Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y...
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Segunda edicioacuten
bull bull bull
bull
LESllE P GARTNER Ph D JAMES lo HIATT Ph D
Associate Professor of AnatomyDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
Associate Professor of Anatomy RetiredDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
University of MarylandBaltimore Maryland
Traduccioacuten
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
University of MarylandBaltimore Maryland
Dr Jorge Orizaga S
Revisioacuten teacutecnica
M en e N Teresa 1 Fortoul Van der CoesDra Patricia Bizarro N
M en e Laura Coliacuten B
BioacuteLIrma E Loacutepez MBioacuteL Ivonne C Saacutenchez C
Dr Rodrigo Vaacutezquez F
McGraw Hill nteranlericanaHEALTIiCARE GROUP
MEXICO bull AUCKLAND bull BOGOTA bull CARACAS bull LISBO middot LO NDRES bull MADRID
MlLAN MONTREAL bull NUEVA DELHI bull NUEVA YORKmiddot SAN FRANCISCO
SAN JUAN middot SINGAPUR bull SIDNEY bull TORONTO
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NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo Conforme surjan nuevos conocimientos se requeriraacuten cambios de la terapeacuteutical los) autor es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificacioacuten medicamentosa sean precisos y acordes
con lo establecido en la fecha de publicacioacuten Sin embargo ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina ni loseditores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacioacuten de la obra garantizan que la informacioacuten contenida enella sea precisa o completa tampoco son responsables de errores u omisiones ni de los resultados que con dicha informacioacuten se
obtengan Convendriacutea recurrir a otras fuentes de datos por ejemplo y de manera particular habraacute que consultar la hoja informativaque se adjunta con cada medicamento para tener certeza de que la informacioacuten de esta obra es precisa y no se han introducidocambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracioacuten Esto es de particular importancia conrespecto a faacutermacos nuevos o de uso no frecuente Tambieacuten deberaacute consultarse a los laboratorios para recabar informacioacutensobre los valores normales
TEXTO ATLAS DE HISTOLOGIA
Proh ibida la reproduccioacuten total o parcial de esta obra por cualquier medio sin
autorizacioacuten escrita del editor
D E HECHOS HESEHVADOS copy 2002 respecto a la segunda edicioacuten en espantildeol por
McGRAW-T-IILL INTERAMERICANA EDITORES SA de CV
A subsidieuy of The McGraw-Hill Companies
Cedro Nuacutem 512 Co l Atlampa
Delegacioacuten Cuauhteacutemoc 06450 Meacutexico DF
Miembro de la Caacutemara Nadonal de la Industria Editorial Mexicana Reg Nuacutem 736
ISBN 970-10-3728-6
Translated from th e second English editio n 01
Color Textbook o Histology by Leslie P Gartner James L Hiatt
Copyright copy 2001 Pllblished by WB Sallnders Company
A Harcourt Health Sciences Company
The Curtis Center
In dependence Square vVest
Philadelphia Pennsylvania 19106
Al rights reserved
ISBN 0-7216-8806-3 Edicioacuten original)
1234567890
hllpr so n ONNELLEY
09876543102
Printed in Chile
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A m esposa Roseannm hija jennifer
y m madre Mary
L P G
A mis nietos
N t l ~ n David
james Mallary
Hanna Elisabeth
lexandm Renate
y
Eric james
J L H
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 2: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/2.jpg)
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ex o
s e
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Segunda edicioacuten
bull bull bull
bull
LESllE P GARTNER Ph D JAMES lo HIATT Ph D
Associate Professor of AnatomyDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
Associate Professor of Anatomy RetiredDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
University of MarylandBaltimore Maryland
Traduccioacuten
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
University of MarylandBaltimore Maryland
Dr Jorge Orizaga S
Revisioacuten teacutecnica
M en e N Teresa 1 Fortoul Van der CoesDra Patricia Bizarro N
M en e Laura Coliacuten B
BioacuteLIrma E Loacutepez MBioacuteL Ivonne C Saacutenchez C
Dr Rodrigo Vaacutezquez F
McGraw Hill nteranlericanaHEALTIiCARE GROUP
MEXICO bull AUCKLAND bull BOGOTA bull CARACAS bull LISBO middot LO NDRES bull MADRID
MlLAN MONTREAL bull NUEVA DELHI bull NUEVA YORKmiddot SAN FRANCISCO
SAN JUAN middot SINGAPUR bull SIDNEY bull TORONTO
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NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo Conforme surjan nuevos conocimientos se requeriraacuten cambios de la terapeacuteutical los) autor es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificacioacuten medicamentosa sean precisos y acordes
con lo establecido en la fecha de publicacioacuten Sin embargo ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina ni loseditores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacioacuten de la obra garantizan que la informacioacuten contenida enella sea precisa o completa tampoco son responsables de errores u omisiones ni de los resultados que con dicha informacioacuten se
obtengan Convendriacutea recurrir a otras fuentes de datos por ejemplo y de manera particular habraacute que consultar la hoja informativaque se adjunta con cada medicamento para tener certeza de que la informacioacuten de esta obra es precisa y no se han introducidocambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracioacuten Esto es de particular importancia conrespecto a faacutermacos nuevos o de uso no frecuente Tambieacuten deberaacute consultarse a los laboratorios para recabar informacioacutensobre los valores normales
TEXTO ATLAS DE HISTOLOGIA
Proh ibida la reproduccioacuten total o parcial de esta obra por cualquier medio sin
autorizacioacuten escrita del editor
D E HECHOS HESEHVADOS copy 2002 respecto a la segunda edicioacuten en espantildeol por
McGRAW-T-IILL INTERAMERICANA EDITORES SA de CV
A subsidieuy of The McGraw-Hill Companies
Cedro Nuacutem 512 Co l Atlampa
Delegacioacuten Cuauhteacutemoc 06450 Meacutexico DF
Miembro de la Caacutemara Nadonal de la Industria Editorial Mexicana Reg Nuacutem 736
ISBN 970-10-3728-6
Translated from th e second English editio n 01
Color Textbook o Histology by Leslie P Gartner James L Hiatt
Copyright copy 2001 Pllblished by WB Sallnders Company
A Harcourt Health Sciences Company
The Curtis Center
In dependence Square vVest
Philadelphia Pennsylvania 19106
Al rights reserved
ISBN 0-7216-8806-3 Edicioacuten original)
1234567890
hllpr so n ONNELLEY
09876543102
Printed in Chile
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A m esposa Roseannm hija jennifer
y m madre Mary
L P G
A mis nietos
N t l ~ n David
james Mallary
Hanna Elisabeth
lexandm Renate
y
Eric james
J L H
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
X
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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Segunda edicioacuten
bull bull bull
bull
LESllE P GARTNER Ph D JAMES lo HIATT Ph D
Associate Professor of AnatomyDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
Associate Professor of Anatomy RetiredDepartment of Oral and Craniofacial
Biological Sciences
