fijación biologica del nitrogeno

5/11/2018 fijaci n biologica del nitrogeno - slidepdf.com

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Fijacion biologica

Beatrlz Eugenia

Baca

Lucia

Soto UrzuaMa. Patricia A.

Pardo Ruiz

o,(D

. ,nrtrogeno

D o s f e n o m e n o s b lo lo g i c o s f u n d a m e n ta J e s a s e g u ra n la d is p o -

n lb il i d a d d e l c a r b o n o y d e l n l1 r6 g e n o e n lo s o rg a n is m o s v iv o s

a p a rO r d e l g a s c a r b o n ic o y d e l n 1 lr o g e n o m o l e c u la r d e l a ir e :

la l o to s f n le s l 5 y l a f i j a c le n b io lo g ic a d e l n il r o g e n o , L a lo lo s ln -

le s l s e s r e a l i z a d a p a r lo s v e g e la le s y a lg u n o s p ro c a rio te s , l a

f i j a c io n d e l n il r o g e n o u n ic a m e n te p o r lo s p ro c a rio le s . L a f i j a -

c io n d e l n il r o g e n o ( F N ) fu n c io n a e n b a c le ri a s a d a p t a d a s e na m b le n te s e c o l6 g l0 0 5 y e s f f l o s d e v id a m u y d iv e r s o s . S in

e m b a rg o , 1 0 0 0 s p o s e e n e l s is te m a e n z im a ti c o r e sp o n sa b le

d e la r e d u o c i6 n d e l n il r 6 g e n o : L a n lt r o g e n a sa .

E I n it r o g e n o m o l e c u la r ( N2J es la u n ic a r e se rv a d e n ~ r 6 -

g e n a ( N ) a c c e s ih le e n la b lo s f e ra . P r a ,c tic a m e n le l I im i t a d a ,

e s t a r e se rv a n o a s d lr e c ta m e n te u ti l iz a d a p o r lo s v e g e la le s y

a n i m a l e s . E I N e s u n c on s t i t u ye n t e e se n c ia l d e m o le cu la s

fu n d am e n t a le s d e lo d o s lo s s e r e s v iv o s : a m in o a c id o s , p ro -

t e in a s , B c id o s n u c le lc o s , v lt a m in a s , e tc e t e ra . P a ra q u e e l N 2

p u e d a s e r a s im i la d o , e s n e c e s a r io q u e s e a r e d u e id o , L o s

u n io o s s e r e s , v lv o s c sp a c e s d e r e aH z a r e s t a r e a c d o n s o n la s

E u b a c l e r i a y A r o h a e a , p a r e l p ro ce so d e n om i n a d o f i j a c io f1

b io l6 g i c a d e n H ro g e n o ( F B N ) . L a a tm o s fe ra c o n t i e n e a lr e d e -

d a r d e 1 0 1S t o n e la d a s d e g a s N t, y e l c ic to d e l n lt r 6 g e n o

in v o lu c r a la t r a n s f6 rm a c io n d e u n a s 3 x 1 Q 9 t o n e la d a s d e N t

p a r a n a . L a s I r a n s to rm a c io n e s n o s o n e x c lu s i v a m e n le b io l6 -

g lc a s : l a s r ad ja c io n e s u l l r a v fo le la r e p r e s e n t a n e 1 1 0 % d e l a p o rt e

g lo b a l; l a in d u s t r i a d e lo s f e rt i l i z a n te s a p o rt a u n 2 5% , p a r 1 0

q u e la F B N c o r r e s p o n d e a l 6 0 % a p r o x im a d a m e n le . A n iv e l

EI e 1'1\0 n t e s 38' ,"2.D DO, pp. , , : : I . . . 9 3



m u n d f a l e l c o n s u m o d e f e r t i l i z a n t e s n it r o g e n a d o s a u m e n to

d e 8 a 17 K g h a " d e s u e lo a g r i c o la e n u n p e r io d o d e 1 5 a a o s

(1973-1988) . S e p r e d lc e q u e lo s r e q u e r im l e n lo s d e f e r t i l i z a n ·

t e s n il r o g e n a d o s a u m a m a r a n e n e l f u tu ro ; s in e m b a r g o , c o n

l a le c n o lo g ia a c t. u a ld e p r n d u e c l e n d e f e r t l l i z a n te s y lo s r n e t o -

d o s d e a p l i c a c io n e m p le a d o s q u e r e s u lt a n p o c o e jl c ie n t e s ,a s i c o m o e l c o s to y la c o n t a m i n a c i o n 8 c o lo g ic a q u e p ro d u c e n ,

s u u s a s e h a c e m a s p ro h i b it l v o . P o r m a s d e c i e n a n o s la F B N

h a a t r a id o a lo s c ie n t i l i c o s in le r e s a d o s e n la n u tr ic io n v e g e ta l ,

y s e h a e x p lo ta d o e s te c o n o c im i e n to e n la a g r i c u lt u r a . ·

L a f i j a c io n q u im i c a p o r e l m e t o d o d e H a b e r -B o s c h p r o d u c e

u n r om p im i e n to d e la u n io n N = N , p o r r e d u c e io n d e l e n la c e d e la

m o l e c u la d ia t6 m i c a d e N 2 a d o s m o le c u la s d e N H3, c o n e !

e m p l e o d e a J ta te m p e r a tu r a y p r e s io n e n p r e s e n c ia d e u n c a ta l l ·

z a d o r . L a F B N s e e n tr e n ta a la s m i sm a s b a rr e r a s e n e r g e ti c a s ,

p e r o o p e ra e n u n a f o rm a m a s s um a t e m p e ra tu ra a m b i e n t e y

p r e s io n p a r c ia l d e N . d e 0.78 a im ; e s t o g ra c ia s a la a c e io n

c o m b i n a d a d e l c n m p l e jo e n z im a l ic o d e l a n j t r o g e n a s a ( N a s a ) .

