IDENTIFICACIÓN DE RHIZOCTONIA El género Rhizoctonia se caracteriza por la producción de esclerocios en una textura uniforme con redes hifales que unen el micelio con plantas. Esto ha provocado la clasificación de muchos hongos en el género Rhizoctonia. Rhizoctonia solana se caracteriza por:

• Pigmentos marrones oscuros de las hifas • Ramificación cerca del septo central en la hifa vegetativa joven . • Estrangulamiento de la hifa y formación de septos a una corta distancia del

punto donde se originan las ramas hifales • Septos doliporos • Células multinucleadas en la hifa vegetativa joven.

Nunca aparecen:

• Conexiones clamp • Conidios, esclerocios diferenciados dentro de la corteza y de la médula y

pigmentos distintos al marrón. Los diferentes Rhizoctonia se diferencian por el color del micelio, el nº de núcleos por célula, y la morfología de los teleomorfos. Ascomicetes: septos transparentes, con poros grandes centrales y 2 o más cuerpos de Woronin. Basidiomicetes: septos con 3 capas Ustomicetes: septos con doliporos y parentosoma no perforado p vesiculado. Los anamorfos de Rhizoctonia son heterogéneos. R. solani comprende varias especies representativas de varios estados teleomórficos. Medios de aislado, identificación y preservación de Rhizoctonia spp Los propágalos de Rhizoctonia sobreviven en el suelo en hifas melanizadas y esclerocios con restos vegetales, en los primeros 25-20 cm del suelo. Pueden ser patógenos o saprófitos, colonizando plantas y materia orgánica fresca. Los propágalos pueden ser aislados directamente de los restos vegetales haciéndolos flotar después de sumergir el suelo en agua. Los no patogénicos se aíslan de plantas sanas o de restos en el suelo. Los micorricénicos se aíslan de las raíces de las orquídeas o de otras plantas colonizadas por Rhizoctonia no patogénicos.

Aislado mediante técnicas de cebo Con plantas de cebo vivas Las semillas son un hospedante para testar cualitativa y cuantitativamente el Rhizoctonia spp del suelo. El potencial inoculante se puede evaluar cuantificando la incidencia de Dumping-off en judías, algodón, se utiliza el índice DSI (índice de severidad de la enfermedad) DSI= 0 . no hay síntomas DSI= 5 . todos los tallos se anillan y la planta muere. Para el aislamiento, la muestra incluye porciones necróticas y vivas cuya superficie se esteriliza con hipoclorito de sodio al 1% durante 1 m. Se enjuagan con agua destilada y se transfieren con una pipeta a agar con 250 µg/ml de cloramphenicol Se incuba de 24 a 48 horas a 24-27 ºC Las hifas de Rhizoctonia se transfieren a PDA. Método del plato Se cogen discos de papel de filtro de 6,35 mm de Ø, se sumergen en la solución de Richards, en 1 l de agua:

• KnO3……………….10 gr • Kh2PO4……………..5 gr • Mg SO4 . 7 H2O……..0,25 gr • Fe CL3………………..0,02 gr • Sucrose………………...50 gr • Rosa bengal…………….100 mgr • Cloramphenicol…………250 mg • Cu SO4…………………..5 mg • Benomylo………………...5 mg

Los discos se secan y almacenan en un desecador. Los platos de aluminio ( 7,6 X 10,2 cm) se agujerean con 3 filas de agujeros de 4mm de Ø , 6 agujeros por fila. Los discos se colocan sobre los agujeros y se tapan con una tapa de vinilo. Los platos se atoclavan y se insertan en el aislado de suelo 5-7 días. Se elimina el exceso de suelo y los discos se colocan con agar + cloramphenicol. El porcentaje de colonización se determina a las 24-48 h. Muestras biológicas del suelo en tubos Se utilizan tubos de plástico para centrifugadora a los cuales se les hace agujeros de 5mm en espiral a través de sus paredes. El espacio entre4 agujeros es variado. Los agujeros en espiral se tapan con cinta aislante. Los tubos se rellenan con agar y nutrientes (PDA) , se taponan con algodón y se autoclavan. Se agujerea la cinta aislante con una aguja esterilizada. Los tubos se incuban en el suelo durante 4-6 días. Posteriormente se extraen del suelo y de cada agujero se transfiere a un medio de agar apropiado (PDA). Utilizando este método obtenemos una positiva correlación entre el porcentaje de agujeros que han sido colonizados por R.solani y la incidencia de la enfermedad en las plantas.

Colonización saprofítica de segmentos de plantas o semillas Se utiliza para evaluar la habilidad saprofítica.

• Se coge 1 gr de semillas de remolacha autoclavazas • Se mezclan con 100 gr de muestra de suelo (a un 50% de capacidad de campo) • Se coloca en placas petri de 9 cm Ø • Se incuban 48 h a 24-26º C • Se recolectan las semillas con una criba de 1,4 cm • Se lavan en agua corriente • Se colocan en toallitas de papel y se colocan en agar líquido (2%), acidificado

con cloramfenicol (250 µg/ml) en placas petri • Se incuban 24 h, a veces más tiempo • Las hifas se transfieren a PDA

Aislamiento para R. zeae

• Se cogen segmentos de tallos de algodón de 100 mm y se autoclavan 10 m. • Se sumergen 2 h en una suspensión de: Benomilo 100 µg+ 500µg a.i/ml de

metalaxil . O solo benomilo a 1,00 µg a.i/ml • Se secan • Se cogen 20 segmentos de algodón y se les añade 150 gr de la muestra de suelo

a capacidad de campo, en una cubeta de 600ml que se tapa con papel de aluminio

• Se incuban 72 h a 22-27ºC • Se extraen los segmentos y se lavan con agua de grifo • Se colocan en papel esterilizado y se ponen en un medio selectivo en placas petri • Después de 24-48 h se examinan los discos para ver el micelio. • Las hifas se transfieren a PDA

Método de partículas de suelo

1. se cogen 100 gr de muestra de suelo y se mezcla con 2,5 l de agua 2. se deja reposar la suspensión 30 seg y se decanta en una malla de 0,25mm 3. se repite este paso varias veces 4. las partículas retenidas en la malla se lavan con un fuerte chorro de agua 5. se colocan entre dos capas de papel estéril, se dejan secar 6. se colocan en agar líquido (2%) acidificado o agar líquido con 25 µg/ml de

cloramphenicol, en placas petri 7. se incuban 48 h a 24-26 ºC 8. se examinan

las hifas de Rhizoctonia se pueden pasar a PDA

Método de criba húmeda

1. las muestras de suelo se mezclan perfectamente y se recogen en submuestras para la identificación

2. se recogen 3 muestras de 50 gr que han sido obtenidas tras cribarlas a 0,355 mm (nº 45)

3. los residuos tamizados se lavan dentro de una cubeta con agua y los residuos se retiran

4. las partículas se dispersan uniformemente en papel de filtro que se pone en un sistema de filtrado Buchner

5. se utilizan de 6 a 8 papeles por muestra 6. el agar líquido (1%) se calienta a 52 ºC 7. se acidifica con ácido láctico para prevenir el cre4cimiento bacteriano 8. se vierte en placas petri en una capa de 2,5 mm de profundidad 9. inmediatamente después de echar el agar cada papel de filtro es invertido en el

agar y se agita para mezclar las partículas 10. las placas petri se almacenan a temperatura ambiente 24 h y las colonias que

crezcan se transfieren para su identificación. Método del montón

1. Se mezclan muestras de suelo con agua destilada, se compactan con una espátula y se distribuyen en 10 montones en un medio selectivo en placas petri (el medio se describe más adelante).

2. para cada muestra utilizaremos 5 discos 3. analizaremos los perímetros del montón de suelo con el microscopio con el

objetivo 10X después de 24 a 48 h de incubación a 28ºC. 4. determinaremos el nº de montones en los que emerge Rhizoctonia y

determinaremos el nº de propágulos por gr de suelo Método por flotación de muestras tamizadas

1. se cogen muestras de suelo de 30 a 80 gr y se agitan en una batidora con 100 ml de una disolución acuosa con 0,2% de H2O2 durante 30 seg a 3000 rpm

2. filtramos la suspensión en una malla de 50 mesh 3. lavamos las partículas con agua corriente 4. repetimos el proceso si es necesario con las partículas que permanezcan en el

filtro 5. estas partículas se sumergen en una disolución acuosa de H2O2 al 0,2% 6. se separan en un embudo con un vigoroso vibrado 7. los esclerocios flotantes y las partículas se recogen en un papel de filtro, en un

embudo de vacío Buchner 8. se lavan y se dispersan uniformemente para analizar al microscopio 9. los esclerocios se ponen en agar para ver el % de viabilidad

Suelo empildorado El multipeletizador de muestras de suelo es un plato que contiene 15 tubos de acero inoxidable de 5mm de Ø y 28 mm de profundidad. Unos pistones o émboilos de acero se acoplan en los tubos.

• Los émbolos se apoyan en la posición más elevada en primavera. • Los suelos que se meten en el peletizador se ajustan a un 11 o 15% de capacidad

de campo. • Se meten 30 gr de muestra de suelo en placas petri de 9cm de Ø • La superficie del suelo se presiona apretando y aplanando con una espátula • El suelo se presiona dentro de los tubos golpeando el tubo suavemente • La superficie del suelo en el borde del tubo se nivela con una espátula

esterilizada y la muestra se coloca en un soporte en anillo en el fondo del disco petri que contiene agar líquido ( acidificado o con 250 µg/ml de cloramfenicol

• Se presiona la muestra 2-4 veces de manera que los pellets de suelo se liberen en la superficie del agar (4 discos por replicación, cada 15 pelets)

• Otros pelets se secan para ver el peso seco de la muestra • La muestra de los tubos se baña en etanol y se flamea • Tras 24 h de incubación se examinan los pelets para ver la presencia de

Rhizoctonia • Aplicamos la siguiente fórmula para estimar el nº de propágulos por gr de suelo

por nº de pelets colonizados: Loge 1/1-X o X= proporción de pelets colonizados

Se supone que la distribución de Rhizoctonia es uniforme. También se puede utilizar una pistola de amalgama de dentista, los pelets son más pequeños (2mm Ø X 5 mm de largo) los pelets se colocan uno por uno en los discos de agar. Medio selectivo El medio desarrollado por Ko y Hora para aislamiento cuantitativo de R.solani del suelo tiene los siguientes ingredientes por litro: KH2PO………………….1gr MGSO4 . 7H2=………….0,5 gr KCL………………………0,5 gr Agar...................................20 gr Después se autoclava y se añade: Ácido gálico……………….0,4 gr Fenamilsulfuro (Dexon 70% w.p)…..60 mg Estreptomicina………………50 mg Se puede sustituir el ácido gálico por tánico. Otra receta por litro: KH2PO4…………………………0,5 gr MgSO4 . 7H2O…………………..0,5 gr KCL………………………………0,5 gr FeSO4 .7H2O……………………..10 mg NaNO2……………………………..0,2 gr