University of MarylandBaltimore Maryland
Traduccioacuten
Baltimore Collage of Dental SurgeryDental School
University of MarylandBaltimore Maryland
Dr Jorge Orizaga S
Revisioacuten teacutecnica
M en e N Teresa 1 Fortoul Van der CoesDra Patricia Bizarro N
M en e Laura Coliacuten B
BioacuteLIrma E Loacutepez MBioacuteL Ivonne C Saacutenchez C
Dr Rodrigo Vaacutezquez F
McGraw Hill nteranlericanaHEALTIiCARE GROUP
MEXICO bull AUCKLAND bull BOGOTA bull CARACAS bull LISBO middot LO NDRES bull MADRID
MlLAN MONTREAL bull NUEVA DELHI bull NUEVA YORKmiddot SAN FRANCISCO
SAN JUAN middot SINGAPUR bull SIDNEY bull TORONTO
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NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo Conforme surjan nuevos conocimientos se requeriraacuten cambios de la terapeacuteutical los) autor es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificacioacuten medicamentosa sean precisos y acordes
con lo establecido en la fecha de publicacioacuten Sin embargo ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina ni loseditores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacioacuten de la obra garantizan que la informacioacuten contenida enella sea precisa o completa tampoco son responsables de errores u omisiones ni de los resultados que con dicha informacioacuten se
obtengan Convendriacutea recurrir a otras fuentes de datos por ejemplo y de manera particular habraacute que consultar la hoja informativaque se adjunta con cada medicamento para tener certeza de que la informacioacuten de esta obra es precisa y no se han introducidocambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracioacuten Esto es de particular importancia conrespecto a faacutermacos nuevos o de uso no frecuente Tambieacuten deberaacute consultarse a los laboratorios para recabar informacioacutensobre los valores normales
TEXTO ATLAS DE HISTOLOGIA
Proh ibida la reproduccioacuten total o parcial de esta obra por cualquier medio sin
autorizacioacuten escrita del editor
D E HECHOS HESEHVADOS copy 2002 respecto a la segunda edicioacuten en espantildeol por
McGRAW-T-IILL INTERAMERICANA EDITORES SA de CV
A subsidieuy of The McGraw-Hill Companies
Cedro Nuacutem 512 Co l Atlampa
Delegacioacuten Cuauhteacutemoc 06450 Meacutexico DF
Miembro de la Caacutemara Nadonal de la Industria Editorial Mexicana Reg Nuacutem 736
ISBN 970-10-3728-6
Translated from th e second English editio n 01
Color Textbook o Histology by Leslie P Gartner James L Hiatt
Copyright copy 2001 Pllblished by WB Sallnders Company
A Harcourt Health Sciences Company
The Curtis Center
In dependence Square vVest
Philadelphia Pennsylvania 19106
Al rights reserved
ISBN 0-7216-8806-3 Edicioacuten original)
1234567890
hllpr so n ONNELLEY
09876543102
Printed in Chile
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A m esposa Roseannm hija jennifer
y m madre Mary
L P G
A mis nietos
N t l ~ n David
james Mallary
Hanna Elisabeth
lexandm Renate
y
Eric james
J L H
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
X
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 4: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/4.jpg)
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NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo Conforme surjan nuevos conocimientos se requeriraacuten cambios de la terapeacuteutical los) autor es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificacioacuten medicamentosa sean precisos y acordes
con lo establecido en la fecha de publicacioacuten Sin embargo ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina ni loseditores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacioacuten de la obra garantizan que la informacioacuten contenida enella sea precisa o completa tampoco son responsables de errores u omisiones ni de los resultados que con dicha informacioacuten se
obtengan Convendriacutea recurrir a otras fuentes de datos por ejemplo y de manera particular habraacute que consultar la hoja informativaque se adjunta con cada medicamento para tener certeza de que la informacioacuten de esta obra es precisa y no se han introducidocambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracioacuten Esto es de particular importancia conrespecto a faacutermacos nuevos o de uso no frecuente Tambieacuten deberaacute consultarse a los laboratorios para recabar informacioacutensobre los valores normales
TEXTO ATLAS DE HISTOLOGIA
Proh ibida la reproduccioacuten total o parcial de esta obra por cualquier medio sin
autorizacioacuten escrita del editor
D E HECHOS HESEHVADOS copy 2002 respecto a la segunda edicioacuten en espantildeol por
McGRAW-T-IILL INTERAMERICANA EDITORES SA de CV
A subsidieuy of The McGraw-Hill Companies
Cedro Nuacutem 512 Co l Atlampa
Delegacioacuten Cuauhteacutemoc 06450 Meacutexico DF
Miembro de la Caacutemara Nadonal de la Industria Editorial Mexicana Reg Nuacutem 736
ISBN 970-10-3728-6
Translated from th e second English editio n 01
Color Textbook o Histology by Leslie P Gartner James L Hiatt
Copyright copy 2001 Pllblished by WB Sallnders Company
A Harcourt Health Sciences Company
The Curtis Center
In dependence Square vVest
Philadelphia Pennsylvania 19106
Al rights reserved
ISBN 0-7216-8806-3 Edicioacuten original)
1234567890
hllpr so n ONNELLEY
09876543102
Printed in Chile
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A m esposa Roseannm hija jennifer
y m madre Mary
L P G
A mis nietos
N t l ~ n David
james Mallary
Hanna Elisabeth
lexandm Renate
y
Eric james
J L H
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
X
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 5: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/5.jpg)
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A m esposa Roseannm hija jennifer
y m madre Mary
L P G
A mis nietos
N t l ~ n David
james Mallary
Hanna Elisabeth
lexandm Renate
y
Eric james
J L H
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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Siempre es muy satisfactorio publicar una nueva edicioacuten deun libro en especial de uno tan bien aceptado no soacutelo en suidioma original sino tambieacuten en sus diversas traduccionesLa histologiacutea como tema se encuentra en el cruce entre
la anatomiacutea macroscoacutepica y la fisiologiacutea y actuacutea como unelemento integral entre ellas Conforme nuestros conoci-mientos en biologiacutea progresaron se desarrollaron nuevasdisciplinas como las biologiacuteas celular y molecular que
ejercen un gran impacto en el cuacutemulo de conocimientosde la histologiacutea que se expande para incorporar vastascantidades de informacioacuten recieacuten descubierta
En la preparacioacuten de la edicioacuten actual buscamos atraveacutes de la muacuteltiple informacioacuten que inunda los campos dela biologiacutea celular y molecular y revisamos la mayor parte
de los capiacutetulos del libro con el fin de reflejar conceptosac tuales en estos campos de manera especiacutefica en su apli-cacioacuten al estudio de la histologiacutea Auacuten asiacute al mismo tiempotrabajamos para presentar el material en forma concisa de
modo que se ajuste al reducido tiempo curricular actual quela mayor parte de las escuelas de medicina y odontologiacuteaasigna al estudio de la histologiacutea