E I d e s c u b r im i e n to d e la f i j a c io n b io lo g ic a d e n it r o g e n o e n

la s l e g u m i n o s a s r e m o n t a a l s lg lo X I X . L o s t r a b a jo s d e l t r a n ·

c e s J e a n B a l i s te B o u s s in g a u lt y lo s d e lo s a le m a n e s H e r m a n n

H e l l r ie g e l y H e r m a n n W i l f a r t h e s la b le c ie r o n , e n 1886 , q u e la

c a p a c i d a d d e l a s le g u m in o s a s d e u tl l i z a r e l N 2 d e l a ir e e ra

d e b id a a la p re s e n c i a d e " n u d o s " d e la r a fz I n d u c id o s p a r

" f e rm e n lo s · 'o c a li z a d o s e n e l s u e lo , " E s te d e s c u b r im i e n to lu es e g u i d o r a p id a m e n te p o r e l a is la m i e n t o d e R h i Z o b i u m p o r

B e i je r in c k a p a r ti r d e l c h ic h a r o ( P i s u m ) , y p o s te r io rm e n te p a r

o fr a s b a c le ria s l i j a d o ra s d e n it r o g e n o ( F N ) q u e n o s e e n -

o u e n tr a n a s o c ia d a s a p la n ta s , c o m o A z o to b a ct e r y C l o s tr id iu m

p a s l e u r i a n u m . 1

F IG U R A 1 . N O d u lo s de Ia r a i ld e u na p J a n t a d e c h ic l1 a fo q u e

c o n l i e n e R h i z o b i u m . ( e d u c e e :N ~e n N H J q u e 1 8 p l a n t a ~ l i z a ,

a c am b io e s ta Ie p r o p o r c i o n a

!w e n te d e c a rb o o o p a r a e l

c r S (: im l e n l o d e l m i c ro o g a n i s -

m o , L o s n 6d u lo s s a

d e s a n o l l a n y s o n c o l O ll iz a d o s

p o r la b a cte ria F N c om o llfl

r e su ll ad o d e J i n t er ca m b i o de

s e l \ a le s q u im i c as q ue s e

e S la b le c en e n tr e lo s d o s

s i m b i o n l e s .

4 4 6 r Sael, L . Sola Unun, Y ~ PardD Ru;,

L a s b a c te r ia s F N p re s e n t a n u n a m u y a m p li a d iv e r s id a d

t a x o n o m i e a , c o n d i le r e n te s e s ti l o s d e v id a y d e a s c c la e o n

c o n lo s v e g e ! a le s . S in e m b a rg o , s o l o u n a p e q u e i ' i a p ro p e r -c io n d e e s p e c i e s s o n c a p a c e s d e h a c e r lo ; 87 e s p e c ie s e n

d o s g e n e ro s d e a r q u lb a c te r ia s , 38 d e b a c t e r ia s , Y 20 g e n e -

r o s d e c la n o b a c t e r i a s s a h a n i d e n tl f i c a d o c o m o d ia z 6 Ir o f o s .'

L a s m a s e f i c a c e s s o n a q u e l la s q u e s e a s o c ia n o o n la s p la n -

la s y p a r m e d io d e e s t r u c tu r a s d i f e r e n c ia d a s p ro d u c id a s p o r

la p la n ta h o s p e c e r a , l I a m a d o s " n 6 d u lo s ·, lo c a l i z a d o s e n l a

r a iz d e la s l e g u m i n o s a s 0 d e la s p la n t a s a c l i n o r i z a s . E n e l

in le r io r d e e s ta s e s tr u c tu r a s s e lo c a l i z a n lo s m i c r o o rg a n is -

m o s , d e s a r r o lla n d o u n a v e r d a d e r a s im b io s ls c o n la p la n la ;

e s ta s im b i o s i s r e p re s e n ta u n m o d e lo b io l6 g ic o e x p e r im e n t a l

b io lo g ic o m u y in le re s a n t e p a r a s u e s t u d io y , d e s d e e l p u n ta

d e v is ta e c o n o m lo o , h a a b ie rt o u n c a m p o d e a p l i c a c io n s u -

m a m e n !e p ro m e t e d o r e n la a g ri c u llu r a ( F ig u ra 1 ) .

L a s im b i o s is R h iz o b iu m - le g u m i n o s a s e s e l r e s u l t a d o d e

u n a in te ra c c io n m u y e s p e c i f i c a e n tr e la b a c t e r ia Y la p la n ta .

L a o rg a n o g e n e s is d e l n 6 d u lo e s u n p ro c e s o in d u c id o p a r u n

" i n t e r c a m b i o d e s e r ia e s ' e n t r e l o s d o s p a r t i c ip a n te s d e l a

in t e ra c c io n , e l m ic r o s im b io n t e ( b a c te r ia ) y e l m a c ro s im b io n t e

( p la n ta ) . E s e s e n c ia ll a u n io n d e l m i c r o o rg a n is m o a l o s p e lo sr a d lc a le s d e la p la n ta . S u s la n c ia s c o n e le c to m i to g e n o ( la c -

lo re s d e n o d u la c i6 n ) s o n s in te ti z a d a s p a r p ro d u c t o s d e lo s

l I a m a d o s g e n e s d e n o c u la c in n d e l m i c ro s im b io n l e ( g e n e s

n o d ) , e n r e s p u e s t a a la e x c r e c i6 n p a r la p la n ta d e s u s t a n e ia s

d e t ip o f la v o n o ld e , E n la lu c a m a , e ll r e b o l y e l c h ic h a m , la

b a c t e r i a I n fe c ta la r a lz e n la e x tr e m i d a d d e lo s p e lo s r a d ic a -

le s p r o v o c a n d o la c u r v a t u r e d e e s t e s . S e p r o m u e v e la

p e n e tr a c io n d e la b a c te r ia , lo rm a n d o e i l l a m a d o " h i lo d e in fe c ·

c i6 n " , e n e l l n t e r io r d e l c u a l s e d e s a r r o lla n lo s m ic r o o rg a n is m o s ,

e s to s c o n t in u a n h a s t a l I e g a r a l c o r t e x r a d ic a l. L a i n f e c c i o n

c o n d u c e a la f o rm a c i6 n d e l m e r is le m o n o d u la r. L a p ro d u c -

c io n d e lo s f a c t o r e s d e n o d u la c io n in d u c e , a d is t a n c ia , la

d iv is io n c e lu la r a n iv e l d e l c o r t e x .

S e e s l im a q u e , a c t u a l m e n t e , la F a N e s d e 20 0 m i l l o n e s

d e lo n e la d a s p o r a n o , e s d e c i r , d o s v e c e s la p ro d u c c io n d e

f e rt i l i z a n te s n i l r o g e n a d o s p r o d u c id o s p o r s in t e s is in d u s t r ia l .