Cloramfenicol……………………….0,05 gr Agar…………………………………20 gr Después se autoclava y se añade: Ácido gálico………………………….0,4 gr Fenamilsulfuro (dexon 70% wp)……..0.06 gr Fosetil-al (alliete 80% wp)……………..0.25 gr Estreptomicina…………………………0,05 gr La adición de prochloraz (1- [N- propyl-N-[2-4-6] triclorofenoexoetileno] en emulsión concentrada a 5 µ1/l al medio Ko y hora facilita una mejoría del suelo donde crece Rhizoctonia También la adición de GA3 nos sirve El medio GG (Yanhopahyay y Grover) + imazalil (2,5mg/l) nos permite un aislamiento selectivo de R.solani en presencia de R.cerealis El medio GG + pencycuron (20-50 mg/l) y triadimefon (2,5-5mg/L) aísla R.cerealis de R.solani Medio Ferris y Mitxchell modificado para ver R.solani y Rhizoctonia spp binucleados. Por litro:

• KNO3………….0,2 gr • Agar……………30 gr • Después de autoclavar: • Enfriar a 50ºC y añadir:

o etanol ………..53ml o metalaxil (Ridomil 2E)….0,38 ml o prochloraz (40EC)……….0,02 ml o obramicina……………….10 mg o estreptomicina……………300 mg o Utilizar el medio fresco

Medio Windhan y Lucas para aislar R. zeae. Por litro:

• Agar………………20 gr • Benomilo………….100 mg • Metalaxil…………..10mg • Sulfato de estreptomicina…50 mg • Penicilina G………………50 mg

Teñido del núcleo La determinación del nº de núcleos de las células de las hifas vegetativas es importante para identificar Rhizoctonia spp. El género se divide en 2 especies con células hifales vegetativas binucleadas o multinucleadas Azul de anilina o azul de tripano Las muestras se acidifican con CLH al 1%. Azul de anilina al 5% en glicerina o 0,5% de azul de anilina o azul de tripano en lactofenol. Se coloca directamente una hifa joven crecida en medio. Se cubre con el cubre objetos y se observa a 400X en una placa petri o una porción de agar con hifas. El núcleo se tiñe de azul o púrpura. Geimsa HCL

1. Las superficies de las capas de los bloques de agar que contienen hifas se fijan con una mezcla de 3/1 de etanol y ácido glacial durante 10 m

2. se lavan en etanol al 70% durante 10 m 3. se hidrolizan en una disolución 1N de CLH durante 10m a 60ºC 4. se lavan en agua destilada 5. se colocan en una disolución de Geimsa durante 30 m 6. la solución de Geimsa se hace añadiendo 2 gotas de Geimsa por cada ml de

solución tampón ( fosfato9 (ph 6,8) 7. el material teñido se lava en agua destilada durante 5 m y se transfiere a un porta 8. se pone el cubre y se presiona suavemente para dispersar el material teñido 9. el núcleo se tiñe de azul.

Orceina

1. Las hifas contenidas en el agar se fijan con formalina:ácido acético:etanol durante 24 h

2. se lavan con ácido acético al 50% 3. se hidrolizan con una disolución 1N de CLH a 65ºC durante 20-30 m 4. se lavan con ácido acético al 50% 5. se tiñen durante 7h en orceina al 2% en ácido acético al 50% 6. el núcleo se tiñe de rojo

DAP

1. las hifas se colocan en cubres cubiertos de agua de agar (2%) y se fijan mediante inmersión en formaldehído al 3% durante 2 m

2. se aclaran con agua destilada 1 m 3. se sumergen las hifas en 1µg/ml de DNA 4´,6´-diamino-2phenylindole (DAPI)

durante 5 a 10 m 4. se aclaran con agua destilada 3-5m 5. se elimina el exceso de agua 6. se añade una gota de glicerina y se coloca el cubre 7. para ver la hifa hay que usar microscopio de fluorescencia.

Naranja de acridina

1. se tiñen las hifas con una solución de naranja de acridina al 0,0025% W/V 2. la solución tamponada se prepara con 50 ml de una disolución de acetato de

veronal (acetato de sodio 0,971gr + diethyhbarbiturate de sodio 1,471 gr y 50 ml de agua destilada) + 74 ml de ácido hydrochcloric 0,001M y 100 ml de agua destilada

3. los especimenes se ven con microscopio de fluorescencia con el filtro BG38 y el filtro barrera 53 y 47 o 65 y 50

4. el núcleo aparece verde brillante o naranja dependiendo de los filtros utilizados. Safranina O

1. se extrae una pequeña cantidad de hifa del medio de cultivo y se coloca en un porta en una solución consistente en: 1 gota de Safranina alcalina + 1 gota de KOH al 3%

2. la solución de Safranina se compone de: • 6 ml de Safranina O al 0,5% W/v en agua destilada • 10 ml de KOH al 3% en agua destilada • 5 ml de glicerina • 75 ml de agua destilada

3. se pone el cubre y se observa al microscopio 4. el núcleo se tiñe de rojo

Un método desarrollado por Yamamoto Y Uchida utiliza aislados que crecen durante 24-48 h en membranas de diálisis que flotan en agua de agar V8 al 2% Posteriormente se tiñen de Safranina O al 0,5% colocando una gota en un lado y en el otro una gota de KOH al 3% Se observa el núcleo teñido en el área donde las 2 gotas convergen. Fusión de hifas (anastomosis) Los aislados de Rhizoctonia se pueden asignar a diferentes grupos de anastomosis, si los pares aislados que se testan son capaces de crecer y fusionarse hifalmente.

• Los aislados se emparejan en (A) agua de agar en placas petri • Se coloca un papel de celofán en medio del agar • Se dejan correr capas de agar en el cubre y se colocan en papel de filtro o en

placas petri con agar • Se coloca un cubre en cámara húmeda • La observación al microscopio nos permite ver las parejas que se teñiran para

ver la anastomosis hifal. • Se tiñen con azul de algodón 0,001% w/v diluido en lactofenol/agua (relación

1/9 v/v) • Se pueden teñir con floxina B o azul de anilina en lactofenol (0,5% w/v)

Hay 3 tipos de fusión hifal : perfecta, imperfecta y fusión de contacto La fusión perfecta incluye fusión de las células de las pareced y citoplasmas, se crea una continuidad en el citoplasma. La fusión perfecta se observa en aislados de hifas del mismo aislado.

La fusión entre diferentes aislados suele ser una plasmolisis o fusión de células o una fusión imperfecta Independientemente, la transferencia de material genético via anaotomosis ha sido demostrada. El contacto entre hifas sin lisis de las paredes celulares en el lugar de contacto no se considera anastomosis. El término frecuencia de fusión se determina con la siguiente formula : % FF= A(100)/B A = suma de puntos de fusión en 15 muestras B = suma de puntos de contacto en 15 muestras Una FF de 50% es alta. De 30-50% moderada y < 30% baja Inducción de teleomorfos Los factores específicos ambientales que influyen en la formación de teleomorfos de Rhizoctonia todavía no están muy claros. Humedad La alta humedad es esencial para la fructificación de Rhizoctonia Sin embargo los diferentes aislados pueden requerir diferentes humedades. Un óptimo de humedad relativa suele ser un 40-60%. Incluso un 100%. La humedad es importante para la formación de teleomorfos en el suelo. Se ha observado una fuerte esporulación al incrementar la humedad. Aireación Es necesaria para la esporulación de Rhizoctonia , así como mover el CO2 de la respiración. Temperatura El óptimo para la formación de teleomorfos es entre 20 y 30ºC. La fructificación se da a 20ºC pero no a 15ºC, 25 o 30ºC según Sims. Las fluctuaciones entre día y noche pueden tener efecto. Por la noche 14-18ºC y de día 23-26ºC inducen a la formación de teleomorfos. Luz Las altas esporulaciones se dan por la noche, la fructificación se reduce durante el día. La luz estimula la formación de himenios pero inhibe la maduración de basidios. Unas condiciones óptimas son 12-16 h de luz. Inóculo La edad y el tamaño tienen influencia. Se ha observado que la fructificación se da con suspensiones miceliares pero no con redes miceliares cuando se inoculan plantas. Sustrato Los teleomorfos se pueden formar en el suelo, en plantas y en agua de agar. Los aislados requieren de varios sustratos para fructificar: arena de río, marga marrón, marga arcillosa, marga de aluvión roja.

Los tejidos vegetales como algodón, Altermanthera philoxeroides, patata, remolacha de azucar, son buenos sustratos para inducir la esporulación. El agua de agar, extracto de suelo en agar se han utilizado como soporte. La adición de N en el medio de agar puede afectar a la esporulación. Plantas y partes de plantas La transferencia de himenio a partes de plantas en cámaras húmedas, estimula la fructificación durante algunos días. Se puede inducir la formación de basidiosporas de R. solani colocando segmentos de tallo de algodón en agua de agar. El micelio de R.solani crece en dextrosa de patata con caldo de carne que ha sido lavada en agua destilada y añadida atrocitos de raíz de Altermanthera philoxioides, el himenio con basidiosporas aparece en las tallitos. La esporulación en remolacha de azúcar se da a temperaturas cálidas y a alta humedad. El himenio aparece como un polvo gris-blanco solo en las zonas centrales de las hojas. Se pueden obtener teleomorfos inoculando raíces de remolacha azucarera de 2 cm de Ø u hojas que crezcan en suelo estéril con asilados de R.solani de diferentes hospedantes. La inoculación de las plantas se hace en cámaras húmedas al 100% con T en oscuridad de 21ºC y de día de 24ºC. Se puede inducir la formación de basidiosporas de R.solani inoculando plantas de algodón, Altermanthera, patata o remolacha azucarera, con una suspensión miceliar que halla crecido en caldo de carne con patata + 5 g/l de sucrosa. Las plantas inoculadas se incuban a 20ºC y alta humedad bajo tarros de cristal. Transferencia de un medio rico en nutrientes a uno pobre Para formar basidiosporas, se hace crecer R.solani en un medio rico durante 17 días y luego se transfieren porciones de micelio a papel de filtro en pequeños matraces. Se en agua de agar. También se induce la formación de basidiosporas en las paredes de matraces de cristal haciendo crecer el micelio en solución sintética de Coon, primero obtenemos crecimientos vigorosos del micelio en un medio rico y luego se transfieren a uno menos nutritivo. Se puede inducir la fructificación de R.solani simplemente haciendo crecer aislados en PDA durante 10 días y luego transfiriendo el micelio en cuñas a agua de agar. Los aislados de Rhizoctonia crecen en PDA suplementado con 1g/l de xtracto de levadura durante 4-6 días a 25ºC, para la esporulación se transfieren cuñas a extracto de agar de suelo.