Tambieacuten antildeadimos nuevo materia l ilustrativo en forma
de dibujos a todo color y fotomicrografiacuteas asiacute como micro-grafiacuteas electroacutenicas de barrido y transmisioacuten con objetode continuar ayudando al estudiante a correlacionar lainformacioacuten que obtiene en las secciones didaacutectica y delaboratorio del curso Otro cambio didaacutectico que observaraacutenquienes utilizaron la ed icioacuten anterior es la adicioacuten de un
resumen corto al inicio de cada seccioacuten que destaca demanera sucinta la informacioacuten que se presenta en esesegmento del capiacutetulo Maacutes auacuten ajustamos el tamantildeo final
re acio
bull bull
del libro para que el estudiante lo manipule en forma maacutesconveniente y coacutemoda
Como en la primera edicioacuten trabajamos para que estelibro sea legible y proporcione la informacioacuten de manera
tan eficiente como sea posible al presentar muchos de losesquemas en forma didaacutectica Gran parte de la informacioacutense resume en cuadros para promover la adquisicioacuten delos conocimientos Con frecuencia el texto se interrumpe
por insertos resumidos que no soacutelo organizan aspectosimportantes de la histologiacutea funcional sino que tambieacutenponen en alerta al lector respecto a su relevancia Losteacuterminos importantes se presentan en negritas tanto para
dirigir la atencioacuten a ellos como para permitir que el estu-diante que se prepara para exaacutemenes los revise con rapidezPor uacuteltimo en la totalidad del tex to el lector encontraraacutecorrelaciones cliacutenicas que se insertan en recuadros e ilustranla importancia de la histologiacutea para los estudiantes de lasprofesiones de la salud Creemos que estas caracteriacutesticas
ayudaraacuten a resaltar el dogma importante de la histologiacuteade los diacuteas modernos que la estructura y la funcioacuten serelacionan de manera estrecha
Aunque hicimos todo lo posible por presentar una
des cripcioacuten completa y precisa del tema reconocemosque en cualquier labor de esta magnitud hay omisionesy errore s Por consiguiente continuamos alentando yacogiendo con mucho gusto las sugerencias los consejos ylas criacuteticas que facilitaraacuten mejorar este texto
LE SLIE P GARTNE R
JAMES L HIATT
X
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
X
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 7: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/7.jpg)
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~ r a
Deseamos agradecer a las personas siguientes la ayuda y
apoyo que nos proporcionaron en la preparacioacuten de estelibro En la University of Maryland gracias en especial al
doctor William A F alkler Jr por la revisioacuten del capiacutetulo
referente al sistema linfoide al doctor Norman F aprapor revisar la seccioacuten de huso muscular y a la sefiorita
Jennifer P Bassiur estudiante de odontologiacutea del tercer
afio por sus sugerencias que contribuyeron a mejorar la
presentacioacuten de este mat erial
Agradecemos verdaderamente al doctor Jam es C Hu s
ton y en especial al doctor Paul May por proporcionarnos
una extensa lista de sugerencias para mejorar los materiales
de texto e ilustrativos Tambieacuten deseamos agradecer a lo s
doc tores Robert A Bloodgood Fadhil Al-Lami y Nicholas
A Chiaia sus valiosos comentarios dirigidos a sus respectivos
campos de experiencia
e imientos
bull bull bull
omo la histologiacutea es un tema visual es imprescindi
ble contar con ilustraciones graacuteficas excelentes Por esta
razoacuten estamos en deuda con Todd Smith por su atencioacuten
cuidadosa a los detalles al revisar las ilustraciones de la
primera edicioacuten y crear nuevas figuras Tambieacuten agradecemos a nu es tros muacuteltiples colegas de todo el mundo
y a sus respectivos editores que nos permitieron generosamente tomar prestados materiales ilustrativos de sus
publicaciones Por uacuteltimo damos las gracias al equipo de proyectos de
WB Saunders por toda su ayuda en particular a WiUiam
R Schmitt Editor en Jefe Textos Meacutedicos Carol Robins
Supervisora de Correctores EUen ZanoUe Disefiadora
Natalie Ware Jefa de Produccioacuten Peg Shaw Ilustrador
Especialista y sobre todo a nuestra Editora de Desarrollo
Deborah Thorp
X
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 8: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/8.jpg)
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Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas
histoloacutegicas baacutesicas
2 Ci t op l a sma
3 Nuacutecleo 49
4 Matriz extracelular 69
5 Epitelio y glaacutendulas 83
6 Tejido conectivo 1 7
Cartiacutelago y hueso bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull bull 127
8 uacutesculo 153
9 Tejido nervioso 179
1O Sangre y hemopoyesis 213
1 1 Sistema circulatorio 243
2 Sistema linfoide inmunitario) 263
onteni
bull bull bull
3 Sistema endocrino 289
4 Sistema tegumentario 3
5 Sistema respiratorio 329
6 Sistema digestivo cavidad bucal 351
7 Sistema digestivo conducto alimentario 363
8 Sistema digestivo glaacutendulas 393
9 Sistema urinario 415
2O Sistema reproductor femenino 439
2 Sistema reproductor masculino 463
2 2 Sentidos especiales 485
Indice alfabeacutetico 511
V
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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ucclon antro
teacutecnicas
Histologiacutea es la rama de la anatomiacutea que estudia los tejidosde animales y plantas Sin embargo este libro de textosoacute lo describe los tejidos animales de manera especiacutefica loshumano s En su aspecto maacutes amplio la palabra histologiacutese emplea como sinoacutenimo de anatomiacutea microscoacutepica yaque su materia no soacutelo incluye la estructura microscoacutepicade los tejidos sino tambieacuten la de la ceacute lul a oacuterganos ysistemas
E s necesario comprender qu e el cuerpo estaacute compues tode ceacutelulas matriz intercelular y una sustan cia liacutequida elliacutequido ex tracelular l iacutequido tisular) que impregna estoscomponentes El liacutequido extracelular que deriva del plasmasanguiacuteneo transporta nutrientes oxiacutegeno y moleacuteculas de
sentildealamiento a las ceacutelulas del cuerpo Por el contrario lasmoleacuteculas de sentildealamiento los productos de desecho y eldioacutexido de carb ono que liberan las ceacutelulas del organismollegan a la sangre y los vas os linfaacuteticos a traveacutes del liacutequidoex tracelular Este uacuteltimo y tam bieacuten gran parte de la matrizintercelular no se observan en preparaciones histoloacutegicas derutina empero es necesario que el estu diante de histologiacuteareco nozca su prese ncia invisible
El objeto de la histologiacutea ya no abo rda simplemente
la es tructu ra del cuerpo sino tambieacuten su funcionam ientoEn realidad la histologiacutea guarda una relacioacuten directa conot ras disciplinas y es ese ncial para comprende rlas Por
esta razoacuten este libro de tex to entrelaza la biologiacutea celularbioquiacutemica fisiologiacutea y seguacuten sea apropiado la patologiacutea