U n a d e la s s im b io s is m a s e le c t i v a s e s la q u e s e e s t a b le c e

e n t r e B r ad y rh iz o b iu m ja p o n ic u m ·s o y a , d o n d e u n 7 0 % d e F N

p o r l a b a c t e ria e s a s im i la d a p o r la p la n t a . E n B ra s i l s e h a

e m p l e a d o c o n e x it o l a le r l i l i z a c io n b io lO g i c a d e s o y a c o n B .

j a p o n / c u m y 0 "1 0 d e a p o r t e d e N c om o le r t l l i z a n te q u im i c o ,



e lla h a c o n d u c id o a q u e e s t e p a is s e a e l s e g u n d o p ro d u c lo r

d e s o y a a n iv e l munda l . '

E x is te u n a g ra n d iv e r s id a d d e s im b io s is e n t r e la s n o -

l e g u m i n o s a s y l a s c a r o b a c ie n a s y a u n e n t r e lo s a c lin o m y c e t o s

c o m o F r a n k i a ; e n e s t e u lt im o c a s o , e l e s lu d io d e l a F B N

n en e im p o r t a n c ia a n iv e l d e la r e t o r e s t a c i o n e s p e c ie s d e

e s le g e n e ra s e h a n a is la d o f r e c u e n t e m e n le d e a rb o le s .

L a F N e n g ra m in e a s e s u n r e io b io te c n o lo g io o . L a s g ra -

m i n e a s c e r e a le s c o n s t l t u y e n e l c o m p o n e n te m a s im p o r t a n le

d e la a lim e n ta c io n h u m a n a . E I a n o z , c u y a p ro d u c c io n a n u a l

e s d e 4 7 0 m i l l o n e s d e t o n e la d a s , c o n s t i l u y e e l a lim e n lo p ri -

m o r d ia l p a ra u n t e r c io d e l a p o b la c io n m u n d ia l. T o m a n d o e n

c o n s id e ra o o n e l desarro'lo d e m o g r a l i o o a c tu a l , s e estma q u e

s u p ro d u c c io n m u n d ia l d e b e r a a u m e n la r u n 4 0 % p a r a e l a ii o

2020. C a n t id a d e s s u s t a n c ia le s d e N s o n f i j a d a s b io lo g ic a m e n -

t e e n la a g ri c u l t u ra d e l t r o p ic o , e n p a r t i c u la r p o r c u lt i v o s q u e

r e c ib e n p o c o 0 n a d a d e le r t i l i z a n t e q u im i c o n i t r o g e n a do . L a

in v e s t ig a c io n e n b a c t e r ia s F N a s o c ia d a s a g r a m i n e a s c o n du jo

e n lo s a r ia s s e t e n ta a l d e s c u b rim i e n to d e u n g e n e ra F N : A z o s ·

p i r i / f u m , q u e r a p id am e n t e s e d e n om i n o P G P R I p la n t g ro w th

p r o m o t in g r h iz o b a c te r ia ) , " b a c te r ia p r o m o l o r a d e l d e s a r r o l lo

v e g e ta l" ; s ie n d o a d e r n a s u n s is te m a m o d e lo d e e s lu d io d e lain le r a c c io n m ic r o o rg a n i s m o ' p la n t a , p a r a la s m o n o o o l il e d o n e a s ;

e s ta s a s o c ia c io n e s n o d e s a r r o l la n e s tr u c tu r a s d i f e r e n c ia d a s

e n la s q u e s e a lb e rg u e n lo s m i c r o o rg a n is m o s .3 E n e s t e c a s o

la s b a c te r ia s F N s e lo c a iz a n e n la s u p e r f i c ie d e la r a iz y e n e l

F I G U R A 2 .• C o k J n i z a c l l o de J a s up a& ie d e I a l a l z de t r i g o p o r A z O S P I F I ' I l l m b r a s D e n s e .

P A N E L A . L a c o I o r o o i O o a zu l e s deWa a Ia p r e s e n c f a d e u n g en e . q ue

p e r m i l e Ia d e l e c c i O n de J a b a cte r ia ; s e o b s e I v a ~ e l a u m en to

c o n s i d e r a b l e d e lo s p e I o s l a d ' 1 C a l e s .

s u e lo q u e la e n v u e lv e , la r i z o s fe ra d e la p la n t a h o s p e d e ra ;

e s ta a s o c ia c lo n e s id e n li f ic a d a p o r m e d io d e u n a l in c io n in s i t u

( F i g u r a 2 ). e n d o n d e s e o b s e rv a n la s c e lu la s f i r m e m e n t e

a d h e r id a s a la s u p e rf i c ie d e la r a iz .

H a s ta e l p re s e n te , lo s r e n d im i e n to s o b le n id o s p o r la in o -

c u la c io n d e l m i c ro o r g a n is m o a la s g ra m in e a s h a n a p o rt a d o

r e s u lt a d o s m u y v a ria b le s , p e ro e s p e ra n z a d o re s . E s c la r o q u e

e l a c tu a l c o n o c im ie n t o d e la in t e r a cc io n p la n ta - m i c r c o r g a n s -

m o e s a u n H m i la d o p a r a p o d e r s e r u ti l i z a d o a o iv e l m a s iv o ;

s in e m b a rg o , e n p a is e s s u b d e s a r r o U a d o s , a u m e n lo s d e r e n o

d im i e n to e n la p ro c u e e io n d e l g ra n o , a u n p e q u e iio s , p o d r ia n

r e p e r c u t i r e n la e o o n o m ia d e e s t o s p a ls e s ,'

E n lo s u lt im o s a rio s s e h e d e s c r i t o o lr o t ip o d e a s o e ia -

c io n d e d ia z 6 1 r o lo s e n la c u a lla b a c te r ia ( l l a m a d a b a c te r ia

e n d o f i t a ) s e lo c a li z a e n e l in le r io r d e l a r a iz , e l t a ll o y la s

h o ja s d e la p la n t a . E I s is t e m a d e la r a iz d e la p la n t a o fr e c e

v a r ie s m i c r o a m b ie n te s p a ra e l d e s a r r o llo d e l m i c r o o rg a n is -

m o : a lg u n o s s e a is la n e n n u m e r o im p o r t a n t e ( m a s d e 1 01

c e lu la s p o r g r a m o d e p e s o s e c o d e la r a iz ) a p a r t i r d e la

s u p e rf i c ie d e la s races " e s te r il i z a d a s " . S i n e m b a r g o , e s t o s

m e tc e o s d e a is la m ie n lo n o s o n s u f i c ie n t e s p a r a d e m o s tr a r

q u e lo s d la z o tr o fo s p u e d e n c o lo n iz a r lo s t e ji d o s in te r n o s d e

l a p la n ta ; e s n e c e s a r io lo c a n z a r e id e n t i f i c a r a la b a c t e r ia p o r

e s t u d lo s m l c r o s c o p ic c s q u e a s e g u r e n q u e la s c e lu la s a is la -

d a s s e l o c a ll z a n e n e l in te r io r y n o p o r contarnoacon d e lo st e jid o s in te rn e s d u ra n te e l p ro c e d m ie n to . E s te e s lu d io s e h a

a p li c a d o e n a is la m i e n lo s d e d ia z o tr o lo s d e p la n ta s f o r r a je r a s

d e P a k is t a n , e n d o n d e s e id e n ti f i e D u n n u e v o F N l I a m a d o

