiones durante 20 minutos

y la actividad antiinflamatoria tópica se evaluó con el modelo de edema de

la oreja inducido por aceite de Crotón en ratones, con dosis de 0,125;

0,25; 0,5; 1 y 2 mg/oreja, dexametasona 0,1 mg/oreja y indometacina 0,5

mg/oreja. y se les administraron por vía IP. Resultados: el efecto máximo

se alcanzó a la dosis de 100 mg/kg con un 94,68 % de reducción de las

contorsiones y en el caso de la actividad antiinflamatoria el efecto máximo

se alcanzó a la dosis de 2 mg/oreja, con un 79,2 % de inhibición.

Conclusiones: se evaluó la actividad analgésica del extracto orgánico del

alga roja Galaxaura rugosa alcanzando un efecto máximo a la dosis de

100 mg/kg con un 94,68 % de inhibición de las contorsiones y la actividad

antiinflamatoria alcanzó un efecto máximo a la dosis de 2 mg/oreja, con

un 79,2 % de inhibición.

2.1.2. Antecedentes Nacionales.

En el estudio titulado “Actividad analgésica y antiinflamatoria de derivados

de podofilotoxina” presentado por Guerrero E, et al. Perú, 2013 10.

Objetivo: comprobar la actividad analgésica y antiinflamatoria de

derivados de podofilotoxina en ratones y ratas respectivamente.

Métodos: en el estudio de las hojas de Juniperus thurifera L. se aislaron,

entre otros compuestos, desoxipodofilotoxina (DP) y desoxipicropodofilina

(DPP) además del ácido thuriférico (AT). En la evaluación de la actividad

analgésica se emplearon ratones machos que fueron divididos en 5

grupos, a cada grupo le fue suministrado por vía oral uno de los

siguientes tratamientos: Ácido acetilsalicílico (AAS) 200 mg/kg, morfina 4

mg/kg, DP 50 mg/kg, DPP 50 mg/kg y AT 50 mg/kg. Todos los productos

7

fueron suspendidos en carboximetilcelulosa (CM) al 2 %, además se

incluyó un grupo control que recibió CM 2 %; 0,1 mL/100 kg. Una hora

después de haber recibido el tratamiento, se les administró ácido acético

al 1 %, vía IP e inmediatamente se cuantifico las contorsiones en un

período de 20 minutos. Para evaluar la actividad antiinflamatoria se

empleó el test del edema plantar por carragenina en ratas 150 - 200 g.

Resultados: se determinó que el grupo DP 50 mg/kg con 77,8 % de

efecto inhibitorio frente AAS 59,5 %. En cuanto a la actividad

antiinflamatoria se obtuvo con DP 68,8 % de efecto inhibitorio frente

indometacina, 62,8 %. Conclusiones: se comprobó la actividad

analgésica de los derivados de podofilotoxina con la fracción de DP 77,8

% y la actividad antiinflamatoria de derivados de podofilotoxina alcanzó su

efecto con la fracción de DP 68,8 %.

En el estudio titulado “Acción analgésica y neurofarmacológica de las

fracciones soluble y no soluble del extracto etanólico de la semilla de

Jatropha curcas L.” presentado por Salazar A, et al. Perú, 2014 11.

Objetivo: evaluar la actividad analgésica de las fracciones de la semilla

de Jatropha curcas L. Métodos: la actividad analgésica se evaluó

mediante el método de contorsiones abdominales inducidas por ácido

acético 1,5 % (Writhing) en ratones, se distribuyeron en 8 grupos de 6

cada uno, ácido acético 0,1 mL/10 g, extracto etanólico 500 mg/kg

fracción soluble (FS), extracto etanólico 250 mg/kg fracción no soluble

(FNS), extracto etanólico 500 mg/kg fracción no soluble (FNS), extracto

etanólico 750 mg/kg fracción no soluble (FNS), agua destilada 0,1 mL/10

mg, clorhidrato de tramadol 10 mg/kg y diclofenaco sódico 10 mg/kg se

les administró por vía oral los tratamientos, luego de 30 minutos se les

aplicó por vía IP el ácido acético 1,5 %. Resultados: la dosis de 750

mg/kg de FNS se obtuvo 62,86 % presentando el mayor porcentaje de

inhibición con respecto al grupo de ácido acético 54,48 %. Conclusión:

se evaluó la actividad analgésica presentando inhibición con la FNS de

750 mg/kg del extracto etanólico de Jatropha curcas L.

8

2.2. Bases teóricas.

2.2.1. Taxonomía de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

La clasificación taxonómica se dio según el herbario del Museo de

Historia Natural de la U.N.M.S.M. e identificada por la Dra. Haydee

Montoya Terreros, según el sistema de clasificación de Cronquist

(1988).

División : Angiospermae

Clase : Dicotyledoneae

Sub clase : Arquichlamydeae

Orden : Malvales

Familia : Elaeocarpaceae

Género : Vallea

Especie : Vallea stipularis L.f.

Nombre vulgar : “chuillur”

2.2.2. Características de la familia Elaeocarpaceae 12, 13.

La familia Elaeocarpaceae con 10 géneros y cerca de 400 especies

está estrechamente relacionada a la familia Tiliaceas, Bombacaceae,

Malvaceae y Sterculiaceae. Más de la mitad de las especies

pertenecen a los géneros Elaeocarpus (250) y Sloanea (100). Se

distribuye en regiones tropicales y subtropicales de Asia, Australia y

América, ausente en el Continente Africano.

2.2.2.1. Especies vegetales de la familia Elaeocarpaceae.

Vallea stipularis L.f. “chuillur” (Perú) 14-16.

Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” (Chile y Argentina) 17.

Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” (India) 18, 19.

Elaeocarpus sphaericus Leaf (India, Bangladesh, Bhutan,

Nepal, Pakistan y Srilankar) 20, 21.

9

2.2.2.2. Propiedades de las especies vegetales de la familia

Elaeocarpaceae.

Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” (hojas) contiene un

efecto analgésico por vía tópica, al utilizar como modelo

algesiométrico el ensayo de tail flick 17.

Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” (hojas) contiene efectos

analgésico, antiinflamatorio, hipoglucémico, antiulcerogénico y

muy alta actividad antimicrobiana 18, 19.

Elaeocarpus sphaericus Leaf (hojas) contiene efecto

analgésico y antiinflamatorio, utilizando el método de retirada

de la cola en ratones y carragenina inducida rata edema de la

pata en ratas respectivamente 20.

Los extractos de hojas y frutos Elaeocarpus sphaericus Leaf

tiene propiedades analgésicas, antiepilépticas,

anticonvulsivos, antihipertensivos, hipnóticos, tranquilizantes,

termogénicos, sedantes, relajantes del músculo liso 21.

2.2.2.3. Metabolitos primarios y secundarios de la familia

Elaeocarpaceae.

Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” entre los estudios

químicos realizados a las hojas de esta especie se ha

identificado la presencia de los siguientes metabolitos:

triterpenos, flavonoides (quercetina), cumarinas

(escopoletina), esteroles (β-sitosterol), alcaloides (indólicos,

quinolínico e isoquinolinico) entre otros 17.

La fruta Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” tiene muchos

fitoconstituyentes tales como alcaloides (isoelaeocarpicine,

isoelaeocarpine elaeocapine), flavonoides (quercetina),

10

taninos, esteroides, triterpenoides, hidratos de carbono y

glucósidos cardiacos 18, 19.

Elaeocarpus sphaericus Leaf tiene varias sustancias químicas

tales como triterpenos, glucósidos, esteroides, alcaloides

(elaeocarpidine, elaeocarpine, isoelaeocarpine,

epiisoelaeocarpiline, epialloelaeocarpiline, alloelaeocarpiline,

pseudoepiisoelaeocarpiline) también indolizina (grandisines),

flavonoides (quercetina), taninos (ácidos gálico y elágico),

ácidos grasos (palmítico y linoleico), hidratos de carbono,

proteínas y cenizas 20, 21.