Los estudiantes reconoceraacuten la importancia de este objetivoen cuanto se remitan al tex to maacutes adelante en su carreraUn excelente ejemplo de esta relacioacuten se advertiraacute cuandoel lec tor cono zca la histologiacutea del rintildeoacuten y obs erve suintrincada estructura (has ta el nivel molecular) e n la quereside la capacidad de este oacutergano para realizar su fun cioacuten
Las alteracione s de la estructura renal dan lugar a un grannuacutemero de trastornos que ponen en peligro la vida
E l resto de este capiacutetulo analiza 10 meacutetodos que aplicanlos histoacutelogos para estudiar la anatom iacutea microscoacutepica delcuerpo
a isto o iacutea
isto oacute icas-
a lcas
bull
MICROSCOPI E LUZ
Preparacioacuten de los tejidos
Los pasos necesarios para l preparacioacuten de tejidos para
microscopia de luz incluyen a fijacioacuten b deshidratacioacuten
y aclaramiento c) inclusioacuten d corte y e montaje y tincioacuten
de los cortes
Se han desarrollado diversas teacutecnicas para preparar lostejidos con el fin de estudiarlos de tal mane ra que se mejencuanto maacutes su estado natural en vivo Las etapas incluidasson fijacioacuten deshidratacioacuten y aclaramiento inclusioacuten
en un medio estable seccioacuten en cortes delgados parapoder los ob servar mediante transiluminacioacuten montaje
en una sup erficie para facilitar su manipulacioacuten y tincioacuten
para dife renciar los diver sos componentes tisulares y celu-lares
Fijacioacuten
La fijacioacuten se re fiere al tratamiento del tejido consustancias quiacutemicas que no soacutelo retardan las alteracionestisulares sub secuentes a la muerte (o despueacutes de su remo-cioacuten del o rganismo) sino que tambieacuten conservan su con fi-guracioacuten normal Los agentes para fijacioacuten usados maacutes amenudo en microscopia de luz son formalina amortiguaday fijador de Bouin Estas dos sus tancias permiten elentrecruzamiento de las proteiacutenas y por tanto conservanuna imagen de l tejido similar al vivo
eshidratacioacuten y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido estaacute constituidapor agua se aplica una serie gradual de bantildeos de alcoholiniciando con alcohol al 50 y alcanzando de man era
1
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 10: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/10.jpg)
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2 Introduccioacuten a la histo logiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
paulatina el alcohol al 100 para eliminar el agua deshi-dratacioacuten) A continuacioacuten el tejido se trata con xileno
una sustancia quiacutemica que es miscible con parafina fundidaEste proceso se conoce como aclaramiento ya que eltejido se torna transparente en xileno
nclusioacuten
Con objeto de distinguir entre siacute las ceacutelulas superpuestasen un tejido y la matriz ex trace lular el histoacutelogo debe
incluir los tejidos en un med io apropiado y a continuacioacuten
seccionarlos en cortes delgados Para la microscopia de luzel medio habitual de inclusioacuten es la parafina Se coloca el
tejido en un recipiente adecuado con parafina fundida hasta
que se inflltra por completo Una vez que se impregna eltejido con parafina se coloca en un receptaacuteculo pequentildeorecubierto con parafina fundida y se deja endurecer para
formar un bloque de parafina que incluya al tejido
Seccioacuten
Una vez que se rebajan los bloques de tejido para
eliminar el material de inclusioacuten redundante se montan
para seccionarlos Esta labor se lleva a cabo medianteun microacutetomo un aparato eq uipado con una hoja y un
brazo que desciende en el bloque de tejido en incremento s
especiacuteficos iguales Para la microscopia de luz el grosorde cada corte fluctuacutea ent re 5 y 10 pm
Tambieacuten es posible efectuar los cortes en especiacutemenes
congelados sea en nitroacutegeno liacutequido o en un portamuestraspara congelacioacuten raacutepida en un crioacutestato Estos cortes se
montan con un medio para montaje de congelacioacuten raacutepida
y se seccionan a temperaturas inferiores a cero medianteuna hoja de acero enfriada con anterioridad Los cortes se
colocan en portaobjetos de vidrio previamente enfriadosse permite que alcancen la temperatura ambiente y se
tintildeen despueacutes con colorantes especiacuteficos (o se tratan para
estudios histoquiacutemicos o inmunocitoquiacutemicos)
ontaje tincioacuten
Los cortes de parafina s montan colocan) en portaobjetos
de vidrio a continuacioacuten s tintildeen mediante colorantes
hidroso ubles que permiten diferenciar los diversos
componentes celulares
Los cortes para microscopia de luz convencional seccionados mediante hojas de acero inoxidable se montanen portaobjetos de vidrio recubi ertos con un adhesivoDebido a que muchos constituyentes de los tejidos tienen
casi las mismas densidades oacuteptimas deben tentildeirse para lamicroscopia de luz La tincioacuten para microscopia de luz se
llevoacute a cabo principalmente con colorantes hidrosolubles
En consecuencia primero es necesario eliminar la parafina
del corte despueacutes de lo cual se rehidrata y tiiacuteie el tejidoUna vez tentildeido se deshidrata el corte de nueva cuenta
de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el
cubreobjetos con un medio adecuado para montaje
El cubreobjetos no soacutelo protege el tejido de alguacuten dantildeosino que tambieacuten se requiere para observar el corte conel microscopio
Aunque existen varios tipos de colorantes para observarlos muacuteltiples componen tes de ceacutelulas y tejidos pueden
agruparse en tres clases
bull Colorantes que diferencian los componentes aacutecidos ybaacutesicos de la ceacutelula
bull Co lorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz ex tracelular
bull Sales metaacutelicas que se precipitan en los tejidos y formandepoacutesitos de metales en ellos
Los colorantes empleados con maacutes frecuencia en his
tologiacutea son hematoxilina eosina H y E La hema
toxilina es una base que tintildee de manera preferencial loscomponentes aacutecidos de la ceacute lula de un color azuloso
Puesto que casi todos los componentes aacutecidos son aacutecidodesoxirribonucleico (DNA ) y aacutecido ribonucleico (RNA elnuacutecleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se
tintilde en de color azul oscuro estos e lementos se denominan
basofiacutelicos La eosina es un aacutecido que tintildee los componentesbaacutesicos de la ceacutelula de color rosado Debido a que muchoscons tituyentes del citoplasma tienen un pH baacutesico lasregiones del citoplasma se tintilde en de color rosa se dice qu e
estos elementos son acidoacutefllos Tambieacuten se usan muchosotros colorantes en la preparacioacuten de especiacutemenes para
estudio histoloacutegico (cuadro 1-1)
Las moleacuteculas de algunos colorantes como el azul detoluidina se polimerizan ent re siacute cuando se exponen aconcentraciones altas de polianiones en el tejido Estos
agregados son de un color diferente al de sus moleacuteculas
individuales Por ejemplo el azul de toluidina tintildee de azullos tejidos excepto los que son ricos en palian ones (p
ej matriz de cartiacutelago y graacutenulos de ceacutelulas cebadas)
que se tintildeen de color puacuterpura Se dice que un tejido
o un componente celular que se tintildee de color puacuterpura
es metacromaacutetico y que el azul de toluidina mu estrabullmetacromaSIa