- 1 kg de suelo seco autoclavado 30 m con 1l de agua. - Después esperar una noche y lo que sobrenada se filtra con

papel de filtro, a esto se añade: • 1 gr de dextrosa • 0,1 gr de extracto de levadura • KH2PO4 • 20 gr de agar • se rellena a 1l , se estabiliza a ph 6,8 y se autoclava. • Los cultivos se incuban a 22-23ºC

Se producen esporulaciones en aislados que hacedmos crecer en platos “paretidos” con un medio rico en nutrientes (glucosa, N y agar GNA) y en la otra parte un medio bajo en nutrientes (sales de tiamina y agar STA) Las sales de tiamina contienen:

• K2PO4…………………1,0 gr • KH2PO4………………..0,78 gr • MGSO4 . 7H2O…………0,75 gr • CaCl2…………………….37,0 gr • FeCl3 .6H2O……………..1,0 gr • ZnSO4 .7H2O…………….0,9 gr • CuSO4.5H2O……………..0,8 gr • Na2 MoO4.H2O…………..0,3 gr • Tiamina-HCL………………0,15 gr • Difco bacto agar…………….20 gr • Agua destilada………………1000ml

El GNA incluye: D-glucosa………………….10 gr NaNO3…………………….0,25 gr Se añade las sales de tiamina agar Agar con marmita Se utiliza para calcular el índice de esporulación de R.solani de los grupos AGs 1, 2-1,2-2,4 y 5 Se les hace crecer en el medio OPDMA

• Extracto de patata……………………15 gr • Extracto de malta de marmite………..40 gr • Dextrosa………………………………7,5 gr • Agar……………………………………20 gr • Agua destilada…………………………1000 ml • Ajustar a Ph 5,3

O en el medio ODMA Marmite…………………………..25 gr Dextrosa…………………………..12,5 gr Agua destilada…………………….1000 ml Ajustar a ph 5.2 Se cogen los bloques de agar de los márgenes de los cultivos que han crecido 3 días a 26ºC y se transfieren a agua de agar Posteriormente se incuban bajo luz difusa. Las fructificaciones aparecen a los 7-12 días En un procedimiento similar los aislados de R.solani crecen durante 2-3 días a temperatura ambiente en el segundo medio:

• Extracto de levadura marmite……….1 gr • Dextrosa……………………………..20gr

• Agar…………………………………..20gr • Agua destilada……………………….1000ml

En el cual se empapan 25º gr de rodajas de patata durante 1h a 60ºC. Se cogen pequeños bloques de agar (2-3mm²) que contengan algunas hifas y se transfieren (de la parte marginal) a platos con agua de agar. Murria enfatiza la importancia de una buena aireación en los medios de dextrosa, extracto de levadura. Es importante anotar que los aislados requieren cantidades de inóculo de 1mm² a 20 X3 mm² para esporular. Agar con fungicida Para inducir la formación de teleomorfos de R. solani de los grupos AG1 y AG 2-2 pero no AG3,4,5 Se utilizan discos de papel de filtro de 15mm de Ø empapados en una solución acuosa de mancozeb al 5% Se colocan en agua de agar en placas petri a 2-3 cm de la periferia del disco Se cogen tacos de agar de 5mm Ø cortados de los márgenes de viejos cultivos de R. solani Se colocan en el agar a 3 cm del papel de filtro Los cuerpos fructíferos aparecen a los 10-15 días de incubación a 25-30 ºC. Los aislados de remolacha azucarera representativos de los grupos AG2-2 IV, exhiben intensa ramificación con este procedimiento pero no se ven basidiosporas. Agar con avena Los himenios de Rhizoctonia se forman en una decocción de avena con agar después de 12 días de incubación a 24-26ºC:

• Se autoclavan granos descascarillados de avena (50gr) en 1 l de agua destilada • Se ajusta a ph 7.2 después del autoclavado • En placas petri se ponen 20 ml de este medio • Se corta un disco de 1cm de Ø del margen de un cultivo de 10 días de

Rhizoctonia en PMYDA • Se coloca en el centro del disco

Agar con V8 La luz de fluoresce4ncia blanca (4700 erg/seg/cm²) estimula la formación de basidios de las especies de Rhizoctonia binucleadas en agar con jugo V8, pero inhibe la formación de basidiosporas.

• Jugo de V8……………10% • CaCO3…………………2 gr • Agar…………………….18 gr • Agua desionizada………..900 ml • Los cultivos crecen 20 días a 24ºC

Suelo con planta colonizada El himenio de Rhizoctonia spp se puede observar en la superficie de suelos que se colocan sobre sustratos infestados de micelio. Los asilados se hacen crecer en agua-dextrosa-patata. Los cultivos se maceran con arena esterilizada y una mezcla de suelo que previamente se ha esterilizado 30 m a 71ºC para eliminar del suelo Rhizoctonia Los culti9vos se incuban a 23-26ºC con 14-16h de luz a 10-440 ft-c La humedad se mantiene regando el suelo 1-3 veces al día dejando que drene. La fructificación se produce a los 12-14 días. Otra receta Los aislados se hacen crecer en placas petri en el medio PYDA:

• Extracto de patata……………..4 gr • Extracto levadura………………5 gr • Dextrosa………………………..5gr • Bacto agar………………………17 gr • Agua destilada…………………..1000ml

Después del autoclavado el medio se deja a ph 4,5 con ácido láctico. Después de algunos días de incubación a 27ºC, cuando la hifa llega a loa márgenes de la placa petri el cultivo se tapa en su contorno con agregados de suelos secados al aire de 3-5mm de Ø. Se añade agua destilada 1- 3 veces al día, dejando que percole el exceso. Los cultivos se incuban a temperatura ambiente con las tapas petri quitadas. El himenio se observa a los 3-14 días. Este método es apropiado para muchos aislados binucleados y multinucleados. Morfología y citología de Rhizoctonia En un medio de cultivo las jóvenes ramificaciones de Rhizoctonia spp se dirigen en la dirección del crecimiento e invariablemente parecen constreñidas al punto de unión de la hifa principal. Se forma un septo en la zona cercana a la constricción. En hifas maduras se observan crecimientos en 90º de la hifa principal, también en 45º. Frecuentemente la mayoría de las células de la hifa principal se desarrollan en una nueva rama cerca del fin distal, así el septo de la hifa principal está cerca de la ramificación. Esto varía a veces. Duggar observó que no había septo (o solo uno) en la hifa principal cerca de la ramificación. Hay septos secundarios que se forman en hifas viejas. El septo primario es grueso en la unión con la célula de la pared, mientras que el septo secundario es fino en esta localización. Las hifas jóvenes de R. solani son hialinas y se extienden en “hifas corredoras” en la superficie de las plantas y en el medio de agar. Las ramificaciones de esta hifa empiezan a acortarse y dar lugar a esclerocios o grupos de infección. Las hifas en el sustrato o en hospedante tienden a permanecer hialinas, pero la aéreas o las superficiales pueden ser amarillas o marrones por la acumulación de melaninas en las paredes celulares.

La hifa madura de R. zeae y R. oryzae son blancas o teñidas de color salmón. El color de R. repens es blanco. Las dimensiones de las células hifales varían en diferentes aislados de R. solani. El diámetro entre 3-17 µm, la longitud celular varía entre 50 a 250 µm. las hifas binucleadas de Rhizoctonia son usualmente más finas que las multinucleadas. La longitud del radio de la célula de las hifas vegetativas es generalmente superior a 5:1. Células monilioides Muchos aislados de R. solani y Rhizoctonia spp binucleadas producen cadenas simples o ramificadas (células monilioides), cuya longitud con respecto al radio es 1-3:1. Estas células pueden ser hialinas o marrones y varían en su forma: lobadas, piriformes, irregulares y en forma de barril. Las células monilioides también se llaman células doliformes, células en forma de barril, células cortas, clamidiosporas y células escleróticas. La formación de nuevas células monilioides ocurre en diferentes partes de la hifa vegetativa. Surgen de brotes en los finales de células preexistentes. Se produce una constricción en los septos entre células monilioides. Sus tamaños varían de 10 x 20 a25 x4 µm. Las cadenas de las células monilioides poseen varios lugares, principalmente por debajo de la superficies del hospedante y/o del sustrato, pero también pueden estar en los tejidos del hospedante. Pueden ser escasas y dispersas, formando masas semicompactas de diversos tamaños, que se pueden agregar formando esclerocios. Los esclerocios se componen usualmente de masas compactas de células monilioides. Algunos esclerocios no están formados de células monilioides pero tienen una hifa indiferenciada. En la formación de los esclerocios no hay un patrón claro de organización de la hifa, resultando una construcción desorganizada. El color de los esclerocios de R. solani es marrón de varias tonalidades. Los de R. zeae son rojizos y los de R. oryzae asalmonados. La forma y tamaño varía según los Rhizoctonia. R. zeae son pequeños, regulares y con forma de balón. R.solani del grupo AG1-IA son alargados y de forma redondeada. Los de AG 1-1c son pequeños y redondeados. Los esclerocios de otros grupos son de forma irregular y de diferentes tamaños de 1 a 5-8 mm de Ø. Los esclerocios se suelen formar en la superficie de los hospedantes y también dentro de los tejidos o en restos vegetales. Teleomorfos Los aislados de Rhizoctonia spp pueden esporular cuando se exponen a condiciones ambientales específicas. Las células de las hifas cortas se bifurcan frecuentemente y producen una densas marañas don de se forman los basidios. La forma de los basidios y su tamaño puede variar. Pueden ser cilíndricos, ovales o esféricos. El esterigma aparece junto a los basidios, su número , forma y tamaño también varían. El número de esterigmas por basidio está en un rango de 1 a 7, lo normal es 4.