2.2.3. Estudio botánico de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

2.2.3.1. Nombre común de la especie Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 14, 15, 22.

El nombre popular de la especie Vallea stipularis L.f. es

“chuillur” a esta especie se le conoce también como:

Achacapuli, cugur, crosckash, chchicllur, chuillur (Tamburco),

chijllurmay (Cusco), gorgor, yongasil, sacha capuli, olla- olla,

tchillurnay, peralilo, rosa, cubillo, guisho (Ecuador), pera

caspi, capulí (Bolivia).

2.2.3.2. Observaciones para el reconocimiento de la especie

Vallea stipularis L.f. “chuillur” 15.

La especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” es fácilmente

reconocible por sus hojas acorazonadas, con los peciolos

ensanchados en sus extremos, es característico también la

pubescencia en la zona de inserción del peciolo en la lámina y

en el envés de ésta.

11

2.2.4. Descripción Botánica 14, 15.

Es un árbol de 8 a 10 metros de altura aproximadamente, de copa

redonda y tronco cilíndrico.

2.2.4.1. Corteza. La parte externa es fisurada, de color café, sin

secreciones ni exudados.

2.2.4.2. Hojas. Son acorazonadas, alternas (4 - 7 cm. de largo y de 2

- 4 cm. de ancho) de color verde amarillento brillante

por el haz y verde claro por el envés con peciolos

largos simples, alternos de base truncada, ápice

acuminado y borde entero.

2.2.4.3. Inflorescencia. Es una panícula de 9 -14 flores.

2.2.4.4. Flores. Son completas de color rojo¸ el cáliz es caduco y

pentámero, al igual que la corola; el androceo está

compuesto generalmente de 32 estambres y el gineceo de

un ovario supero con estilo simple y estigma compuesto.

2.2.4.5. Fruto. Es una cápsula globosa negruzca cuando está

madura, la misma que contiene de 2 - 5 semillas de color

blanco.

2.2.5. Distribución de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.

La familia de Elaeocarpaceae se desarrolla en regiones tropicales y

subtropicales con algunas especies en zonas templadas. El género

Vallea, posee dos especies en hábitat desde Venezuela hasta Bolivia,

una de ellas, nativa del Perú: Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se

desarrolla a una temperatura media anual 10 – 17 °C y se encuentra

en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay, departamento de

Apurímac a 3,100 m.s.n.m. Observada en el Ecuador entre los 2,500

12

– 3,900 m.s.n.m., en el Perú entre los 2,200 – 3,200 m.s.n.m., y en

Colombia de 2,200 – 3,400 m.s.n.m.

2.2.6. Usos populares y propiedades medicinales 14, 15.

Vallea stipularis L.f. “chuillur”, es una planta de la región andina,

empleada por las comunidades campesinas para el tratamiento de:

escorbuto, cicatrizante, gastritis, reumatismo, purgante drástico,

antiinflamatorio y como analgésico (tabla 1).

Tabla 1. Información etnofarmacológica de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

Propiedades

terapéuticas

Parte

utilizada

Preparación Administración

Afecciones del

hígado

Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza en ayunas

Analgésico y

Antiinflamatorio

Hojas y

fruto

Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día

Cicatrizante Hojas y

fruto

Cocimiento 10 g/L x 5´ Lavar la zona afectada 2 - 3

veces x día, en caso del fruto

moler las semillas y aplicarse

a la herida

Purgante

drástico

Fruto Infusión 10 g/L x 5´ Tomar 1 taza en ayunas

Escorbuto Hojas 4 semillas de fruto

fresco, triturar hasta

obtener un jugo

Usar un hisopo y aplicarse

antes de dormir

Gastritis

Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día

Prostatitis

Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día

Fuente: Chávez J. 14, Rafaile S. 16

13

2.3. Flavonoides.

Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas,

principalmente las angiospermas en (hojas, flores y frutos) aunque poco se

ha detectado en hongos y algas. Los flavonoides proceden del metabolismo

secundario de las plantas a través de la ruta de los policétidos que sintetiza

el anillo A, y por la ruta del ácido shikimico que sintetiza el anillo B y la

unidad C de los flavonoides 23.

Los flavonoides tienen una estructura de anillos formada por 15 átomos de

carbono (C6-C3-C6), que consiste en dos anillos aromáticos (A y B) que

contienen generalmente grupos hidroxilos unidos por una cadena lineal de

tres carbonos como se muestra en la figura 1. En algunos casos el anillo

heterocíclico C se encuentra de forma abierta. Los diferentes tipos de

flavonoides difieren en el nivel de oxidación y la saturación del anillo C,

mientras que los compuestos individuales dentro de una clase difieren en el

patrón de sustitución de los anillos A y B 24.

Figura 1. Estructura básica de los flavonoides.

Fuente: Solís M. 25

14

2.3.1. Clasificación de los flavonoides 25-27.

Los flavonoides se clasifican a partir de sus variaciones estructurales.

Al modificar el esqueleto común de los flavonoides por glicosilación,

oxidación, reducción o alquilación; el núcleo genera un escaso

número de estructuras básicas de las cuales se derivan la amplia

gama de flavonoides.

Se trata de compuestos polifenólicos que se caracterizan por poseer

un mismo elemento estructural, conocido como encadenamiento

diaril-propánico, fenilcromano o benzopiránico. Esta estructura es del

tipo Ar-C3-Ar o bien C6-C3-C6, lo que viene a decir que: C6 son anillos

bencénicos (anillo A y anillo B) unidos entre sí a través de una cadena

de 3 átomos de carbono que puede formar o no un tercer anillo pirano

o pirona anillo C).

Todos ellos comparten una estructura común, un grupo fenol, al que

pueden asociarse núcleos aromáticos con diversos tipos de

sustituyentes, predominando los grupos hidroxilos. Sus estructuras

químicas les permiten donar hidrógeno/electrones a los radicales

libres, lo que les confiere el carácter antioxidante.

Atendiendo a lo anteriormente expuesto los compuestos flavónicos se

pueden clasificar en dos grupos, los flavonoides “propiamente dichos”

y los compuestos relacionados con ellos. Los flavonoides propiamente

dichos (figura 2) se caracterizan por poseer un núcleo fenilcromona

(fenil – benzo - y - pirona), y dependiendo de la posición del anillo

fenólico B, se subdividen en compuestos 2- fenilcromona

(flavonoides) y compuestos 3-fenilcromona (isoflavonoides). A su vez,

estos compuestos dan origen a las flavanonas e isoflavanonas por

hidrogenación del anillo C. Asimismo, la hidroxilación del carbono 3

en la serie de las 2-fenilcromonas da lugar a los flavonoles y a los

flavanonoles (2,3-dihidroflavonoles).

15

Figura 2. Estructura básica de los flavonoides “propiamente dichos”.

Fuente: Bonkanka C.26

Figura 3. Estructura básica de los compuestos relacionados a los

flavonoides.

Fuente: Bonkanka C.26

16

Por otro lado, entre los compuestos relacionados a los flavonoides

(figura 3) podemos incluir a las catequinas, flavan-3-oles, flavan-3,4-

dioles, antocianos, chalconas, auronas, xantonas y los neoflavonoides.

2.3.2. Efectos farmacológicos de los flavonoides.

Los flavonoides constituyen una de las familias de compuestos naturales

más interesantes por su amplia bioactividad y presencia en la dieta

humana, numerosos estudios in vitro han confirmado sus efectos

antioxidantes, reducen la formación de radicales libres, inhiben la

peroxidación lipídica, poseen efectos antimutagénicos y tienen la

capacidad de inhibir diversas enzimas. Estudios in vivo han demostrado

que los flavonoides presentan numerosas actividades farmacológicas:

antianginosa, antitumoral, analgésica, antiinflamatoria, antialérgica,

antiulcerosa, hepatoprotectora y acción protectora vascular 27.