A z o a r c u ! ; ; e s t e m i c ro o r g a n is m o s e lo c a li z a e n la s c a p a s e x -

P A N E l S . T e s li go d e la l a I z n o c o k l I I i z a d a

4 5



t e m a s d e l c o r t e x ; u n a v e z e n e l In t e r i o r d e la p la n ta s e

d is em in a a lo s le ji d o s a e r e o s p ro b a b le m e n te p o r m e d io d e

lo s v a so s d e l x i l e m a . E n e )( p e r lm e n lo s d e I n o cu la c io n c o n

A z o a r c u s a l a r r o z , s e lo g r6 la c o lo n lz a e ie n d e l m i c r o o rg a n is -

m o y l a e x p re s i6 n d e la n it r o g e n a s a . L a b a c te r i a I n v a d e la s

r a lc e s e n la z o n a d e a la rg am i e n t o y d l te r e n c ia c !6 n , c o lo n lz a

e l c o r t e x in tr a e in te rc e lu la rm e n te , p e n e l r a n d o e n a l s is te m a

v a s c u la r e n lo s v a s e s d e l : d le m a , p e rm i l i e n d o la d is em i n a -

c io n s is te m ic a d e l l a ll a d e l a rr o z ; e s t e r e s u lt a d o e s t im u la a

c o n li n uC ! f c o n u n a n a lis is m a s d e t a lla d o d e la I n !e ra c c io n

A z 0 8 r c u s . A r r o z e In ic ia r e l e m p le o d e l m i c ro o r g a n is m o e n e l

m e j o ra m i e n to d e la p ro d u c c io n d e l c e re a l, s

L a c o lo n i z a o io n d e la lla y h o ja s p a r A c e to b a . c le f d ia z o -

I r o p h i c u s e s e s p e c ia J m e n t e p ro n u n c fa d a e n la C a n a d e a z u e a r;

e s le m ic ro o rg a n is m o h a s id o a is la d o r e c ie n t e m e n te d e la

r i z o s f e r a d e l c a fe p o r in ve s t i g a d o re s d e n u e s tr o c e n t r o d e

in v e s t l g a c io n ( G r u p o d e M i c ro b io lo g ia d e l S u e lo ) , 5 e x te n d ie n d o

la c o lo n lz a c io n e n d o f i l i c a a p la n t a s n o g r a m in e a s . E n la

a s o c ia c io n d e A . d i B l o t r o p h i c u s c o n a lg u n o s c u l l iv o s d e c a n a

d e a z u c a r e n B ra s i l , s e h a n d e s c ri t o r e n d im ie n to s d e F N d e

1 6 0 K g lN p a r h e o ta re a , . u n a H ja c le n s im i l a r s a h a o b s e r v a d o

e n la s le g um i n o s a s . 1

NITROGENASAS

T o d o s lo s m i c ro o r g a n is m o s q u e c o n v ie rte n e l N 2 e n a m o n ia c o

1 0 h a c e n g ra c ia s a la a c t iv id a d d e l c o m p le jo e n z im a t l c o N a s a ;

la e n z im a r e q u ie re d e la c o la b o ra c lo n d e o tr a s d o s p ro te in a s

! la m a d a s ' f e rr o d o ) (i n a y f la v o d o x in a ; e s t a s a c tu a n c o m o d o n a -

d o re s d e e le c tr o n e s y r e d u c to re s n a tu ra le s d e la N a s a .

2 A T PR d, f d 1 I

Polel l~lal

R e d o ' xM e t a l i lI T o o ,

6 , ,,0 ncp, I.. Solo Unlll, O J ~ Pardo Rube

E J c o m p le jo e n z im a t i c o N a s a , q u e c a la J lz a la r e d u c c ie n

d e l N 1 e n a m o n ia c o , e s t a co n s ti t u ld o p o r d e s m e la lo p r o te i-

n a s , y c o n t ie n e I r e s l ip o s d e g r u p o s p r c s te f t e o s . L a

n o m e n c la tu ra p a r a d e s ig n a r e s t a s p ro te ln a s e s v a r ia b le . A s l,

l a p ro te h a I e s J la m a d a t a m b le n d in il r o g e n a s a 0 " F i e r r o -

m O l ib d e n o -p ro te in a " . E l o lr o c o m p o n e n t e , l a p ro te in a IJ , e s

ig u a lm e n te n o m b ra d a d in " r o g e n a sa r e d u c 1 a s a 0 " F i e r r o - p r o -

l e in a " , P a r a s u f u n c io n a m ie n t o e l c o m p le jo r e q u ie r e u n

d o n a d o r d e e le c l r o n e s d e b a jo p o t e n c ia l, d e la h id r6 1 1 s is d e