icroscopia de luz
os microscopios compuestos estaacuten constituidos por una
disposicioacuten especifica de lentes que permiten una gr n
mplific cioacuten y una buen resolucioacuten de los tejidos
observados
En el microscopio de luz actual se utiliza una disposicioacutenespeciacutefica de grupos de lentes que amplifican una imagen(fig 1- 1) Como resultado del uso de maacutes de una lente
simple este instrumento se conoce como un microscopio
compuesto La fuente de luz es una bombilla eleacutectrica
con un filamento de tungsteno cuya luz se reuacutene en unhaz enfocado por la lente condensadora
El haz de luz se localiza abajo y se enfoca en el espeacutecimen La luz que pasa a traveacutes de este uacuteltimo penetra en una
de las lentes del objetivo estas lentes estaacuten asentadas en
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 11: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/11.jpg)
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Cuadro 1 1 Colorantes reacciones histoloacutegicascomunes
Reactivo
Hematoxilina
Eosina
Tricroacutemica de Masson
Colorante de orceiacutena parafibras e laacutesticas
Co lorante Weigert para
fibras elaacutesticas
Tincion es argeacutenticas
Hematoxilina feacuterrica
Acido peryoacutedico de Schiff
Colorantes de Wright )Giemsa
Resultado
Aul nuacutecleo regiones
aacutecidas del citoplasma
matri z de cartiacutelago
Rosa regiones baacutesicas delcitoplasma fibras de colaacute
gena
Aul oscuro nuacutecleo rojo
muacutesculo queratina cito
plasma
Aul claro mucinoacutegeno
colaacutegena
Pardo fibras elaacutesticas
Aul fibras elaacutesticas
Negro middot fib ras reticulares
Negro estri aciones de
muacute sculo nuacutecleos eritrocitos
Magenta moleacuteculas ricas
en glucoacutegeno) carb ohi
dratos
Se utiliza para tincion esdiferenciales de ceacutelulas
hem aacuteticas
Rosa eritrocitos graacutenulos
de eosinoacutefilos
PUacuteriexclJtlm nuacutecleos de leuco
cito s graacutenulos basoacutefilos
Aul citoplasma de mono
citos) linfocitos
una torreta movible localizada justo arriba del espeacutecimen
Por lo general se dispone de cuatro lentes objetivos en
una torreta qu e proporcionan amplificaciones baja media
alta y con aceite En la mayor parte de lo s microscopios
las tres primeras lentes suelen amplificar cuatro 10 y 40
veces respe ctivamente y se utilizan sin aceite la lente
para aceite amplifica la imagen 100 veces
La imagen de las lentes del objetivo se reuacutene y las
lentes del ocular la amplifican de manera adicional Es
tas lentes aumentan la imagen en un factor de 10 - para
amplificaciones totales de 40 100 400 Y1 000 y enfocan
la imagen resultante en la retina del ojo
E l enfocamiento de la im agen se rea liza mediante
perillas indentadas qu e mueven las len tes del objetivo hacia
arriba y abajo sobre el espeacutecimen La perilla de enfoque
amplio las mueve en increm entos mayores qu e la perilla
Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 3
de enfoque fino Resulta de in tereacutes que la imagen que se
proyecta en la retina estaacute invertida de derecha a izquierda
y al reveacutes
La calidad de una imagen no soacutelo depende de la capa
cidad de un a lente para amplificar sino tambieacuten de su
resolu ioacuten l a capacidad de la lente para mostrar que
dos objetos distintos estaacuten separados por una distancia La
calidad de un a lente depende de queacute tan cerca se aproxima
su resolucioacuten al liacutemite teoacute rico de 025 pm una restriccioacuten
deter minada po r la longitud de onda de la luz visible
Existen varios tipos de microscopios de luz que se
diferencian por el tipo de luz que utilizan como fuente
luminosa y la forma en que la emplean Sin embargo lamayoriacutea de los estudiantes de histologiacutea deben reconocer
soacute lo las imaacutegene s obtenidas de los microscopios de luz
compuesto elec troacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de
barrido en consecuencia no se comentan aquiacute lo s otros
tipos de microscopios
Teacutecnicas de imaacutegenes digitales
n las teacutecnicas de imaacutegenes digitales se emplea
una computadora para capturar y manipular imaacutegeneshistoloacutegicas
El advenimiento de la computadora proporcionoacute un
medio para cap tu rar imaacutegenes en forma digital sin utilizar
una pe liacutecula Aunque este meacutetodo de captura de imaacutegenes
auacuten no puede comp etir con la tecnologiacutea fiacutelmica tiene
muchas ventajas que la constituyen en una herramienta
valiosa por ejemplo
bull Obs ervacioacuten inmediata de la imagen adquirida
bull Modificacioacuten digital de la imagen
bull Capacidad para realzar la imagen mediante el uso deprogramas de computadora disponibles en el comer-
ClO
Ademaacutes debido a que estas imaacutegenes se guardan en
un formato digital es posible archivar cientos de ellas en unsolo disco CD -ROM Y su rec uperacioacuten es casi instantaacutenea
Por uacuteltimo su forma digital hace posible la transmisioacuten
electroacutenica de e stas imaacutegenes med iante correo electroacutenico
o su distribucioacuten a traveacutes de In ternet
nterpretacioacuten de cortes microscoacutepicos
Una de las habilidades maacutes difiacuteciles fru strante s y
dem oradas en histologiacutea es la de aprender a interpretar
un corte bidimensional como si fuera tridimensional Si se
imagina una manguera para el jardiacuten como en la figura
1-2 y a continuacioacuten se practican cortes delgados se torna
obvio qu e el objeto tridimensional no necesariamente
se distingue de cualquiera otra de las representacion esbidimensionales Sin embargo observando todos los cortes
ex traiacutedos de la manguera arrollada es posible reconstruir
mentalm ente la imagen tridimens ional
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
bull
bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 12: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/12.jpg)
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4 Introduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Laacutempara
Imagen n l ojo
bull
----Lente
condensador
Lente deproyeccioacuten
Imagen n
la pantalla de
bull
CaacutetodoAnodo
Ventana para observacioacuten
EspeacutecimenImagen enla pantalla de observacioacuten
Pantalla detelevisioacuten
Microscopio de luz Microscopio electroacutenicode transmisioacuten
Microscopio electroacutenicode barrido
Fig 1 1 Comparacioacuten de los microscopios de luz electroacutenico de transmisioacuten y electroacutenico de barrido
Procedimientos avanzadosde observacioacuten
istoquimica
La histoquiacutemica es un meacutetodo de tincioacuten de tejidos
que proporciona informacioacuten sobre la presencia
localizacioacuten de macromoleacuteculas intracelulares
extracelulares
Es posible localizar los constituyentes quiacutemicos especiacute
ficos de tejidos y ceacutelulas por los meacutetodos de histoquiacutemica
y citoquiacutemica Estos meacutetodos aprovechan la actividad
enzimaacutetica re actividad quiacutemica y otros fenoacutemenos fisico
quiacutemicos relacionados con el elemento en cuestioacuten Las
reacciones de intereacutes se tornan evidentes mediante la
formacioacuten de un precipitado insoluble que toma cierto
color Con frecuencia la histoquiacutemica se efectuacutea en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de