Esta variedad estructural está relacionada con las diversas actividades

biológicas que poseen los flavonoides, de entre las cuales destaca, tal

vez por ser una de las más estudiadas, sus propiedades

antiinflamatorias. Desde 1948 se describieron las propiedades

antiinflamatorias de la hesperidina, la naringenina y la nobiletina,

presentes en la fracción soluble en agua de casi todas las especies de

Citrus; a partir de entonces son muchos los estudios in vivo e in vitro que

describen las propiedades antiinflamatorias de los flavonoides y sus

mecanismos 28.

Los flavonoides destacan desde el punto de vista farmacológico por su

baja toxicidad y por presentar numerosos efectos biológicos y

actividades terapéuticas, estudios in vivo demuestran que los

flavonoides potencialmente presentan numerosas actividades

farmacológicas, antitumoral, analgésica, antiinflamatoria, antialérgica,

antiulcerosa y hepatoprotectora, etc. 28, 29.

17

Antocianinas, (figura 4) son un subgrupo perteneciente a la gran familia

de flavonoides, tiene beneficios para la salud como: anticancerígenos,

antitumorales y antinflamatorios 30.

Quercetina, (figura 4) es una flavona más comúnmente hallada en la

naturaleza que posee efectos antiinflamatorios y analgésicos 17, 23.

Hesperidina, (figura 4) una flavanona importante de Citrus sp, posee

efectos antiinflamatorios y analgésicos, se ha utilizado para el

tratamiento de ciertas enfermedades como la artritis 31, 32.

Los flavonoides que se encuentran en altas concentraciones en las hojas

de Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui”, es una especie

perteneciente a la familia Elaeocarpaceae jugarían un rol importante en

la actividad analgésica, antiinflamatoria y antioxidante 17, 33, 34.

Además de sus propiedades analgésicas y antiinflamatorias se ha

descrito una variedad de efectos producidos por diversos metanolitos.

En la tabla 2 se describen los efectos terapéuticos más representativos

de los flavonoides 28.

18

Figura 4. Estructuras químicas de los distintos tipos de flavonoides.

Fuente: Sánchez J. 35

19

Tabla 2. Efecto farmacológico de algunos flavonoides.

Efectos farmacológicos Flavonoides

Antineoplásico Quercetina, kaemferol, fiselina.

Cardiotónicos 3 – metil – quercetina.

Disminuyen la fragilidad

capilar

Rutina, quercetina, naringenina.

Antitrombóticas Tangeretina, hesperidina y rutina.

Colesterol Liquiritigenina.

Protección y

regeneración hepática

Gosipina, hispidulina, hidroxietilrutósido, kolavirona,

quercetina, silimarina y apigenina.

Antiulcerosa Kaemferol, quercetina, rutina, solona y naringina.

Antimicrobianos Quercetina y baicalina.

Antibacterial Crisina y rutina.

Antiviral Crisoeriol.

Antifúngica Cloroflavonina y apigenina.

Antiinflamatorio Hesperidina, apigenina, crisina, gosipina, hibrifolina,

luteolina, miricetina, nepetina, quercetina,

quercitrina, rutina, y sidertoflavonona.

Analgésico Quercetina, hesperidina y miricitrina.

Anticancerígeno Baicaleína, epigalocatequina, nobiletina,

quercetina, rutina, y tangeretina.

Antialérgica Quercetina.

Antiaterogénica Quercetina.

Antidiabética Quercetina.

Antidiarreica Apigenina, kaenferol, morina, miricetina,

naringenina, quercetina y quercitrina.

Antiespasmódica Apigenina, crisina, kaenferol y quercetina.

Antiosteoporotica Ipriflavona.

Protector vascular Antocianidina, citrina y rutósido.

Fuente: Bonkanka C.26, Estrada R. 28

20

2.4. Estudios de actividad analgésica.

2.4.1. Analgesia

La palabra analgesia procede del griego a - carencia, negación, y

algos - dolor. Por lo tanto, define a la analgesia como la falta o

supresión de toda sensación dolorosa, sin pérdida de los restantes

modos de la sensibilidad, es decir, es una condición en la cual se

perciben los estímulos nociceptivos pero no se interpretan como

dolor, por lo común va acompañada de sedación sin pérdida de la

conciencia 36.

2.4.2. Dolor

La International Association for Study of Pain (IASP) definió al dolor

como “una experiencia sensorial y emocional desagradable

asociada a una lesión en los tejidos real o potencial” 37.

El dolor afecta de forma relevante la calidad de vida de la población,

con importantes consecuencias en el ámbito personal, familiar y

social. Representa un problema de salud pública dada su gran

repercusión socioeconómica y constituye uno de los motivos más

frecuentes de utilización de los servicios de salud 38.

2.4.3. Fisiopatología del dolor 36, 39.

El componente fisiológico del dolor se denomina nocicepción, el cual

consiste en el proceso de transducción, transmisión y modulación de

las señales nerviosas generadas en respuesta a un estímulo nocivo

externo. Este es un proceso fisiológico que resulta en una percepción

consciente del dolor. En su forma más simple, el sistema puede ser

considerado como una cadena de tres neuronas, con una neurona

denominada de primer orden que se origina en la periferia y que se

proyecta a la médula espinal, otra neurona de segundo orden que

21

asciende desde la médula espinal, y una neurona de tercer orden que

se proyecta a la corteza cerebral. En una forma más compleja del

sistema puede haber comunicación con otras neuronas sensitivas y

vías neuronales descendentes inhibitorias que provienen del cerebro

medio y que son capaces de modular el estímulo doloroso.

Para que se produzca una sensación dolorosa se requiere de la

estimulación de receptores específicos o nociceptores, que

corresponden a terminaciones nerviosas especializadas, propias de

nervios sensitivos o neuronas de primer orden, que se encuentran en

piel y órganos, las cuales pueden ser estimuladas por una diversidad

de estímulos como presión y lesión de las fibras del dolor, calor

superior a 45 °C, inyección de sustancias químicas o por daño tisular.

El dolor se inicia con un trauma que a nivel de los tejidos provoca la

liberación de: prostaglandinas (Pg), cininógeno, bradicidina y

tromboxanos (Tx).

Esta produce edema y liberación de histamina, serotonina,

bradiquinina, acetilcolina, degranulación de los mastocitos, etc., que

estimulan los nociceptores (receptores del dolor) que están

localizados en los tejidos periféricos.

Este trauma, junto con la cadena de acontecimientos señalados,

produce vasodilatación y aumento de la permeabilidad vascular

(edemas), se liberan proteasas a nivel periférico y promueven la

proteólisis e inflamación, se produce exudación del plasma y la

presencia de leucocitos polimorfo nucleares, monocitos y linfocitos.

En las células comienza la activación de la cascada del ciclo del ácido

araquidónico que activa la destrucción de los fosfolípidos de la

membrana, la misma que lo hace por la presencia de la enzima

fosfolipasa. Aumenta la producción del ácido araquidónico y por

efecto de la lipooxigenasa (Lox) y la ciclooxigenasa (Cox), se generan

22

las prostaglandinas, leucotrienos y tromboxanos. Se inicia así otra vía

de activación del dolor: la de los hidroximetabolitos y leucotrienos.

2.4.4. Origen del dolor: 37, 40 – 42

2.4.4.1. Dolor nociceptivo.

Es causado por la activación de los receptores del dolor

(nociceptores) en respuesta a un estímulo (lesión,

inflamación, infección, enfermedad). Como ocurre con el dolor

agudo, suele haber una relación directa entre su intensidad y

la gravedad de la agresión.