A T P y d e u n a m b ie n t e e s lr l c ta m e n t e a n a e r o b io . L a p ro te in a .1

e s u n t e t r a m e r o d e a lr e d e d o r d e 2 2 0 ,0 0 0 D a , f o rm a d o p O I

d o s t i p o s d e s u b u n id a d e s ~~2' d e m a s a m o le c u la r s e m e ja n -

t e , y q u e s o n lo s p ro c lu c t o s d e lo s g e n e s n i fD K . E s t a p r o te in a

c o n ti e n e e l c o f a c t o r c o n H e rr o y m o l ib d e n o ( F e M o - C o )_ L a

c om p o s lc e n m e ta U c a g lo b a l d e la p ro te fn a I e s d e 2 M o , 3 0 F e

y 3 0S . P o r 1 0 t a n to , la p ro te in a c o n ti e n e a d e m a s c o s g ru p o s

p ro s h ~ l i c o s d if e re n le s : c u a tm g ru p o s 4 F e - 4 S . l I a m a d c s g ru -

p o s P l i g a d o s d e m a n e ra c o v a le n le a r e s id u o s d e c is te in a d e

la s s u b u n id a d e s (X y ~ Y l o s d o s g r o p o s F eM o C o u n id o s a la

s u b u n i d a d I X , d on d e s e p r o p o n e q u e s on t r a ns p o r ta d o s lo s

e l e C 1 r o n e s y e s r e d u c id o e l N2• L a p rc te fn a I I e s u n d im e ro d e

a lr e d e d o r d e 6 8 ,0 0 0 D a , ! o rm a d o p a r d o s s u b u n id a d e s id e n -t i c a s u n id a s p o r u n g r u p o p r o s le t i c o u n ic o d e 4 F e - 4 S . E I

g e n e r e s p o n s a b le d e la s f n t e s is d e e s la p r o t e in a e s n i f H I

E s la p ro le in a U e n e [ a f u n c lo n d e l r a n s p o rt a r l o s e le c t r o n e s

d e l d o n a d o r I i s io !6 :g ic o d e e l. e c tr on e s ( fe r r od o x in a 0 f l a v o d o -

) ( i n a ) , h a c la la p ro te in a l p a r a n e v a r a c a b o la r e d u c c io n d e ~ Ia

M o t = e : P t e e l n a



m o le cu la d e Nl,( F i g ~ L 1 r a 3 ). L a N a s a e s s u m a r n e n t s la b i l a la

in a c tiv a c io n p o r e l 0t ; d e h e c h e , p a r a s u p u r i f i c a . c i6 n s a r e -

q u ie re n c o n d ic io n e s a o a e r o b lc a s e s t r r c la s d a b ld o a q u e e l

c o fa c to r F e M o C o e s i r re v e rs ib le m e n t e d e s n a iu r a ll z a d o y o x i -

d a d o ( F ig u r a 4 ) . L a F B N e s u n p r o c e s o q u e r e q u ie r e u n

g a s t o c o n s id e r a b le d e e n e rg ia , d e a h f q u e s u b io s f n te s is

e s le s om e t id a a u n a e s t r c ta r e g u la c io n . H a s id o d e te r m l n a -

d o q u e , b a lo c o n d Ic io n e s d e la b o r a t o r la , s a r e q u ie r e n 1 6

m o le c u la s d a M g - A T P y s e p r o d u c e a d e m a s u n a m o le c u la

d e Hf

L a e c u a c io n g l.o b a l e s :

E n c o n d ic io n e s n a tu ra le s s a h a e s t im a d o Q u e l a d em a n -

d a e n e r g e t i c a e s m u ch o m a yo r d e 2 0 - 3 0 m o le c u la s d e A T P .

P o r e s ta r a z o n l o a m i o ro o r g a n is m o s h a n s e le c c io n a d o m e -

c a n is m o s p a r a I n a c ti v a r a la e n z im a c u a n d o e s la d ls p o n ib le

e l n it r o g e n o c om b in a d o ; e s t o I e p e rm i t e m a n le n e r la s n e c e s l·

c la d e s p e l m i c ro o rg a n is m o y e v it a r u n g a s t o e n e r y e ti c o ln u tl l .

L a h ld ro li s ls d e A T P a s ia a co p la d a a la t r a n s fe re n c ia d e

e le c l r o n e s ( e ') h a e la la p ro te fn a I ; d o s m o le cu la s d e A T P s o n

h id ro liz a d a s p o r c a d a p a r d e e I r a n s fe r id o s . S e p ie n s a q u e

lo s g ru p o s P t ie ne u n a !u n c io n e n la t r a ns fe re n c ia d e e o . D e

m a n e r a s im i l a r , e l c o m p le jo d e la N a s a c a t a liz a ig u a lm e n te la

r e c u ce lo n d e a m ilo g o s e s le ric o s d e l N , e n p a r l l e u a r s l a c s ll -

l e n o , q u e e s r e d u c id o a e ti le n o . E s la p ro p le d a d e s la b a s e d e

u n r n e t o d o r e ia liv a m e n le s e n c il lo p a ra a n a l i z a r l a a c tiv ld a d

d e la N a sa p o r c ro m a to g r a f1 a e n la se g a s e o sa . E s le m e to d a

h a p e rm l tld o ! a m b le n e l d e sc L Jb r im i e n lo d e o ir c s d ia z o t r o fo s

u li l i z a n d o e l s e n c i l l o m e d lo d e c u lH v o s in n il r O g e n o I la m a d o

n tb ( n it r o g e n f ix a ll o n b ie lo g ic a l) , d e s . c r i l o e n B r a s il p o r J o a n -

n a 0 6 b e r e in e r. 1 E n s s t e m e d io s e a d ic io n a u n a lu e n le d e

c a r b o n o y a lg u n a s s a le s , l a f u e n te d e N e s e l m o le cu la r, p e r

1 0 t s n to lo s u n ic o s m i c ro o r g a n is m o s q u e s e d e s a r r o la ra n

s e r a n a q u e l lo s q u e s e a n c a p a c e s d e F N . S e in o c u la a l m e d io

u n a p o r d on d e r a l z , d e l n O d u lo 0 b ie n la b a c te ri a y a a is la d a

p o r p ic a d U ra y e l d e s a r r o ll o d e l m i c ro o r g a n ls m o s e r e a l l z a r a

e n la z o n a e n la c u a l e x is la u n a p O zm e n o r a 0 .0 2% (m i c ro a e -

r o l i l l a ) d e b id o a q u e , c o m o y a s e m e n c io n o , l a e n z im a e s

s u m am e n t e s en s ib le a e s t e g a s . E s le m e to d o h a p e rm i l i d o

a is la r e id e n U f i c a r d fa z 6 tr o f o s d e d lf e r e n le s h a b it a t s .E n 1 9 7 2 , D ix o n y P o s tq a te ( c i l a d o e n 3 ) , I r an s f1 r i e r o n lo s

g e n e s n ;{ ( p o r I l l l r o g e n ! I x a tlo n ) d e K l e b s Ie lla p n e u m o n ia a