luz como en la electroacutenica
En una reaccioacuten histoquiacutemica se utiliza el reactivo
aacutecido peryoacutedico de Schiff PAS ) que forma un precipitado
de color magenta con moleacuteculas ricas en glucoacutegeno y
carbohidratos Para asegurar que la reaccioacuten sea especiacutefica
del glucoacutegeno los cortes consecutivos se tratan con ami
lasa Por consiguiente los cortes no tratados con amilasa
muestran un depoacutesito magenta en tanto que en los cortes
tratados no se observa tincioacuten en la misma regioacuten
Aunque es posible localizar enzimas mediante proce-
dimientos histoquiacutemicos se observa el producto de la
reaccioacuten enzimaacutetica y no la enzima en siacute misma El reactivoestaacute disentildeado de tal manera que el producto se precipita
en el sitio de la reaccioacuten y se reconoce como un depoacutesito
metaacutelico o de color
Inmunocitoquiacutemica
n la inmunocitoquiacutemica se utilizan anticuerpos marcados
con fluoresceiacutena antianticuerpos para identificar una
localizacioacuten intracelular y extra celular de las
macromoleacuteculas maacutes precisa de la que es posible con la
histoquiacutemica
Aunque los procedimientos histoquiacutemicos permiten
ubicar relativamente bien ciertas enzimas y macro moleacuteculas
en ceacutelulas y tejidos es posible obtener una localizacioacuten maacutes
exacta con la inmunocitoquiacutemica Este procedimiento
exige desarrollar un anticuerpo contra la macromoleacutecula
particular a localizar y marcar el anticuerpo con un colo
rante fluorescente fluoresceiacutena o rodamina)
Existen dos meacutetodos de marcado con anticuerpo
directo indirecto En el meacutetodo directo fig 1-3)
se marca el anticuerpo contra la macromoleacutecula con un
colorante fluorescente A continuacioacuten se permite que
reaccione el anticuerpo con la macromoleacutecula y puede
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
bull
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bull
bull
bull
bull
bull gt
bull
bull
2minbull
bull
bull
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bull
10minbull
bull
bull
20min
bull
bull
bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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Fig 1 2 La histologiacutea exige la reconstruc
cioacuten mental de imaacutegenes bidimens ionales en
una soacutelida tridimensional a partir de la cual
se cortaron En este diagrama se seccionoacute un
tubo curvo en var ios planos para ilustrar la
relacioacuten en tre una serie de cortes bidimen
sionales y la est ructura tridimensional
Corte
transversal
Corteoblicuo
cI
t
c )
I I
e )
observarse el com plejo resultante con un microscopio de
fluorescencia fig 1-4)En el meacutetodo indirecto fig 1-3) se prepara un anti
cuerpo marcado con flu orescencia contr a el anticuerpo
primario especiacutefico para la macromoleacutecula de intereacutes Una
vez que reacciona el anticuerpo primario con el ant iacutegeno
se lava la preparacioacuten para eliminar el anticuerpo primario
no unido en seguida se antildeade el anticu erpo marcado
y reacciona con el complejo an tiacutegeno- anticuerpo origi
nal con lo cual se forma un complejo secundario visi
ble con microscopia de fluorescencia fig 1-5) El meacutetodo
Anticuerpofluoresceinado
Antiacutegeno
Introduccioacuten a l histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 5
~
c )
CC ~e gt
Diagrama que muestra los diferentesaspectos de cortes a traveacutes de un tubocurvo en diferentes niveles
e
e )
Cortelongitudinal
- - -
- - - - -
e )
indirec to es maacutes sensible que el direc to porque se un en
muacuteltiples antianticuerpos marcados con el anticuerpo primario cuya observacioacuten es maacutes faacutecil Ademaacutes el meacutetodo
indirec to no requiere marcar el anticuerpo primario que
muchas veces soacutelo se encuentra disponible en cantidades
limitadas
La inmunocitoquiacutemica puede utilizarse con especiacuteme
nes para microscopia electroacutenica si se marca el anticuerpo
con ferritina una moleacutecula densa en electrones en lugar
de un colorante fluorescente El marcado con fe rritina
puede aplicarse en los meacutetodos direc to e indirecto
Antianticuerpofluoresceinado adicionado
r
nticuerpo
Antiacutegeno r
Fig 1 3 Meacutetodos de inmunohistoquiacutemicadirecto e indirecto lquie rda Se marca un
anticuerpo contra el antiacutegeno con un colorante
fluorescente y se obselva con un microscopio deAuorescencia La fluorescencia se identificoacute soacutelo
en donde se loca lizaba el anticuerpo Derec
Se preparan anticuerpos marcados con fluo
rescencia contra un anticuerpo que reacciona
con un antiacutegeno particular Cuando se obser
van mediante microscopia de fluorescencia
la regioacuten que flu oresce representa el sitio del
anticuerpo
~ __ = _ ~ ___ ~ C o r t e de te ido ~ f
- - Lavado
Directo Indirecto
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6 ntroduccioacuten a la histologiacutea teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
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Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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Fig 1 4 Ejemplo de inmunocitoquiacutemica directa Se tifiacuteeron inmuno
loacutegicamente neuronas cultivadas de un ganglio cervical superior de rata
con anticuerpo marcado con fluorescencia especiacutefico para el receptor
de insulina Las aacutereas brillantes corresponden a los sitios en los que se
unioacute el anticuerpo a receptores de insulina El patroacuten de tincioacuten indicaque los receptores estaacuten localizados en todo el citoplasma del soma y
las prolongaciones pero no en el nuacutecleo Tomado de James S Patel
N Thomas P Burnstock G Immunocytochemical localisation of insulin
receptors on rat superior cervical ganglion neurons in dissociated cell
culture J Anat 18295-100 1993)
utorradiografiacutea
a au torra diogra fiacutea es un meacutetodo en el que se
incorporan isoacutetopos radiactivos en macromoleacuteculas que a
continuacioacuten se observan con el uso de una peliacutecula de
emulsioacuten superpuesta
La autorradiografiacutea radioautografiacutea) es un meacutetodo
particularmente uacutetil para localizar e investigar una secuen
cia temporal especiacutefica de fenoacutemenos El meacutetodo exige
incorporar un isoacutetopo radiactivo casi siempre tritio
3H) en el compuesto estudiado fig 1-6) Un ejemplo
es el empleo de un aminoaacutecido tritiado para observar la
siacutentesis y agrupamiento de proteiacutenas Despueacutes de inyectar
el compuesto radiomarcado en un animal se obtienen
especiacutemenes de tejido a intervalos de tiempo seleccionados
Se procesa el tejido en la forma usual y se coloca en un
portaobjetos de vidrio sin embargo en lugar de sellar el
tejido con un cubreobjetos se aplica sobre eacutel una capa
delgada de emulsioacuten fotograacutefica Se coloca el tejido en una
caja oscura durante unos cuantos diacuteas o semanas durante
los cuales las partiacuteculas emitidas del isoacutetopo radiactivo
exponen la emulsioacuten sobre los sitios celulares en los que
se localiza el isoacutetopo Se revela y fija la emulsioacuten mediante
teacutecnicas fotograacuteficas y se dejan pequentildeos graacutenulos de