2.4.4.2. Dolor neuropático.

Special Interest Group on Neuropathic Pain (NeuPSIG) de la

Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP),

propuso a finales del 2007 una nueva definición de dolor

neuropático como “El dolor que se origina como consecuencia

directa de una lesión o enfermedad que afecta al sistema

somatosensorial”. Es causado por el daño estructural y la

disfunción de las neuronas del sistema nervioso central

S.N.C. o periférico. Además, el dolor neuropático puede

deberse a compresión nerviosa o al procesamiento anormal

de las señales dolorosas por el cerebro o la médula espinal.

2.4.4.3. Dolor somático.

El dolor somático se debe a lesiones en los tejidos corporales

tales como (piel, boca, nariz, uretra, ano, etc.), o en tejidos

profundos como: articulares, músculos y huesos. Se

caracteriza por ser bien localizado, pero variable en la

descripción y la experiencia. Por ejemplo, las alteraciones

tisulares ocasionadas por cortes o esguinces producen dolor

23

somático superficial, mientras que los calambres musculares

por falta de oxigenación producen dolor somático profundo.

2.4.4.4. Dolor visceral.

El dolor visceral se caracteriza por ser, cólico cuando la

víscera es hueca, profundo, sordo, difuso, mal localizado

que en ocasiones se irradia o se refiere en un área distante

al órgano afectado. Suele acompañarse de sintomatología

vegetativa, como náuseas, vómitos, sudoración, aumentos

de la presión arterial y frecuencia cardiaca. Ejemplos de

este tipo de dolor seria el asociado con apendicitis,

colecistitis, o patología pleural.

2.4.5. Clasificación del dolor: 37, 40 – 42

2.4.5.1. Dolor agudo.

Inicialmente el dolor agudo se definió simplemente en términos

de duración, pero en la actualidad se define como “una

experiencia desagradable y compleja con factores cognitivos y

sensoriales que suceden como respuesta a un trauma tisular”.

2.4.5.2. Dolor crónico.

Se define como “el dolor que se extiende más de 3 ó 6 meses

desde su aparición o que se extiende más allá del período de

curación de una lesión tisular, o está asociado a una condición

médica crónica”.

24

2.5. Escala analgésica de la O.M.S 43.

Existen unas normas de uso de la escala analgésica:

La cuantificación de la intensidad del dolor es esencial en el manejo y

seguimiento del dolor. Generalmente se utilizan escalas

unidimensionales como la escala verbal descriptiva (EVD) o la escala

visual analógica (EVA).

La subida de escalón depende del fallo al escalón anterior, (figura 5). En

primer lugar se prescriben los analgésicos del primer escalón. Si no

mejora, se pasará a los analgésicos del segundo escalón, combinados

con los del primer escalón más algún coadyuvante si es necesario. Si no

mejora el paciente, se iniciarán los opioides potentes, combinados con

los del primer escalón, con el coadyuvante si es necesario.

Si hay fallo en un escalón el intercambio entre fármacos del mismo

escalón puede no mejorar la analgesia (excepto en el 3 escalón).

Si el segundo escalón no es eficaz, no demorar la subida al tercer

escalón.

La prescripción de co-analgésicos se basa en la causa del dolor y se

deben mantener cuando se sube de escalón.

No mezclar los opioides débiles con los potentes.

Prescribir cobertura analgésica del dolor irruptivo.

25

Figura 5. Escalera analgésica de la OMS modificada.

Fuente: Argitalpen E.43

Analgésicos no opioides:

- AINE

- Paracetamol

- Metamizol

Pueden asociarse a los fármacos

del primer escalón en

determinadas situaciones.

Pueden asociarse a los fármacos del

primer escalón en determinadas

situaciones.

Opioides débiles:

- Codeína

- Dihidrocodeina

- Clorhidrato de Tramadol

Opioides potentes:

- Morfina

- Fentanilo

- Oxicodona

- Metadona

- Buprenorfina

Primer escalón

Segundo escalón

Tercer escalón

Posibilidad de usar coadyuvantes en cualquier escalón según la situación clínica y causa específica del dolor.

26

2.6. Analgésicos

Los analgésicos son los fármacos de elección para las diversas

clasificaciones del dolor, siguiendo ciertos principios básicos como: la

elección del fármaco más adecuado en cada caso; la determinación de la

dosis, intervalo y vía de administración; asociaciones de fármacos para

conseguir una mayor potencia; y tratar de evitar en lo posible la aparición

de efectos adversos. Aunque la solución ideal para el dolor sería eliminar la

causa que lo produce, con frecuencia esto no es posible o no puede

hacerse con la suficiente rapidez y se precisa un tratamiento sintomático.

Para ello se utilizan fundamentalmente los analgésicos, aunque también

pueden emplearse coadyuvantes 40.

2.7.1. Analgésico menores (no opioides)

Los analgésicos con propiedades antipiréticas (AAP) y con

propiedades antiinflamatorias de carácter no esteroideo (AINE)

deben ser considerados inicialmente por lo que son adecuados para

dolores leves y moderados. Cubren un número importante de

indicaciones terapéuticas, tienen un "techo" analgésico, es decir, que

por encima de la dosis máxima no tienen mayor eficacia analgésica,

su asociación a codeína con o sin cafeína, aumenta algo este

"techo" estos fármacos, como todos, tienen sus ventajas y sus

riesgos 44, 45.

Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la

ciclooxigenasa (COX), que interviene en la síntesis de

prostaglandinas, los leucotrienos y otros importantes productos

metabólicos, todos ellos derivados del ácido araquidónico. La

inactivación de estas enzimas bloquea la sensibilización y activación

de fibras nerviosas periféricas, disminuyendo el número de impulsos

hacia el sistema nervioso central 46, 47.

27

2.7.1.1. Paracetamol (acetaminofén)

Derivado p-aminofenólico, inhibidor de la síntesis de

prostaglandinas a nivel central por acción sobre la

ciclooxigenasa. Al contrario que los AINE el paracetamol

(figura 6) no presenta acción antiinflamatoria, ni

antiagregante plaquetaria 40, 45, 48.

El paracetamol es analgésico y antipirético pero es mucho

menos irritante a la mucosa gástrica que los antiinflamatorios

no esteroideos y ácido acetilsalicílico, por lo que es

preferible su uso en situaciones febriles y dolorosas 46, 49.

Figura 6. Formula química del paracetamol.

Fuente: Munive R.50

2.7.2. Analgésicos opiáceos 45, 49, 51, 52.

Constituyen un grupo que se caracteriza por poseer afinidad selectiva

por los receptores opioides (μ, k, ∂,) y como consecuencia inducen

analgesia de elevada intensidad, producida sobre el S.N.C., por ello

es de gran utilidad para aliviar dolores moderados a severos

particularmente de origen visceral (como en el cáncer); su

28

administración repetida ocasiona dependencia y tolerancia. Durante

su administración se debe evitar el consumo de alcohol u otros

depresores del S.N.C., en especial en el tratamiento a pacientes con

depresión respiratoria.

Para obtener una dosis que proporcione un alivio adecuado del dolor

con un grado aceptable de efectos colaterales, las dosis de morfina o

de otros opioides potentes tienen que incrementarse gradualmente

hasta que sean eficaces. Al contrario de lo que ocurre con el

paracetamol y los AINE, no hay un límite superior para las dosis de

analgésicos opioides. El objetivo del ajuste de las dosis para aliviar el

dolor consiste en seleccionar la dosis que evite que el paciente sufra

dolor entre una administración y la siguiente, utilizando la mínima

dosis eficaz. La mejor forma de lograr este objetivo consiste en

realizar evaluaciones frecuentes del alivio del dolor, ajustando las

dosis del analgésico según sea necesario.