E S C h e r ic h ia c a ll c re a n d o u n a n u e v a e s p e c ie l i ja d o ra d e n ll r o -

g e n o . E ll o c o n d u jo a p ro p o n e r, c o m o u n a s o lu c io n a l p ro b le m a

d e J a n u t r i c i6 n v e g e t a l, l a I r a n s fe re n c ia d ir e c t a d e lo s g e n e s

n i f H D K a la s p la n t a s . E g le o b je tl v o e s la le io s d e s e r o b t e n i ·

d o , y a q u e la g en e l i c a d e 1 a F B N h a r e su lt a d o s u m am e n le

c o m p l e j a y a s ia . s o m e lid a a u n c o n tr o l e s t r ic to y r e f i n a d o ,

jU s la m e n te p o r la im p o r t a n te d em a n d a e ne rg e t i c a . S e h an

d e s c t i t o a lr e d e d o r d e 2 0 g e n e s ln v o !u c r a d o s e n la F B N , c u y a

s e c u e n c i a y f u n c io n e s h a n s id e ya d e t e rm i n a d a s . S e h a

d e s c r to la m b is n q u e lo s g e n e s e s n u e lu r a le s d e la N a s a

e s t a n s um a m e n le c o n s e rv ad cs , a s l c o m o u n c ie rt o n um a ro

d e o lr o s g e n e s c u y o s p r o d u c lo s ] u e g a n u n p a p a l e n la m a d u -

r a c io n d e la e n z im a , la s ln te s i s d e l c o f a c t o r, e ll r a n s p o rt e d e

M o l ib d e n o (M o ) y la r e g u la c io n .'

E n e l m i c r o o rg a n is m o d ia z o l r o fo d e v id a I Ib re A z o t o b a c t e r

v l n e l a n d i i , s e d e sc r ib ie ro n p o r v e z . p r im e r s t r e s N a s a s d H e re n -

le s . U n a d e e li a s e s la u c o n v e n c io n a l" N a s a a M o . E s ta N a s a ·1

a s e x p r e s a d a e n m e d io q u e c o n le n ie n e M o . L a s o l r a s d o s ,

l 1 a m a d a s N a s a s 'a 1 te rn a ti v a s ' , i n c lu y e n a la N a s a - 2 ; e s ta e s

u n c om p le jo e n z im a t l c o q u e o o n tie n e V a n a d lo ( V ) e n lu g a r d e

M o . T a l c o m p le jo e n z im a t l c o e s la lo rm a d o p o r d o s c om p o n e n -

r e s : la d in l t r o g a n a s a r e d u e ta s a - z , u n d l r n e r o d e d o s

s u b u n id a d e s r d e n t i c a s , y la d in tt r o g e n a sa ·2 , la c u a l e s u n

h e x a m e r o d e M M r 2 4 0 , 0 0 0 D a c o n I r e s t i p o s d i f e r e n le s d e

s u b u n id a d e s ( a .P

y o ) . L a d ln lt r o g e n a s a r e d u c t a s a -2 l i e n e

u n a m a s a m o l e c u la r r e la t i v a d e a k e d e d o r 6 2 ,0 0 0 D a , c o n t i e n e

c u a t r o a la m o s d e F e y c u a lm g tU p O S ·S H a o id o la b U p o r

d fm e r o ; l a d in il r o g e n a s a -2 c o n ti e n e d e s a lo m o s d e V , 2 3 a lo -

m a s d e F e y 2 0 g r u p o s - S H a c id o la b l l p o r m o le c u la . E I

c o f a c t o r F e V aC o a n a lo g o a l F e M o C o s e h a e x l r a ld o d e la

d l n l t r o g e n a s a . L a N a s a - 3 c o n U e n e F e e n lu g a r d e M o y V .

C o n s lj l u id a ta m b ie n p o r d o s c om p o n e n le s . l a d ln lt r o g e n a s a

r e d u c t a s a e s u n d lm e r o d e 6 5 , 0 0 0 O a y d o s s u b u n ld a d e s

ld e n li c a s : l a d in il r o g e n a s a e s u n le lr a m e ro d e d o s s u b u n id a -

d e s ( e xy ~ ) : e s ta u lt im a N a s a I le n e u n g a s lo e n e rg e t io o d e A T P

m u c h o m a y o r. 2 .U n r ec ie n le y e x c il a n te h a ll a z g o r ea l iz a d o p o r in v e s tig a -

d o r e s a le m a n e s (M e y e r s y . 0 0 1 5 . , 9 ) . s e r e l i e r e a u n a N a s a

a is la d a d e S t re p to m y c e s th e rm o a u t o tr o p h ic u s , la e ua l p r e -

s e n ta v a r ia s c a r a c t e r l s ll c a s o r ig in a le s : lo s r e q u e r im l e n t o s

e n e rg e l ic o s ( A T P ) s o n c o n s id e r a b le m e n t e m e n o r e s , la r s a c -

c io n e s t a a co p la d a a la o x id a c io n d e l m o n o x id o d e c a r b o n o

( C O ) p o r u n a e n z l m a a d ic io n a l la m o li b d e n o C O d e s h id ro g e ·

n a sa , q u e I r a n s f ie re lo s e le c tr o n e s d e ri v a d o s d e la o x id a c io n

4 1



d e CO a J °2, p ro d u c ie n do r a d i c a le s d e l a n io n s u p e ro x id o ( °

2-),

U n a s u p e r o x id o r e du c ta sa r e o x id a lo s a n io n e s 02 ' a 02 y

t r a n s l i e re lo s e le c t r o n e s a la F e - M o S d ln it r o g e na sa p a r a la

r e d u e c e n d e N 2 a a m e n ia ; l a e n z m a n o e s c a p a z d e r e d u c i r

e li n o y e t e n o ; a d e m a s , e s r e l. e va n le d e s ta ca r q u e lo s c om p o -

n en te s d e la N a sa s on e xp re sa d o s c on s t l t u ti v a m e n te ; l o d o 1 0

a n te ri o r h a c e a e s t a n ue v a N a s a s u m a m e n t e a t r a c t i v a p a ra

s u e s t u d io m o le c u la r . E n r e s u m e n , u n a d e la s m a s s o r p r e n -

d e n te s p ro p ie d a de s d e l c o m p le jo e n z r n a n c o d e la N a s a d e

S . t h e r m o a u t o lr o p h ic u s e s s u d e p en d en c ia d e l 0 2 'Y la m s s n -

s ib i l i d a d d e t o d o s lo s e o m p o n e n le s a l 02 y HP2 ' L o s

c o m po n en t e s d e e s t a N a sa s o n e s t r u c t u ra lm e n t e d if e re n le s

d e la s o tr a s N a s a s , p a r 1 0 t a n io , l o s g en e s q u e c od if i c a n p a r a

e s te c o m p le jo enzmai ico n o e s t a n r e la c io na do s c a n lo s g e ·

n e s d e la s " N a s a s c on ve n c io na l y a l l e r n a U v a s " . 9

E s te qu io m e lr i a d e la N a s a d e S. I h e r m o a u t o t r o p h i c u s .