plata sobre las porciones expuestas de la emulsioacutencontinuacioacuten se sella el espeacutecimen con un cubreobjetos
y se observa con un microscopio de luz Los graacutenulos
de plata se hallan sobre las regiones del espeacutecimen que
incorporoacute el compuesto radiactivo
Se usa una autorradiografiacutea para vigilar el tiempo de
incorporacioacuten de prolina tritiada en la membrana basal
subyacente a ceacutelulas endodeacutermicas del saco vitelino fig
1-6 ) Se ha empleado una adaptacioacuten del meacutetodo de auto
radiografiacutea de la microscopia electroacutenica para demostrar
que la prolina tritiada aparece primero en el citosol de
las ceacutelulas endodeacutermicas se desplaza a continuacioacuten al
retiacuteculo endoplaacutesmico rugoso despueacutes al aparato de Golgi
Fig 1 5 Inmunocitoquiacutemica indirec ta Se prepararon anticuerpos
fluorescentes contra anticuerpos primarios contra colaacutegena de tipo IV
para demostrar la presencia de una laacutemina basal continua en la interfaz
entre acumulaciones de ceacutelulas malignas y el tejido conectivo circundante
Tomado de Kopf-Maier P Schroter-Kermani C Distribution 01 type VII
collage in xenografted human carcinomas Cell Tissue Res 272395-405
1993 Copyright Springer-Verlag )
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
bull
bull
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bull gt
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2minbull
bull
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10minbull
bull
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20min
bull
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bull 8hrbull bull
bull
Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
1987 Copyright copy 1987 Heprinted by permission o
Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
con autorizacioacute n de Wiley-Li ss Inc a subsidiay of Joh
Wiley Sons 1nc)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 15: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/15.jpg)
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a continuacioacuten hacia vesiacuteculas y por uacuteltimo a la matriz
extracelular fig 1-7 ) De esta forma se demostroacute visual
mente la secuencia de fenoacutemenos que tiene lugar en la
siacutentesis de colaacutegena de tipo IV l a proteiacutena principal en
la laacutemina densa de la laacutemina basal
MICROSCOPIA ELECTRONICA
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia
electroacutenica permite lograr una amplificacioacuten y resolucioacuten
mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz
En los microscopios de luz las lentes oacutepticas enfocan
luz visible un haz de fotones ) En los microscopios elec
troacutenicos los electromagnetos tienen la funcioacuten de enfocar
un rayo de electrones Debido a que la longitud de onda
de un rayo de electrones es mucho maacutes corta que la de
la luz visible los microscopios electroacutenicos son en teoriacutea
capaces de obtener la resolucioacuten de dos objetos separadospor 0005 nm Sin embargo en la praacutectica la resolucioacuten
del microscopio electroacutenico de transmisioacuten MET)
es alrededor de 02 nm auacuten maacutes de 1 000 veces mayor
que la resolucioacuten del microscopio de luz compuesto La
resolucioacuten del microscopio electroacutenico de barrido
MEB) se aproxima a 10 nm considerablemente menor
res pecto de los instrumentos de transmisioacuten Maacutes auacuten los
microscopios electroacutenicos modernos pueden amplificar un
objeto hasta 150 000 veces esta amplificacioacuten es lo bastante
po tente para observar macromoleacuteculas individuales como
DN y miosina
Mic roscopia electroacutenica de transmisioacuten
En la microscopia electroacutenica de transmisioacuten se utilizan
cortes mucho maacutes delgados en comparacioacuten con 105 de la
microscopia de luz para tentildeir 105 tejidos y se requieren
teacutecnicas de precipitado de metales pesados en lugar de
colorantes hidrosolubles
La preparacioacuten de especiacutemenes de tejido para micros
copia electroacutenica de transmisioacuten incluye las mismas etapas
baacutesicas que las de la microscopia de luz Se han desarrollado
fijadores especiales para la microscopia de luz de transmi
sioacuten ya que el poder de resolucioacuten mayor del microscopioelectroacutenico requiere enlaces cruzados de proteiacutenas maacutes
finos y especiacuteficos Estos fijadores por ejemplo soluciones
amortiguadas de glutaraldehiacutedo paraformaldehiacutedo
tetroacutexido de osmio permanganato de potasio no
soacutelo preservan los detalles estructurales finos sino que
tambieacuten actuacutean como colorantes electrodensos que per
miten observar el tejido con el haz de electrones
Puesto que estos fijadores penetran en tejidos frescos
incluso en los que se emplean para la microscopia de luz
se infiltran piezas relativamente pequentildeas de tejidos en
grandes voluacutemenes de fijadores Los bloques de tejido
para microscopia electroacutenica de transmisioacuten no suelen ser
mayores de 1 mm3
Se han creado medios de inclusioacutenadecuados como la resina epoacutexica de tal modo que pue-
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 7
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2minbull
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bull 8hrbull bull
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Fig 1 6 Autorradiografla Examen con microscopia de luz de la incor
poracioacuten de prolina tritiada en la membrana basal en funcioacuten del tiempo
tra nscurrido desde la inyeccioacuten de la prolina En las fotomicrografiacuteas a
a e los graacutenulos de plata pu tos negros ) se localizan principalmente en
las ceacute lulas endodeacutermicas sin embargo despueacutes de ocho horas el) los
graacutenulos de plata tambieacuten se hallan en la membrana basal La presen
cia de graacutenulos de plata indica la localizacioacuten de la prolina tritiada Tomado
de Mazariegos MR Leblon cr van der Rest M Radioautographic
tracing of H-proline in endodennal ce ll s of the parietal yolk sac as an
indicator of the biogenesis of basement membrane components Am JAnat 17979-93 1987 Copyright copy 1987 Reprinted by permission of
Wiley-Li ss ln c a subsidiary of John Wiley amp Sons lnc )
den cortarse los tejidos incluidos en plaacutestico en cortes
extremadamente delgados ultradelgados ) 25 a 100 nm )
que no absorben el haz de electrones
Los haces de electrones se generan en una caacutemara de
vaciacuteo mediante calentamiento de un filamento de tungsteno
el caacutetodo A continuacioacuten se atraen los electrones al
aacutenodo de carga positiva una placa metaacutelica en forma de
rosquilla con un agujero central Con una carga diferencial
de alrededor de 60 000 voltios colocada entre el caacutetodo
y el aacutenodo los electrones que pasan a traveacutes del agujeroen el aacutenodo tienen una alta energiacutea cineacutetica
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bull
8 ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas
Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
tographic tracing of 3 H proline in endodennal cells o
th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