Las basidiosporas son esféricas, ovales o piriformes. En algunas especies la germinación se produce en basidiosporas secundarias, se llaman basidiosporas repetitivas. La forma, número y tamañote basidios, esterigmas y basidiosporas así como la morfología del himenio es importante para la clasificación de Rhizoctonia spp. Citoplasma La observación de las hifas de Rhizoctonia solani bajo microscopio revela a las jóvenes células hifales en su actividad de crecimiento en los cultivos. Hay un citoplasma denso con conspicuas vacuolas. Las vacuolas son largas y aparecen además en los extremos hifales. En las células maduras pueden aparecer ; citoplasma denso, grandes vacuolas o puede aparecer totalmente vacío. En las células monilioides, los esclerocios pueden contener glóbulos de aceite. Las estructuras internas observadas en las células de Rhizoctonia solani incluyen: núcleo, mitocondria, vacuolas, retículo endoplasmático, ribosomas, inclusiones de lípidos, gránulos (probablemente de glucógeno), microtúbulos, lomasomas, vesículas citoplasmáticas, paredes de hifas, poros y septos. La organización del citoplasma es diferente según la edad de las células hifales. Paredes de células Las paredes celulares de Rhizoctonia solani cerca del extremo hifal consisten en una simple capa de 80 Å de espesor. Con la edad se depositan centrípetamente capas adicionales. Algunas de 1 µm. En este estado loas paredes empiezan a mecanizarse. La pared del septo se compone de dos zonas densas eléctricamente, que continúan en paredes laterales. El septo puede contener de 1 a varias lamelas dependiendo de la edad. Poro del septo En Rhizoctonia solani el poro del septo mide sobre 1-0,2 µm de Ø. Un anillo anular amorfo cerca del centro del septo y estructuras alrededor del poro del septo. El parentosoma es una capa perforada membranosa en el poro que está en cada septo formando una estructura abultada. La membrana del plasma es continua de una célula a la siguiente, pasando a través del hinchamiento septal y del poro. El poro no se cierra con el cfrecimiento del hinchamiento septal. Cuando se cierra es porque el poro del septo se tapona. La morfología del doliporo y el parentosoma del septo en los basidiomicetos es una estructura específica de cada especie. La figura 6 resume las formas de los parentosomas en diferentes grupos taxonómicos. La citología del poro del septo nos sirve para separar Rhizoctonia de ascomicetos, ustomicetos, holobasidiomicetos y heterobasidiomicetos. Los ascomicetos tienen un septo transparente con un gran poro central y 2 o mas cuerpos de Woronin. El septo de los basidiomicetos está triplemente estratificado. Los ustomicetos tienen un septo simple y poros pequeños con bordes acusados Los holobasidiomicetos tienen un septo dolíporo con parentosomas y vesículas no perforadas.

Membranas El plasma de la membrana de Rhizoctonia solani se compone de capas electrocondensadas con una región conductora de electrones. El grosor de la membrana varía de 60 a100 Å. El tonoplast ¿? Y el plasma de la membrana son más gruesos que las membranas del núcleo, el retículo endoplasmático o la mitocondria. Retículo endoplasmático En Rhizoctonia solani es más abundante en la hifas jóvenes y , adyacente al poro del septo. En hifas viejas o en esclerocios es fragmentado o ausente. El retículo endoplasmático se compone de 2 capas más o menos paralelas formando un sistema de cisternas cerrado. Usualmente es continuo con el parentosoma alrededor del poro del septo y se ramoifica a través del citoplasma. Aparece en diferentes formas en láminas continuas o en cisternas porosas, en formas enrolladas, en pilas lamelares, tubular o en forma de cisterna no asociada. También se lomasones adyacentes a las paredes del septo o en los septos hinchados. El aparato de Golgi no se ha encontrado en Rhizoctonia solani. Núcleo Las células de R.repens , Epulorrhiza (Rhizoctonia) anaticula, y Ceratorrhiza spp (Rhizoctonia binucleadas), contienen 2 núcleos. Las células de Rhizoctonia solani , R. zeae y R. oryzae son multinucleadas. El nº de núcleos en las especies puede variar de 3 a 28 en células jóvenes. El nº de núcleos es bajo en células viejas probablemente por la formación de septos secundarios. El nº de núcleos en las células monilioides es similar al de las células hifales jóvenes. El núcleo tiene forma oval y los núcleolos se observan claramente en microscopio de contraste. La membrana del núcleo a veces tiene poros y conexiones con el retículo endoplasmático. El contenido del núcleo puede aparecer variegado, pero usualmente se observa una matriz homogénea. En Rhizoctonia solani durante la formación del teleomorfo las células probasidias empiezan a binuclearse emparejándose los núcleos y formando un septo secundario. Los 2 núcleos haploides se fusionan y forman uno diploide que se divide en meiosis para formar 4 núcleos haploides. Cuando el esterigma empieza a alcanzar su tamaño final, los núcleos alongados migran al esterigma de una basidiospora. En los primeros estadios de la germinación de las basidiosporas las células son uninucleadas, aunque a veces se observan binucleadas. 6 pares de cromosomas se se observan durante la meiosis de Rhizoctonia solani. Mitocondria En Rhizoctonia solani las mitocondrias son polimórficas en relación a otros hongos y plantas superiores. En las células jóvenes tienen forma de barra y en las viejas empiezan a acortarse y se cierran en forma de esferoide. La organización ultraestructural de la mitocondria en Rhizoctonia es similar a la de otros basidiomicetes. La membrana exterior cubre la mitocondria, en el interior existe una membrana con repliegues (crista). Los crista tienen forma de plato y se distribuyen en forma dispersa en la mitocondria.

Vacuolas Las vacuolas de Rhizoctonia solani aparecen en la pared celular, antes de las puntas de las hifas. Los lípidos se almacenan en las células viejas, en las monilioides y en los esclerocios. Se pueden observar inclusiones esféricas alrededor de la periferia del protoplasto. Las inclusiones de lípidos son transmisores de electrones después de la fijación con KMn O4. Clave citomorfológica para Rhizoctonia spp. Los criterios citomorfológicos del nº de núcleos celulares (CNN) en la hifas jóvenes y el ancho de las hifas corredoras se utilizan para dividir Rhizoctonia en dos grandes grupos, binucleadas y multinucleadas. Las características morfológicas de las especies dentro de estos grupos se resumen en esta clave dicotómica:

1. CNN en las terminales de las hifas jóvenes normalmente 2 (menos frecuentemente 1-3), la anchura de la hifa principal corredora es normalmente menos de 7 µm.

Rhizoctonia binucleada (3) 2. la CNN en las hifas terminales jóvenes es mayor de 2. la anchura de la hifa

principal corredora es mayor a 7 µm Rhizoctonia Multinucleada (13)

3. colonias blancas a amarillo crema en PDA, hifa vegetativa de 3.0-4,5 µm de

diámetro. Células monilioides (16 X 22 X 11-15 µm) pueden formar agregados de 100-300 µm de diámetro. Esclerocios grises a la luz marrón, redondos a 1 mm de Ø

R.callae Teleomorfo. Indeterminado

4. Colonias blancas a la luz marrón en PDA, ausencia de zonación colonizadora, hifas de 3,8 µm de diámetro. Células monilioides de 15-30 X 7-12 µm esclerocios blancos a marrones < 0,5-3,0 mm de diámetro.

R. cereales Teleomorfo : Ceratobasidium gramineum (= C. cereales) 5 . Colonias blancas a color ante en PDA, hifa de 3.7 µm de diámetro. Células monilioides (18-22 X 9-12,5 µm) pueden formar agregados de 0,5-0,75 mm de Ø . Esclerotios marrones, 2-10 mm de diámetro R. endophyta Teleomorfo: C. cornigerum (= C.ramicola)

6Colonias blancas a color ante en PDA, ausencia de zonación. Hifas de 3,6-8,7 µm de diámetro. Células miniliodes 6,7-17,7 X 11,1- 3,45 µm, esclerocios poco comunes de 0,1-0,3 mm de diámetro.

R.fragariae

Teleomorfo: C. cornigerum (= C.ramicola)

7Colonias blancas a amarillo blancas en PDA. Hifas de 4-8 µm de diámetro. Células monilioides de 7-10 X 10-20 µm. Esclerocios en plantas de arroz marrones a gris-marrón de 0,3-2,5 mm de diámetro, a veces no se producen esclerocios en cultivo.

R. fumigata

(= Sclerotium fumigatum) Teleomorfo: C. Sateriae (= Hypochnus setariae)

8Colonias gris oliva a marrón púrpura en PDA. Las colonias maduras teñidas de lavanda. Hifas 3,7-9,9 µm de diámetro. Ausencia de células monilioides y esclerocios.

R. ramicola

9 Colonias blancas a marrón pálido en PDA. Hifas de 5-7 µm de diámetro. Esclerocios irregulares globosos de 0,5-3mm de diámetro. Compuestos de células de 13-30 µmde lado. C´ Células monilioides de 21-37 X 6-11 µm. R.oryzae-sativae (= S.oryzae-sativae) Teleomorfo: C. Oryzar-sativae. 10 Hifas hialinas, lisas, con paredes finas, tortuosas, reptantes, irregulares en anchura ( 2-3,5 µm de diámetro crecimiento lento <3 mm/día. Esclerocios diminutos, sumergidos, desparramados, dispuestos en racimos poco apiñados. Con células monilioides con paredes finas, hialinas, elipsoides a esféricas 13-18 X 8-17 µm, en cadenas, ramificadas o no ramificadas. R.repens [=R.globularis (nombre invalidado) renombrado. Epulorrhiza repens] Teleomorfo: Tulasnella calospora. 11 similar a R.repens excepto que las células moniliodes son de elípticas a claviformes, con espátulas en el contorno 14-18 X 7-10 µm, con células adyacentes conectadas con conexiones anchas de 14-18 µm. La célula terminal de la cadena prolifera avanzando en cortos o largos picos de proyección. R.. anaticula Renombrado con Epulorrhiza anaticula. Releomorfo :Tulasnella sp.

12 especies de Rhizoctonia binucleadas o con otras características Anamorfos: R. alpina, R. candida, R. endophyta var endophyta, R. floccosa, R. fraxini, R. fuccosa, R. goodyetae-repentis, R. muneratii, R. pini-insignis, R. quercus, Sxclerotium deciduum.

Se asignan a anamorfos de Rhizoctonia con teleomorfos de cetotobasidium a Ceratorrhiza: R cereales = C. cereales R. fragariae= C. fragariae R. goodyerae-repentis = C. goodyerae repentis R. ramicola = C. Ramicola Especies binucleadas dudosas: R. muscorum, R.solani var fucchsiae, R. stahlii. Teleomorfos: Ceratobasidium spp ( o llamados incorrectamente como Coticium sp, Hypochnus sp, Koleroga sp y Tulasnella sp. 13 micelio coloreado de amarillo claro, regular, pequeño, con forma de balón, con esclerocios coloreados de rojizo. R. zeae Renombrado como Moniliopsis zeae Teleomorfo: Waitea circinata ( grupo anastomisis WAG-Z) Otros anamorfos descritos en este grupo: R. endophyta var filicata, Sclerotium oryzocola. 14 Micelio blanco amarillento usualmente, con esclerocios coloreados

irregularmente de color salmón.