Este grupo de fármacos constituyen la herramienta más potente

disponible en la actualidad para el tratamiento del dolor. De todos los

analgésicos son estos los que presenten un intervalo de eficacia más

amplio, proporcionando el método más seguro para conseguir un

alivio rápido del dolor de intensidad moderada a severa.

2.7.2.1. Clorhidrato de Tramadol

Es un opioide débil muy prescrito para el tratamiento del

dolor moderado. La eficacia analgésica es intermedia entre

la codeína y la morfina. El clorhidrato de tramadol tiene alta

biodisponibilidad (70 – 90 %), por lo que se absorbe rápida y

casi totalmente después de la administración oral 53.

Su mecanismo de acción no está aclarado del todo, aunque

parece que coexisten dos mecanismos complementarios.

Por una parte se une a receptores μ, y por otra actúa

29

inhibiendo la recaptación de la norepinefrina y la serotonina

a nivel presináptico. 52.

El clorhidrato de tramadol (figura 7) posee una elevada

afinidad tisular, siendo su unión a las proteínas plasmáticas

del 20%, mientras que su concentración plasmática máxima

se alcanza cinco horas después de la administración, debido

a esto, esta droga atraviesa las barreras hematoencefálica y

placentaria y en unos porcentajes mínimos (< 0,2 %) pasa a

la leche materna y su periodo de semidesintegración es de

aproximadamente 6 horas, independiente del modo de

administración 50.

Figura 7. Formula química de clorhidrato de tramadol.

Fuente: Munive R.50

30

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Tipos de investigación.

Experimental

Observacional y

Descriptivo

3.2. Población y muestra.

3.2.1. Población

La población de estudio está conformada por ratones albinos de cepa

Balb/C53/CNPB y especie Mus musculus de 2 meses de edad

provenientes del Instituto Nacional de Salud (INS).

3.2.2. Muestra

Se tomó 56 ratones albinos de cepa Balb/C53/CNPB y especie Mus

musculus de ambos sexos de 25 38 g de peso corporal.

3.3. Criterios de inclusión y exclusión.

3.3.1. Criterios de inclusión

Ratones albinos de ambos sexos.

Ratones albinos de 25 38 g de peso corporal.

Ratones albinos que no tengan características apreciables de

enfermedad.

31

3.3.2. Criterios de exclusión

Ratones albinos que no cumplan con el rango de peso corporal

especificado.

Ratones albinos que hayan sido utilizados anteriormente para

modelos de experimentación.

Ratones albinos con características apreciables de enfermedad.

3.4. Materiales, solventes y reactivos.

3.4.1. Material vegetal.

Fruto de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

3.4.2. Material biológico.

Para esta investigación se usó 56 ratones albinos de ambos sexos de

la especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB entre 25 38 g de

peso corporal, provenientes del Instituto Nacional de Salud (Centro

Nacional de Productos Biológicos) de Chorrillos – Lima.

3.4.3. Material químico.

3.4.3.1. Solventes químicos:

- Agua destilada.

- Acetato de etilo Q.P. Merck Chemical®.

- Acetona Q.P. Merck Chemical®.

- Benceno Q.P. Merck Chemical®.

- Cloroformo Q.P. Merck Chemical®.

- Etanol Q.P. Merck Chemical®.

- Éter etílico Q.P. Merck Chemical®.

- Éter de petróleo Q.P. Merck Chemical®.

32

- Hexano Q.P. Merck Chemical®.

- Metanol Q.P. Merck Chemical®.

- N-butanol Q.P. Merck Chemical®.

3.4.3.2. Reactivos químicos:

- Mayer.

- Dragendorff.

- Tricloruro férrico.

- Popoff.

- Gelatina + Cloruro de sodio.

- Fehling A y Fehling B.

- Tricloruro de aluminio.

- Shinoda.

- Ninhidrina.

- Salkowski.

- Liebermann - Burchard.

- Wagner.

3.4.4. Materiales para obtención de la muestra.

- Beacker 100 mL y 250 mL de vidrio tipo Pyrex®.

- Gasa Medica 20 x 20 cm.

- Algodón CKF 500 g

- Papel filtro whatman N°40.

- Gotero de plástico.

- Bagueta de vidrio.

- Frasco de vidrio de 20 L.

- Fuente de vidrio Pyrex®.

- Guantes látex descartable N° 6 ½ y 7.

- Mascarillas descartable Prosemedic.

- Gorra descartable Prosemedic.

33

3.4.5. Equipos para obtención de la muestra.

- Balanza semi - analítica de marca Sartorius® (modelo ELT602,

serie 25955357).

- Balanza analítica de marca Sartorius® (modelo TE 4101, serie

17503114).

- Balanza granataria de marca OHAUS® (modelo 28073).

- Estufa de marca Memmert Gmbh + Co.KG Typ Um 20.

- Campana extractora de marca KtPERÚ, (modelo: CL – 1000).

- Lámpara UV (modelo 4305M/MH).

- Molino nacional (marca: Rey).

- Tamices luz de la malla 20 µ.

3.4.6. Materiales para determinación de los ensayos preliminares.

- Beacker 100 mL y 250 mL de vidrio tipo Pyrex®.


- Pipetas de vidrio 1 mL, 2 mL, 5 mL y 10 mL.

- Propipeta de goma.

- Mortero y pilón de porcelana.

- Espátula de metal.

- Bagueta de vidrio.

- Tubos de ensayo de vidrio 13 x 100 mL.

- Cuba cromatografíca de vidrio 10 x 10 cm.

- Probeta de 100 mL.

- Cocinilla eléctrica de marca CERAN® 500209.




34

3.4.7. Materiales para determinación de los estudios farmacológicos.

- Sonda orogástrica N° 18 de metal.

- Jaula de metal para ratones.

- Beacker 50 mL de vidrio tipo Pyrex®.


- Jeringa de insulina graduada 1 mL Terumo®.




3.4.8. Reactivo.

- Ácido acético glacial 100 % Q.P. Merck Chemical®.

3.4.9. Medicamentos y otros.

- Clorhidrato de Tramadol Q.P.

- Paracetamol Q.P.

- Extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

3.4.10. Alimento.

- Comida balanceada pellets para ratones.

35

3.5. Metodología de la preparación y evaluación de la actividad analgésica.

Figura 8. Preparación y evaluación de la actividad analgésica del extracto

etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

Selección

del fruto

maduro

Pulverización del

fruto

Macerar en etanol

de 70 ° x 7 días

Filtrar

Pesado del

extracto

Estufa a 40 °C

hasta secar la

muestra

Solución

traslúcida

Gasa

Algodón

Papel

filtro

Fuente de

vidrio pírex

Concentración del extracto

(evaporación de alcohol)

Marco

Muestra del extracto seco del fruto de Vallea

stipularis L.f. “chuillur” en un frasco ámbar de

vidrio (rotulado)

Prueba de solubilidad

Análisis fitoquímico

Actividad analgésica

del extracto etanólico

del fruto de Vallea

stipularis L.f. 50 mg,

100 mg y 200 mg.

36

3.6. Lugar de ejecución.

El presente trabajo de investigación se desarrolló en el Centro de

Investigación de Productos Naturales, Laboratorio de Farmacología y

Bioterio de la Universidad Privada Norbert Wiener, entre los meses de

enero – marzo del 2015.

3.7. Estudio fitoquímico.

3.7.1. Recolección del material botánico

La especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” fue recolectada en enero

del 2015, un aproximado de 10 kilos, de la comunidad de San

Antonio, ubicada en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay

departamento de Apurímac, a 3,100 m.s.n.m. La muestra

recolectada y seleccionada se envolvió con papel kraff y se roció

alcohol 96° para su conservación y se embaló en cajas de cartón

con su respectivo rotulo.

3.7.2. Preparación del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis

L.f. “chuillur”.