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Wiley- Liss II1C a subsidiary of John Wiley Son1n e)
Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
] Anat 185 165- 176 1989 Copyright copy 1989 Reproducid
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
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bull
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Fig 1 7 Autorradiografiacutea En esta foto micrografiacute
elec troacutenica de una ceacute lula endodeacutermica de saco vitelin
son obvios graacutenulos de plata s imilares a los de la figur
1-6 ) qu e representan la presencia de prolina tritiad
rec ubriendo el re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rER ) eaparato de e olgi e ) y gruacutenulos secretorios Se ) L
colaacutegena de tipo IV que es rica en prolina se sintetiz
en ceacutelulas endodeacutermicas y se libera a la membran
basal La p rolina tritiada se concentra maacutes e n organelo
qu e participan en la siacutentesis de proteiacutena Tomado d
Mazariegos MH Leblon CP van de Hest M Hadioau
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th e pariental yolk sac as an indicator of the biogenesis o
base ment membrane components Am JAnat 17979-93
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Fig 1 8 Citoquiacutemica y grabado po r congelacioacuten cr io
fractura) Heacuteplica del marcado por criofrac tura de un
ceacutelula acinar pancreaacutetica de rata Se localizaron residuos d
N-ace til-d-galactosamina mediante el complejo de lectin
y oro de Helix pomatia que aparecen como puntos negro
en la im age n El nuacute cleo Nu ) semeja una depresioacuten
re tiacuteculo endoplaacutesmico rugoso rE R ) asume la forma de liacutene
paralelas y los graacutenulos secretorios e ) pa rece n elevacione
o depresiones pequ entildeas Las elevaciones e ) representa
la mitad de la cara E y las depresiones asteriscos) la ca
P de la me mbrana del graacutenulo secre torio Tomado de Ka
FVK Benda yan M Topographical and planar distributio
of Helix pom ti lectin binding glycoconjugates in secre tor
granules
and plasmame
mbrane
of pancreaticacinar celof th e rat Demonstration of me mbrane hete rogeneity A
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httpslidepdfcomreaderfullgartner-leslie-p-texto-atlas-de-histologia-2da-edicion-1-introduccion 1717
Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
ntroduccioacuten a la histologiacutea y teacutecnicas histoloacutegicas baacutesicas 9
medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
bull
![Page 17: Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [1 Introducción a La Histología y Técnicas Histológicas Básicas]](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022050621/55cf97ab550346d03392eb41/html5/thumbnails/17.jpg)
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Se enfoca el haz de electrones en el espeacutecimen medianteelectro magnetos que son anaacutelogos a las lentes condensadoras de un microscopio de luz (fig 1-1) Debido a que eltejido estaacute tentildeido con metales pesados que se precipitan demanera preferencial en membranas liacutepidas los electronespierden parte de su energiacutea cineacutetica a medida que int eractuacutean con el tejido uanto maacutes pesado sea el metalque encuentra un electroacuten menos energiacutea retendraacute elelectroacuten
Los electrones que salen del espeacutecimen se someten alos campos electromagneacuteticos de varios electromagnetosadicionales que en focan el haz en una placa fluorescente A
medida que los electrones chocan con la placa fluorescentese convierte su energiacutea cineacutetica en puntos de luz cuyaintensidad es una funcioacuten directa de la energiacutea cineacutetica delelectroacuten Es posible llevar a cabo un registro permanentede la imagen resultante sustituyendo la placa fluorescentecon una peliacutecula sensible a electrones y produciendo unnegativo a partir del cual pueden imprimirse una fotomi crografiacutea en blanco y negro
Microscopia electroacutenica de barrido
a microscopia electroacutenica de barrido proporciona
una imagen tridimensional del espeacutecimen
A diferencia de la microscopia electroacutenica de transmisioacuten la de barrido se usa para observar la superficie deun espeacutecimen soacutelido on esta teacutecnica es posible ver una
imagen tridimensional del objeto Por lo general el objetoque se observa se prepara en una forma especial que
permite depositar en la superficie del espeacutecimen una capa
delgada de un metal pesado como oro o paladio
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medida que el haz de e lectrones explora la superficiedel objeto se reflejan algunos (electrones retrodispersos)
se exp ulsan otros (e lec trones secundario s) desde lacapa de metal pesado Los electrones retrodispersos ysecundarios son capturados por detectores de electronesy se interpretan comparan y muestran en un monitor comouna imagen tridimensional (fig 1-1) Es posible representar una imagen permanente fotografiaacutendola o digitalizaacutendolapara guardarla en una computadora
eacutecnica de fractura por congelacioacutencriofractura)
La estructura macromolecular de las superficies inter-
nas de la membrana se revela mediante el meacutetodo defr ctur por congel cioacuten criofr ctur (fig 1-8 )
Los especiacutemenes congelados con rapidez que se trataronmediante criopreservadores no forman cristales de hielodurante el proceso de congelacioacuten en consecuencia el
tejido no sufre un daiacuteio mecaacutenico A medida que chocaen el espeacutecimen congelado una hoja de corte sumamentefriacutea fractura a lo largo de planos de segmentacioacuten que
son regiones de meno r unioacuten molecular en las ceacutelulas lafractura ocurre con frecuencia en tre las hojas interna yexterna de la membrana
La cara de la fractu ra se recubre en un aacutengulo medianteplatino y carboacuten evaporados con ello se forman acumulaciones de platino en un lado de una proyeccioacuten pero no enel lado opuesto cerca de la proyeccioacuten generando asiacute una
reacuteplica de la superficie continuacioacuten se digiere el tejido) se examina la reacuteplica mediante microscopia electroacutenicade transm isioacuten Este meacutetodo permite mostrar las proteiacutenas
transmembranales de membranas celulares (fig 1-8)
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![Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [15 Sistema Respiratorio]](https://static.fdocuments.es/doc/165x107/563db7e8550346aa9a8f121e/gartner-leslie-p-texto-atlas-de-histologia-2da-edicion-15-sistema-respiratorio.jpg)
![Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [9 Tejido Nervioso]](https://static.fdocuments.es/doc/165x107/563db835550346aa9a918e35/gartner-leslie-p-texto-atlas-de-histologia-2da-edicion-9-tejido-nervioso.jpg)
![Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [4 Matriz Extracelular]](https://static.fdocuments.es/doc/165x107/55cf8608550346484b9397b5/gartner-leslie-p-texto-atlas-de-histologia-2da-edicion-4-matriz-extracelular.jpg)
![Gartner, Leslie P. - Texto Atlas de Histologia, 2da Edición [17 Sistema digestivo - conducto alimentario]](https://static.fdocuments.es/doc/165x107/55cf9b7d550346d033a64514/gartner-leslie-p-texto-atlas-de-histologia-2da-edicion-17-sistema-digestivo.jpg)