R.oryzae Renombrado como Monuiliosis oryzar Teleomorfo : Waitea circinata (grupo anastomosis WAG- O) Clave dicotómica pata teleomorfos de Rhizoctonia spp Los teleomorfos cuyos micelios presentan características de Rhizoctonia se asignan a basidiomicetes, clase Hymenomycetes, subclase Phragmobasidiomycetydae y Holodasidiomycetidae Subclase Phragmobasidiomycetyda 1 metabasidios globosos, piriformes, clavados o raramente con forma de huso. Longitudinalmente u oblicuamente septados o ( cruciate ¿?) septados. Tremellares (2) 2 basidios no catenulados protosterigma no deciduo, esporas apiculadas, borde del esterigma a simétrico o apiculado. Tremellaceae(3) 2 esterigma robusto , septado basalmente, gloeocistidios con contenidos amarillos Metabourdotia Monotropo: M. tahitiensis 4 basidiocarpo cartilaginoso a coriáceo, raramente gelatinoso-céreo, firme a duro, resupinado u ocasionalmente lobado, encostrado. Sebacina (5) 5 basidiosporas largas a vermiformes (30-60 X 1,0-2,5 µm). Probasidios que forman cadenas o basidios parcialmente fusionados (fig 7) . (Sebacina vermifera) Basidios y basidiosporas. Bar = 10 µm Subclase Holobasidiomycetidae

1 basidios subesféricos y anchos con sólidas estructuras en forma de dedos, o esterigmas inflados, esporas reiterativas. Tulasnellales 2 esterigma relativamente pequeño, no inflado, esporas no reiterativas. Cuerpo de fructificación que se desarrolla en gimnocarpo, himenio unilateral o anfígeno, liso o dentado , que procede de la línea de los tubos Aphyllophorales Tulesnales 1 protosterigma fuertemente hinchado y esporas subglobosas, elipsoides o piriformes. Al principio empiezan a elongarse apicalmente dentro de un soporte fusiforme o subfusiforme llamado espículo, interrumpido en la base desde el metabasidio por un septo adventicio a menudo decíduo. Células de la hifa binucleadas. Tullasnaceae Esta familia solo tiene un género, Tulasnella. (Sinónimo : Glo0eotulasnella, Muciporus, Pachysterigma, Prototremella). Anamorfo: Rhizoctonia repens. 2 protosterigma sólido, subcilíndrico o fusiforme más o menos recto y digitado, no decíduo , raramente desarrolla septos adventicios y no en la base. Ceratobasidiae (4) 3 basidiocarpos efusos o discoides a coronados, himenóforo plano, meruloide ( con bordes fértiles en los pliegues), tuberculazo, dentado ( con puntas estériles en los dientes), o pseudodentado ( con fascículos emergentes estériles que surgen de la hifa originados en capas profundas), sin setae ¿?, con o sin clamps, con cistidios cortos, gloeocistidios e hifidios presentes o ausentes, esporas usualmente hialinas o coloreadas de claro, lisas o ornamentadas amiloides o no. Cortinaceae 4 metabasidios 2-3 veces el ancho de la hifa que los soporta o los pedicelos (6) 5 metabasidios igual de la hifa que los soporta o los pedicelos (7) 6 basidios subglobosos o piriformes, abruptamente sujetos a los pedicelos, gloeocistidios y cistidios ausentes, hifa con células binucleadas. Ceratobasidium 7 basidios cortos , subcilíndricos a forma de barril u ovoides. Basidiosporas elipsoides con una cara lisa o raramente piriforme u obovada , hialina a coloreada de marrón. Células de las hifas multinucleadas. Thanatephorus Sinónimo: Pellicularia Los siguientes nombres genéricos han sido mal empleados para Thanatephorus: Botryobasidium, Ceratobasidium, Corticium e Hypochnus. Anamorfo:Ñ_ Rhizoctonia solani.

8 metabasidios que son más anchamente clavados que Thanatephorus en relación a la hifa que los soporta. Esterigma (1-) 2 Ypsilonidium Basidios cilíndrico clavados, basidiosporas típicamente biapiculadas, fusiformes, citriformes, elipsoides, hialinas a amarillentas. Saprobiótico de madera muerta y desechos. No se conocen esclerocios. Uthatobasidium 10 basidios ovados a redondeados con un pedicelo, gloeocistidios y/0 cistidios usualmente presentes, ausencia de esclerocios, saprobiótica del suelo. Oliveonia Sinónimo: Heteromyces, Hidrabasidium Corticiaceae (Aphyloforales) con anamorfos de Rhizoctonia 1 basidios constrictor, subuniformes, subbasidios ramificados frecuentemente en volutas i ciliados. 4 esterigmas no especialmente sólidos o alongados con una substancial longitud. Basidiosporas oblongas, elipsoides y lisas. Ausencia de cistidios, hifa sin clamps, células de la hifa multinucleadas, esclerocios rosas o castaños (fig b8) Anamorfos: Rhizoctonia zeae, grupo anastomosis WAG-Z, Rhizoctonia oryzae Grupo anastomosis WAG-O 2 subbsasidios típicamente ramificados, no ciliados, esterigma (4-) 6 (-8), esporas amigdaliformes , fusiformes o subnaviculares, cistidios presentes o ausentes, hifa con clamp o no, ausencia de esclerocios, , conidios, oídio Rhizoctonia o Hifa multinucleada . Con apariencia de Rhizoctonia, normalmente no patogénica (no ha sido bien estudiado). Botryobasidium Tulasnella 1 probasidios esféricos, espícula de 7-10 (-22) µm de larga. Basidiosporas de 24-28 (-52) X3 -4,5 µm . Fig 9 a T.calospora Sinónimo: Gloeotulasnella calospora. Anamorfo: Rhizoctonia repens. 2 probasidios ovados a subclavados. Espícula de 8-15 µm de larga. Basidiosporas de 6-8 (-10) X 2,5-3 µm, curvadas (fig 9 b) T. allantospora 3 probasidios ovados, clavados, espícula de 2,5-5 µm de larga. Basidiosporas de 4,5-6,5 X 4.5- 5,5 µm , subesféricas, ovadas (fig 9 c) T. violea 4 probasidios ovados a subclavados, con un largo pedicelo , protosterigma de variado tamaño, unilateral, ecuatorial o irregular. Basidiosporas de 11-14 X 4,5 -5 µm

fig 9 d T. irregularis 5 probasidio globoso o clavado, frecuentemente asimétrico. Espícula de 3-18 X 1,5-2 µm, cónico cilíndrica, basidiosporas de 6,5 -10 X 3,5-5,5 µm con una de las caras inflada (Fig 9 e) T. asimétrica 6 probasidios pedunculados con forma esférica, espícula de 20 (-74) µm de largo con 1-2 septos. Basidiosporas 12-18 X 3,5-4,5 µm (fig 9 f) T. cruciata Thanatephorus 1 esterigma constante en número (2). Basidiosporas subcilíndricas, curvadas 12-17 X 4,5-6 µm (fig 10 a) T. sterigmaticus 2 esterigma (1-) 4 (-7) en número, esporas oblongas, elipsoides a ovadas, usualmente anchas hacia el final distal (3) 3 hifa de 12 (-17) µm de diámetro, micelio que en cultivo tiene un tinte marronáceo, 4 esterigmas del mismo tamaño que los metabasidios o más cortos. Esporas de 7-10 (-12) X 4-7 µm , subhimenio que se ramifica T.cucumeris 4 hifas de más de 9 µm, micelio blanco en cultivo, harinoso, después marrón grisáceo . Esterigma (1) 3 (4) , usualmente mucho más largo que el metabasidio. Basidiosporas 7-9 X 4-6 µm. Subhimenio ramificado, a menudo racemoso (fig 10 c) T. praticola Sinónimo: Ceratobasidium pratícola, Corticium praticola, Pellicularia praticola, Estas especies a menudo se incluyen erróneamente en T. cucumeris. 5 Hifa marrón oscuro, la hifa crece despacio y dispersa en cultivo, fructifica rápidamente, marrón siempre en la juventud, más de 17 µm de diámetro. Metabasidios (13) 16-21 X 9-11 µm, esterigma 4,9 -12 X 7-8,5 µm , lisas. (fig 10 d) T. orchidicola 6 hifa dispersa, hialina al principio , color marrón camello, , plana , con color blanco o marrón claro la hifa aérea, en matas flocosas e irregulares. Metabasidio 10-12 X 7-7,5 µm. Esterigma 4, 6-9 µm de largo, curvado en horquilla . Basidiosporas globosas. 5-9 -6-8 µm de diámetro, apiculadas, no repetitivas (fig 10 e) T. pennatus 7 hifas de 3-8,8 µm de diámetro, color amarillo claro, esclerocios pequeños, sueltos, marrón cinamomo a marrón Marte en PDA, himenio gris blanquecino, ramificaciones subcimosas, basidios de 8,6-15 X 5,8-10 µm, piriformes, clavados con forma de cabeza al final. Esterigma (2-) 4 (-5) por basidio, 6,3-12,5 µm de largo0 y 1,3-2,5 µm de ancho en la base, divergentes, curvados un poco como cuernos. Basidiosporas a veces septadas (fig 10 f) T. crochorus.

Aquathanetephorus 1 parecida a thanatephorus pero los basidios son pequeños, esterigma (usualmente 2) o protosterigma hinchados con una curva interior (fig 11) A.pendulus Ypsilonidium 1 fructificaciones dispersas y coloreadas de claro con basidios dispersos y basidiosporas septadas (fig 11) Y. anomalum 2 fructificaciones un poco gruesas y coloreadas de marrón con basidios cerrados en empalizada, basidiosporas septadas. Y langlei-regis 3 basidiosporas subcilíndricas, largamente atenuadas hacia la base , basidiosporas no septadas. Y. sterigmaticum Ceratobasidium 1 esterigma (1-) 2 (3) 2 4 esterigmas (6) 3 basidiosporas globosas a subglobosas de 11-15 X 10-12 µm. Esterigma 11-12 X 3,4 µm. Los esclerocios se forman en el hospedante y son esferoides, compuestos por células alongadas. C. setariae Sinónimos: Hypochnus setariae Anamorfo: R. fumigata Sclerotium fumigatum 4 basidiosporas globosas a subglobosas 9-17 X 9-16 µm. Esterigma muy sólido de 12-23 X 4,5 -5 µm. Esclerocios producidos en el hospedante globulares o cilíndricos, compuestos por células esferoides cercanas (fig 12 a) C. oryzae-sativae Anamorfo: R. oryzae-sativae 5 basidiosporas estrechamente ovadas a estrictamente elipsoides. C. bicomo 6 basidiosporas esféricas (9) 7 basidiosporas cilíndrico-subcilíndricas (11) 8 basidiosporas elipsoide-ovadas (14) 9 basidiosporas de 6,5-9 µm de diámetro (fig 12 b)

C. sphaerosporum 10 basidiosporas 10-12 µm de diámetro (fig 12 c) C. globisporum 11 basidiosporas de 8-11 X 3,5-4 µm la longitud 2 veces más grande que la anchura C. pseudocornigerum 12 basidiosporas de 11-14 µm de largo C. angostiporum 14 metabasidios con una prolongación apical papilada C. papillatum 15 metabasidios sin prolongación apical papilada

(16) 16 metabasidios de más de 18 µm de largo (fig 12 e) C. obscurum 16 metabasidios usualmente menores de 18 µm de largo

(18) 18 basidiosporas anchamente fusiformes a elipsoide-ovadas con una cara hinchada 6,5-10 X 3,5-6 µm. la longitud es de 1-2 veces que la anchura (fig 12 f) C. cornigerum 19 metabasidios 7,3-19.7 µm de largo, basidiosporas 6,2-12,7 X 3,2-6,3 µm. C. gramineum Sinónimo: C.cereale, Corticium gramineum Anamorfos: Rhizoctonia cereales 20 metabasidios de 10-18 µm de largo, basidiosporas de 9-13 X 5-7,5 µm (fig 12 g) C. anceps Sinónimo: Ceratobasidium vagum, Corticium anceps, Tulasnella 21 metabasidios de 2,0-16,5 µm de largo, basidiosporas de 5,2-10,5 X 3-6,9 µm C. ramicola Anamorfos: R.candida, R. endophytica var endophytica, R. frgariae, R. ramicola.