De la especie vegetal recolectada se seleccionaron cuatro kilos de

los frutos de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se procedió a la

pulverización de las mismas, usando un molino mecánico marca

nacional, hasta obtener un polvo fino, el cual pasó por un tamiz de

20 µ para la homogenización de partículas. El polvo fino se maceró

en un recipiente herméticamente cerrado en alcohol de 70° donde

permaneció por 7 días, se procedió al filtrado para ser colocado en

una estufa a 40 °C hasta obtener el extracto seco que fue 120

gramos.

37

3.8. Ensayos preliminares.

3.8.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 54.

La prueba de solubilidad es una técnica cualitativa para determinar

el comportamiento de disolución del extracto seco del fruto Vallea

stipularis L.f. “chuillur en diversos solventes con diferentes

polaridades, permitiendo encontrar el sistema de solvente apropiado.

Se realizó con 11 tubos de ensayo lo cual se tomó una cantidad

aproximadamente de 2 mg del extracto seco del fruto Vallea

stipularis L.f. “chuillur” con una bagueta incorporándolo en las bases

de los tubos, luego se agregó 1 mL de los siguientes solventes:

Agua destilada.

Etanol.

Metanol.

N-Butanol.

Acetona.

Acetato de etilo.

Cloroformo.

Hexano.

Benceno.

Éter etílico.

Éter de petróleo.

38

3.8.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis L.f.

“chuillur” 14, 15.

El análisis fitoquímico es una técnica cualitativa, basándose en

pruebas de coloración y precipitación, por lo cual se utilizan

diversos reactivos químicos, con el fin de confirmar la presencia o

ausencia de metabolitos primarios y secundarios presentes en el

extracto seco del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”,

Se realizó con 12 tubos de ensayo de la siguiente manera:

Se tomó una cantidad aproximada de 20 mg del extracto seco del

fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” incorporándolo en la base del

tubo de ensayo con la ayuda de la bagueta, a esta muestra se le

solubilizo con un solvente soluble (metanol), luego se le agrego

aproximadamente I a V gotas de los siguientes reactivos químicos:

Mayer.

Dragendorff.

Tricloruro férrico.

Popoff.

Gelatina + Cloruro de sodio.

Fehling A y Fehling B.

Tricloruro de aluminio.

Shinoda.

Ninhidrina.

Salkowski.

Liebermman - Burchard.

Wagner.

39

3.9. Procedimiento de la actividad analgésica en ratones.

Figura 9. Selección de los animales de experimentación 56 ratones albinos

especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB (28 ratones hembras y 28

ratones machos).

Grupo I

Agua destilada

Grupo II

AcOH

0,8 %

Grupo III

Extracto

EtOH

50 mg/kg

Grupo IV

Extracto

EtOH

100 mg/kg

Grupo V

Extracto

EtOH

200 mg/kg

Grupo VI

Paracetamol

Q.P.

300 mg/kg

Grupo VII

Clorhidrato de

Tramadol Q.P.

40 mg/kg

7 días de aclimatación y 24 horas de ayuno previos al

ensayo

Se seleccionaron 7 grupos aleatoriamente, cada grupo

consta de 8 ratones (4 hembras y 4 machos)

Adquisición del material biológico: 56 ratones albinos de

especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB con un

peso corporal comprendido entre 25 38 g.

Grupo sin

tratamiento

Grupo

Control

Extracto etanólico del fruto Vallea

stipularis L.f. “chuillur”

Paracetamol

Q.P. 300

mg/kg

Clorhidrato de

Tramadol Q.P.

40 mg/kg

40

3.10. Estudios farmacológicos.

3.10.1. Animales de experimentación.

Se utilizaron 56 ratones albinos de especie Mus musculus y de

cepa Balb/C53/CNPB, con un peso corporal comprendido entre

25 38 g procedentes del Instituto Nacional de Salud (Centro

Nacional de Productos Biológicos) de Chorrillos - Lima.

Los ratones albinos se mantuvieron aclimatando en el bioterio de

la Universidad Privada Norbert Wiener, durante 7 días, luego se

emplearon aleatoriamente un total de 7 grupos, con 8 ratones

cada uno. Después de ser pesados fueron alojados en jaulas

metálicas bajo condiciones ambientales normales, con libre

acceso a comida balanceada y agua, con el ciclo de 12 horas de

luz y 12 horas de oscuridad.

3.10.2. Preparación de las dosis del extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

A partir del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f.

“chuillur” se preparó con agua destilada, tres dosis del extracto

etanólico de diferentes concentraciones 50 mg/kg, 100 mg/kg y

200 mg/kg, dejando en reposo por 5 minutos, para luego ser

empleados con fines de experimentación.

3.10.3. Preparación de los medicamentos Q. P.

A partir de los medicamentos químicamente puros de

paracetamol y clorhidrato de tramadol al 100 %, se preparó a

concentraciones que requirió el método, paracetamol Q.P. 300

mg/kg y clorhidrato de tramadol Q.P. 40 mg/kg disueltos con

agua destilada dejando en reposo por 5 minutos para luego ser

empleados con fines de experimentación.

41

3.10.4. Evaluación de la técnica del ácido acético 0,8 %.

La acción analgésica se evaluó mediante el método de

contorsiones abdominales inducidas por un agente irritante como

ácido acético 0,8 % (Koster, et al.) 55.

Los ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa

Balb/C53/CNPB, se mantuvieron aclimatados en el bioterio por 7

días acondicionándoles 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Se trabajó con ratones albinos de un peso corporal comprendido

entre 25 38 g y aleatoriamente se formaron 7 grupos, con 8

ratones cada uno (tabla 3), previamente al ensayo se les

mantuvo 24 horas de ayuno.

Tabla 3. Distribución aleatoria de animales de experimentación

(ratones albinos de especie Mus musculus)

Grupos Tratamiento

Grupo I sin tratamiento Agua destilada

Grupo II control AcOH 0,8 %

Grupo III extracto EtOH Extracto EtOH 50 mg/kg + AcOH 0,8 %

Grupo IV extracto EtOH Extracto EtOH 100 mg/kg + AcOH 0,8 %

Grupo V extracto EtOH Extracto EtOH 200 mg/kg + AcOH 0,8 %

Grupo VI paracetamol Paracetamol 300 mg/kg + AcOH 0,8 %

Grupo VII clorhidrato de

tramadol

Clorhidrato de tramadol 40 mg/kg +

AcOH 0,8 %

42

El peso de los ratones albinos se usó para calcular las dosis de

los tratamientos expresados en mg/kg. Los siete grupos

empleados: extractos EtOH (50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg),

el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de tramadol Q.P.

40 mg/kg se dosificaron por vía oral usando una cánula

orogástrica N° 18 de acero inoxidable, de acuerdo al peso

corporal de cada ratón albino, 30 minutos después de haber

actuado los extractos EtOH (50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg),

el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de tramadol Q.P.

40 mg/kg se les administró por vía intraperitoneal ácido acético

0,8 % con la ayuda de una jeringa de insulina descartable de 1

mL a una dosis de 0,1 mL/10 g peso corporal.

Al grupo sin tratamiento se le administró solo agua destilada y el

grupo control solo se le administró ácido acético al 0,8 %,

inmediatamente se procedió a cuantificar el número de

contorsiones abdominales de cada grupo de los ratones albinos

de especie Mus musculus durante 20 minutos.

De las contorsiones abdominales producidas, se calculó el

porcentaje de inhibición empleando la formula siguiente:

Dónde: Ct -número de contorsiones del grupo tratado.

Cc -número de contorsiones del grupo control.

Transcurrido los 10 días de tratamiento se sacrificó a los

animales de experimentación (ratones albinos de especie Mus

musculus) con una sobredosis de pentobarbital sódico 40 mg/kg

por vía intraperitoneal.