N t + B H ' 8 8 '+ " · 1 2 M g - A TP . . . . 2 N H . + H l 4 · 1 2 M g · A D P + 4 · 1 2 P i

CONClUSIONES

E I a v a n c e d e la s in v e s t i g a c io n e s e n lo s u l t im o s 2 0 anos h a

s id e m u y im p o r t a n le , s i s e c o n s id e r a la c o m p le j id a d d e lo s

s is te m a s e n z im a H c o s in v o lu c r a d o s , la l i s io l0 9 ia d e l m i c ro o r -

g a n i s m o e n rslacion c o n la prcduccon d e e n e r g ia , l a s

F IG U I U 4 E s i r u c l lJ la t r id im e n sio n a l d e l c o m p l e j o 1 3 > 1 Z i m 3 I i C O N i t r o g e n a s a a

e lro y m o l ib d e n o, d e A z o t o b ac te r V l n e la n d n o b t e n id o po l d i f r a c d o n f a v u s X ,

C o m p o n e rn e I F I € f l ' O - M o ~ b d e n o d i n i t r o g e n a s a r e d u c a s a , h e e r o o l m e r oC G C ' e -

n a s a y IJ ( a z u l. v e l d e ~ C om p on em e I I F Je rr o -p ro \e in a h om o dfm e ro (a m an ,

r O j a . n a r a n i a l . T om a do d e S ir u ctu re o f A d p X a l f4 ( .) .S ! a b ir iz e d n l l r o g e n a s ec o m t ) l e ~ an d Its ' I' l1 p l l c a O O S f o r s i g n a t I r a n sd uc l io n 1 9 97 H S ch m d e m . C ,

K i s I I e r , J .L S c h 1 e w n a n . J .B H ow a rd a nd D . R e e s . . N a t u (e 3 8 7 :3 7 0 .

4 8 S ;£ ..D lI C ., L SDlo U rziill, ~ ~ .Pardo Ru i l

c a r a c t e ri s t ic a s d e la l n te ra cd on r r i c ro o t q an ls m o - p la n t a y la s

e s l r a t e g ia s s e le c c io n a d a s e n e l p r o c e s o e v o lu t i v o p a r a e l

c o n t r o l d e la F B N . L a F B N a a m o n io e s r e a l iz a d a u n i c a m e n te

p o r p ro ca r i o t e s y , e n m ic r o o r g an is m o s c a n N a s a s " c o n v e n -

c lo n a le s ' , e s u n p r o c e s o m u y s e n s ib le a l o x ig e n o . P o r o i r a

p a r t e , e l p r o c e s o d e F a N e s u n c o m p o n e n te c r i l i e o e n e l

c ic io g lo b a l d e l n it r o g e n o d e r e le v a n t e im p o rt a n c ia e c o l6 g ie a .

L o s m e jo r e s f i j a d o r e s s o n lo s q u e e s la b le c e n u na s im b io s i s

c o n p la n t a s s u p e r i o r e s e n la c u a t l a e n e r g ia p a r a la F N y . e n

g en e ra l, e l s i s t e m a d e p ro te cc ic n a l 0 2 e s p ro po rc io n a d o p o r

l a p la n ta . D e n U o d e lo s d ia z O lr o l o s s e in c lu y e n lo s a s o c l a -

d o s , d e v id a l i b re , s im b ie fi c o s y e n d 6 f i t o s .

L a F B N e s e l m e c a n is m o p r in c ip a l d e a p o r t e d e N e n lo s

e co s i s l e m a s n a t u r a le s y e s m u y im p o rl a n le e n la a g r i c u l t u r a

d e l ! r o p ie o . E n v a ri o s s u e lo s t r o p i c a le s , d eb id o a l b a jo i n le r·

c a m b io d e io ne s y a la m in im a r e t e n d on d e a g u a d e la I r a cc io n

m i ne ra l, la f e r l i l i d a d d e l s u e lo e s t a e s lr e c h a m e n le r e la c io n a d a

c o n e l c o n te n id o d e m a le r i a o r g a n i c a d e l s u e lo . C o m o e l N ,e s

e l e le m e n t o m a s fa c i lm e n !e p e r d id o c u a n d o la m i n e r a li z a c io n

d e la m a te ri a o rg a n ic a d e l s u e lo e s e s t im u la d a p a r e l a r a d o d e l

s u e lo , e s f r e c u e n te q u e e s le e le m e n t o c o n t r a l e la m a t e r i a

e r g an ic a d e l s u e lo y , p o r 1 0 t a n lo , s u f e r t i l i d a d . L a a p li c a c io n

c o n t i n u a d e le rt i l iz a n le s n o . p ue d e s e r u n a o p c i o n s o . s l e n i d a

p a r a e l t e r c e r m u n d o , y a q u e lo s p r e c io s d e lo s e n e r g e U c ( ls

s o n m u y e le v a do s , s o n c o n ta m in an t e s d e lo s m a n to s a c u i t e -

r o s y m u c h a s v e ce s s o n p e r d id o s p o r l e x iv ia c i o n .

E I n i t r o g e n o d e la b io s t e ra e s t a s u j e l o a u n r a p id o r e -

c a m b ia , y d e b id o a q u e e s p e r d id o c o m o N 2 a la a tm o s fe ra ,

s u m a n t e n im ie n t o r e q u ie r e d e u n c o n t i n u o r e e m p la z o c o n N

r e d u c i d o a p a r t i r d e l N 2 a f m o s t e r l c o . L a N a s a d e S . t h e r ·

m o a u t o t r o p h i c u s p u e de s e r u na e nz im a q u e e s le d i s l r ib u id a

e n m ic r o o r g a n is m o s a is l a d o s d e a m b ie n t e s e x t r e m o s , a s ·

p e c t o q u e n o h a b ia s id e e x p lo r a d o c a n a n t e r i o r id a d y a b r e

e xp e c ta ti v a s a le n t a d o ra s p a r a la m a n p u l a c i o n p o r i n g e n ie r ia

g e n e t i c a d e e s t s c o m p l e j o e n z i m a l c o d e b id o a s u t o le ra n c ia

h a c ia e l o x fg e n o , d e ta l m a n e r a q u e s e r a r e la t i v a m e n le m a s

s e n cH la s u c a r a c t e ri z a c io n b io q u im i c a , g e n e l i c a y m o le cu la r.