Términos utilizados en la clasificación de teleomorfos de Rhizoctonia

Abaxial: (relativo a las basidiosporas), la cara sobre el eje largo del basidio Adaxial: la cara próxima al eje largo del basidio, usualmente con el espículo Amiloide: (relativo a esporas) se tornan azules con el yodo en presencia de almidón. Apical: (esporas) que tienen una corta proyección en el final, una proyección donde puede estar fijado el esterigma Apiculado: que tienen apículo Basidiospora: espora que surge del basidio Basidium: incluye el metabasidio, el esterigma y el espículo Probasidio: la parte de basidio donde ocurre la cariogamia. Primera célula basidial Metabasidio: la parte del basidio donde ocurre la meiosis Esterigma: la parte del basidio entre el metabasidio y las basidiosporas, se compone de filamentos basales o una parte inflada ( el esterigma) y un punto apical, el espículo Holobasidio: basidio no septado, típico de holobasidiomicetes Phragmobasidio: basidio dividido en septos Heterobasidio: basidio de heterobasidiomicetes , usualmente un Phragmobasidio Estrichchobasidio: cilíndrico, con hilos nucleares longitudinales Chiastobasidio: clavado, con hilos nucleares a lo largo del basidio al mismo nivel Autobasidio: con esporas no apiculadas, con el borde simétrico en el esterigma. Epibasidio: una estructura que está entre el probasidio y el esterigma (o una espora esterigmática) Hypobasidio: basidio con esterigma y esporas Pleura basidio: relativamente ancho en la base y con “raíces” bifurcadas en hilos Protrobasidio: basidio primitivo, opuesto al metabasidio en el sentido de que es un basidio degenerado Blastospora: espora que ha brotado, una célula germinada. Los blastos son generalmente mucilaginosos pero el conidio de cladosporium puede ser un Blastospora seca.

Circinado: enrollado, en ovillo Clavado: en forma de porra, en dirección a la base Obclavado: dirigido al ápice Subclavado: no perfectamente dirigido al ápice Cimado: un racimo determinado o de tipo centrífugo especialmente ancho o liso Cistidio: órgano estéril y generalmente claro, prismático, cónico, cilíndrico, al final de una hifa no vesicular. En el himenio ( o en otra parte) en basidiomicetes. Gloeocistidios: con paredes finas, usualmente irregulares, con contenidos altamente reflectantes, hialinos o amarillentos. Oleocistidios: que tienen exudados o residuos resinosos Liocistidios: cónicos o cilíndricos, con paredes muy gruesas, la pared se estrecha abruptamente en el ápice, sin incrustaciones, poco coloreado. Digitado: con divisiones en forma de dedos Fusiforme: con forma de huso, dirigido hacia el final. Subfusiforme: no completamente fusiforme Globoide: globoso, esferoide o semejante Globoso: con forma de balón Subgloboso: no completamente esférico Hilum: una marca o muesca en la espora, en el punto de fijación de la conidiospora con el esterigma. Himenio: la superficie esporal del cuerpo de fructificación Hipochnoide: fuertemente resupinado, seco, como en Tomentella. Metabasidio: (basidio, Hypobasidio, probasidio) el órgano de los basidiomicetes que después de la cariogamia y la meiosis, soporta los basidios. Ovado: con forma de huevo, dirigido hacia fuera Ovovado: inverso a ovado, dirigido hacia la base Papila: suavemente redondeado Pedicelo: un “tallo” pequeño

Pleura: cara a cara Pleurosporo: que tiene esporas en las caras, por ejemplo los basidios de los uredinales. Pruinoso: con forma de harina en la superficie Piriforme: con forma de pera Obpiriforme: con forma de pera Subpiriforme: el reverso de la forma de pera Repandado: (el píleo) con forma de ola Repetitivo: (germinación de esporas) produciendo esporas desde el principio Resupinado: (los cuerpos fructíferos) con sustrato liso y con el himenio en el otro lado Extendido: (del estípite) muy largo comparado con la anchura. Esferoide: esferoidal, subesférico (la espora) , cercano a la forma de esfera. Espículo: el punto apical del esterigma Esterigma: compuesto por el protosterigma y el espículo, el proceso en el que el basidio forma las basidiosporas. Tortuoso: inclinado, revuelto en varias direcciones. Truncado: con el final abrupto, parece que el final se ha cortado. Tulasnelóceo: perteneciente a las Tullasnaceae, con las siguientes características: heterobasidios no septados, con Hypobasidio más o menos piriforme, 2,4 u 8 epibasidios ventrudos separados del Hypobasidio por paredes que se cruzan. Meiosis en el Hipobasidio. Ventricoso: hinchado en la mitad de una cara, inflado. Volvado: enrollado hacia fuera Involvado: enrollado hacia dentro Grupos de anastomosis de Rhizoctonia spp binucleados Los aislados de Rhizoctonia spp de Japón, excepto Rhizoctonia Repens y Rhizoctonia Anaticula han sido asignados a 17 grupos de anastomosis designados AG A a AG Q. Lo0s aislados de Norteamérica se asignan a 7 grupos de anastomosis de CAG 1 a CAG 7. Los grupos norteamericanos corresponden a los grupos japoneses excepto CAG5 y CAG7 que son designados como AG-R y AG-S respectivamente. Recientemente Ogoshi asignó aislados de Rhizoctonia Repens a 2 grupos que previamente se les había asignado como no decritos (R.r 1 y R.r 2) Las asociaciones entre anamorfos de los grupos de anastomosis y teleomorfos binucleados de Rhizoctonia se resumen en la tabla 1 Grupo de Rhizoctonia repens Los aislados de Rhizoctonia repens se dividen en 2 grupos incompatibles (anastomosis) R.r 1 y R.r2. En relación a la fusión hifal los miembros se designan en 2 grupos: Los aislados capaces de la fusión hifal con miembros R.r 1 pertenecen al grupo de anastomosis R.r 1. El aislado utilizado como testigo es el ATCC76153 accesión OR-810, aislado de Spirantes sinensis en Aichi, Japón.

Los aislados capaces de la fusión hifal con miembros del grupo R.r 2 forman el grupo anastomosis R.r 2 El testigo es el aislado Atcc76153 accesión N-322 aislado de Liparis kumokiri en Hokkaido, Japón. Otros Rhizoctonia spp binucleados (Ceratorrhiza spp) Los Rhizoctonia binucleados distintos de Rhizoctonia repens se dividen en grupos incompatibles (por anastomosis) y grupos capaces de fusión hifal. AG-A Estos aislados son capaces de fusión hifal entre miembros AG-A y CAG-Z. El testigo es el aislado ATCC76133 accesión C-157 aislado de Soja en Japón. Anamorfos descritos en este grupo Rhizoctonia candida, R. endophytica var endophytica, R. fragariae, R. ramicola. Teleomorfo: Ceratobasidium cornigerum, (Sin: C. ramicola) AG-B Estos aislados son capaces de fusión hifal con miembros AG-B. El grupo de subdivide en relación a la frecuencia de anastomosis y características de cultivo. AG-Ba Estos aislados son capaces de fusión hifal con una frecuencia mayor o igual al 50% con AG-Ba y con una frecuencia menor al 30% con AG-Bb y/o AG-B. Esclerocios irregulares ( no esféricos) y grisáceos. El testigo utilizado en la anastomosis es el ATCC 76134 , accesión C- 484 aislado en Miyagi, Japón. Anamorfo de este grupo: R. fumigata (= Sclerotium fumigatum) Teleomorfo desconocido AG-Bb Estos aislados son capaces de fusión hifal en alto porcentaje ( mayor o igual al 50%) con los miembros de AG-Bb y de baja frecuencia con AG-Ba y/o AG-B(0). Esclerocios esféricos y marrones. El asilado para testar la anastomosis es el ATCC 76135 accesión C-455 aislado en arroz en Fukuoka, Japón. Anamorfos descritos en este subgrupo: R. oryzae-sativae. (sinónimos: Sclerotium oryzae-sativae) teleomorfo: Ceratobasidium setariae (Sin: Hypochnus setariae) AGB(0) Estos aislados son capaces de fusión hifal a baja frecuencia con AG-Ba y/o AG-Bb. Las características de cultivo y morfología son variables, pero difieren de AG-Ba y AG-Bb. La anastomosis se testa con el aislado ATCC 7616, accesión SIR-2, aislado de patata en Tokoshima, Japón.