% Inhibición = 100 – (Ct / Cc) x 100

43

3.10.5. Análisis estadístico de la actividad analgésica.

Para analizar los resultados de las contorsiones abdominales, se

realizaron análisis estadísticos SPSS versión 22,0 consistentes

en prueba de Normalidad (KS), la prueba de homogeneidad de

varianza, análisis de varianza (ANOVA), la prueba de T de

Dunnett y la prueba Post hoc de HSD Tukey, para determinar si

existían diferencias significativas entre las medias de los

tratamientos respecto del grupo control con un nivel de p < 0,05.

44

VI. RESULTADOS

4.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.

El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, es soluble en

solventes polares; principalmente en metanol, etanol y agua destilada e

insoluble en n-butanol, acetona, acetato de etilo, cloroformo, hexano, benceno,

éter etílico y éter de petróleo (tabla 4 y figura 10).

Tabla 4. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea

stipularis L.f. “chuillur”.

Solventes Solubilidad

Agua Destilada +

Etanol +

Metanol +

N-butanol -

Acetona -

Acetato de Etilo -

Cloroformo -

Hexano -

Benceno -

Éter etílico -

Éter de petróleo -

Leyenda: (+) soluble, (-) insoluble

45

Figura 10. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.

Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” muestra solubilidad

principalmente en metanol, etanol y agua destilada. En donde se deduce que los componentes químicos

mayoritarios son de estructura y naturaleza polar.

46

4.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.

El análisis fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales

metabolitos de la planta medicinales. En la tabla 5 y figura 11, se muestra los

resultados del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se

observa la presencia de flavonoides, taninos, compuestos fenólicos, grupo

amino libre, esteroides y/o triterpenos y ausencia de alcaloides y azúcares

reductores.

Tabla 5. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea


Reactivos Metabolitos primarios

y secundarios

Resultados

Tricloruro de aluminio. Flavonoides +

Shinoda. Flavonoides +

Tricloruro férrico 1 %. Compuestos fenólicos

y/o taninos

+

Gelatina + NaCl. Taninos +

Mayer. Alcaloides -

Dragendorff. Alcaloides -

Popoff. Alcaloides -

Wagner Alcaloides -

Salkowski Esteroides +

Liebermman - Burchard Esteroides y/o

Triterpenos

+

Fehling A y Fehling B Azúcares reductores -

Ninhidrina. Grupo amino libre +

Leyenda: (+) presencia, (-) ausencia.

47

Figura 11. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.

Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” presenta metabolitos

como los flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.

48

4.3 .Análisis estadístico SPSS versión 22,0 del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

Tabla 6. Promedio y porcentaje de inhibición (%) de las contorsiones abdominales del extracto etanólico del fruto de Vallea


Grupos Tratamientos Promedio Contorsiones

abdominales

Inhibición (%) Contorsiones

abdominales

Grupo I Grupo sin tratamiento (agua destilada). 0 0

Grupo II Grupo control AcOH 0,8 %. 35,00 0

Grupo III Grupo extracto EtOH 50 mg/kg. 22,00 37,14

Grupo IV Grupo extracto EtOH 100 mg/kg. 17,75 49,29

Grupo V Grupo extracto EtOH 200 mg/kg. 10,50 70,00

Grupo VI Grupo paracetamol Q.P. 300 mg/kg. 15,63 55,34

Grupo VII Grupo clorhidrato de tramadol Q.P. 40 mg/kg. 3,00 91,43

49

En la tabla 7 se muestra la prueba de normalidad (Kolmogorov - Smirnov) (p > 0,05), determinó que el tipo de

distribución de los grupos experimentales fue Gaussiana, esta prueba compara la eficacia de los fármacos con

los extractos empleados, determinando que no hay diferencias significativas.

Tabla 7. Prueba de normalidad (KS) de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.

Pruebas de normalidad

Tratamiento Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.

Contorsiones Grupo control (AcOH 0,8 %). ,198 8 ,200* ,956 8 ,773

Extracto EtOH 50 mg/ kg. ,138 8 ,200* ,957 8 ,780

Extracto EtOH 100 mg/kg. ,196 8 ,200* ,931 8 ,521

Extracto EtOH 200 mg/kg. ,128 8 ,200* ,983 8 ,975

Paracetamol 300 mg/kg. ,186 8 ,200* ,957 8 ,783

Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. ,250 8 ,150 ,860 8 ,120

*. Esto es un límite inferior de la significación verdadera.

a. Corrección de significación de Lilliefors

50

En la tabla 8 la prueba de homogeneidad de varianza de Levene (estadístico: 1,679; gl1: 5 y gl2: 42;

p > 0,05) esta prueba compara la eficacia de los fármacos con los extractos empleados, indicando la

igualdad de varianzas entre los grupos tratados.

Tabla 8. Prueba de homogeneidad de varianza de contorsiones abdominales de todos los grupos

experimentales

Prueba de homogeneidad de varianzas

Contorsiones

Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig.

1,679 5 42 ,161

51

En la tabla 9 la prueba de ANOVA mostró un valor (p < 0,05) esta prueba compara el grupo

control con los grupos experimentales, determinando que existe diferencias significativas

entre los efectos de los tratamientos empleados.

Tabla 9. Prueba de ANOVA de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.

ANOVA

Contorsiones

Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.

Entre grupos 4712,938 5 942,588 248,400 ,000

Dentro de grupos 159,375 42 3,795

Total 4872,313 47

52

De acuerdo con la tabla 10 la prueba Post hoc de T de Dunnett se observa que hay diferencias significativas

de los tratamientos empleados comparadas con el tratamiento del grupo control (p < 0,05). Las últimas

columnas muestran los límites para un intervalo de confianza de estas diferencias al 95 %, notemos que los

límites de los intervalos son del mismo signo, esto nos está indicando que los promedios son diferentes.

Tabla 10. Prueba de T de Dunnett de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.

Comparaciones múltiples

Variable dependiente: Contorsiones

T de Dunnett (bilateral)a

(I) Tratamiento (J) Tratamiento Sig. 95% de intervalo de confianza

Límite inferior Límite superior

Extracto EtOH 50 mg/ kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -15,55 -10,45

Extracto EtOH 100 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -19,80 -14,70

Extracto EtOH 200 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -27,05 -21,95

Paracetamol 300 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -21,92 -16,83

Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -34,55 -29,45

*. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0.05.

53

En la tabla 11 se muestra la prueba de Post hoc de HSD Tukey en la cual se observa que las diferencias

significativas se encuentran entre estos cuatro grupos: clorhidrato de tramadol 40 mg/kg 3,00; extracto EtOH 200

mg/kg 10,50 y extracto EtOH 50 mg/kg 22,00 y un grupo conformado por el paracetamol 300 mg/kg 15,63 y el

extracto EtOH 100 mg/kg 17,75 que estadísticamente tienen efectos ligeramente similares.

Tabla 11. Prueba de Post hoc de HSD Tukey de contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.

Contorsiones

HSD Tukeya

Tratamiento N Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3 4

Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. 8 3,00

Extracto EtOH 200 mg/kg. 8 10,50

Paracetamol 300 mg/kg. 8 15,63

Extracto EtOH 100 mg/kg. 8 17,75

Extracto EtOH 50 mg/ kg. 8 22,00

Sig. 1,000 1,000 ,268 1,000

Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.

a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000.

54

35,0

22,0

17,8

10,5

15,6

3,0

0,0

5,0

10,0

15,0

20,0

25,0

30,0

35,0

40,0

Grupo control (AcOH 0,8 %) Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.

Contorsiones

Porcentaje de inhibición de las contorsiones inducidas con AcOH 0,8%.

Figura 12. Promedio del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales

inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.

Los valores del eje de las ordenadas representan la media de cada grupo. Los valores sobre la barras representan el número

promedio de contorsiones. Se puede apreciar que transcurrido 20 minutos después de la administración del extracto, todos los

grupos lograron disminuir significativamente (p < 0,05) el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control,

el extracto EtOH de 200 mg/kg presentó una reducción superior al grupo de paracetamol 300 mg/kg.