E s la r e v i s i o n r e co n o ce e l p a p e l d e f a F B N c om e u n a m a n e -

r a m a s e le c t i v a , m e n os c a r a y n o c e n ta m in a n le , p a ra m e jo ra r la

le rt i l i d a d d e l s ue lo c om p a ra d a c an o t r a s v ia s ( c o m o la f e r t i l i z a ·

c io n q u r m i c a y la o rg a n ic a ) , l a s c ua le s p re s e n t a n a lt o s n iv e ! e sd e c o n la m na c io n c o n m e t a le s p e s a do s . s a le s n i t r o g en ad a s y

m i o r o o r g a n i s m o s p a to g e n os p a r a e l h o m b r e . E n n u e s t r o e s t a d o



d e o o n o c ! m l e n t . o a c tu a l , t o m a n d o e n c o n s l d e r a . c i o n Ia p r o d u . o -

c i o n o b le n id a , l a s im b i o sis R h i zo b iu m - le g u .m i n o sa .e s s u p e rio r a

lo s o tr o s s is te m a s F N ; . s in e m b a rg o . la I r w e s U g a c i6 n r e c i e n t er e a J i z a d a . c o n lo s e n d 6 fi t o s ·p o d r ia r e p re s 8r J ta r la m e j o r fu e n t e

d e l e r t i n z a n i e s ' d e a J e S ' , por 1 0 q ue d em a n d an u n g r a n i n l e r e s

c o m o a r e a d e f u l u r a i n v e s t i g a c i o n .

ReF ERE N C I A S

• SaI : l lr i J I, C a r u s o , L . . B a 1 d a r i . \Il D . . G a . S . R , a n d I~ J, 1997.

A e : : e 1 I a d ' I a n c : e s 1 ' 1 8 N F 1 ' & 1 ~ p ! a n l s . S o l i B i o i '. B i o : : : h e m . 2 9 : . 9 1 1 - 9 2 2 .

2 9 i s ! l o p , P E , a n d P r em a k ll l la f, R ., 1 9 9 2 . A l t l ! r n a t ! v a n i ~ f i x a l l o n s y s t e m s .

In 8 10 b gic a l n l l r o g en f W l O O o . E d s G . S ! a l : e y , A , H . B U H i S . , an d H . J '. E v a n s .

p p 7J 6 .7 62 ., C h a pm a n . & H a l l .

l B ' r e t : h . C ., 1 9 9 3 . , F b r a Ii c n bl :l b ;i iq u e d e r a z o le . A n n . l n s li tu ! P a s t e u r , 4 ; 1 n . I 5 3 .

• H u ss e in Z l; IM r a n , H . . 1 99 9, R h iz O b Iu m -l l ! g um e s ym lJ lo sl$ a nd n it rO g en

f i x a t io n u n d e r s e v S !e c o n dU i o n s a m lin a n S ! id c l im a le . M i c ro b ia l. M o l. B io !.

R e v . 6 3 : 9 6 a . 9 8 9 .

" J i tr e n ez . · S a I g a O O 1 , F U B I \ [e s ·R a m f r e z ., L E ., T B p i a · H e r ~ n d e . z , A ., M a s c a .

r oa ·E s pa n a . M • . M a r lJ n ez :'R o m e r o .. E ., a n d C l lb a l li ll o -M e l l a d o , J . , 1 9 9 7 ,

C < J R e a 8 1 W 1 c a L , a o o w h o s t p la n ! f or A c e lo b a c/ 8I ' d la Z O / ro p h io o s , a n d

[ s o l a t i o n 0 1 o l M ! n l n o g a n , · f i x i n g A c e t o b a c l I ~ r i a , A p p l , E r lv ir o n M i c r o b i o l .

6 3 : $ 7 6 - 3 6 8 3

IL e v o l l a y , J .. 1 9 6 6 . l 'm : o t e e l . l a v ie .: r oo v r e d e J ea n S e p l i m e S o u S S i n g a u H .

V l I1 'i i S d e nt if fq u e s G A S , 5 9 -- .7 2 .

T N u lrM n . P .S . . 1 9 8 7 C e n le rl ;1 ry le c lu re . P M T m flS R e a l S o c ie ty L on d ( l l ) B

317: 6 9 - 1 1 l 6 .

, R e in tw ld -H w 'e k, B " a m i H u re k, 1 , 1 9S B . l l Ie I n g ra ss es ~ d m o l r o ph ic

e m : h ~ p h Y le s . T re r d s M i c ro b ia L 1 3 9 ;1 3 9 -1 4 3 .

, R lb b e . M . , G a d k a r i . D ., a n d M e y er s , 0 . , 1 9 9 7 N , ; f O O ! lk mb y S f J e p k J m y -

e s s lfIellllOa u r o ! . r o p / I i c l l $ i n v o l v e s a m c ly bd en ul l 'H lin il r o ge n as a a nd a m a n,

g a .o o se -s u pe ro x id e o x id o re d uc ta s e lh a l c o o . ~J e (e d il~ l io o 1 0 ih e o x ld a U o n 0 1

s u pe ro x lo 'e p rO d u c ed l r om 0, b y m o I ib d ff iu n H JO · d e l ly d ro g e na s e . J .S io !.

C h e m . 27 2 .: 26 6 27 - 26 6 3 3.

SAm . E . u g e n f . i l S a c a y L u c I a 5 0 1 (1 Urz:Uason ln l fes f lgadoru

d e l centro d e l n ll es ti ga c lo n e s. M l c ro b J o1 6 gI C ll $ c l e l . f C I J A I ' ;

Palr ic; ia A . P ard o Ru iz esp f i l: lf e . 5Qrade la FacuJfad de

Me d lc lm ld ft la lln lv es Jd a d A u f6 n om a de Pueb la ,

c~ G . u : I D ! ' n . R I _ _ (~(l"el!!!7Im'l\!l~rM f J l J . G . 1 M l l !

c e ll ~ C Iu I! od tWviU. 19'iJ6,anl 4 9

fijación biologica del nitrogeno

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