AG-C Estos aislados son capaces de fusión hifal entre miembros AG-C y a veces AG-I. El testigo de anastomosis es el ATCC 76137 accesión OR-706, aislado de Gymmadenia conopsea en Hokkaido, Japón. Anamorfo: R. globulares Teleomorfo: Ceratobasidium cornigerum. AG-D Estos aislados son capaces de fusión hifal con AG-D y CAG 1. El aislado empleado para la anastomosis es el Atcc76138 accesión W-12 aislado en trigo en Hokkaido, Japón. Anamorfo: R.cereales Teleomorfo: Ceratobasidium gramineum /sin: C. cereale, Corticium gramineum) AG-E Estos aislados son capaces de fusión hifal entre miembros AG-E, CAG3 Y CAG&. El aislado de anastomosis es el ATCC76139, accesión F-18 aislado de Lino en Hokkaido, Japón. Anamorfo: R. mumenatii Teleomorfo: Ceratobasidium sp AG-F Estos aislados son capaces de fusión hifal entre miembros AG-F y CAG-4 y a baja frecuencia con AG-6. R. solani (fig 13) El aislado es ATCC 76140 accesión AH-6 aislado de cacahuete en Chiba, Japón. Teleomorfo: Ceratobasidium sp AG-G Estos aislados son capaces de fusión hifal entre miembros AG-G. El testigo es el ATCC76141 accesión AH-9 aislado de cacahuete en Chiba, Japón. AG-H Se fusionan con AG-. El aislado e el ATCC 76142 accesión , aislado en Tochigi, Japón. Teleomorfo : Ceratobasidium SP AG-I Se fusionan con AG-I y ocasionalmente con AG-C. El aislado e el ATCC 76143 accesión AV-2 , aislado en Artemisia, en Tokio, Japón. Anamorfo: R. fragariae Teleomorfo desconocido

AG-J Se fusionan con AG-J. El aislado es el ATCC 76432 accesión , aislado en el suelo en Kanto, Japón. Teleomorfo : Ceratobasidium sp. AG-K Se fusionan con AG-K. El aislado es el ATCC76142 accesión AC-1 , aislado en cebolla en Hokkaido, Japón. Teleomorfo: Ceratobasidium sp. AG-L Se fusionan con AG-L. El aislado es el ATCC 76146 accesión FKO-2_26, aislado en el suelo en Fukuoka, Japón. Teleomorfo: Ceratobasidium sp AG-M Se fusionan con AG-M. Teleomorfo Ceratobasidium sp AG-N Se fusionan con AG-N. . El aislado es el ATCC 76148 accesión STc-43 , aislado en el suelo en Tochigi, Japón Teleomorfo desconocido AG-O Se fusionan con AG-O. El aislado es el ATCC 76149 accesión FKo-6-2 , aislado en el suelo en Fukuoka, Japón. Teleomorfo: desconocido AG-P Se fusionan con AG-P . El aislado es el ATCC 76150 accesión C-578 , aislado en Té en Shizuoka, Japón Teleomorfo: Ceratobasodium cornigerum AG-Q Se fusionan con AG-Q. El aislado es el ATCC 76151 accesión C-620 , aislado en Grama en Chiba, Japón Teleomorfo: Ceratobasidium cornigerum

AG.R Se fusionan con AG-R y CAG5 . El aislado es el ATCC 76144 accesión BN-37, aislado en melón en Georgia, USA Teleomorfo: Ceratobasidium sp AG-S Se fusionan con AG-S, CAG7 . El aislado es el ATCC76147 accesión Bn22 (FTCC 585) , aislado en Pitosporum en Florida , USA Teleomorfo: Ceratobasidium sp Grupo de anastomosis en Rhizoctonia spp multinucleados Las especies multinucleadas de Rhizoctonia incluyen R. solani, R. zeae, R. oryzar. A esta fecha los aislados de Rhizoctonia solani se asignan a grupos de anastomosis AG y los aislados de Rhizoctonia zeae y Rhizoctonia oryzare han sido asignados a un grupo cada uno. La asociación entre grupos de anastomosis, anamorfos y teleomorfos de Rhizoctonia spp se resumen en la tabla 2. Los aislados que representan grupos de anastomosis de Rhizoctonia multinucleados se pueden obtener en el American Type cultur collection 12301 Parklawn, Rockville MD 20852 USA El grupo de Rhizoctonia solani Los asilados de Rhizoctonia solani se asignan en relación a la incompatibilidad de los grupos basados en la fusión hifal entre miembros de cada grupo. Bajas frecuencias entre grupos, por ejemplo AG3 y 8 se pueden usar para comparar relaciones genéticas entre grupos de anastomosis (fig 14) Estas relaciones suponen que la secuencia de bases del DNA presenta homologías dentro y entre los grupos. Los aislados de Rhizoctonia solani han sido descritos utilizando los siguientes: Anamorfos: R. alba, R. aderholdii, W. alli, R. anomala = R.borealis, (renombrado como Moniliopsis anomala) , R.betae, R. brassicarum, R.dauci, R. dichotoma, R. dimorpha, R.fusca, R. gossipi, R. macrosclerotia, R. melongena, R. microsclerotia, R. napae, R. napaeae, R. napi, R.potomacensis, R. pratícola, R. rapae, R. solani var ambigua, R solani var brassicae, R. solani var cedri-deodare, R. solani var Cichoreii-endiviae, R. solani var hortensis, R-solani var lycopersicea, R.solani vat tytpica. Teleomorfos : Thanatephorus cucumeris (sin: Pellicularia sp) Los teleomorfos que han sido incorrectamente descritos bajo los nombres: Botryobasidium, Ceratobasidium, Costicium, Hypochnus. AG1-IA Se caracterizan por tener esclerocios relativamente esféricos y muy grandes 1-3 mm de diámetro. Homología de la secuencia de bases del 98-100% entre miembros AGI-IA (tipo Sasaki) y baja homología (50-56%) entre miembros AGI-IB . AGI-IA representa a AGI tipo 2. El testigo para la anastomatosis es el ATCC 76121, accesión CS-KA, aislado de arroz en HOkkaido, Japón Anamorfos: Sclerotium irregulare

Teleomorfo: T. cucumeris ( sin: Corticium sasaki, Hypochnus sasaki, Pellicukaria sasaki) AGI-IB Esclerocios de forma irregular, pequeños, homología de las bases de DNA alta (96%) entre miembros AH-IB y baja (50-56%) con AGI-AI AG-I-IB representa a ASGI tipo I La anastomosis se testa con ATCC 76122, accesión B-19 en Hokkaido, Japón. Anamorfo: R. microsclerotia, Teleomorfo: T cucumeris AGI –IC Posee eclerocios redondeados, pequeños (0,2-0,8mm de diámetro). Las homologías entre bases de DNA son entre AG-I-IA y AGI-IB y no se4 ha determinado bien entre AGI-IC que representa al Ag1 DE Sherwood. El testigo para la anastomosis es el atcc76123, accesión BV-7, de remolacha azucarera en Hokkaido, Japón. Teleomorfo: T. Cucumeris AG2 Se fusionan con AGH2, AG-BI y a baja frecuencia con AG 8 Teleomorfo: T. cucumeris AG2 se divide en varios grupos: AG-2-1 La fusión hifal se da con frecuencia alta (mayor o igual al 50%) en tre AG 2-1 y baja (menor al 30%) entre AQG-2-2 Son autrótofos de Tiamina y exiben una homología de las bases del DNA con AG-2-1 del 100% y una homología baja ( 37,6 al 40%) entre AG2-IIIB y AG2-2IV (43-49%) La anastomosis se testa con el aislado ATCC 76168 accesión P-S 4 aislado de guisante en Tokushima, Japón. Anamorfos: R.solani, var brassicae AG-2-2IIIB Se fusionan a alta frecuencia con AG2-2 y a baja con AG 2-1. Son autrótofos de Tiamina. Los cultivos crecen a 35ºC. La homología d elas bases de DNA es del 98% con AG-2 2-IIIB, baja (68-79%) con AG2- 2IV y muy baja (38-40%) con A 2-1. Se testa con el ATCC76124, accesión C-96, aislado en Ubakari, Japón AG3 Son autótrofos de Tiamina y se fusionan con AG3 y AGBI y a baja frecuencia con AG8. Poseen una homología de las bases de DNA del 100% con AG3 El testigo es ATCC 76167 accesión 5X.11-6, aislado en patata en Hokkaido, Japón. Anamorfo : R. solani var typica Teleomorfo : T cucumeris.

AG4 Son autótrofos de Tiamina y se fusionan con AG4 Anamorfos: R.- pratícola, R. solani var cichoii-endiviae. Telemorfos: T. pratícola ( sin : Ceratobasidium pratícola, Corticium pratícola, Pellicularia pratícola) AG4 se divide en varios grupos: AG4-HG-I Esclerocios marrón oscuros en PDA, alta homología de las bases de DNA (89-93%) y baja (31-48%) con AG4-HG-II El testigo es ATCC 76126 accesión AH-I aislado en cacahuete en Chiba, Japón. AG4 HG-II Los esclerocios son gris o blancos en PDA, alta homología de las bases de DNA (89-100%) entre su grupo y baja (31-48%) con AG4-HGI El testigo es ATCC 76127 accesión Rh-165 aislado en remolacha de azúcar en Hokkaido, Japón. AG-5 Son autótrofos de Tiamina, se fusionan con AG5. Alta homología de las bases de ADN con su grupo. El testigo es ATCC 76128, accesión GM-10 aislado de soja en Pagano, Japón. Teleomorfo : T. cucumeris AG6 Aislados autótrofos de Tiamina, capaces de fusionarse con su grupo y a baja frecuencia con AG8 y AGBI o con R. solani y AGF o Rhizoctonia spp binucleados Teleomorfo: T.cucumeris AG6 se divide en varios grupos: AG6 HG-I Homología del 92-98% y baja (48-63%) con AG6GV. El testigo es ATCC 76129, accesión OHT-I-I, aislado del suelo en Hokkaido, Japón. AG6 GV Homología con su grupo del 48-63%. Grupo heterogéneo. El testigo es ATCC 76130 accesión NKN-2-1, aislado del suelo en Hokkaido, Japón. AG7 Son autótrofos de Tiamina y se fusionan solo con los de su grupo. Homología del 99%. El testigo es ATCC 76131, accesión HO-1556, aislado del suelo en Kagawa, Japón.