Tratamientos

Me

dia

de c

onto

rsio

ne

s

55

0

37,14

49,29

70

55,34

91,43

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Grupo control (AcOH 0,8%)

Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.

Contorsiones

Tratamientos

¿

Figura 13. Porcentaje de inhibición del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las

contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.

Los valores sobre la barras representan los porcentajes de inhibición de las contorsiones. Todos los grupos lograron

disminuir significativamente el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, el efecto

máximo se alcanzó a la dosis 200 mg/kg con un 70 %.

Me

dia

de C

on

tors

ion

es

56

V. DISCUSIÓN

En el proceso de la prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó que es altamente soluble en

metanol, etanol y agua destilada (tabla 4 y figura 10) por lo tanto la

mayoría de los componentes químicos son de estructura y naturaleza

polar 54. La solubilidad de los flavonoides, depende de la forma en que se

encuentren y el número y clase de sustituyentes presentes, las agliconas

flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol,

metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en

solventes como éter etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas

flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos

polares como el éter de petróleo y el cloroformo 56, 57.

En el análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis

L.f. “chuillur” se demostró la presencia de flavonoides, compuestos

fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre (tabla 5 y

figura 11). En otros estudios realizados también determinaron la presencia

de estos metabolitos en el extracto etanólico de las hojas Vallea stipularis

L.f. 14 - 16.

Otros estudios realizados determinan que los flavonoides presentan

numerosas actividades farmacológicas, entre ellas la actividad analgésica

y antiinflamatoria 26, 28 - 32. En la investigación realizada del extracto

etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó la

presencia de los flavonoides mediante los ensayos de coloración

(Shinoda) y con tricloruro de aluminio (AlCl3) se observó una formación de

halo amarillo que se observa en la lámpara UV visible a 365 nm 54.

Otros estudios realizados determinan que la familia Elaeocarpaceae de

diferentes especies (Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz “maqui” 17, 33, 34,

Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” 18, 19 y Elaeocarpus sphaericus Leaf 20,

57

21, presenta la actividad analgésica en sus extractos de hojas y frutos.

Posiblemente el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.

“chuillur” perteneciente a la familia Elaeocarpaceae presente actividad

analgésica.

La mayoría de las investigaciones experimentales aplican el método de

contorsiones abdominales en ratones a diferentes dosis de ácido acético

(0, 75 %; 0,8 %; 1,0 %; 1,5 %), determinando la evaluación de la actividad

analgésica 8, 9, 11, 58. En esta investigación se determinó por el método de

contorsiones abdominales inducidas por un agente irritante como el ácido

acético a una dosis de 0,8 % por vía intraperitoneal, determinando la

actividad analgésica del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.

“chuillur”.

Generalmente para determinar la actividad analgésica se emplea

medicamentos como los AINE y opioides 8, 9, 11, 58. El extracto etanólico del

fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” a diferentes concentraciones (50, 100 y

200 mg/kg) se comparó la actividad analgésica con dos medicamentos

farmacéuticos paracetamol Q.P. 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol Q.P.

40 mg/kg obteniéndose un mejor resultado en la eficacia de 200 mg/kg del

extracto etanólico como se observa en la (figura 12 y 13) 58.

Los resultados presentados en este estudio demuestran por primera vez,

que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, está

constituido por una mezcla de compuestos capaces de inhibir con una

elevada eficacia farmacológica el dolor inducido por agentes irritantes,

estos efectos fueron similares y en algunos casos superiores a los

observados en fármacos (paracetamol 300 mg/kg y clorhidrato de

tramadol 40 mg/kg) comúnmente utilizados en la práctica clínica 55, 58.

La prueba de ANOVA (tabla 9) mostro un valor p < 0,05 determinando que

existe diferencias significativas entre los extractos a diferentes

58

concentraciones (50, 100 y 200 mg/kg), los fármacos (paracetamol 300

mg/kg y clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) y el grupo control 9.

La prueba de normalidad (KS) y la prueba de homogeneidad de varianza

(tabla 7 y 8) mostro un valor de p > 0,05 determinando que no existe

diferencias significativas entre los extractos a diferentes concentraciones

(50, 100 y 200 mg/kg) y los fármacos (paracetamol 300 mg/kg y

clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) 9.

Todos los grupos lograron disminuir significativamente el número de

contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, podemos

determinar que a medida que aumentamos la concentración del extracto

etanólico, obtenemos mejores resultados (figura 12).

El efecto analgésico de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se evaluó en 3 dosis

diferentes, llegándose a determinar que a dosis menores de 100 mg/kg el

efecto fue escaso, lo que indica que su actividad farmacológica es menor

a un opioide como clorhidrato de tramadol pero es similar a un AINE como

paracetamol. La dosis de 200 mg/kg si tiene efecto analgésico,

presentando un efecto máximo de inhibición con un 70 % (figura 13).

59

VI. CONCLUSIONES

Se determinó la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto Vallea

stipularis L.f. “chuillur” logrando una reducción de 70 % de inhibición en las

contorsiones abdominales a partir de la dosis de 200 mg/kg.

Se realizó el análisis cualitativo del extracto etanólico del fruto Vallea

stipularis L.f. “chuillur” observando la presencia de compuestos fenólicos,

flavonoides, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.

Se comprobó que la dosis de 100 mg/kg y 200 mg/kg del extracto etanólico

del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” presento actividad analgésica

mediante el método de contorsiones abdominales inducidas con ácido

acético 0,8 % con un 49,29 % y un 70 % de inhibición respectivamente muy

similar al paracetamol con un 55,34 % de inhibición.

60

VII. RECOMENDACIONES

1. Continuar y contribuir al conocimiento con otros estudios

farmacológicos con el fin de establecer y validar un diseño

experimental más amplio del género Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

2. Profundizar en el aislamiento, identificación y caracterización de los

compuestos con actividad farmacológica presentes en el fruto de

Vallea stipularis L.f. “chuillur” por medio de técnicas analíticas

como: análisis de cromatografía gases - masas, análisis

espectrales de resonancia magnética nuclear, análisis infrarrojo,

análisis espectrometría de masas, etc.

3. Las potencialidades que presenta este extracto etanólico del fruto

Vallea stipularis L.f. “chuillur” en la terapia de las patologías que

involucran procesos inflamatorios y dolorosos sugiere la necesidad

de realizar estudios toxicológicos por vía intragástrica que permitan

validar su seguridad.

4. Realizar más investigaciones sobre la medicina tradicional en el

Perú, hay una gran diversidad de plantas cultivadas, de las cuales

no hay registro de las actividades farmacéuticas que presentan.

61

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68

IX ANEXOS

Anexo 1. Constancia de la especie Vallea stipularis L.f “chuillur”.

69

Anexo 2. Certificado sanitario de los ratones albinos de especie Mus

musculus.

70

Figura 14. Separación del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

Figura 15. Fruto maduro de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

71

Figura 16. Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.

Figura 17. Observando los ensayos preliminares (prueba de

solubilidad y análisis fitoquímico) de la especie Vallea stipularis

L.f. “chuillur”.

72

Figura 18. Aclimatación del material biológico (ratones albinos

de especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB).

Figura 19. Preparación de los tratamientos y el grupo

control (AcOH 0,8 %).

73

Figura 20. Administración de los tratamientos por vía oral a los

ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa

Balb/C53/CNPB.

Figura 21. Observación y cuantificación de las contorsiones

abdominales de los ratones albinos de especie Mus musculus y

de cepa Balb/C53/CNPB.

74

Figura 22. Evaluación de las contorsiones abdominales de los

grupos experimentales.

Figura 23. Observación de las contorsiones abdominales de

los grupos experimentales.

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