AG8 Se fusiona a alta frecuencia (mas del 50%) con su grupo. A baja (menos 30%) con AG3, AG6 y AGBI y AG2. El testigo es ATCC 76106, accesión W-5651 , asilado en trigo en Washington, USA Teleomorfo: T. cucumeris AG9 Se fusiona solo con su grupo. El testigo es ATCC 62804, accesión 521 aislado del suelo en Palmer, Alaska, USA Teleomorfo: T. cucumeris AG9 se divide en varios grupos: AG9TP Autótrofo de Tiamina y alta homología (94%) con su grupo. Baja (78-87%) con AG9TX AG9TX Autótrofo de Tiamina, alta homología (94%) con su grupo y baja (78-87%) con AG9TP AG10 No está bien estudiado, solo se fusiona con su grupo. Testigo ATCC 76107, accesión W-399, aislado de cebada en Washington, USA Teleomorfo T.cucumeris AGBI Autótrofos de Tiamina, alta homología (91-97%) con su grupo. Se fusiona con AGBI y AG2, AG3, AG6 y AG8. El aislado es el ATXCC 76132, accesión TS-2-4, aislado del suelo en Hokkaido, Japón. Otros Rhizoctonia spp binucleados WAG-Z Se fusionan con su grupo. El testigo es ATCC 76155, accesión C-505, aislado de arroz en Yamagata, Japón. Anamorfo: Rhizoctonia oryzicola. Teleomorfo: Waitea circinata A veces decrito como: Rhizoctonia endophytica var filicata, Sclerotium oryzicola. Teleomorfo: Waitea circinata WAH-O Se fusionan con su grupo. El testigo es el ATCC 76154 accesión C-521 aislado en el suelo en Fukuy, Japón. Anamorfo: Rhizoctonia oryzae ( renombrado como Moniliopsis oryzae). Teleomorfo: W. circinata

Rhizoctonia dudosos Los siguientes aislados asignados a Rhizoctonia se consideran dudosos . Especies excluidas Las siguientes especies se excluyen de Rhizoctonia porque incluyen caracteres morfológicos que no entran en el concepto de género VII Características comunes de aislados de grupos de anastomosis de Rhizoctonia spp Los aislados que comúnmente se asignan a los grupos de anastomosis pueden variar considerablemente en relación al hospedante, muchos aislados pueden no ser patógenos. En contraste los aislados a signados a diferentes grupos provocan los mismos síntomas en los hospedantes más comunes. Por ejemplo, algunos aislados de Rhizoctonia fragariae pertenecientes a AG-G y algunos AG-I son Rhizoctonia spp binucleados. Sin embargo hay algunas características comunes a los aislados dentro del grupo de anastomosis. Lo describiremos a continuación: Rhizoctonia repens y Rhizoctonia anaticula forman asociaciones con micorrizas de orquídeas AG-A (==CAG2) Son patógenos que causan pudrición de la raíz en fresa, dumping off en remolacha azucarera, judía, tomate, melón, girasol, espinacas, pepino, lechuga, enmarronamiento en vainas de cacahuete y daños en patata. Algunos aislados micorrizan con orquídeas AG-Ba Son patógenos que causan daños en arroz, en Echinochloa crusgalli subsp submitica var typica y en mijo. AG-Bb Son patógenos del arroz, mijo AG-B-(0) (otros) Patógenos del arroz AG-C También llamado ACI, patógenos poco importantes, algunos micorrizan orquídeas. Se han aislado en remolacha azucarera, trigo y trébol AG-D (=CAG1) Patógenos que atacan a cereales, gramíneas, trigo, remolacha azucarera, cebada, trébol, cebollas y guisantes. Lesionan tallos de tomate, algodón y soja. Atacan a Juncos effusus y se han asilado en mijo y trébol.

AG-E (=CAG3,6) Patógeno que ataca a judía, guisante, cebolla, lechuga, patata, tomate, rábano, soja, cacahuete, remolacha azucarera azalea, y camping off en plántulas de pino. Algunas forman micorrizas con orquídeas. Se ha aislado en arroz AG-F (=CAG4) Patógenos de judía, rábano, cebolla, cacahuete, lechuga, tomate y guisante. Se ha asilado de trébol y rábano, tomate, algodón AG-G Patógenos que afectan a fresa, camping off en remolacha azucarera, judía, guisante, tomate, melón y girasol. Los aislados atacan a las vainas del cacahuete. AG-H No se han descrito plagas en este grupo AG-1 Antes se llamaba AGC. Son patógenos de fresa. Se ha aislado en remolacha azucarera. Algunos forman micorrizas con orquídeas. AG-J No se han descrito plagas en este grupo AG-K No se han descrito plagas en este grupo. Estos hongos se han aislado en plántulas de remolacha azucarera, rabanitos, tomate , zanahoria, cebolla y cereales. AG-L No se han descrito plagas en este grupo AG-M No se han descrito plagas en este grupo AG-N No se han descrito plagas en este grupo AG-O No se han descrito plagas en este grupo AG-P provoca daños en hojas de té. Los basidiosporas no son repetitivas AG-Q Patogénicos de césped AG-R patogénico de judía, guisante, rábano, cebolla, soja AG-S No se han descrito plagas en este grupo. Se ha aislado en azalea WAG-Z Causa daños en trigo y arroz, en mijo, en plántulas de pino, en césped. Necesita 33ºC para criar bien. Rhizoctonia oryzae WAG-O Causa daños en arroz, en hojas de trigo y en el sorgo. Ataca a cereales y gramíneas. Necesita óptimos de 32ºC para crecer

Rhizoctonia solani AG1-1 A (= AG tipo1) Crece rápidamente, 30 mm/día a 28-30ºC. Su óptimo es a 30ºC AG 1 IC (AG1 TIPO 3) Patógeno virulento que se cría en climas fríos, causa camping off a zanahoria, alforfón, lino soja y pino AG 1 inespecífico Patógeno de remolacha azucarera, col, repollo, judías y soja. AG2-1 Este grupo tiene crecimiento lento (13mm/día a 25ºC). Son patógenos de cultivos de invierno formando esclerocios rojos en forma de anillo. Causa camping off en crucíferas, fresa, tabaco japonés, tulipán y en trébol subterráneo AG2-2IIIB Es un grupo que crece a altas temperaturas (óptimo aproximadamente 30ºC). Son patogénicos de arroz, jengibre, gladiolos, césped, trigo, remolacha azucarera, batata y provoca camping off en plántulas de árboles, crisantemos y batata china. AG2-2IV Patógeno de remolacha azucarera, césped AG2-2-2 (inespecífico) AG3 Crece unos 12mm/día a 25ºC. Patógeno de patata, tomate y tabaco. AG-4 Se define como tipo “pratícola”. Según algunos autores representa a algunas especies (R. pratícola. Teleomorfo: T. pratícola). Se suele aislar del suelo con plantas infectadas en países de clima húmedo. Ataca a tomate, guisante, espinaca, patata. Camping off en pinos y otros hospedantes en estado de plántula, cebolla, guisante, patata y judía. Hay aislados no patógenos que protegen a rabanitos, zanahoria, algodón, patata y trigo de camping off, estimulando el crecimiento de la planta. AG-5 Patógenos débiles de patata, césped, judía, soja y azuki. Algunos se micorrizan con orquídeas

AG-6 No son patógenos, algunos micorrizan a orquídeas. AG-7 no son patógenos AG-8 Patógeno de cereales AG-9 Patógeno de crucíferas, patata pero menos patogénicos que AG-3 AG-10 Probablemente no son patógenos AGBI no son patógenos AGUNK Patógeno de de arroz, no se fusionan con ningún grupo. IX Rhizoctonia spp asociadas a orquídeas La asociación de Rhizoctonia Spp con orquídeas surge pronto en el desarrollo de estas plantas, hay 3 grupos de orquídeas que son micorrizadas. La asociación de orquídeas de Rhizoctonia spp es esencial en muchos casos para la germinación de las semillas y el consiguiente desarrollo de la planta. Ha sido observado que con adición de fósforo y otros minerales, a asociación del hongo provee a las pequeñas semillas de recursos de carbono, así como de vitaminas y factores de crecimiento. En algunos casos se observa que las hifas de Rhizoctonia Es degradada en las células de la orquídea. No está claro si es una forma de protección de la planta de la patogénesis o si es un mecanismo de absorción de nutrientes. El balance entre la orquídea y la Rhizoctonia es muy delicado en muchos casos las semillas o las plántulas son matadas por el hongo. Los aislados de Rhizoctonia spp constituyen un gran grupo de endositos asociados con las raíces de las orquídeas . Pero muchos de ellos no han sido bien identificados como especies o grupos de anastomosis. Se han asignado endositos parecidos a Rhizoctonia con orquídeas australianas a 5 grupos de anastomosis (Ramsey 1987) Rhizoctonia repens (Tulasnella calospora) ha sido identificada como ubiquista y como micorriza de orquídeas ( Warcup,1981) Otras Rhizoctonia binucleadas spp como R. goodyerare-repentis (Ceratibasidium cornigerum) en Goodyer repens y otras especies. También hay Rhizoctonia spp multinucleadas (R.Solani, Thanatephorus cucumeris, T. pennatus) han sido identificados como micorrizas de orquídeas. Rhizoctonia anaticula, que es similar a R. repens se ha aislado en raíces de orquídeas en Canadá. Rhizoctonia stahii y R. mucoroides en especies de Dactylorrhiza. Se han identificado un considerable número de teleomorfos de Rhizoctonia spp asociados con orquídeas australianas : Tulasnella allantospora, T. asimétrica, T. calospora. T.crociata, T. irregularis, T. Violea. Cerartobasidium angustiforium, C. cornigerum, C. glkobisporum, C. sphaerosporum, C. obscurum, C. Papillatum, Thanatephorus cucumeris, T. sterigmaticus, T. orchidicola, Ypsilonidum anomalum, Y. sterigmaticum y Y. langler-regis. Una simple raíz puede ser micorrizada por varios hongos de diferentes especies. Los hongos aislados de Calypso bulbosa incluyen R. anaticula, Rhizoctonia spp no identificados y Thanatephorus pennatus. La especificidad de la asociación micorrícica se da en distintos niveles, desde especies a subtribus. Todas las especies de la familia Caldeninae se asocian con Sebacina vermifera excepto Lyperathus que se asocia con un amplio rango de hongos. Las orquídeas Microtus y Prasophyllum se asocian con diferentes endositos a pesar de ser las dos Prasiphyllinae.

Muchos aislado de Rhizoctonia spp que establecen relaciones micorrícicas exhiben una especificidad con el hospedante, mientras otros tienen un amplio rango. Se ha documentado una considerable especificidad entre muchas orquídeas y sus endositos. Tulasnella calospora se asocia con Thelymitra y Dendrobium. Ceratobasidium cornigerum se asocia con Prrasophyllum y Pterostylis Otro Ceratobasodium spp se asocia con Sarcanthinae. Sebacina vermifera con Caladenia. La especificidad no es absoluta y varios Rhizoctonia spp pueden asociarse solos o con otros endositos. Algunas orquídeas se asocian con un amplio rango de endositos. La no especificidad se ha encontrado en aislados de Rhizoctonia solani, R. repens, Y R. stahlii aislados de 15 especies de diferentes orquídeas. Todas ellas forman asociaciones micorrícicas con plántulas de Blassolaelioca talega en Japón. En otro estudio 54 aislados de C. cornigerum, R. repens y Rhizoctonia solani se obtuvieron de 20 especies de orquídeas con éxito. Un asilado de C. cornigerum (AG-C) se obtuvo de Gymmadenia camschatica probó ser una efectiva simbiosis con Spiantis sinensis. Rhizoctonia stahlii es simbiótica de Dactylorrhiza spp. Varios aislados de Rhizoctonia spp que micorrizan orquídeas y otros hospedantes han sido evaluados para ver sus efectos en la germinación de semillas de 10 orquídeas norteamericanas y europeas. Ceratobasidium cereale estimula la germinación de 4 especies . Sin embargo Thanatephorus pennatus y C. obscurus no son efectivas.